Hielscher Ultrasəs Texnologiyası

Ultrasonikasiya ilə BL21 hüceyrələrinin hüceyrə lizisi

BL21 hüceyrələri zülalları yüksək dərəcədə effektiv ifadə etmək qabiliyyətinə görə tədqiqat laboratoriyalarında, biotexnologiyada və sənaye istehsalında geniş istifadə olunan bir E. coli növüdür. Ultrasonik hüceyrə pozulması, lizis və protein çıxarılması, hədəflənmiş zülalları BL21 hüceyrələrinin hüceyrə içərisindən ayırmaq və toplamaq üçün yayılmış üsuldur. Ultrasonikasiya hüceyrəni tamamilə pozur və bütün zülalları sərbəst buraxır və 100% zülal əldə edir.

Zülal İfadəsi üçün BL21 Hüceyrələri

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 hüceyrəsi, T7 RNA polimeraz-IPTG induksiya sistemi istifadə edərək transformasiya və yüksək səviyyəli protein ekspresiyası üçün uyğun olan kimyəvi cəhətdən səriştəli bir E. coli bakteriya suşudur. BL21 hüceyrələri, bir T7 promoterinin nəzarəti altında olan hər bir genin yüksək effektivli protein ekspresiyasına imkan verir. E. coli suşu BL21 (DE3), T7 promoter əsaslı ekspresyon vektorları ilə birləşən bir T7 RNA polimeraza əsaslı protein istehsal suşudur və rekombinant proteinlər istehsal etmək üçün laboratoriyalarda və sənayedə geniş tətbiq olunur. BL21 (DE3) -də rekombinant zülalı kodlayan genin ifadəsi xromosomal olaraq kodlanmış T7 RNA polimerazı (T7 RNAP) tərəfindən transkripsiyalanır, bu da şərti E. coli RNAP-dan səkkiz dəfə daha sürətli köçürülür. Bu, BL21 (DE3) suşunu yüksək dərəcədə təsirli edir və ən çox seçilən protein ekspresiya hüceyrə sistemlərindən birinə çevirir.

Ultrasonik Lizis və BL21 Hüceyrələrindən Zülal Ekstraktı üçün Protokol

BL21 hüceyrələrinin hüceyrə lizisi, əsasən lizis tamponu kimi sodyum lauroyl sarkosinatı (sarkosil kimi də bilinir) ilə birlikdə ultrasonik istifadə ilə aparılır. Ultrasonik hüceyrə pozulmasının və zülal çıxarılmasının üstünlükləri ultrasəs aparatlarının etibarlılığı, təkrarlanabilirliyi və sadə, təhlükəsiz və sürətli işləməsidir. Aşağıdakı protokol ultrasəs BL21 hüceyrə lizisi üçün addım-addım istiqamət verir:

lizisi üçün UP200St insonifier Probe tipli

Ultrasonik hüceyrə pozucu UP200St lizis və protein çıxarılması üçün mikro ucu S26d2 ilə

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


  • Şaperon zülallarını çıxarmaq üçün BL21 bakteriya qranulları 50 ml buzlu Sodium Tris-EDTA (STE) tamponda (10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 100 mM əlavə olunmuş 150 mM NaCl tərkibində) yenidən süspansiyon edildi. PMSF).
  • , 500 ul lizozim (10 mq / ml) əlavə olunur və hüceyrələr 15 dəqiqə buz üzərində inkübe edilir.
  • Daha sonra 500 ul DTT və 7 ml sarkosil (STE tamponunda hazırlanan% 10 (h / h)) əlavə edilir.
  • Bütün təmizlənmə tamponlarını buz kimi saxlamaq və nümunələrin hər zaman buzda saxlanılması vacibdir. Bütün təmizlənmə mərhələləri mümkünsə soyuq otaqda aparılmalıdır.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Ultrasonik lizis və protein çıxarılması üçün nümunələr sonikasiya olunur VialTweeter MultiSample Ultrasonicator hər sonikasiya arasında 2 dəqiqə fasilə ilə% 100 genlikdə 4 x 30 saniyə. Alternativ olaraq, mikro tipli bir prob tipli ultrasəs homojenləşdirici, Uf200 ः t S26d2 ilə (3 x 30 saniyə, ultrasəs dövrləri arasında 2 dəqiqə fasilə,% 80 genlik) istifadə edilə bilər.
  • Digər təmizlənmə mərhələləri üçün nümunələr buzda saxlanılmalı və ya əlavə işlənənə qədər alternativ olaraq -80 ° C-də saxlanılmalıdır.

Prescise Temperature Control altında ultrasəs lizisi

Bioloji nümunələrlə işləyərkən dəqiq və etibarlı istilik nəzarəti vacibdir. Yüksək temperatur, nümunələrdə termal səbəb olan protein deqradasiyasına başlayır.
Bütün mexaniki nümunə hazırlama üsulları kimi sonikasiya istilik yaradır. Bununla birlikdə, VialTweeter istifadə edilərkən nümunələrin temperaturu yaxşı idarə edilə bilər. VialTweeter və VialPress ilə analiz üçün hazırlayarkən nümunələrinizin istiliyini izləmək və idarə etmək üçün sizə müxtəlif variantları təqdim edirik.

  1. Nümunə istiliyinin izlənməsi: VialTweeter-i idarə edən ultrasəs prosessoru UP200St, ağıllı bir proqram təminatı və bağlana bilən bir temperatur sensoru ilə təchiz edilmişdir. Temperatur sensörünü UP200St-ə qoşun və temperatur sensorunun ucunu nümunə borularından birinə daxil edin. Rəqəmsal rəngli toxunma ekranı ilə UP200St menyusunda nümunə sonikasiya üçün müəyyən bir temperatur aralığını təyin edə bilərsiniz. Ultrasonikator maksimum temperatura çatdıqda avtomatik olaraq dayanacaq və nümunə temperaturu təyin olunmuş temperaturun ən aşağı qiymətinə düşənə qədər fasilə verin. Sonra sonication yenidən avtomatik olaraq başlayır. Bu ağıllı xüsusiyyət istidən qaynaqlanan deqradasiyanın qarşısını alır.
  2. VialTweeter bloku əvvəlcədən soyudula bilər. Titan blokunu əvvəlcədən soyutmaq üçün VialTweeter blokunu (yalnız çeviricisiz sonotrod!) Soyuducuya və ya dondurucuya qoyun, nümunədəki temperatur artımını təxirə salmağa kömək edir. Mümkünsə, nümunənin özü də əvvəlcədən soyudula bilər.
  3. Sonikasiya zamanı sərinləmək üçün quru buzdan istifadə edin. Quru buzla doldurulmuş dayaz bir qabdan istifadə edin və VialTweeter-i buzun üzərinə qoyun ki, istilik sürətlə yayılsın.

Dünyadakı müştərilər gündəlik bioloji, biyokimyəvi, tibbi və klinik laboratoriyalarda nümunə hazırlamaq üçün VialTweeter və VialPress-dən istifadə edirlər. UP200St prosessorunun ağıllı proqram təminatı və istilik nəzarəti, temperatur etibarlı şəkildə idarə olunur və istidən qaynaqlanan nümunə deqradasiyasının qarşısını alır. VialTweeter və VialPress ilə ultrasəs nümunəsi hazırlığı olduqca etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr verir!

Lysis Tətbiqiniz üçün Optimal Ultrasonik Disruptoru tapın

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics laboratoriyalar, dəzgah üstü və sənaye miqyaslı sistemlər üçün uzun müddət təcrübəli, yüksək performanslı ultrasəs hüceyrə pozucuları və homogenizator istehsalçısıdır. Bakterial hüceyrə kulturasının ölçüsü, tədqiqat və ya istehsal hədəfiniz və hüceyrənin saat və ya gündə işləmə həcmi tətbiqiniz üçün doğru ultrasəs hüceyrə pozucusunu tapmaq üçün vacib amillərdir.
Hielscher Ultrasonics, çox nümunələrin (VialTweeter ilə 10 flakona qədər) və kütləvi nümunələrin (yəni mikrotitr plitələr / UIP400MTP ilə ELISA plitələr) eyni zamanda sonikasiyası üçün müxtəlif həllər təklif edir, eyni zamanda fərqli prob tipli laboratoriya ultrasəs cihazı Ticarət hüceyrələrinin pozulması və böyük istehsalda protein çıxarılması üçün vahid başına 16,000watt-a qədər olan tam sənaye ultrasəs prosessorlarına qədər 50 ilə 400 vatt arasında güc səviyyələri. Bütün Hielscher ultrasəs cihazları tam yük altında 24/7/365 əməliyyatı üçün hazırlanmışdır. Sağlamlıq və etibarlılıq ultrasəs cihazlarımızın əsas xüsusiyyətləridir.
Bütün rəqəmsal ultrasəs homogenizatorları ağıllı proqram təminatı, rəngli toxunma ekranı və ultrasəs cihazını laboratoriya və istehsalat sahələrində rahat bir iş alətinə çevirən avtomatik məlumat protokollaşdırması ilə təchiz edilmişdir.
Bioloji nümunələrinizi necə bir hüceyrə, hansı həcmlə, hansı tezliklə və hansı hədəflə işlətməyiniz lazım olduğunu bizə bildirin. Proses ehtiyaclarınız üçün sizə ən uyğun ultrasəs hüceyrə pozucusunu tövsiyə edəcəyik.

Aşağıdakı cədvəl sizə ultrasəs sistemlərimizin kompakt əl homojenləşdiricilərindən və MultiSample Ultrasonicators-dan ticari tətbiqetmələr üçün sənaye ultrasəs prosessorlarına təxmini işləmə qabiliyyətinin göstəricisini verir:

Partiyanın həcmi Axın tövsiyə Cihazlar
96 quyu / mikrotiter plitələr na UIP400MTP
10 flakon 0,5 ilə 1,5 ml arasında na UP200St at VialTweeter
0.01 - 250 ml 5 ilə 100 ml / dəq UP50H
0.01 ilə 500mL arasındadır 10 200ml / dəq UP100H
10 2000ml üçün 20 400ml / dəq Uf200 ः t, UP400St
0.1 20L üçün 04L / min .2 UIP2000hdT
10 100L üçün 10L 2 / dəq UIP4000hdT
na 10 100L / dəq UIP16000
na daha böyük çoxluq UIP16000

Bizimlə əlaqə saxlayın! Bizdən soruşun!

Daha ətraflı məlumat üçün müraciət edin

Zəhmət olmasa, ultrasəs prosessorları, tətbiqetmələr və qiymətlər haqqında əlavə məlumat tələb etmək üçün aşağıdakı formadan istifadə edin. Prosesinizi sizinlə müzakirə etməkdən və tələblərinizə cavab verən bir ultrasəs sistemini təklif etməkdən məmnun olarıq!









Xahiş edirik unutmayın Gizlilik Siyasəti.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrasonikator Uf200 ः t kiçik nümunələrin sonikasiyası üçün 2 mm mikrotip S26d2 ilə

Ədəbiyyat / İstinadlar



Bilmək lazımdır

Escherichia Coli Bakteriyaları

Escherichia coli, bakteriya növüdür, spora əmələ gətirmir, Gram-mənfi və düz bir çubuq şəklindədir. E.coli bakteriyaları insan və heyvanların ətraf mühitində, qidalarında və bağırsaqlarında mövcuddur. E. coli ümumiyyətlə peritrichous flagella istifadə edərək hərəkətlidir, lakin qeyri-hərəkətli növləri də var. E.coli, fakultativ cəhətdən anaerobik kemoorganotrof orqanizmlərdir, bu da həm tənəffüs, həm də fermentativ metabolizmaya qadir olduqlarını göstərir. Əksər E.coli tipləri zərərsiz bakteriya növlərinin böyüməsini dayandırmaq, vitaminləri sintez etmək və s. Bədənin xeyirxah və faydalı funksiyalarını yerinə yetirir.
B tipi adlandırılan Escherichia coli bakteriya hüceyrəsi, bakteriyofaj həssaslığı və ya məhdudlaşdırma-modifikasiya sistemləri kimi mexanizmləri araşdırmaq üçün tədqiqatlarda geniş istifadə olunan E.coli suşlarının xüsusi bir kateqoriyasıdır. Bundan əlavə, E.coli bakteriyaları biotexnologiya və həyat elmi laboratoriyalarında protein ekspresiyası üçün etibarlı işçi atı kimi qiymətləndirilir. Məsələn, E.coli, sənaye miqyasında zülallar və oligosakkaridlər kimi birləşmələri sintez etmək üçün istifadə olunur. Proteaz çatışmazlığı, yüksək səviyyədə qlükoza səviyyəsində aşağı asetat istehsalı və inkişaf etmiş keçiricilik kimi spesifik xüsusiyyətlərə görə, E. coli B hüceyrələri genetik cəhətdən hazırlanmış zülalların istehsalı üçün ən çox istifadə edilən hüceyrə hüceyrələridir.

Rekombinant Zülal

Rekombinant zülallar (rProt), kimyəvi istehsal, əczaçılıq, kosmetika, insan və heyvan təbabəti, kənd təsərrüfatı, qida və tullantıların təmizlənməsi sahələrində də daxil olmaqla çoxsaylı qollarda əhəmiyyətli əhəmiyyət qazanır.
Rekombinant protein istehsalı bir ifadə sisteminin istifadəsini tələb edir. Rekombinant DNT istehsalı üçün ekspres hüceyrə sistemləri olaraq həm prokaryotik həm də ökaryotik hüceyrələrdən istifadə edilə bilər. Bakteriya hüceyrəsi, aşağı qiymət, asan ölçeklenebilirlik və sadə mühit şərtləri kimi amillər səbəbiylə protein ekspresyonu üçün ən çox istifadə edilərkən, məməli, maya, yosun, böcək və hüceyrəsiz sistemlər alternativ olaraq qurulur. Zülal növü, funksional fəaliyyət, həmçinin ifadə olunan zülalın tələb olunan məhsuldarlığı, zülal ifadəsi üçün istifadə olunan hüceyrə sisteminin seçilməsinə təsir göstərir.
Rekombinant zülalı ifadə etmək üçün, müəyyən bir hüceyrəyə rekombinant DNT şablonunu ehtiva edən bir DNT vektoru ilə yoluxdurmaq lazımdır. Şablonla köçürülmüş hüceyrələr daha sonra əkilir. Hüceyrə mexanizmi nəticəsində hüceyrələr maraq zülalını köçürür və tərcümə edir və bununla da hədəflənmiş zülalı istehsal edir.
Eksprese edilmiş zülallar hüceyrə matrisinə düşdüyündən hüceyrə zülalları sərbəst buraxmaq üçün parçalanmalı (pozulmalı və qırılmalıdır). Sonrakı bir saflaştırma mərhələsində protein ayrılır və təmizlənir.
Müalicədə istifadə olunan ilk rekombinant protein 1982-ci ildə rekombinant insan insulini idi. Bu gün tibbi müalicələr üçün dünya miqyasında 170-dən çox rekombinant protein istehsal olunur. Tibbdə yaygın olaraq istifadə edilən rekombinant proteinlər, rekombinant hormonlar, interferonlar, interlökinlər, böyümə faktorları, şiş nekrozu faktorları, qan laxtalanma faktorları, trombolitik dərmanlar və diabet, cırtdanlıq, miyokard infarktı, konjestif ürək çatışmazlığı kimi böyük xəstəliklərin müalicəsi üçün fermentlərdir. beyin apopleksiyası, çoxsaylı skleroz, neytropeniya, trombositopeniya, anemiya, hepatit, romatoid artrit, astma, Crohn xəstəliyi və xərçəng müalicəsi. (bax: Phuc V. Pham, Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Yüksək performanslı ultrasəs! Hielscher-in məhsul çeşidi, kompakt laboratoriya ultrasəs aparatından dəzgah üstü qurğulardan tam sənaye ultrasəs sistemlərinə qədər olan bütün spektri əhatə edir.