Hielscher Ultrasəs Texnologiyası

Toxuma və Cell Mədəniyyətlərarası olan ultrasəs Zülal hasilatı

  • Zülal hasilatı proteomics mühüm nümunə hazırlanması addımdır.
  • Zülallar bitki və heyvan toxuma, mayalar və mikroorqanizmlərin hasil edilə bilər.
  • Sonication qısa hasilatı müddət ərzində yüksək protein verir verən etibarlı, səmərəli protein hasilatı üsuludur.

 

Dokular və hüceyrələrdən zülal çıxarılması

toxuma və mədəni hüceyrələri Zülal hasilatı, belə ELISA, SƏHİFƏ kimi bir çox biokimyəvi və analitik üsulları ərzində həyata keçirilir mühüm nümunə hazırlanması addımdır Qərb basma, Kütləvi spektrometri, və ya zülal təmizlənməsi. Ultrasonik mobil pozulması, lizisi və çıxarma zülal yüksək verir təmin etmək üçün dəqiq nəzarət texnikadır.

heyvan toxuma Zülal hasilatı

Bütün ölçülü toxumaların (məsələn, böyrək, ürək, ağciyər, əzələ və s.) Hazırlanması üçün toxum təmiz vasitələrlə, tercihen buzda çox kiçik parçalara bölünməlidir və proteazların pozulması qarşısını almaq üçün mümkün qədər tezdir (məsələn, RIPA ya da proteaz və fosfataz inhibitor kokteyli olan hipotonik lizis tamponu kimi lizis tamponu. Dəyişdikdən sonra nümunə snap dondurmaq üçün maye azotla batırılır. Nümunə, dərhal homojenləşdirmə üçün daha sonra istifadəsi üçün -80 ° C-də saxlana və ya buzda saxlana bilər. Ultrasonik ekstraksiyadan dərhal əvvəl, nümunə tüpünə sürətlə əlavə olaraq buzlu soyuq lizis tamponu (proteaz inhibitorları DTT, leupeptin və aprotininlə) (təxminən ~ 600 mL tamponun təxminən 10 mq toxuması təklif olunur). Təxminən. Hər bir nümunə tüpün başına 20-60mg toxuma təklif edilir.
Ultrasonik homogenization, lizisi və çıxarma kimi bir ultrasəs Homogenizer ilə həyata keçirilir Uf200 ः t və ya UP200StBir mikro-tip sonotrode ilə təchiz olunub. Sonication müddəti 60-90 san. 15 sec ultrasəs dövrü rejimi. sonication 10 sec. istirahət vaxtı. nümunə buz hər zaman saxlanılır.
ultrasəs homogenization / hasilatı sonra lysate təqribən 27,000g da mərkəzdənqaçma olunur. 20 min. zülal konsentrasiyası belə Pierce zülal təhlil BCA bir protein təhlil ilə müəyyən edilə bilər ki, sonra supernatent, toplanır.

Protein sonikasiyası nümunə hazırlamağın vacib bir üsuludur

İlə hüceyrələrdən ultrasəs zülal çıxarılması UP200St

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


qan zərdabında olan Zülal hasilatı

serum və fosfat bufer bir homogen qarışıq üçün nümunə ultrasəs mobil lizisi əvvəl ilk vortexed edir. ultrasəs lizisi üçün nümunə kimi ultrasəs laboratoriya Homogenizer ilə sonicated edir UP100H hər 5 saniyə dövründən 20% amplituda 8 dövründən və off 15 saniyə. Sonocation dövründən sonicationg və nümunə bir ısınmayı və istilik deqradasiyası yol ki, buz üzərində nümunə yerləşdirilməsi ilə həyata keçirilir. serum İEF əsnasında aşağı molekulyar çəki zülalların ayrılması ilə müdaxilə (məsələn albumin, α1 antitripsin, Transferin, haptoglobulin, immunoqlobulinin G və immunoqlobulinin A) yüksək molekulyar çəki zülal, böyük məbləğdə var-ci ildən, onları boşaltmak üçün tövsiyə olunur bir tükənməsi sütun istifadə serum olan.

bitki toxuma Zülal hasilatı

Təzə, yumşaq bitki toxuma, məsələn moss və s. asanlıqla sadəcə sonication üçün lizisi bufer doğranmış nümunə maddi yerləşdirilməsi ilə pozularsa bilər. belə fir iynələr və s. toxum kimi sərt, ligenous bitki toxumalarının, quru yer olmalıdır. Bəzi ağır, meşəli bitki materialları dondurulmuş olunmalıdır və maye azot torpaq əvvəl sonication tərəfindən hasil. bitki mobil mədəniyyət suspensions, bir lizisi bufer 30 və 150 ​​saniyə arasında ultrasəs müalicə əsasən kifayətdir. aşağıda təsvir kimi balqabaq toxumu kimi sərt material daha sıx sonication tələb edir.

balqabaq toxum albumin ultrasəs çıxarılması üçün Protokol

Ultrasonik toxuma homogenizer S24d40 ilə UP400St - bitki və heyvan toxuma protein çıxarılması üçün (Böyütmək üçün)gözəl yer balqabaq toxumu toz albumin ultrasəs zülal çıxarılması üçün, yağsızlaşdırılmış balqabaq toxumu toz 10 g və həlledici kimi deionised su 100 ml bir 250ml şüşə bulker əlavə olunur. Birincisi, nümunə bir probe tipli ultrasonicator ilə sonicated olunur: protein hasilatı iki addımlar ibarətdir UP400St (400W, 24kHz) monte sonotrode S24d7 ilə. şüşə bulker ultrasəs homogenization zamanı soyuq su hamamında yerləşdirilir. ultrasonicator qəbulu UP400St tıxanabilən temperaturlu sensorlar nümunə temperaturu həmişə 30 ° C-də saxlanılmasını təmin edir. Sonication zamanı dəqiq temperatur nəzarət ilə, albümin bir denaturation qarşısını alır. İkincisi, hasilat 200 rpm sürətində və 30 ° C-də bir qarışdırıcı ilə aparılmışdır. Daha sonra baqqal termostatik bir çalkalayıcıya köçürülür. Globulin distillə edilmiş su ilə diyaliz vasitəsilə çıxarılır. Globulinin çıxarılmasından sonra, protein ekstraktı albümin profilinin müəyyən edilməsi üçün nümunə ola bilər və sonradan albumin pıhtılaşması üçün 0.1 M HCl ilə pI = 3.0-ə düzəldilir. Qatı faz 5000g, 20 ° C-də santrifüqasiya ilə ayrılır və deionlaşdırılmış suda yenidən həll olunur. Albumin konsentratında protein nisbətini artırmaq üçün albümin pıhtılaşma iki dəfə aparılır.

düyü kəpək olan protein konsentrat hazırlanması üçün Ultrasonik qələvi protein hasilatı göstərir ki, əhəmiyyətli dərəcədə qısa hasilatı vaxt ali protein gəlir ultrasəs müalicə nəticələri – şərti hasilatı üsullarla müqayisədə.

toxuma nümunələri protein çıxarılması üçün ultrasəs cihaz VialTweeter (Böyütmək üçün)

VialTweeter dolayı sonication üçün.

üstünlükləri

  • sürətli
  • yüksək verir
  • Yüksək səmərəli
  • parametrlərinin dəqiq nəzarət
  • reproducible nəticələri
  • xətti genişlənmə

funksional İnose ferment üçün Nümunə hazırlanması protokol

(Məsələn narkotik seçim üçün) tam funksional İnose ferment almaq üçün aşağıdakı protokol tövsiyə olunur: mobil asma bir ilə buz və sonicate yerləşdirilmiş olmalıdır UP100H 5 san dövrü rejimi 10μm amplituda da. sonication 25 sec. buz üzərində istirahət. proseduru təqribən təkrar olunmalıdır. 3 dəfə. sonication dövründən arasında istirahət vaxtı temperatur artımı azaldır və buna görə də denaturation riskini azaldır.

Ultrasonik Zülal Solubilization

Sonication adətən bir neçə saat tələb protein solubilization prosesi sürətləndirə bilər. sidik cövhəri olan həlləri protein tənəzzül və dəyişikliklər nümunə overheat və qarşısını almaq üçün, ultrasəs bursts neçə saniyə daha uzun olmamalıdır.

General Təlimatlar

Temperatur nəzarət: istilik denaturation olmadan yüksək protein gəlir təmin etmək üçün, hasilatı zamanı temperatur nəzarət olmalıdır. Hielscher dövlət-of-art ultrasəs homogenizers – də ultrasəs disintegrator ya sonificator deyilən – dəqiq nəzarət edir. Onlar plugable temperatur sensor ilə gəlir. ultrasəs Homogenizer qəbulu variantları, bir maksimum temperatur müəyyən edilə bilər. Bu temperatur max əldə zaman nümunə aşağı soyudulur qədər ultrasonicator avtomatik olaraq dayanır.
Tampon: uyğun bufer və bufer sağ həcmi choise toxuma toxuma dəyişir və sınaq və səhv test fiqurlu-out olmalıdır.
Isolation / təmizlənməsi: Protein Lysates protein yağıntı (deoxycholate-trichloroacetic turşusu) tərəfindən çıxarıla bilər belə DNT və ya karbohidratlar kimi biomolecules, bir artıq olan və ya mübadiləsi bufer bilər.

Chittapalo və (2009) Noomhorm protein gəlir sonication istifadə artıb ki, ultrasəs toxuma homogenization və lizisi proses əhəmiyyətli dərəcədə mövcud hasilatı prosesləri artırmaq olar ki, – yeni kommersiya hasilatı imkanları imkan.

Hielscher səs əlavə SPB-L və ultrasəs cihaz UP200St ilə qorunması səs. (Böyütmək üçün)

Ultrasonik toxuma homogenizer UP200St səmərəli zülal çıxarılması üçün

ultrasəs müalicə dəqiq nəzarət (Böyütmək üçün)

sonication prosesinin dəqiq əməliyyat və monitorinqi üçün Browser nəzarət

Zülal hasilatı üçün Ultrasonic Equipment

Hielscher ultrason hüceyrələri, toxumaların, bakteriya, mikroorqanizmlərin, maya, və sporlar dağılması üçün ultrasəs homogenizers geniş çeşidini təklif edirik.
Hielscher laboratoriya ultrasonicators güclü və fəaliyyət üçün asandır. 24/7 əməliyyat üçün tikilmiş, onlar sağlam və səmərəli laboratoriya və bench-top cihazlar kimi nəzərdə tutulmuşdur. bütün cihazlar üçün, enerji çıxış və amplituda dəqiq nəzarət edə bilər. geniş Aksessuarlar Daha quraşdırma variantları açır. kimi digital cihazlar VialTweeter, Uf200 ः t, UP200StUP400St vahid temperatur nəzarət və var daxili avtomatik data qeydiyyatdan üçün SD kart.
dolayı, cross-çirklənmə-free və çox nümunələri eyni zamanda sonication üçün, biz təklif VialTweeter və ya Ultrasonik cuphorn.
Sizin tətbiqi, maddi və nümunə həcmi asılı olaraq, biz sizin nümunə hazırlayıcı üçün ən uyğun quraşdırma tövsiyə edəcəkdir. Bu gün bizə müraciət edin!

Bizimlə əlaqə saxlayın! Bizdən soruşun!

Ultrasonik homogenizasiya haqqında əlavə məlumat tələb etmək istəyirsinizsə, aşağıdakı formu istifadə edin. Sizin tələblərinizə cavab verən ultrasəs sistemi təklif etməkdən şadıq.









Xahiş edirik unutmayın Gizlilik Siyasəti.


Ədəbiyyat / Referanslar

  • Chittapalo T, Noomhorm A (2009): ultrasəs yağsızlaşdırılmış düyü kəpək və zülal konsentratlar xassələri olan protein qələvi hasilatı yardım. Int J Food Sci Technol 44: 1843-1849.
  • Simoes, André E.Ş:; Pereira, Diane M. Amaral, Joan. Nunes, Ana M. Gomes, Sofia E. Roberts, Peter M. Lo, Adrian C. D'Hooge, Rudi; Clifford J, sükan arxasında oturmaq. Thibodeau, Stephen C. Borralho, Peter M. Rodrigues, Cecilia M. P. (2013): Trizol ya Trizol LS RNT hasilatı və uzun müddətli saxlama sonra çox mənbə nümunələri zülalların səmərəli bərpa. BMC Genomics, 2013, 14: 181.


Bilmək lazımdır

proteomics

Proteomics zülal və proteome araşdırır tədqiqat sahəsidir. Zülallar orqanizmlərin ərzində həyati funksiyaları geniş array fullfil. proteome müəyyən bir zaman bir genomu, hüceyrə, toxuma, və ya orqanizm ifadə zülalların bütün müəyyən edilir. proteome bir hüceyrə və ya orqanizm məruz ki, vaxt və fərqli tələbləri və ya stress ilə dəyişir. Daha konkret desək, bu hüceyrə və ya orqanizmin bir növü ifadə zülalların müəyyən edilir, müəyyən şəraitdə bir zamanda. müddətli zülal və genomu bir qarışığı var. Proteomics proteome öyrənilməsi edir.

zülal

böyük biomolecules olunur zülallar, qondarma macromolecules – amin turu qalıqlarının bir və ya daha uzun zəncirlərindən ibarətdir. Proteinlər bitki və heyvan mənşəli bütün orqanizmlərdə mövcuddur və bioloji funksiyaların çoxu üçün vacibdir. Zülalların çoxu bioloji məlumatları olduğu üçün analitik məqsədlər üçün, məsələn, proteomik tədqiqatlar üçün çıxarılırlar. Zülalların ən əhəmiyyətli funksiyası arasında metabolik reaksiyaların kataliziyası, DNT replikasiyası, xəbərdarlıqlara cavab və molekulların bir yerdən digərinə nəql edilməsi daxildir. Proteinlər bir-birindən fərqlənirlər, əsasən onların genlərinin nükleotid sekansı ilə diktə edilən və adətən, onun fəaliyyətini təyin edən xüsusi bir üç ölçülü strukturun tərkibinə protein qatmağına səbəb olan amin turşuları sırası ilə fərqlənirlər. Proteinlər var – peptid başqa – Qida əsas komponentlərindən biridir. Buna görə də, proteomics proseslər, ərzaq təhlükəsizliyi və qida qiymətləndirilməsi optimize qida elm güclü bir vasitədir.

Gel Elektroforez

Gel elektroforez ayrılması və DNA, RNT və zülal, eləcə də onların ölçüsü və pulsuz əsasında onların fraqmentləri kimi makromolekulların təhlili üçün əsas metodudur. Bu pulsuz və / və ya ölçüsü ilə zülal ayırmaq üçün klinik kimya istifadə olunur (İEF agarose, mahiyyətcə ölçüsü asılı olmayaraq) və biokimya, molekulyar biologiya və proteomics DNT ölçüsünü hesablamaq üçün, uzunluğu DNT və RNT fraqmentləri bir qarışıq əhalisi ayrı-ayrı və ya RNT parçaları vəzifəli ilə zülal ayırmaq üçün.

Cell Cultures

Cell mədəniyyət hüceyrələri nəzarət şəraitində yetişdirilir olan nəzarət artan prosesdir. Cell mədəniyyət şərait hər bir hüceyrə növü üçün dəyişir. Ümumiyyətlə, bir mobil mədəniyyət mühiti substrat və ya əsas qida (amin turşuları, karbohidratlar, vitaminlər, minerallar), böyümə faktorları, hormonlar təchizatı orta və qazlar (CO ilə uyğun gəmi (məsələn Petri yeməyi) ibarətdir2,2) Və Physio-kimyəvi mühit (pH bufer, osmotik təzyiq, temperatur) tənzimləyir. digər mobil mədəniyyətlər mədəniyyət orta (körpü mədəniyyət, mobil körpü) üzən pulsuz becərilir bilər isə ən hüceyrələri, bir yerüstü və ya süni döşənəyi lazımdır.
heyvan mobil xətləri kütləvi mədəniyyət virus vaksinlər və digər biotechnologically edilən məhsulların sənaye istehsalında istifadə olunur. İnsan kök hüceyrələri hüceyrələrinin sayını artırmaq və nəqli məqsədlər üçün müxtəlif somatik hüceyrə növə hüceyrələri fərqləndirmək mədəni var.

toxuma nümunələri

mobil material hüceyrələri və tam orqanı arasında təşkilati səviyyədə olduğu müddət toxuma, mobil ara təsvir edir. toxuma bənzər hüceyrələr birlikdə xüsusi funksiyası yerinə yetirmək eyni mənşəli olan, yığılmış olunur. Çox toxumaların funksional qruplaşdırılması ki, orqanların kompleks strukturları formalaşır.
Toxuma biologiya, histologiya / Histopatoloji, parazitologiya, biokimya, immunhistokimya tədqiqat, eləcə də yetişdirmək və DNT çıxarış üçün örnek olunur. və bitki toxuma: Bu heyvan (məməli toxuma subdivision) arasında fərq ola bilər. Animal toxumaların birləşdirici, əzələ, sinir, və epitel toxuma dörd əsas növ qruplaşdırılıb. epidermisin, torpaq toxuma və damar toxuma: Plant toxuma Aşağıdakı üç toxuma sistemi bölünür.
Toxuma nümunələri heyvan və ya bitki hissələri, məsələn hazırlanmış ola bilər sümük, əzələ, yarpaq, və s.

Bədən mayeləri

Qan, serum, plazma, cerebrospinal maye, tüpürcək və sinovial maye diaqnostik müvafiq məlumatların böyük bir mənbə təklif bədən mayeləri var. Buna görə də, analiz üçün bədən maye nümunələrinin inkişaf etmiş bir hazırlıq vacibdir. ilk çətinlik bədən mayeləri mövcud komponentlərinin geniş dinamik diapazonu ilə bağlıdır.

zülal konsentrasiyası müəyyən edilməsi

Bradford təhlil, Lowry təhlil və bicinchoninic turşusu (BCA) təhlil zülal konsentrasiyası müəyyən etmək üçün ümumi təhlillər var. İri Buynuzlu serum albumin (BSA) ən çox istifadə olunan zülal standart biridir.

lizisi Buffer

Lizisi bufer mobil maddi və ya toxumasının (toxuma mədəniyyət, bitki, bakteriya, göbələklərin, və s.) Uyğun olaraq seçilmiş və olmalıdır hüceyrələri bir quruluş və quruluş növü olub. lizisi geniş zülal, membranların çıxarılması üçün TAKOZLARI və organelles bir və ya daha çox yuyucu ilə ifadə olunur. yuyucu adətən sınaq və səhv testlər və ya vasitəsilə seçilmiş – əgər varsa – Mövcud protein hasilatı protokola görə. yuyucu toxuma mənbəyi və zülalları ilə uyğun olmalıdır. Ümumiyyətlə, müəyyən bir toxuma / protein üçün çalışır mildest yuyucu, çıxarış maksimal funksionallıq təmin etmək üçün seçilir. Bundan başqa, membranların və orqanoidlərinin bir çıxarıldığı halda, mülayim yuyucu membran bütöv saxlayır. lizisi arabellekleri istifadə olunan yuyucu məsələn, əsasən nonionic ya zwitterionic var Chaps, deoxycholate, Triton ™ X-100, NP40 və Tween 20.
Məsələn, belə beyin, qaraciyər, bağırsaq, böyrək kimi toxumaların, dalaq və s. sadəcə RIPA ilə buffered bilər – lakin protease inhibitorları və (məsələn gel elektroforez üçün) DTT daxil edilməlidir.
20 mM Tris (pH 7,8), 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1% Triton X-100, 10% qliserin (/ v w), 1 mM EDTA: skelet əzələ toxuması (buz soyuq) üçün lizisi bufer 1 mM protease və fosfataza inhibitor kokteyl əlavə dithiothreitol
ümumi buferlər Cədvəl və onların pH üçündür. Ümumiyyətlə, bu buferlər adətən 20-50 mm konsentrasiyaları istifadə olunur.

Buffer pH sıra
Limon turşusu – NaOH 2.2 – 6.5
Sodium sitrat – Limon turşusu 3.0 – 6.2
Sodium asetat – sirkə turşusu 3.6 – 5.6
Cacodylic turşusu natrium duz – HCl 5.0 – 7.4
MY – NaOH 5.6 – 6.8
Sodium dihydrogen fosfat – dinatrium hidrogen fosfat 5.8 – 8.0
imidazol – HCl 6.2 – 7.8
Mops – KOH 6.6 – 7.8
Trietanolamin hidroxlorid – NaOH 6.8 – 8.8
Tris – HCl 7.0 – 9.0
HEPES – NaOH 7.2 – 8.2
Tricine – NaOH 7.6 – 8.6
Sodium tetraborate – Bor turşusu 7.6 – 9.2
Bicine – NaOH 7.7 – 8.9
Glycine – NaOH 8.6 – 10.6

Ən buferlər temperatur bir pH-asılılığını göstərir. Bu Tris buferlər üçün xüsusilə doğrudur. pKa 0 ° C 8.85 25 ° C 8,06 dəyişir.
bir bufer (pH və pKa: pH bir suda həll hidrogen ionlarının konsentrasiyası tədbirlər pKa (= turşusu dissosiasiya sabit) əlaqəli, lakin daha konkret tədbir bir molekul müəyyən bir çıxış edəcək necə proqnozlaşdırmaq üçün kömək edir ki, edir. pH dəyəri.)

TRIzol

TRIzol guanidinium Thiocyanate-fenol-xloroform hasilatı zamanı RNT / DNT / protein çıxarmaq üçün istifadə olunan kimyəvi həll edir. Eyni nümunə yüksək DNT, RNT və zülal rekoltesinde ultrasonically yardım TRIzol hasilatı nəticələri istifadə və bununla da digər hasilatı üsulları excels.