Ultrasəs emalı ilə hazırlanan bufer məhlulları
Ultrasəs toxuma homogenizatorlarından istifadə etməklə lizis buferlərini səmərəli və sürətlə hazırlamaq mümkündür. Ultrasəs cihazları qarışdırma, həll etmə və dispersləşdirmə üçün ideal vasitə olduğundan, lizis buferlərinin etibarlı və istifadəçi üçün rahat hazırlanmasını təmin edir.
Lizis buferlərinin ultrasəslə hazırlanması
Ultrasəs toxuma homogenizatorları hüceyrələrin parçalanması, lizis və ekstraksiya üçün geniş istifadə olunan vasitələrdir və buna görə də əksər laboratoriyalarda mövcuddur. Zond tipli ultrasəs cihazlarının əlavə tətbiq sahələrindən biri lizis buferlərinin hazırlanmasıdır.
Lizis buferi hüceyrələri parçalamaq (lizis etmək) və sonrakı analiz üçün onların möhtəviyyatını sərbəst buraxmaq məqsədilə istifadə olunan məhluldur. Lizis buferinin konkret tərkibi lizis edilən hüceyrələrin növündən və sonrakı tətbiqdən asılı olaraq dəyişə bilər. Bununla belə, tipik lizis buferinin tərkibinə detergentlər, duzlar və proteaza inhibitorları kimi komponentlər daxildir. Buferləşdirici duzlar (məsələn, Tris-HCl) və ion duzları (məsələn, NaCl) adətən lizatın pH göstəricisini və osmolyarlığını tənzimləmək üçün istifadə olunur.
Lizis buferini hazırlamaq üçün komponentlər müvafiq konsentrasiyalarda və pH şəraitində bir-biri ilə qarışdırılır. Qarışıq adətən komponentlər həll olana və məhlul homogen olana qədər qarışdırılır və ya çalxalanır.
Ultrasəs homogenləşdirməsi komponentlərin qarışmasını və həll olmasını yaxşılaşdırmaqla keyfiyyətli lizis buferinin hazırlanmasına kömək etmək üçün istifadə oluna bilən üsuldur. Bu üsulda qarışığa ultrasəs dalğaları – adətən 20 ilə 30 kHz diapazonunda – tətbiq edilir. Bu, çökərək intensiv lokal enerji yaradan kavitasiya qabarcıqlarının əmələ gəlməsinə səbəb olur və nəticədə mexaniki kəsilmə təsiri yaranır və komponentlər qarışır.
Ultrasəs homogenləşdirməsi prosesi komponentlərin hər hansı topalarını və ya aqreqatlarını parçalamağa və məhlulun bərabər şəkildə qarışmasını təmin etməyə kömək edə bilər. Nəticədə, bu cür yaxşılaşdırılmış lizis buferi hüceyrələrin daha səmərəli parçalanmasına və ekstraksiya olunan materialın daha yüksək çıxımına səbəb ola bilər. Bundan əlavə, ultrasəs homogenləşdirməsi ənənəvi qarışdırma və ya çalxalama üsulları ilə müqayisədə lizis buferinin hazırlanması üçün tələb olunan vaxtı azalda bilər.
Ümumilikdə, ultrasəs homogenləşdirməsi lizis buferinin hazırlanmasının keyfiyyətini və səmərəliliyini artırmaq üçün güclü vasitədir.
UP200Ht ultrasəs laboratoriya homogenizatoru tədqiqat laboratoriyalarında nümunələrin hazırlanması, lizis, ekstraksiya, DNT-nin fraqmentləşdirilməsi və həll etmə üçün geniş istifadə olunur.
Lizis buferinin ultrasəslə hazırlanması protokolu
Bu, zond tipli ultrasəs cihazından istifadə etməklə lizis buferinin hazırlanması üçün ümumi protokoldur:
Materiallar:
- Seçilmiş detergent(lər) (məsələn, Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Seçilmiş duz(lar) (məsələn, NaCl, KCl)
- Proteaza inhibitorları (məsələn, PMSF, aprotinin, leupeptin)
- Ultrasəs cihazı
- Qarışdırıcı
- Deionlaşdırılmış su
- pH-metr və ya pH indikator zolaqları
Addım-addım təlimatlar:
- Lizis edəcəyiniz hüceyrələrə və ya toxumaya, eləcə də lizatdan istifadə edəcəyiniz sonrakı tətbiqlərə əsasən lizis buferinin tərkibini müəyyənləşdirin. Detergentlərin, duzların və proteaza inhibitorlarının istənilən konsentrasiyalarda stok məhlullarını hazırlayın.
- Detergentlərin, duzların və proteaza inhibitorlarının stok məhlullarını laboratoriya stəkanına və ya kolbaya əlavə edin.
- Buferin həcmini istənilən miqdara çatdırmaq üçün deionlaşdırılmış su əlavə edin.
- İlkin qarışıq məhlulu əldə etmək üçün komponentləri qarışdırıcı ilə qarışdırın.
- pH-metr və ya pH indikator zolaqları ilə buferin pH göstəricisini ölçün və zərurət olduqda az miqdarda turşu və ya qələvi əlavə edərək pH göstəricisini tənzimləyin.
- Yüksək dərəcədə homogen məhlul əldə etmək üçün ilkin qarışıq məhlulunu zond tipli ultrasəs cihazı ilə homogenləşdirin. Bunun üçün məhlul tam qarışana və bütün topalar və ya aqreqatlar parçalanana qədər onu bir neçə saniyə ultrasəslə emal edin. Ultrasəs emalının müddəti və gücü istifadə olunan konkret lizis buferinə və ultrasəs cihazına əsasən optimallaşdırıla bilər.
- Ultrasəs emalından sonra buferin pH göstəricisini yenidən ölçün və zərurət olduqda tənzimləyin.
- Ultrasəs emalı zamanı əmələ gəlmiş ola biləcək hər hansı qalıqları və ya aqreqatları uzaqlaşdırmaq üçün buferi 0,2 mikronluq filtrdən keçirin.
- Lizis buferi artıq istifadəyə hazırdır.
Qeyd: Lizis buferinin dəqiq tərkibi və pH göstəricisi lizis edilən hüceyrələrdən və ya toxumadan, eləcə də sonrakı tətbiqlərdən asılı olaraq dəyişə bilər. Yuxarıdakı protokol ümumi təlimatdır və konkret tətbiqlər üçün optimallaşdırılması lazım gələ bilər.
Ultrasəs homogenizatorları hüceyrələrin parçalanması və hüceyrədaxili molekulların ekstraksiyası üçün geniş istifadə olunur. Buna görə də bir çox lizis tətbiqində zond tipli ultrasəs emalından yalnız lizis buferinin hazırlanması üçün deyil, həm də hüceyrələrin mexaniki parçalanması və ekstraksiya üçün istifadə edilir.
Bu, ultrasəs toxuma homogenizatorlarını laboratoriyalar üçün çoxməqsədli vasitəyə çevirir və ultrasəs cihazlarının mikrobiologiya, biotexnologiya və həyat elmlərində geniş istifadəsini izah edir.
Ultrasəs laboratoriya homogenizatorları
Hielscher Ultrasonics müxtəlif güc göstəriciləri və nümunə həcmləri üçün ultrasəs homogenizatorları və zondlar (sonotrodlar) istehsal edir və təchiz edir. Bu, nümunələrinizin hazırlanması üçün sizə ən uyğun ultrasəs parçalayıcısını təklif etməyimizə imkan verir. Biz ən yüksək keyfiyyətə, istifadə zamanı müstəsna rahatlığa və etibarlı ultrasəs emalı nəticələrinə diqqət yetiririk. Bütün rəqəmsal ultrasəs cihazları ağıllı proqram təminatı, ultrasəs emalı protokollarının proqramlaşdırılması və əvvəlcədən qurulması, brauzer vasitəsilə uzaqdan idarəetmə, temperaturun idarə olunması, nümunənin işıqlandırılması, eləcə də daxili SD kartda məlumatların avtomatik qeydə alınması funksiyalarına malikdir.
Layihələndirmə, istehsal və məsləhət xidmətləri – Almaniya istehsalı keyfiyyət
Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və layihələndirmə standartları ilə tanınır. Möhkəmlik və asan idarəetmə ultrasəs cihazlarımızın sənaye obyektlərinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Hielscher ultrasəs cihazları ağır şəraitdə və yüksək tələblər qoyan mühitlərdə asanlıqla işləyir.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatlı şirkətdir və ən müasir texnologiyaya malik, istifadəçi üçün rahat, yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə, Hielscher ultrasəs cihazları CE tələblərinə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
Aşağıdakı cədvəl müxtəlif laboratoriya ultrasəs cihazlarımız haqqında ümumi məlumat verir:
| UP200St ilə VialTweeter | 200W | 26kHz | kiçik flakonların ultrasəslə emalı, məsələn, Eppendorf 1,5mL |
| UP50H | 50W | 30kHz | əldə tutulan və ya ştativə quraşdırılan laboratoriya homogenizatoru |
| UP100H | 100W | 30kHz | əldə tutulan və ya ştativə quraşdırılan laboratoriya homogenizatoru |
| UP200Ht | 200W | 26kHz | əldə tutulan və ya ştativə quraşdırılan laboratoriya homogenizatoru |
| UP200St | 200W | 26kHz | ştativə quraşdırılan laboratoriya homogenizatoru |
| UP400St | 400W | 24kHz | ştativə quraşdırılan laboratoriya homogenizatoru |
| SonoStep | 200W | 26kHz | ultrasəs emalını, nasosu, qarışdırıcını və qabı birləşdirən laboratoriya reaktoru |
| GDmini2 | 200W | 26kHz | çirklənməyə yol verməyən axın hüceyrəsi |
| CupHorn | 200W | 26kHz | flakonlar və laboratoriya stəkanları üçün intensiv ultrasəs vannası |
| UIP400MTP | 400W | 24kHz | çoxquyulu lövhələr / mikrotitr lövhələri üçün ultrasəs sistemi |
Kasavari ultrasəs sonotrodu nümunələrin steril homogenləşdirilməsi məqsədilə qapalı sınaq borularının və flakonların intensiv ultrasəs emalı üçün.
Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizə sual verin!
UP400St ultrasəs laboratoriya homogenizatoru lizis buferinin hazırlanması və sonradan hüceyrələrin parçalanması üçün geniş istifadə olunur.
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs homogenizatorlarını müxtəlif ölçülərdə istehsal edir: laboratoriya ölçüsündən sənaye ölçüsünədək.