Hielscher Ultrasonics
Prosesinizi müzakirə etməkdən məmnun olarıq.
Bizə zəng edin: +49 3328 437-420
Bizə e-poçt göndərin: [email protected]

Toxumalardan və hüceyrə kulturlarından ultrasəslə zülal ekstraksiyası

  • Zülal ekstraksiyası proteomikada nümunə hazırlanmasının vacib mərhələsidir.
  • Zülallar bitki və heyvan toxumalarından, mayalardan və mikroorqanizmlərdən ekstraksiya edilə bilər.
  • Ultrasəslə işləmə qısa ekstraksiya müddətində yüksək zülal çıxımı təmin edən etibarlı və səmərəli zülal ekstraksiyası üsuludur.

Toxumalardan və hüceyrələrdən zülal ekstraksiyası

Toxumalardan və kulturada yetişdirilmiş hüceyrələrdən zülal ekstraksiyası ELISA, PAGE, Western blotting, kütlə spektrometriyası və ya zülalların təmizlənməsi kimi bir çox biokimyəvi və analitik üsul zamanı həyata keçirilən vacib nümunə hazırlama mərhələsidir. Ultrasəslə hüceyrələrin parçalanması, lizisi və ekstraksiyası yüksək zülal çıxımını təmin etmək üçün dəqiq idarə oluna bilən qeyri-termik üsuldur.

Məlumat sorğusu



UP200St kimi zond tipli ultrasəs cihazları etibarlı toxuma homogenizatorlarıdır və genetik və proteomik tədqiqatlarda nümunələrin hazırlanması üçün geniş istifadə olunur.

Hüceyrələrdən zülal ekstraksiyası – UP200St ultrasəs zondu ilə

Ultrasəslə lizisin və zülal ekstraksiyasının üstünlükləri
 

  • Sürətli
  • Yüksək çıxım
  • Yüksək səmərəlilik
  • Parametrlərə dəqiq nəzarət
  • Təkrarlana bilən nəticələr
  • Xətti miqyaslandırma imkanı

Ultrasəslə lizis və zülal ekstraksiyası üçün ümumi göstərişlər

  • Temperatura nəzarət: Termik denaturasiya olmadan yüksək zülal çıxımını təmin etmək üçün ekstraksiya zamanı temperatura nəzarət edilməlidir. Hielscher şirkətinin ən müasir ultrasəs homogenizatorları – ultrasəs dezinteqratorları və ya ultrasəs emal cihazları da adlandırılır – dəqiq idarə oluna bilir. Onlar qoşula bilən temperatur sensoru ilə təchiz olunur. Ultrasəs homogenizatorunun tənzimləmə seçimlərində maksimum temperatur təyin edilə bilər. Bu maksimum temperatura çatdıqda ultrasəs cihazı nümunə soyuyanadək avtomatik dayanır.
  • Bufer: Uyğun buferin və onun düzgün həcminin seçimi toxumadan toxumaya dəyişir və sınaq və səhv üsulu ilə aparılan yoxlamalarla müəyyən edilməlidir.
  • Ayrılma / təmizlənmə: Zülal lizatlarında DNA və ya karbohidratlar kimi biomolekulların artıq miqdarı ola bilər; bunlar zülalların çökdürülməsi (dezoksixolat–trixlorsirkə turşusu) və ya buferin dəyişdirilməsi ilə kənarlaşdırıla bilər.

Chittapalo və Noomhorm (2009) tədqiqatlarında ultrasəslə işləmənin zülal çıxımını artırdığını və ultrasəslə toxuma homogenləşdirilməsi və lizis prosesinin mövcud ekstraksiya proseslərini əhəmiyyətli dərəcədə təkmilləşdirə bildiyini – yeni kommersiya ekstraksiyası imkanları yaratdığını bildirmişlər.
 

Zülalların ayrılması və DNA fraqmentasiyası üçün çoxsaylı nümunələrin eyni şəraitdə eyni vaxtda hazırlanmasını təmin edən ultrasəs CupHorn.

Ultrasəs CupHorn zülalların ayrılması və DNA fraqmentasiyası üçün çoxsaylı nümunələrin eyni şəraitdə, eyni vaxtda və yüksək səmərəliliklə hazırlanmasını təmin edir.

Heyvan toxumasından zülal ekstraksiyası

UP100H ultrasəs cihazı hüceyrə kulturası lövhələrinin nümunə hazırlanmasında tez-tez istifadə olunan laboratoriya homogenizatorudur.Bütöv toxumanın (məsələn, böyrək, ürək, ağciyər, əzələ və s.) hazırlanması üçün proteazaların təsiri ilə parçalanmanın qarşısını almaq məqsədilə toxuma təmiz alətlərlə, yaxşı olar ki, buz üzərində və mümkün qədər tez çox kiçik hissələrə bölünməlidir (məsələn, RIPA kimi lizis buferi və ya proteaza və fosfataza inhibitorları qarışığı olan hipotonik lizis buferi). Hissələrə bölündükdən sonra sürətli dondurma üçün nümunə maye azota salınır. Nümunə sonradan istifadə üçün -80°C-də saxlanıla və ya dərhal homogenləşdirmə üçün buz üzərində tutula bilər. Ultrasəslə ekstraksiyadan dərhal əvvəl nümunə sınaq borusuna buz kimi soyuq lizis buferi (DTT, leupeptin və aprotinin proteaza inhibitorları ilə) sürətlə əlavə edilir (hər ~10 mg toxuma üçün təxminən ~600 μL bufer tövsiyə olunur). Hər nümunə sınaq borusu üçün təxminən 20–60mg toxuma tövsiyə olunur.
Ultrasəslə homogenləşdirmə, lizis və ekstraksiya mikrouclu sonotrodla təchiz edilmiş UP100H və ya UP200Ht kimi ultrasəs homogenizatoru ilə aparılır. Ultrasəslə işləmə müddəti 15 san. ultrasəslə işləmə və 10 san. fasilədən ibarət ultrasəs dövr rejimində 60–90 san. təşkil edir. Nümunə bütün müddət ərzində buz içində saxlanmalıdır.
Ultrasəslə homogenləşdirmədən / ekstraksiyadan sonra lizat təxminən 20 dəq. ərzində 27.000g-də sentrifuqalanır. Daha sonra supernatant toplanır ki, zülal konsentrasiyası Pierce BCA zülal analizi kimi bir zülal analizi ilə müəyyən edilə bilsin.

Qan zərdabından zülal ekstraksiyası

Zərdab və fosfat buferinin homogen qarışığını əldə etmək üçün ultrasəslə hüceyrə lizisindən əvvəl nümunə əvvəlcə vorteks qarışdırıcıda qarışdırılır. Ultrasəslə lizis üçün nümunə UP100H kimi ultrasəs laboratoriya homogenizatoru ilə 20% amplitudada 8 dövr ərzində işlənir; hər dövr 5 saniyə işləmə və 15 saniyə dayanma müddətindən ibarətdir. Zülal ekstraksiyası dövrlərlə ultrasəslə işləmə (pulsasiya rejimi) və nümunənin həddindən artıq qızmasının və termik parçalanmasının qarşısını almaq üçün onun buz üzərində yerləşdirilməsi ilə aparılır. Zərdabda IEF zamanı aşağı molekulyar kütləli zülalların ayrılmasına mane olan çox miqdarda yüksək molekulyar kütləli zülal (albumin, α1-antitripsin, transferrin, haptoqlobulin, immunoqlobulin G və immunoqlobulin A kimi) olduğundan, onların zərdabdan kənarlaşdırma sütunu vasitəsilə uzaqlaşdırılması tövsiyə olunur.

Bitki toxumasından zülal ekstraksiyası

Təzə, yumşaq bitki toxuması, məsələn, mamır və s., sadəcə doğranmış nümunə materialını ultrasəslə işləmə üçün lizis buferinə yerləşdirməklə asanlıqla parçalana bilər. Toxumlar, küknar iynələri və s. kimi sərt, odunlaşmış bitki toxumaları quru halda üyüdülməlidir. Bəzi bərk, oduncaqlı bitki materialları ultrasəslə ekstraksiyadan əvvəl dondurulmalı və maye azotda üyüdülməlidir. Bitki hüceyrə kulturlarının suspenziyaları üçün lizis buferində 30 ilə 150 saniyə arasında ultrasəslə işləmə əsasən kifayətdir. Balqabaq toxumları kimi daha sərt material aşağıda təsvir edildiyi kimi daha intensiv ultrasəslə işləmə tələb edir.
 

Elmi tədqiqat və analizdə hüceyrələrin parçalanması və zülal ekstraksiyası üçün ideal ultrasəs cihazını necə seçməliBu təlimat laboratoriya, analiz və tədqiqat işlərində lizis, hüceyrələrin parçalanması, zülalların ayrılması, DNT və RNT fraqmentasiyası kimi nümunə hazırlama tapşırıqları üçün hansı növ ultrasəs cihazının daha uyğun olduğunu izah edir. Tətbiqinizə, nümunə həcminə, nümunə sayına və emal məhsuldarlığına uyğun ideal ultrasəs cihazı növünü seçin. Hielscher Ultrasonics sizin üçün ideal ultrasəs homogenizatoruna malikdir!
Bu təlimat laboratoriya, analiz və tədqiqat işlərində lizis, hüceyrələrin parçalanması, zülalların ayrılması, DNT və RNT fraqmentasiyası kimi nümunə hazırlama tapşırıqları üçün hansı növ ultrasəs cihazının daha uyğun olduğunu izah edir. Tətbiqinizə, nümunə həcminə, nümunə sayına və emal məhsuldarlığına uyğun ideal ultrasəs cihazı növünü seçin. Hielscher Ultrasonics sizin üçün ideal ultrasəs homogenizatoruna malikdir!

 

Balqabaq toxumlarından ultrasəslə albumin ekstraksiyası protokolu

S24d40 ilə təchiz edilmiş UP400St ultrasəs toxuma homogenizatoru – bitki və heyvan toxumalarından zülal ekstraksiyası üçün (Böyütmək üçün klikləyin!)İncə üyüdülmüş balqabaq toxumu tozundan albuminin ultrasəslə zülal ekstraksiyası üçün 250mL şüşə stəkana 10 g yağsızlaşdırılmış balqabaq toxumu tozu və həlledici kimi 100 mL deionlaşdırılmış su əlavə edilir. Zülal ekstraksiyası iki mərhələdən ibarətdir: əvvəlcə nümunə aşağıdakı cihazla ultrasəslə işlənir: S24d7 sonotrodu ilə təchiz edilmiş zond tipli UP400St ultrasəs cihazı (400W, 24kHz). Ultrasəslə homogenləşdirmə zamanı şüşə stəkan soyuq su vannasına yerləşdirilir. UP400St ultrasəs cihazının qoşula bilən temperatur sensoru və temperatura nəzarət parametrləri nümunənin temperaturunun həmişə 30°C-dən aşağı saxlanmasını təmin edir. Ultrasəslə işləmə zamanı temperatura dəqiq nəzarət albuminin denaturasiyasının qarşısını alır. İkinci mərhələdə ekstraksiya qarışdırıcı ilə 200 rpm sürətində və 30°C-də aparılmışdır. Daha sonra stəkan termostatlı çalxalayıcıya köçürülür. Qlobulin distillə edilmiş su ilə dializ vasitəsilə kənarlaşdırılır. Qlobulin kənarlaşdırıldıqdan sonra albumin profilini müəyyən etmək üçün zülal ekstraktından nümunə götürülə bilər və sonra albuminin koaqulyasiyası üçün 0,1 M HCl istifadə edilərək pI=3,0 səviyyəsinə tənzimlənir. Bərk faza 5000g-də, 20°C-də sentrifuqalama ilə ayrılır və deionlaşdırılmış suda yenidən həll edilir. Albumin konsentratında zülal nisbətini artırmaq üçün albuminin koaqulyasiyası iki dəfə aparılır.

Düyü kəpəyindən zülal konsentratının hazırlanması üçün ultrasəslə qələvi zülal ekstraksiyası göstərir ki, ultrasəslə işləmə ənənəvi ekstraksiya üsulları ilə müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə daha qısa ekstraksiya müddətində daha yüksək zülal çıxımı verir.

UP100H ultrasəs homogenizatoruBu videoçarx laboratoriyalarda nümunələrin hazırlanması üçün geniş istifadə olunan Hielscher UP100H ultrasəs homogenizatorunu göstərir.

Funksional iNOS fermenti üçün nümunə hazırlama protokolu

Tam funksional iNOS fermenti əldə etmək üçün (məsələn, dərman skrininqi üçün) aşağıdakı protokol tövsiyə olunur: hüceyrə suspenziyası buz üzərinə yerləşdirilməli və UP100H ilə 10µm amplitudada, 5 san. ultrasəslə işləmə və buz üzərində 25 san. fasilədən ibarət dövr rejimində işlənməlidir. Prosedur təxminən 3 dəfə təkrarlanmalıdır. Ultrasəslə işləmə dövrləri arasındakı fasilə temperatur artımını azaldır və buna görə də denaturasiya riskini azaldacaq.

Ultrasəslə zülalların həll edilməsi

Ultrasəslə işləmə adətən bir neçə saat tələb edən zülalların həll edilməsi prosesini sürətləndirə bilər. Nümunənin həddindən artıq qızmasının və karbamid tərkibli məhlullarda zülalların parçalanmasının və modifikasiyalarının qarşısını almaq üçün ultrasəs impulsları bir neçə saniyədən çox davam etməməlidir.

Qapalı flakonların ultrasəslə işlənməsi üçün VialTweeter ilə UP200StVialTweeter çarpaz çirklənmə olmadan 10 flakona qədər nümunəni tamamilə eyni şəraitdə eyni vaxtda ultrasəslə işləmək üçün unikal ultrasəs sistemidir.
VialTweeter çarpaz çirklənmə olmadan 10 flakona qədər nümunəni tamamilə eyni şəraitdə eyni vaxtda ultrasəslə işləmək üçün unikal ultrasəs sistemidir.
Bioloji nümunələrin ultrasəslə lizisi üçün S26d2 mikroucu ilə təchiz edilmiş UP200Ht ultrasəs cihazı

UP200Ht ultrasəs cihazı kiçik nümunələrin ultrasəslə işlənməsi üçün 2mm ölçülü S26d2 mikroucu ilə təchiz olunmuşdur.

Zülal ekstraksiyası üçün ultrasəs avadanlığı

Hielscher Ultrasonics hüceyrələrin, toxumaların, bakteriyaların, mikroorqanizmlərin, mayaların və sporların parçalanması üçün geniş çeşiddə ultrasəs homogenizatorları təklif edir.
Hielscher laboratoriya ultrasəs cihazları güclüdür və istifadəsi asandır. 24/7 iş rejimi üçün hazırlanmış bu cihazlar möhkəm və səmərəli laboratoriya və masaüstü cihazlar kimi layihələndirilmişdir. Bütün cihazlarda çıxış enerjisi və amplituda dəqiq idarə oluna bilir. Geniş aksesuar çeşidi əlavə quraşdırma variantları yaradır. VialTweeter, UP200Ht, UP200St və UP400St kimi rəqəmsal ultrasəs cihazlarında inteqrasiya edilmiş temperatura nəzarət və məlumatların avtomatik qeydə alınması üçün daxili SD kart mövcuddur.
Çoxsaylı nümunələrin dolayı, çarpaz kontaminasiya olmadan və eyni vaxtda ultrasəslə işlənməsi üçün VialTweeter və ya ultrasəs CupHorn təklif edirik.
Aşağıdakı cədvəl nümunə hazırlanması, hüceyrələrin parçalanması və ekstraksiya üçün ultrasəs cihazlarımız haqqında ümumi məlumat verir. Hər ultrasəs homogenizatoru haqqında daha ətraflı məlumat almaq üçün cihazın növünə klikləyin. Yaxşı təlim keçmiş və uzun illərin təcrübəsinə malik texniki heyətimiz nümunə hazırlanması üçün ən uyğun ultrasəs cihazını seçməyinizə məmnuniyyətlə kömək edəcək!
 

Partiyanın həcmi Axın sürəti Tövsiyə olunan cihazlar
10-a qədər flakon və ya sınaq borusu n.a. VialTweeter
çoxyuvalı / mikrotitr lövhələri n.a. UIP400MTP
çoxsaylı sınaq boruları / qablar n.a. CupHorn
1-dən 500mL-ə qədər 10-dan 200mL/min-ə qədər UP100H
10-dan 1000mL-ə qədər 20-dən 200mL/min-ə qədər UP200Ht, UP200St
10-dan 2000mL-ə qədər 20-dən 400mL/min-ə qədər UP400St

Tətbiqinizdən, materialınızdan və nümunə həcmindən asılı olaraq, nümunə hazırlanması üçün sizə ən uyğun qurğu konfiqurasiyasını tövsiyə edəcəyik. Bu gün bizimlə əlaqə saxlayın!

Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizə sual verin!

Əlavə məlumat istəyin

Ultrasəs homogenizatorları, biotexnologiya və proteomika sahələrində tətbiqlər, eləcə də qiymətlər haqqında əlavə məlumat almaq üçün aşağıdakı formadan istifadə edin. Hüceyrələrin parçalanması və zülalların ekstraksiyası prosesinizi Sizinlə müzakirə etməkdən və tələblərinizə cavab verən ultrasəs cihazı təklif etməkdən məmnun olarıq!





 

Çoxyuvalı lövhələrin ultrasəslə işlənməsi üçün UIP400MTP ultrasəs cihazıVideoda yüksək intensivlikli ultrasəs vasitəsilə istənilən standart çoxyuvalı lövhədə nümunələrin etibarlı hazırlanmasını təmin edən UIP400MTP ultrasəs nümunə hazırlama sistemi göstərilir. UIP400MTP cihazının tipik tətbiqlərinə hüceyrə lizisi, DNT, RNT və xromatinin parçalanması, eləcə də zülal ekstraksiyası daxildir.
Videoda yüksək intensivlikli ultrasəs vasitəsilə istənilən standart çoxyuvalı lövhədə nümunələrin etibarlı hazırlanmasını təmin edən UIP400MTP ultrasəs nümunə hazırlama sistemi göstərilir. UIP400MTP cihazının tipik tətbiqlərinə hüceyrə lizisi, DNT, RNT və xromatinin parçalanması, eləcə də zülal ekstraksiyası daxildir.
Hielscher ultrasəs cihazları brauzer vasitəsilə uzaqdan idarə oluna bilər. Ultrasəslə işləmə parametrləri izlənilə və prosesin tələblərinə dəqiq uyğunlaşdırıla bilər.

Hielscher rəqəmsal ultrasəs cihazları brauzer vasitəsilə uzaqdan idarəetmə və inteqrasiya edilmiş SD kartda məlumatların avtomatik qeydə alınması funksiyalarına malikdir.

Toxuma nümunələrindən zülal ekstraksiyası üçün VialTweeter ultrasəs cihazı (Böyütmək üçün klikləyin!)

VialTweeter dolayı ultrasəslə işləmə üçün.



Bilməyə dəyər faktlar

Proteomika

Proteomika zülalları və proteomu araşdıran tədqiqat sahəsidir. Zülallar orqanizmlərdə çox geniş çeşiddə həyati funksiyalar yerinə yetirir. Proteom müəyyən bir vaxtda genom, hüceyrə, toxuma və ya orqanizm tərəfindən ifadə olunan zülalların tam məcmusudur. Proteom zamanla və hüceyrənin və ya orqanizmin üzləşdiyi müxtəlif tələblər və ya stresslərə uyğun olaraq dəyişir. Daha dəqiq desək, proteom müəyyən tip hüceyrədə və ya orqanizmdə, müəyyən vaxtda, müəyyən edilmiş şəraitdə ifadə olunan zülalların məcmusudur. Termin zülallar və genom sözlərinin birləşməsindən yaranmışdır. Proteomika proteomun öyrənilməsidir.

Zülal

Zülallar bir və ya bir neçə uzun amin turşusu qalıqları zəncirindən təşkil olunan iri biomolekullardır – makromolekullar adlandırılırlar. Zülallar həm bitki, həm də heyvan mənşəli bütün orqanizmlərdə mövcuddur və bioloji funksiyaların əksəriyyəti üçün həlledici əhəmiyyət daşıyır. Zülallar çoxlu bioloji məlumat ehtiva etdiyindən analitik məqsədlərlə, məsələn, proteomik tədqiqatlar üçün ekstraksiya edilir. Zülalların yerinə yetirdiyi ən mühüm funksiyalara metabolik reaksiyaların katalizi, DNA replikasiyası, stimullara cavab və molekulların bir yerdən başqa yerə daşınması daxildir. Zülallar bir-birindən əsasən amin turşuları ardıcıllığına görə fərqlənir; bu ardıcıllıq onların genlərinin nukleotid ardıcıllığı ilə müəyyən edilir və adətən zülalın fəaliyyətini müəyyən edən xüsusi üçölçülü quruluşa qatlanmasına səbəb olur. Zülallar – peptidlərlə yanaşı – qidanın əsas komponentlərindən biridir. Buna görə də proteomika qida elmində proseslərin, qida təhlükəsizliyinin və qida dəyərinin qiymətləndirilməsinin optimallaşdırılması üçün güclü vasitədir.

Cloud Point Extraction

Cloud Point Extraction analitlərin ayrılması və ilkin qatılaşdırılması üçün analitik mərhələdən əvvəl tətbiq olunan prosedurdur. Ultrasəslə işləmə ilə birləşdirildikdə bulanma nöqtəsində ekstraksiya intensivləşdirilə bilər və proses daha səmərəli, daha sürətli və ətraf mühit üçün daha əlverişli olur. Ultrasəslə işləmə tətbiq edildikdə bulanma nöqtəsində ekstraksiya analitlərin hazırlanması üçün əhəmiyyətli dərəcədə daha səmərəli üsuldur. Ultrasəs dəstəyi ilə bulanma nöqtəsində ekstraksiya haqqında daha ətraflı oxuyun!

Gel elektroforezi

Gel elektroforezi DNA, RNA və zülallar kimi makromolekulların, eləcə də onların fraqmentlərinin ölçü və yük əsasında ayrılması və təhlili üçün əsas üsuldur. Klinik kimyada zülalların yükə və/və ya ölçüyə görə ayrılması üçün (IEF aqarozası, əsasən ölçüdən asılı deyil), biokimyada, molekulyar biologiyada və proteomikada isə DNA və RNA fraqmentlərinin qarışıq populyasiyasını uzunluğa görə ayırmaq, DNA və RNA fraqmentlərinin ölçüsünü qiymətləndirmək və ya zülalları yükə görə ayırmaq üçün istifadə olunur.

Hüceyrə kulturları

Hüceyrə kulturası hüceyrələrin nəzarət olunan şəraitdə yetişdirildiyi idarə olunan böyümə prosesidir. Hüceyrə kulturasının şəraiti hər hüceyrə tipi üçün fərqlənir. Ümumiyyətlə, hüceyrə kulturasının mühiti əsas qida maddələrini (amin turşuları, karbohidratlar, vitaminlər, minerallar), böyümə amillərini, hormonları və qazları (CO2, O2) təmin edən və fiziki-kimyəvi mühiti (pH buferi, osmotik təzyiq, temperatur) tənzimləyən substrat və ya qida mühiti olan uyğun qabdan (məsələn, Petri qabı) ibarətdir. Hüceyrələrin əksəriyyətinə səth və ya süni substrat lazımdır, digər hüceyrə kulturları isə qida mühitində sərbəst üzən vəziyyətdə yetişdirilə bilər (suspenziya kulturası, hüceyrə suspenziyası).
Heyvan hüceyrə xətlərinin kütləvi kulturları virus vaksinlərinin və biotexnoloji yolla əldə edilən digər məhsulların sənaye istehsalında istifadə olunur. İnsan kök hüceyrələri hüceyrə sayını artırmaq və transplantasiya məqsədilə hüceyrələri müxtəlif somatik hüceyrə tiplərinə diferensiasiya etdirmək üçün yetişdirilir.

Toxuma nümunələri

Toxuma termini hüceyrə materialının təşkilati səviyyə baxımından hüceyrələrlə bütöv orqan arasında olduğu aralıq hüceyrə quruluşunu təsvir edir. Toxumada eyni mənşəli, birlikdə müəyyən bir funksiyanı yerinə yetirən oxşar hüceyrələr birləşir. Çoxsaylı toxumaların funksional qruplaşması ilə orqanların mürəkkəb quruluşları yaranır.
Toxumadan biologiya, histologiya/histopatologiya, parazitologiya, biokimya və immunohistokimya tədqiqatları, eləcə də toxuma yetişdirilməsi və DNA ekstraksiyası üçün nümunələr götürülür. Heyvan (alt bölmə: məməli toxuması) və bitki toxumalarını fərqləndirmək olar. Heyvan toxumaları dörd əsas tipə bölünür: birləşdirici, əzələ, sinir və epitel toxuması. Bitki toxuması aşağıdakı üç toxuma sisteminə bölünür: epidermis, əsas toxuma və keçirici toxuma.
Toxuma nümunələri heyvan və ya bitki hissələrindən, məsələn, sümük, əzələ, yarpaq və s.-dən hazırlana bilər.

Bədən mayeləri

Qan, zərdab, plazma, onurğa-beyin mayesi, tüpürcək və sinovial maye diaqnostik baxımdan əhəmiyyətli məlumatların zəngin mənbəyini təşkil edən bədən mayeləridir. Buna görə də bədən mayesi nümunələrinin analiz üçün diqqətlə hazırlanması vacibdir. İlk çətinlik bədən mayelərində mövcud olan komponentlərin geniş dinamik diapazonu ilə bağlıdır.

Zülal konsentrasiyasının müəyyən edilməsi

Bradford analizi, Lowry analizi və bisinxonin turşusu (BCA) analizi zülal konsentrasiyasını müəyyən etmək üçün geniş istifadə olunan analizlərdir. İnək zərdab albumini (BSA) ən çox istifadə olunan zülal standartlarından biridir.

Lizis buferi

Lizis buferi hüceyrə materialına və ya toxumaya (toxuma kulturası, bitki, bakteriya, göbələk və s.), eləcə də hüceyrələrin bir quruluş daxilində olub-olmamasına və həmin quruluşun tipinə uyğun seçilməlidir. Zülalların, membranların və orqanellərin ekstraksiyası üçün geniş çeşiddə lizis buferləri bir və ya bir neçə detergentlə hazırlanır. Detergent adətən sınaq və səhv üsulu ilə aparılan yoxlamalarla və ya – mövcud olduqda – hazır zülal ekstraksiyası protokoluna uyğun seçilir. Detergent toxuma mənbəyi və zülallarla uyğun olmalıdır. Ümumiyyətlə, ekstraktın maksimum funksionallığını qorumaq üçün müəyyən toxuma / zülal üçün təsirli olan ən yumşaq detergent seçilir. Bundan əlavə, membranların və orqanellərin ekstraksiyası zamanı yumşaq detergent membranın bütövlüyünü qoruyur. Lizis buferlərində geniş istifadə olunan detergentlər əsasən qeyri-ion və ya zvitterion tipli olur, məsələn, CHAPS, dezoksixolat, Triton™ X-100, NP40 və Tween 20.
Məsələn, beyin, qaraciyər, bağırsaq, böyrək, dalaq və s. kimi toxumalar sadəcə RIPA ilə buferləşdirilə bilər – lakin proteaza inhibitorları və DTT (məsələn, gel elektroforezi üçün) əlavə edilməlidir.
Skelet əzələsi toxuması üçün lizis buferi (buz kimi soyuq): proteaza və fosfataza inhibitorları qarışığı əlavə edilmiş 20 mM Tris (pH 7,8), 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1 % Triton X-100, 10 % (w/v) qliserol, 1 mM EDTA, 1 mM ditiotreitol
Geniş istifadə olunan buferlərin və onların pH diapazonlarının cədvəli. Ümumiyyətlə, bu buferlər adətən 20–50 mM konsentrasiyalarda istifadə olunur.
 

Bufer pH diapazonu
Limon turşusu – NaOH 2,2 – 6,5
Natrium sitrat – limon turşusu 3,0 – 6,2
Natrium asetat – sirkə turşusu 3,6 – 5,6
Kakodil turşusunun natrium duzu – HCl 5,0 – 7,4
MES – NaOH 5,6 – 6,8
Natrium dihidrogenfosfat – dinatrium hidrogenfosfat 5,8 – 8,0
İmidazol – HCl 6,2 – 7,8
MOPS – KOH 6,6 – 7,8
Trietanolamin hidroxlorid – NaOH 6,8 – 8,8
Tris – HCl 7,0 – 9,0
HEPES – NaOH 7,2 – 8,2
Trisin – NaOH 7,6 – 8,6
Natrium tetraborat – bor turşusu 7,6 – 9,2
Bisin – NaOH 7,7 – 8,9
Qlisin – NaOH 8,6 – 10,6

Əksər buferlərin pH-ı temperaturdan asılıdır. Bu, xüsusilə Tris buferlərinə aiddir. pKa 25°C-də 8,06-dan 0°C-də 8,85-ə dəyişir.
(Buferin pH və pKa göstəriciləri: pH sulu məhlulda hidrogen ionlarının konsentrasiyasını ölçür. pKa (= turşunun dissosiasiya sabiti) əlaqəli, lakin daha spesifik göstəricidir, çünki molekulun müəyyən pH qiymətində necə davranacağını proqnozlaşdırmağa kömək edir.)

TRIzol

TRIzol quanidinium tiosianat–fenol–xloroform ekstraksiyası zamanı RNA/DNA/zülal ekstraksiyası üçün istifadə olunan kimyəvi məhluldur. Ultrasəs dəstəyi ilə TRIzol ekstraksiyasının istifadəsi eyni nümunədən yüksək DNA, RNA və zülal çıxımı verir və bununla digər ekstraksiya üsullarını üstələyir.

Ədəbiyyat/İstinadlar

Prosesinizi müzakirə etməkdən məmnun olarıq.

✕