Hielscher VialTweeter, koronavirus SARS-COV-2-ni təsirsiz hala gətirmək üçün istifadə edilən, misilsiz bir ultrasəs çoxsaylı nümunə hazırlıq vahididir. VialTweeter eyni vaxtda 10-a qədər flakon hazırlamağa imkan verir və bununla da kütləvi nümunə işlənməsi üçün ideal vahiddir.

SARS-CoV-2 Coronavirusunun VialTweeter ilə təsirsiz hala gətirilməsi

Fiksatif çıxarıldıqdan sonra, monolayerlər hüceyrələri 1 ml MEM /% 5 FBS-yə sürtmədən əvvəl üç dəfə fosfat tamponlu salin (PBS) ilə yuyulur və Hielscher istifadə edərək sonikasiya olunur (3 × 10 saniyə, 100 saniyə gücündə və amplituda 10 saniyəlik). ultrasəs prosessor VialTweeter ilə UP200St əlavə. Supernatantlar 10 dəqiqə ərzində 3000 × g-də santrifüj edərək aydınlaşdırıldı. Welch və digərlərinin SARS-CoV-2 koronavirus inaktivasiyası üçün tam protokolu burada oxuyun. (2020) aşağıda:

Hüceyrələr və viruslar

Vero E6 hüceyrələri (Vero C1008; ATCC CRL-1586), 10% (h / h) fetal buzov serumu (FCS) ilə tamamlanan dəyişdirilmiş Kartalın minimum əsas mühitində (MEM) becərildi. İstifadə olunan virus, SARS-CoV-2 suşu hCOV-19 / İngiltərə / 2/2020 idi, PHE tərəfindən İngiltərədəki ilk xəstə qrupundan 29/01/2020 tarixində təcrid olundu. Bu virus keçid 1-də əldə edilmiş və keçid 2 və ya 3-də təsirsizləşdirmə işləri üçün istifadə edilmişdir.
SARS-CoV-2 inaktivasiyası və reagent sitotoksikliyinin çıxarılması üçün istifadə olunan reaktivlər və kimyəvi maddələr üçün Welch et al. (2020).

Yuyucu vasitələrlə virusun təsirsiz hala gətirilməsi – Welch və digərlərinin SARS-CoV-2 Coronavirus İnaktivasiya protokolu. 2020

SARS-CoV-2 İnaktivasiya

Ticarət məhsulları üçün virus preparatları (toxuma kulturası mayesi, titrləri 1 × 10 arasında dəyişir⁶ 1 × 10-a⁸ PFU / ml) konsentrasiyalı reaktivlərlə və istehsalçıların təlimatında tövsiyə olunan əlaqə müddətləri və ya mövcud olduqda test laboratoriyaları tərəfindən xüsusi tələb olunan konsentrasiyalar və vaxtlar üçün üç nüsxədə müalicə edilmişdir. İstehsalçı tərəfindən bir sıra konsentrasiyalar verildikdə, məhsulun nümunəyə nisbəti ən aşağı nisbətdə yoxlanıldı (yəni test məhsulunun ən aşağı tövsiyə olunan konsentrasiyası). Nümunə daşıma borusu reaktivləri, istehsalçı tərəfindən nümunə maye ilə reaktivin həcm nisbəti müəyyən edilmədiyi təqdirdə, bir həcm toxuma kulturası mayesinin on həcmli reaktivə nisbəti ilə sınaqdan keçirildi. Yuyucu maddələr, fiksatiflər və həlledicilər göstərilən vaxtlar üçün göstərilən konsentrasiyalarda test edilmişdir. Bütün inaktivasiya addımları ətrafdakı otaq temperaturunda (18 - 25 ° C) həyata keçirilmişdir. Alternativ nümunə növlərinin sınanması üçün virus 1: 9 nisbətində göstərilən nümunə matrisinə töküldü, sonra yuxarıdakı kimi test reagentləri ilə müalicə edildi. Bütün təcrübələr, test reaktivinin yerinə ekvivalent həcmdə PBS ilə üçlü nəzarət süni müalicə nümunələrini əhatə etmişdir. Tələb olunan əlaqə müddətindən dərhal sonra 1mL müalicə olunmuş nümunə müvafiq olaraq seçilmiş filtrasiya matrisindən istifadə edilərək işlənmişdir. İnaktivasiya testi üçün reaktivin çıxarılması Pierce 4mL Deterjan Təmizləmə Spin Sütunları (Termo Fisher) istifadə edərək və ya boş Pierce 10mL tutumlu santrifüj sütunlarına (Thermo Fisher) SM2 Bio-Boncuk, Sephacryl S-400HR və ya doldurularaq daha böyük bir spin sütun formatında aparıldı. Sephadex LH-20, 4 mL qablaşdırılmış boncuk / qatran vermək. Amicon filtrlərindən istifadə edərək təmizlənmək üçün 2 × 500μl nümunələri əvvəllər təsvir edilmiş üsulla iki mərkəzdənqaçma filtrindən istifadə edilərək təmizlənmiş və sonra bir yerə toplanmışdır. Glutaraldehid çıxarılması ilə formaldehid və formaldehid üçün 1 filtr 1 × 500μl nümunə həcmi ilə istifadə edildi, 500μl PBS-də işləndikdən sonra yenidən dayandırıldı və 400ul MEM /% 5 FBS-ə əlavə edildi. Yoluxmuş xəstəliyin təsirsizləşdirilməsi üçün monolayerlər, 12,5 sm² Vero E6 hüceyrələrinin balonları (2,5 × 10)⁶ hüceyrələr / kolba 2.5mL MEM /% 5 FBS) MOI 0.001-də yoluxmuş və 37 ° C /% 5 CO-da inkubasiya edilmişdir.₂ 24 saat. Supernatant çıxarıldı və hüceyrələr 5mL formaldehid və ya formaldehid və glutaraldehiddən istifadə edərək otaq temperaturunda 15 və ya 60 dəqiqə sabitləndi. Fiksatör çıxarıldı və monolayerlər hüceyrələri 1 ml MEM /% 5 FBS-yə sürtmədən əvvəl PBS ilə üç dəfə yuyuldu və VialTweeter əlavəsi (Hielscher Ultrasəs) ilə UP200St istifadə edərək sonikasiya edildi (3 × 10 saniyə, 100 saniyə gücündə və amplituda 10 saniyə endirim). Texnologiya). Supernatantlar 10 dəqiqə ərzində 3000 × g-də santrifüj edərək aydınlaşdırıldı.

Welch və digərlərinin protokoluna görə ultrasəs VialTweeter ilə SARS-CoV-2 koronavirus inaktivasiyası üçün istifadə olunan reaktivin təfərrüatları. 2020

Hielscher VialTweeter-in istifadəsi daxil olmaqla tam protokola burada baxmaq olar:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Mükəmməl ultrasəs disembratorları və hüceyrə pozucuları

Çox nümunəli ultrasonikator VialTweeter bioloji, biyokimyəvi və klinik laboratoriyalarda nümunə hazırlamaq üçün bir çox ultrasəs həllindən biridir. Hielscher Ultrasonics tətbiqiniz üçün ideal ultrasəs dismbrbratoru təklif edir, məsələn, hüceyrə lizisi, hüceyrənin çıxarılması, toxuma homogenləşdirilməsi, lizatın həll edilməsi, həll edilməsi, nümunənin qazdan çıxarılması və s.
Doğrudan və ya dolayı sonikasiya seçirsinizsə və ultrasəs nümunəsi müalicəsinin hədəfi nədirsə, bir saat və gündə neçə nümunə işlətməli olduğunuzu bizə bildirin. Gündəlik iş rejiminiz üçün sizə ən uyğun ultrasəs aparatını tövsiyə edəcəyik!
Hielscher Ultrasonics 'rəqəmsal ultrasəs prosessorları ağıllı proqram təminatı, avtomatik məlumat qeydiyyatı, istilik nəzarəti, sonikasiya müddəti, dövr / nəbz rejimi, nümunə işıqlandırma və brauzerin uzaqdan idarə edilməsi üçün asan əvvəlcədən seçim imkanları ilə təchiz edilmişdir. Tədqiqat və iş qaydanızın mümkün qədər rahat və uğurlu olması üçün ultrasəs cihazlarımızı mümkün qədər ağıllı etməyə çalışırıq.
VialTweeter ilə ultrasəs nümunəsi hazırlanması protokolları da daxil olmaqla daha çox tətbiq tapmaq üçün buraya vurun!