Sonication ilə SARS-CoV-2 Coronavirus inaktivasiyası üçün protokol

Hielscher VialTweeter, SARS-COV-2 koronavirusunu təsirsiz hala gətirmək üçün istifadə edilən unikal ultrasəs çox nümunəli hazırlama vahididir. VialTweeter eyni vaxtda 10-a qədər nümunə flakonu hazırlamağa imkan verir və bununla da nümunənin kütləvi emalı üçün ideal vahiddir.

VialTweeter ilə SARS-CoV-2 Koronavirusunun inaktivasiyası

Fiksatoru çıxardıqdan sonra monolaylar hüceyrələri 1ml MEM/5% FBS-ə sürmədən əvvəl üç dəfə fosfat tamponlu şoran (PBS) ilə yuyuldu və Hielscher istifadə edərək sonikasiya edildi (3 × 10 saniyə, 100% güc və amplituda 10 saniyə söndürüldü). ultrasəs prosessoru VialTweeter ilə UP200St qoşma. Supernatantlar 10 dəqiqə ərzində 3000 × g-də sentrifuqa edilərək aydınlaşdırıldı. Welch və digərləri tərəfindən SARS-CoV-2 koronavirusunun inaktivasiyası üçün tam protokolu burada oxuyun. (2020) aşağıda:

Hüceyrələr və Viruslar

Vero E6 hüceyrələri (Vero C1008; ATCC CRL-1586) 10% (v/v) fetal dana serumu (FCS) ilə əlavə edilmiş dəyişdirilmiş Eagle minimum əsas mühitində (MEM) becərildi. İstifadə olunan virus 29/01/2020-ci ildə Böyük Britaniyada ilk xəstə klasterindən PHE tərəfindən təcrid olunmuş hCOV-19/England/2/2020 SARS-CoV-2 ştammı idi. Bu virus 1-ci keçiddə əldə edilmiş və 2 və ya 3-cü keçiddə inaktivasiya tədqiqatları üçün istifadə edilmişdir.
SARS-CoV-2-nin inaktivasiyası, həmçinin reagentin sitotoksikliyinin aradan qaldırılması üçün istifadə olunan reagentlər və kimyəvi maddələr üçün Welch et al-ın elmi hesabatına baxın. (2020).

Yuyucu vasitələrlə virusun inaktivasiyası – Welch et al tərəfindən SARS-CoV-2 Coronavirus inaktivasiya protokolu. 2020

SARS-CoV-2 inaktivasiyası

Ticarət məhsulları üçün virus preparatları (toxuma kulturası mayesi, titrləri 1 × 10⁶ 1 × 10-a qədər⁸ PFU/ml) üç nüsxədə reagentlərlə konsentrasiyalarda və istehsalçının istifadəyə dair təlimatlarında tövsiyə olunan təmas vaxtları üçün, mümkün olduqda, və ya sınaq laboratoriyaları tərəfindən xüsusi olaraq tələb olunan konsentrasiyalar və vaxtlar üçün müalicə edilmişdir. İstehsalçı tərəfindən bir sıra konsentrasiyalar verildiyi halda, məhsulun nümunəyə ən aşağı nisbəti sınaqdan keçirilmişdir (yəni test məhsulunun tövsiyə olunan ən aşağı konsentrasiyası). Nümunə daşıyıcı boru reagentləri, istehsalçı tərəfindən nümunə mayesinin reagentə həcm nisbəti göstərilmədiyi halda, bir həcm toxuma mədəniyyəti mayesinin on həcmli reagent nisbətindən istifadə etməklə sınaqdan keçirilmişdir. Yuyucu vasitələr, fiksatorlar və həlledicilər göstərilən vaxtlarda göstərilən konsentrasiyalarda sınaqdan keçirilmişdir. Bütün inaktivasiya addımları ətraf mühitin otaq temperaturunda (18-25°C) yerinə yetirildi. Alternativ nümunə növlərinin sınaqdan keçirilməsi üçün virus göstərilən nümunə matrisinə 1:9 nisbətində hopduruldu, sonra yuxarıdakı kimi test reagentləri ilə müalicə olundu. Bütün eksperimentlərə sınaq reagentinin yerinə ekvivalent həcmdə PBS olan üç nüsxəli nəzarət saxtalaşdırılmış nümunələr daxil edilmişdir. Tələb olunan təmas müddətindən dərhal sonra, müvafiq seçilmiş filtrasiya matrisindən istifadə etməklə 1 ml işlənmiş nümunə emal edildi. İnaktivasiya sınağı üçün reagentin çıxarılması daha böyük fırlanma sütunu formatında Pirs 4ml Yuyucu Tozdan Çıxarılan Spin Sütunlarından (Termo Fisher) istifadə etməklə və ya boş Pirs 10mL tutumlu sentrifuqa sütunlarını (Thermo Fisher) SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-40 və ya doldurmaqla həyata keçirilmişdir. 4ml qablaşdırılmış muncuq/qatran vermək üçün Sephadex LH-20. Amicon filtrlərindən istifadə etməklə təmizləmə üçün 2 × 500μl nümunələr iki mərkəzdənqaçma filtrindən istifadə edərək əvvəllər təsvir edilən üsulla təmizləndi, sonra birləşdi. Qlutaraldehidin çıxarılması ilə formaldehid və formaldehid üçün bir filtr 1 × 500μl nümunə həcmi ilə istifadə edildi, 500μl PBS-də emal edildikdən sonra yenidən dayandırıldı və 400ul MEM/5% FBS-ə əlavə edildi. Yoluxmuşların inaktivasiyası üçün monolaylar, 12,5 sm² Vero E6 hüceyrələrinin şüşələri (2,5 × 10⁶ 2,5 ml MEM/5% FBS-dəki hüceyrələr/kolba) MOI 0,001-də yoluxmuş və 37°C/5% CO-da inkubasiya edilmişdir.₂ 24 saat ərzində. Supernatant çıxarıldı və hüceyrələr 15 və ya 60 dəqiqə otaq temperaturunda 5 mL formaldehid və ya formaldehid və qlutaraldehid istifadə edilərək fiksasiya olundu. Fiksator çıxarıldı və monolaylar hüceyrələri 1ml MEM/5% FBS-ə sürmədən əvvəl PBS ilə üç dəfə yuyuldu və VialTweeter qoşqulu (Hielscher Ultrasəs) UP200St istifadə edərək sonikasiya edildi (3 × 10 saniyə işə salındı, 100% güc və amplituda 10 saniyə söndürüldü). Texnologiya). Supernatantlar 10 dəqiqə ərzində 3000 × g-də sentrifuqa edilərək aydınlaşdırıldı.

Welch və digərlərinin protokoluna uyğun olaraq ultrasəs VialTweeter ilə SARS-CoV-2 koronavirusunun inaktivasiyası üçün istifadə olunan reagentin təfərrüatları. 2020

Hielscher VialTweeter-in istifadəsi daxil olmaqla tam protokolu burada tapa bilərsiniz:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Mürəkkəb Ultrasəs Dismembrators və Hüceyrə Disruptors

Çox nümunəli ultrasəs cihazı VialTweeter bioloji, biokimyəvi və klinik laboratoriyalarda nümunə hazırlamaq üçün bir çox ultrasəs həllərindən yalnız biridir. Hielscher Ultrasonics tətbiqiniz üçün ideal ultrasəs dismembratoru təklif edir, məsələn, hüceyrə lizisi, hüceyrə çıxarılması, toxuma homogenləşməsi, lizat həlli, həll, nümunənin deqazasiyası və s.
Birbaşa və ya dolayı sonikasiyaya üstünlük verirsinizsə və ultrasəs nümunəsinin müalicəsinin məqsədi nədirsə, saatda və gündə neçə nümunə emal etməli olduğunuzu bizə bildirin. Biz sizə gündəlik iş rejiminiz üçün ən uyğun ultrasəs cihazı tövsiyə edəcəyik!
Hielscher Ultrasonics-in rəqəmsal ultrasəs prosessorları ağıllı proqram təminatı, məlumatların avtomatik qeydi, temperaturun tənzimlənməsi üçün asan əvvəlcədən təyinetmə variantları, sonikasiya müddəti, dövr/nəbz rejimi, həmçinin nümunə işıqlandırması və brauzerin uzaqdan idarə edilməsi ilə təchiz edilmişdir. Biz ultrasəs cihazlarımızı mümkün qədər ağıllı etməyə çalışırıq ki, tədqiqat və iş rejiminiz mümkün qədər rahat və uğurlu olsun.
VialTweeter ilə ultrasəs nümunəsinin hazırlanması protokolları daxil olmaqla daha çox proqram tapmaq üçün bura klikləyin!