Ultrasonikasiya ilə hazırlanmış tampon həlləri
Lizis tamponları ultrasəs toxuma homogenizatorlarından istifadə edərək səmərəli və tez hazırlana bilər. Ultrasonikatorlar qarışdırmaq, həll etmək və dağıtmaq üçün xəyal vasitəsi olduğundan, liziz tamponlarının etibarlı və istifadəçi dostu hazırlanmasına imkan verir.
Lizis tamponlarının ultrasəs hazırlanması
Ultrasəs toxuma homojenizatorları hüceyrələrin pozulması, lizisi və çıxarılması üçün ümumi vasitədir, buna görə də əksər laboratoriyalarda mövcuddur. Zond tipli ultrasəs cihazları üçün ikinci dərəcəli tətbiq lizis tamponlarının hazırlanmasıdır.
Lizis buferi hüceyrələrin açılması (lizis) və onların məzmununu aşağı axın analizi üçün buraxmaq üçün istifadə edilən bir həlldir. Lizis buferinin spesifik tərkibi lizinq edilən hüceyrələrin növündən və aşağı axın tətbiqindən asılı olaraq dəyişə bilər. Bununla belə, tipik bir liziz tamponu yuyucu vasitələr, duzlar və proteaz inhibitorları kimi komponentləri ehtiva edir. Lizatın pH və osmolyarlığını tənzimləmək üçün adətən tamponlama duzları (məsələn, Tris-HCl) və ion duzları (məsələn, NaCl) istifadə olunur.
Lizis tamponunu hazırlamaq üçün komponentlər müvafiq konsentrasiyalarda və pH-da qarışdırılır. Qarışıq adətən komponentlər həll olunana və məhlul homojen olana qədər qarışdırılır və ya çalxalanır.
Ultrasonik homojenləşdirmə, komponentlərin qarışdırılmasını və həllini yaxşılaşdırmaqla yaxşı bir lizis tamponu yaratmağa kömək etmək üçün istifadə edilə bilən bir üsuldur. Bu üsulda ultrasəs dalğaları – normal olaraq 20 ilə 30 kHz diapazonunda – qarışığa tətbiq olunur ki, bu da çökən və intensiv yerli enerji yaradan, mexaniki kəsilməyə və komponentlərin qarışmasına səbəb olan kavitasiya qabarcıqlarını yaradır.
Ultrasəs homojenləşdirmə prosesi komponentlərin hər hansı bir dəstəsini və ya aqreqatını parçalamağa kömək edə bilər və məhlulun bərabər şəkildə qarışdırılmasını təmin edə bilər. Nəticə etibarilə, belə təkmilləşdirilmiş lizis tamponu hüceyrənin daha səmərəli pozulmasına və çıxarılan materialın daha yüksək məhsuldarlığına səbəb ola bilər. Bundan əlavə, ultrasəs homogenləşdirmə ənənəvi qarışdırma və ya sarsıdıcı üsullarla müqayisədə lizis tamponunun hazırlanması üçün tələb olunan vaxtı azalda bilər.
Ümumilikdə, ultrasəs homogenləşdirmə lizis tamponunun hazırlanmasının keyfiyyətini və səmərəliliyini artırmaq üçün güclü bir vasitədir.
Ultrasəs laboratoriya homojenizatoru UP200Ht nümunənin hazırlanması, lizisi, çıxarılması, DNT-nin parçalanması və həll edilməsi üçün tədqiqat laboratoriyalarında məşhurdur.
Ultrasonik Lizis Buferinin Hazırlanması Protokolu
Bu, zond tipli ultrasəs cihazından istifadə edərək lizis tamponunun yaradılması üçün ümumi protokoldur:
Materiallar:
- Seçdiyiniz yuyucu vasitə(lər) (məsələn, Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Seçilmiş duz(lar) (məsələn, NaCl, KCl)
- Proteaz inhibitorları (məsələn, PMSF, aprotinin, leupeptin)
- ultrasəs aparatı
- Qarışdıran
- Deionlaşdırılmış su
- pH metr və ya pH zolaqları
Addım-addım təlimatlar:
- Lizis buferinin tərkibini lizinq edəcəyiniz hüceyrələrə və ya toxumalara və lizatdan istifadə edəcəyiniz aşağı axın tətbiqlərinə əsasən müəyyənləşdirin. Yuyucu vasitələrin, duzların və proteaz inhibitorlarının ehtiyat məhlullarını istədiyiniz konsentrasiyalarda hazırlayın.
- Yuyucu vasitələrin, duzların və proteaz inhibitorlarının ehtiyat məhlullarını stəkana və ya kolbaya əlavə edin.
- Həcmi istədiyiniz bufer miqdarına çatdırmaq üçün deionlaşdırılmış su əlavə edin.
- Əvvəlcədən qarışdırıcı bir həll əldə etmək üçün bir qarışdırıcı istifadə edərək komponentləri qarışdırın.
- Bir pH metr və ya pH zolaqlarından istifadə edərək tamponun pH-ını ölçün və lazım olduqda az miqdarda turşu və ya baza ilə pH-ı tənzimləyin.
- Yüksək homojen bir həll əldə etmək üçün əvvəlcədən qarışdırılmış məhlulu homogenləşdirmək üçün zond tipli ultrasəs cihazından istifadə edin. Buna görə, məhlul hərtərəfli qarışdırılana və hər hansı bir yığın və ya aqreqat parçalanana qədər məhlulu bir neçə saniyə sonikləşdirin. Sonikasiyanın müddəti və gücü istifadə olunan xüsusi lizis tamponu və ultrasəs cihazı əsasında optimallaşdırıla bilər.
- Ultrasonikasiyadan sonra tamponun pH-nı yenidən ölçün və lazım olduqda tənzimləyin.
- Sonikasiya zamanı əmələ gələ biləcək hər hansı zibil və ya aqreqatları təmizləmək üçün tamponu 0,2 mikron filtrdən süzün.
- Lizis buferi artıq istifadəyə hazırdır.
Qeyd: Lizis tamponunun dəqiq tərkibi və pH-ı lizis olunan hüceyrələrə və ya toxumalara və aşağı axın tətbiqlərinə görə dəyişə bilər. Yuxarıdakı protokol ümumi təlimatdır və xüsusi tətbiqlər üçün optimallaşdırılmalıdır.
Ultrasonik homojenizatorlar hüceyrənin pozulması və hüceyrədaxili molekulların çıxarılması üçün adətən istifadə olunur. Buna görə də bir çox lizis proqramları yalnız liziz tamponunun hazırlanması üçün deyil, həm də hüceyrənin mexaniki pozulması və çıxarılması üçün zond tipli sonikasiyadan istifadə edir.
Bu, ultrasəs toxuma homogenizatorlarını laboratoriyalar üçün çox yönlü alətə çevirir və mikrobiologiya, biotexnologiya və həyat elmində ultrasəs aparatlarının geniş istifadəsini izah edir.
Ultrasonik Laboratoriya Homogenizatorları
Hielscher Ultrasonics, müxtəlif güc dərəcələrində və nümunə həcmlərində ultrasəs homogenizatorları və zondları (sonotrotlar) istehsal edir və təmin edir. Bu, nümunə hazırlamağınız üçün sizə ən uyğun ultrasəs pozucunu təklif etməyə imkan verir. Biz yüksək keyfiyyətli, üstün istifadəçi rahatlığı və etibarlı sonikasiya nəticələrinə diqqət yetiririk. Bütün rəqəmsal ultrasəs cihazları ağıllı proqram təminatı, proqramlaşdırma və sonikasiya protokollarının əvvəlcədən qurulması, brauzerin uzaqdan idarə edilməsi, temperaturun idarə edilməsi, nümunənin işıqlandırılması, həmçinin daxili SD kartda məlumatların avtomatik qeydinə malikdir.
Dizayn, İstehsalat və Konsaltinq – Keyfiyyətli Almaniya istehsalı
Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Sağlamlıq və asan əməliyyat ultrasəs aparatlarımızın sənaye obyektlərinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Kobud şərtlər və tələbkar mühitlər Hielscher ultrasəs cihazları tərəfindən asanlıqla idarə olunur.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikatlı bir şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadəçi dostu olan yüksək performanslı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə ki, Hielscher ultrasəs cihazları CE-yə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
Aşağıdakı cədvəl sizə müxtəlif laboratoriya ultrasəs aparatlarımız haqqında ümumi məlumat verir:
| UP200St-də VialTweeter | 200W | 26 kHz | kiçik flakonların ultrasəslənməsi, məsələn, Eppendorf 1.5mL |
| UP50H | 50W | 30 kHz | əl və ya dayanıqlı laboratoriya homojenizatoru |
| UP100H | 100W | 30 kHz | əl və ya dayanıqlı laboratoriya homojenizatoru |
| UP200Ht | 200W | 26 kHz | əl və ya dayanıqlı laboratoriya homojenizatoru |
| UP200 St | 200W | 26 kHz | quraşdırılmış laboratoriya homojenizatoru |
| UP400St | 400W | 24 kHz | quraşdırılmış laboratoriya homojenizatoru |
| SonoStep | 200W | 26 kHz | laboratoriya reaktoru, ultrasəs, nasos, qarışdırıcı və qab |
| GDmini2 | 200W | 26 kHz | çirklənməsiz axın hüceyrəsi |
| kubok | 200W | 26 kHz | flakonlar və stəkanlar üçün intensiv ultrasəs vannası |
| UIP400MTP | 400W | 24 kHz | çox quyulu plitələr / mikrotiter plitələr üçün ultrasəs sistemi |
Ultrasonik Kubok Horn qapalı boruların və nümunələrin steril homogenləşdirilməsi üçün flakonların intensiv sonikasiyası üçün.
Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizdən soruşun!
Ultrasonik laboratoriya homojenizatoru UP400St lizis tamponunun hazırlanması və sonrakı hüceyrənin pozulması üçün adətən istifadə olunur.
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir laboratoriya üçün sənaye ölçüsü.