C. Elegans Nümunələrinin Ultrasəs Hazırlanması
Nematod qurdu olan C. elegans biologiyada geniş istifadə olunan model orqanizmdir. Təhlildən əvvəl nümunənin hazırlanması liziz, zülal və lipid ekstraksiyasını, eləcə də sonikasiya yolu ilə etibarlı şəkildə həyata keçirilə bilən RNT fraqmentasiyasını tələb edir. Ultrasəs hüceyrə pozucuları C. elegans nümunələrinin sürətli hazırlanması üçün etibarlı, mürəkkəb və istifadəsi asan cihazlardır.
C. Elegans Nümunələrinin Ultrasəs Hazırlanması
C. elegans, genomikanı, inkişaf biologiyasını və xəstəlikləri araşdırmaq üçün tədqiqat laboratoriyalarında geniş istifadə olunan yuvarlaq qurdlardır. C. elegans genomunda olan bir çox genlərin insanlarda funksional qarşılıqları var. Beləliklə, nematod qurdu insan xəstəlikləri üçün son dərəcə faydalı bir modeldir. C. elegansın geniş istifadəsinin digər üstünlükləri onun tərkibində bakteriyalar (məsələn, E. coli) olan boşqablarda asan və ucuz becərilməsi, şəffaflığı, rahat idarə olunması, həmçinin qurdları daha uzun müddət dondurmaq və saxlamaq imkanıdır.
Zülal və lipid analizi laboratoriyalarda müntəzəm prosedurlardır və ultrasəs nümunəsinin hazırlanması hər bir inkişaf mərhələsində (yəni embrionlar, sürfələr L1-L4, böyüklər) C. elegans nematodlarını lize etmək üçün müəyyən edilmiş üsuldur. C. elegans həmçinin hədəflənmiş zülalları həddindən artıq ifadə etmək üçün zülal ifadə sistemi kimi istifadə edildiyi üçün yüksək protein məhsuldarlığı verən etibarlı, təkrarlana bilən liziz və zülal çıxarma üsulu tələb olunur. Ultrasəs hüceyrələrinin pozulması və çıxarılması sistemləri zond tipli homogenizatorlar və çox nümunəli ultrasəs cihazı kimi mövcuddur. Rahat nümunə hazırlığı və hər cür nümunə ölçüləri üçün xidmət göstərən Hielscher Ultrasonics laboratoriya prosedurunuz üçün ideal ultrasəs hüceyrə pozucuya malikdir.

- Qurd homogenatlarının hazırlanması
- Protein çıxarılması
- lipidlərin çıxarılması
- Protein miqdarının təyini
- İmmunoçökmə
- Western Blotting
- RNT çıxarılması
- Enzimatik analizlər
VialTweeter 10 sınaq borusunun eyni vaxtda sonikasiyası üçün çox nümunəli hazırlama qurğusu.
C. Elegans pozulması və lizisi üçün ultrasəs protokolları
C. elegansın ultrasəs homogenləşdirilməsi və lizisi və sonrakı zülal və lipid çıxarılması müxtəlif homogenləşdirmə və lizis tamponlarından və s. istifadə edərək müxtəlif prosedurlardan istifadə etməklə həyata keçirilə bilər. Bütün liziz protokollarının ümumi cəhəti zülalın deqradasiyasının qarşısını almaq üçün nümunələrin davamlı olaraq buz üzərində saxlanmasıdır. Aşağıda biz sizə yüksək keyfiyyətli protein və ya lipid tərkibli C. elegans nümunələrinin hazırlanması üçün bəzi etibarlı və sürətli ultrasəs lizis və ekstraksiya protokollarını təqdim edirik.
Ultrasonik C. elegans Lysis-in üstünlükləri
- Etibarlı
- təkrarlana bilən
- dəqiq temperatur nəzarət
- prosesə etibarlı nəzarət
- zərif üsul
- tətbiq etmək asandır
- Təhlükəsiz
C. elegans Nümunələrindən Ultrasonik Zülal Ekstraksiya
C. elegans qurdlarının ultrasəs lizisi və zülal çıxarılması müxtəlif protokollardan istifadə etməklə həyata keçirilə bilər. Aşağıda təkrarlanan zülal çıxarılması nəticələri üçün bir neçə etibarlı və sürətli lizis protokollarını təqdim edirik.
Sonikasiya yolu ilə C. elegans qurdlarından sitozolik ekstraktın sürətli hazırlanması
Aşağıdakı protokolla siz 30 dəqiqədən az müddətdə C. elegans lizatlarını hazırlaya bilərsiniz.
C. elegans kolleksiyası
İstədiyiniz C. elegans qurdlarını 1,5 ml boru fosfat tamponlu şoran məhluluna (PBS) seçin və ya 1,5 ml PBS ilə boşqabdan yuyun. Qranullaşmaq üçün 1 dəqiqə 2000 rpm-də sentrifuqa edin. Nümunələri hər zaman buzda saxlayın.
Sonra, qurdları iki dəfə PBS ilə yuyun.
Daha sonra qurdları iki dəfə ddH ilə yuyun2O.
Qurdları ən azı 500ul homojenləşdirmə tamponunda (HB) yenidən dayandırın. Qurd nümunələri artıq ultrasəs lizis üçün hazırdır.
Daha yüksək protein ekstraktı keyfiyyəti üçün siz qurdları hər birini 5 dəqiqə PBS və steril, ultra saf suda (ddH) yuyaraq bakterial çirklənməni azaltmaq istəyə bilərsiniz.2O) və ya saxaroza floatasiyasını həyata keçirin. Qurd nümunələrini davamlı olaraq buz üzərində saxlayın.
Ultrasonik C. elegans Lizis Protokolu
- Ultrasəs homogenizatorunun istifadəyə hazır olması üçün ultrasəs cihazını əvvəlcədən hazırladığınızdan əmin olun (zond quraşdırılıb, sonikasiya proqramı əvvəlcədən qurulub).
- UP200St və ya UP200Ht ilə C. elegans lizisi üçün ultrasəsləmə mikrotipdən (məsələn, 2 mm-lik prob S26d2; sol şəklə bax) 40% amplituda 1 saniyə ərzində 30 saniyə fasilələrlə həyata keçirilməlidir. 30 saniyəlik fasilələrlə hər 1 saniyə üçün 5 sonikasiya dövrü C. elegans lizisi üçün idealdır. Əgər siz ilk dəfə lizis həyata keçirirsinizsə, mikroskopdan istifadə edərək hər nəbzdən sonra nümunənin kiçik alikotlarında lizisin gedişatını yoxlaya bilərsiniz.
- Qurdlar pozulduqda lizis uğurla başa çatır. Həddindən artıq səslənmə nüvələrin qırılması ilə nəticələnir və nümunə özlü və ya köpüklənəndə görünür. Nümunənin deqradasiyasının qarşısını almaq üçün, lazım gələrsə, daha çox puls istifadə edin. Yüksək keyfiyyətli protein ekstraktları əldə etmək üçün hər bir ultrasəs impuls dövrünün vaxtını artırmayın.
- Ultrasonik olaraq parçalanmış qurdları 4ºC-də 10 dəqiqə ərzində 14,000 rpm-də sentrifuqa edərək hüceyrə lizatını təmizləyin.
- Sonra, supernatantı təzə bir boruya köçürün və immunoprecipitation və ya digər analizlərə hazırlayın.
Əgər ultrasəs aparatınız dayağa quraşdırılıbsa, buz vannasını nümunə borularınızla birlikdə ultrasəs zondu altına qoyun və ultrasəs zondu 1,5 ml boruya daxil edin.
Homojenləşdirmə buferi üçün qeyd: Yuxarıdakı ultrasəs lizis protokolu üçün homogenləşdirmə buferini aşağıdakı kimi hazırlayın:
- 15 mM Hepes pH 7.6 – 15 ml 0,5 M
- 10 mM KCl – 2,5 ml 2 M
- 1,5 mM MgCl2 – 0.75 ml 1 M
- 0.1 mM EDTA – 100 ul 0,5 M
- 0.5 mM EGTA – 2,5 ml 0,1 M
- 44 mM saxaroza – 14,7 ml 50%
- İstifadədən dərhal əvvəl əlavə edin: 1mM DTT – 1M-dən 1000x
- üstəgəl bir proteaz inhibitoru
UIP400MTP Plitə Sonikatorundan istifadə edərək 96 Quyu Plitələrdə C. elegans-ın Yüksək Keçirilməli Lizisi
C. elegans Lysis (yetkin nematodlar)
UIP400MTP 80% amplituda, 20 dövr (hər sonikasiya dövrü: 30 san ON, 30 san OFF)
Lizis buferi:
- Seçim 1) 4% SDS, 0,1 M Tris/HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
- Variant 2) Co-immunoprecipitation (co-IP): 10 mM Tris HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.5 % NP-40 (Tam proteinaz inhibitor kokteyli)
Yüksək məhsuldarlıqlı DNT fraqmentasiyası
C. elegans (yetkin nematodlar) DNT 200-300bp: UIP400MTP nömrəli sonikator – 80% amplituda, 30 impuls təyin edin – hər 30 saniyə aktiv, 30 saniyə söndür
Yüksək məhsuldarlıqlı nümunə hazırlamaq üçün UIP400MTP Plitə Sonikatoru nümunələri çoxlu, mikrotitr plitələrdə və 96 quyu boşqablarda vahid şəkildə sonikləşdirir.
Kəmiyyət Yaxınlıq Təmizləmə Təhlilləri üçün C. elegans-ın Ultrasəs Lizisi
C. elegans embrionları (hər replikatda ~2 milyon) gənc gravid hermafroditlərin ağardılması yolu ilə bioloji üç nüsxədə təzə yığılıb və buz üzərində ultrasonikasiya edilib (dövr: 0,5 s, amplituda: 40-45%, 5 vuruş/sessiya, 5 seans, seanslar arası interval : 30 s; UP200S ultrasəs prosessoru mikro-ucu ilə S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) lizis tamponunda (ümumi həcm: ~600 μl; 50 mm Tris-HCl, pH 7.4, 100 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTTly, 10%rol , proteaz inhibitor qarışığı, 0,1% Nonidet P-40 Əvəzedicisi). Sonikasiyadan sonra Nonidet P-40 Əvəzedicisi 1%-ə qədər əlavə edildi və lizatlar 30 dəqiqə ərzində 4°C-də başın üstündə fırlanma ilə inkubasiya edildi, ardınca 4°C-də 20 dəqiqə ərzində 20,000 × g-də sentrifuqasiya edildi. Sonra təmizlənmiş lizat yuxarı lipid təbəqəsini pozmadan aspire edildi və ya anti-GFP agaroza muncuqlarına və ya bloklanmış nəzarət muncuqlarına (40-50 µl) yarıya bölündü. 60-90 dəqiqə ərzində 4°C-də başın üstündə quyruq fırlanmasından sonra muncuqlar bir dəfə 0,1% Nonidet P-40 Əvəzedicisi olan liziz tamponu ilə yuyuldu, ardınca hər iki tamponda (25 mm Tris-HCl, pH) iki dəfə yuyuldu. 7,4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2) və ya tampon II (1 mm Tris-HCl, pH 7,4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2) və ya hər ikisi. GFP:MBK-2 pull-downs üçün müxtəlif yuma şərtlərindən istifadə etməklə iki ayrı təcrübə aparıldı. Zülallar otaq temperaturunda 50 μl 6 m sidik cövhəri/2 M tiokarbamiddə orbital silkələnmə yolu ilə çıxarıldı. MBK-1::GFP aşağı açılan təcrübələr üçün zülallar iki dəfə 90°C-də 50μl 8 m guanidinium xloriddə silkələməklə, sonra etanol çöküntüsü ilə yuyuldu. Elut edilmiş protein nümunələri daha sonra məhlulda həzm olundu.
(müq. Chen və başqaları, 2016)
Ultrasonik Qurd Homogenləşdirilməsi və Lizis
C.elegans lizisi və zülal çıxarılması proseduru üçün hər bir nümunə üzrə müvafiq mərhələnin 30.000 nemotodu toplanmış və buz kimi soyuq S-bazalda yuyulmuş, 2 dəqiqə ərzində 1500 rpm-də sentrifuqasiya ilə konsentrasiya edilmiş, altı dəfə buz kimi S- ilə yuyulmuşdur. qalıq bakteriyaları aradan qaldırmaq üçün bazal, sonra istifadəyə hazır olana qədər buz üzərində saxlanılır. Protein çıxarılması üçün, gravid-yetkin qurdların sonuncu S-bazal yuyulmasından sonra kompakt qranul əmələ gətirməsinə icazə verildi. Sonra qurd qranulları 1 ml buz kimi soyuq Ekstraksiya Buferində [20 mM kalium fosfat, pH 7.4, 2 mM EDTA, 1% Triton-X-100, proteaz inhibitorları (Sigma P2714)] içində yenidən dayandırıldı və dərhal emal edildi.
~30.000 qravid-yetkin qurd (~100 mq yaş çəkiyə uyğundur), aa tipli ultrasəs cihazından (məsələn, mikrotip MS2 ilə UP50H) istifadə edərək, 3 saniyəlik 10 dövr ərzində 40% amplituda, 30-da ultrasəs edildi. 1 ml buz kimi soyuq ekstraksiya tamponu. (bax. Basxaran et al. 2012)
C. elegans-dan ultrasəs lipid ekstraktı
Metabolomikanın bir qolu olan lipidomikada bioloji sistemlərin lipid komplementi səciyyələndirilir və təhlil edilir. C. elegans metabolik lipidlərin qarşılıqlı təsirini və onların sağlamlıq və həyat müddətinə təsirini araşdırmaq üçün lipidomikada geniş istifadə olunur.
Ultrasonik lizis və ekstraksiya C. elegans embrionlarından, sürfələrdən və yetkin qurdlardan sfinqolipidlər kimi lipidləri azad etmək üçün istifadə olunur. Ultrasonication qurd homogenatları hazırlamaq və daha sonra nümunədən lipidləri çıxarmaq üçün istifadə olunur.
C. elegans-dan Ultrasonik Lipid Ekstraksiyasına dair Protokol
C. elegans qranulunu buz üzərində əridin və 0,5 ml ultrasu ilə yenidən dayandırın. Nümunələri davamlı olaraq buzda saxlayaraq, 1,5 ml sınaq borularında C. elegans nümunələrini sonikləşdirin.
Sonikasiya prob-ultrasonikatordan istifadə etməklə həyata keçirilə bilər UP200Ht, ultrasəs nümunə hazırlama vahidi VialTweeter (10 nümunənin eyni vaxtda sonication) və ya UIP400MTP (96 quyulu lövhələr kimi çox quyulu plitələrin sonication üçün). UP200Ht ilə ultrasəs lizis üçün mikro-ucu S26d2 istifadə edin. Rəqəmsal menyuda ultrasəs dövrü rejimini əvvəlcədən təyin edin. Amplitudu 10% və sonikasiya dövrü rejimini 30 saniyəlik fasilə ilə 20 dövrdən ibarət 2 saniyə impulslara təyin edin. hər ultrasəs pulsasiyası arasında.
Supernatantları vidalı qapaqlı şüşə borulara köçürün. Hər şüşə boruya 1 ml ultrasu əlavə edərək, sonra hər şüşə boruya 6 ml xloroform/metanol (nisbət = 2:1) qarışığı əlavə etməklə Folch ekstraksiyasını həyata keçirin.
Hər şüşə borunu 30 saniyə ərzində 4 dəfə vorteks edin. Faza ayrılmasını daha da artırmaq üçün boruları 15 dəqiqə (Eppendorf, 5810 R) 1,258 xg-də sentrifuqa edin. Aşağı hidrofobik fraksiyanı bir şüşə Pasteur pipeti ilə təmiz şüşə boruya köçürün. Aşağı hidrofobik fraksiyanı azot buxarlandırıcısında azot axını altında qurutun. Qurudulmuş pelet istifadə olunana qədər -80 °C dondurucuda saxlanılır.
Qurd Lizatlarının Ultrasonik Hazırlanması
Qurd lizat: L4 mərhələsi qurdları yığıldı və M9 tamponu (42,26 mM Na) ilə üç dəfə yuyuldu.2HPO4, 22.04 mM KH2PO4, 85,56 mM NaCl və 0,87 mM MgSO4) bütün bakteriyaları çıxarmaq üçün. M9 tamponunu mümkün qədər çıxardıqdan sonra qurdlar lizis tamponunda yenidən dayandırıldı: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM fosfat β-qliserin, 0,1% (x/v) triton, 50 mM natrium flüorid, 1 mM natrium ortovanadat, 5 mM natrium pirofosfat, 0,2 mM fenilmetansülfonilflüorid və proteaz inhibitoru. Qurdlar maye azotda dondurulmuş və 37°C-də üç dəfə əridilmişdir, sonra qurdlar 10 nümunə borusunun eyni vaxtda hazırlanması üçün ultrasəs VialTweeter qurğusu ilə quru buz üzərində sonikasiya edilmişdir. Sonikasiya 2 saniyəlik 10 dövrədə 50% amplituda həyata keçirildi. sonikasiya partlayışları arasında 30 saniyəlik fasilə ilə. Daha sonra nümunələr 12000 rpm-də 4°C-də 15 dəqiqə sentrifuqa edilmişdir. Supernatant toplandı və -70 ° C-də saxlanıldı. Bradford analizi ilə zülalın miqdarının təyini üçün bir alikot istifadə edilmişdir.
Ümumi glutatyonun, GSH və GSSG-nin təyini: Glutatyonun kəmiyyətinin təyini üçün lizatlar və təyini eyni gündə aparılmışdır. Qlükoza ilə qidalanan və nəzarət L4 sürfələri yığıldı və üç dəfə M9 tamponu ilə yuyuldu. M9 tamponunu mümkün qədər çıxardıqdan sonra qurdlar buz kimi soyuq metafosfor turşusunda (5% w/v) yenidən dayandırıldı, sonra qurdlar 2 saniyəlik on sonikasiya dövründə 50% amplituda ultrasəs VialTweeter ilə buzda ultrasəs edildi. 30 saniyə ilə. hər dövrə arasında fasilə. Daha sonra 12000 rpm-də 4 ̊C-də 15 dəqiqə sentrifuqa edilir.
(müq. Alcántar-Fernández et al., 2018)
C. elegans İmmunoprecipitation və Western Blotting öncəsi Nümunə Hazırlığı
Qısaca olaraq, embrion ekstraktları üçün C. elegans L1 sürfələri böyük miqyaslı maye S-orta kulturalarda yetkinlik yaşına qədər yetişdirilmişdir. Embrionlar standart ağartma üsulu ilə toplanmış və liziz tamponunda (50 mM Tris, pH 7.5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8.7% qliserin, 0.05% NP-40, 100 mM MgCl2, 0.05% NP-40, 100 mM KCl, və 100 mM) dayandırılmışdır. 1 Fosfataza İnhibitor Kokteyli I və II), maye azotda tez dondurulur və mikrotipli ultrasəs cihazından istifadə edərək ultrasəs hüceyrələrinin pozulması ilə parçalanır. UP200Ht 30% amplituda 10 saniyə ərzində 10 impuls üçün S26d2 ilə. Əgər daha çox sayda nümunə hazırlanmalıdırsa, ultrasəs VialTweeter və ya quyu lövhələri üçün MultiSample-Ultrasonikator UIP400MTP tövsiyə olunur. Sonikasiyadan sonra ekstraktlar 4°C-də 20 dəqiqə ərzində 30.000 q-da sentrifuqa ilə əvvəlcədən təmizlənmişdir. Əvvəlcədən təmizlənmiş ekstrakt (ümumi zülalın 300 µg) A-agaroz zülalı ilə çarpaz əlaqədə olan 40µ⏰q anti-CDC-25.1 yaxınlığı ilə təmizlənmiş antikor (bu tədqiqat) və ya nəzarət olaraq analoji miqdarda dovşan immunoqlobulini ilə inkubasiya edilmişdir. Protein A-agaroza ilə çarpaz əlaqədə olan (Ig)G, 1% NP-40 ehtiva edən 200 µl lizis tamponunda istifadə edilmişdir, onun daxil edilməsi zülalların matrisə qeyri-spesifik bağlanmasını azaldır. Nümunələr 4°C-də 1 saat fırlandı, muncuqlar üç dəfə lizis tamponu ilə yuyuldu və 30µl qlisin/HCl və 200 mM NaCl, pH 2.2 ilə yuyuldu. İmmunopresipitasiyadan sonra eluatlar 30µµl SDS nümunə tamponunda seyreltildi, 4 dəqiqə ərzində 95°C-ə qədər qızdırıldı və adətən giriş üçün ümumi məbləğin 3%-i və eluatlar üçün 30%-i SDS-PAGE-ə tətbiq olundu, ardınca anti-bloklama ilə Western blotting aparıldı. -CDC-25.1 (1:400), anti-LIN-23 (1:750), anti-ubikitin (1:1000), anti-GSK3Ώ (1:500) və ya anti-Ώβ-aktin (1: 2000) antikorlar. Ekstraktlar immunopresipitasiyaya məruz qalmadıqda, həmin ekstraktlardan əldə edilən eyni miqdarda ümumi zülal SDS nümunə tamponunda yenidən dayandırıldı, 95°C-yə qədər qızdırıldı və sonra birbaşa SDS-PAGE-ə tətbiq olundu və Western blotlama üsulu ilə təhlil edildi. (bax. Segref və başqaları 2020)
Ultrasonik hüceyrə pozucusu UP200St liziz və zülal çıxarılması üçün mikro-ucu S26d2 ilə
Dəqiq Temperatur Nəzarəti altında Ultrasonik Lizis
Bioloji nümunələrlə işləyərkən dəqiq və etibarlı temperatur nəzarəti çox vacibdir. Yüksək temperatur nümunələrdə termal səbəb olan zülal deqradasiyasına səbəb olur.
Bütün mexaniki nümunə hazırlama üsulları kimi, sonication istilik yaradır. Bununla belə, VialTweeter istifadə edərkən nümunələrin temperaturu yaxşı idarə oluna bilər. Biz sizə nümunələrinizi VialTweeter və VialPress ilə analiz üçün hazırlayarkən onların temperaturuna nəzarət etmək və nəzarət etmək üçün müxtəlif variantları təqdim edirik.
- Nümunə temperaturunun monitorinqi: VialTweeter-i idarə edən ultrasəs prosessoru UP200St, ağıllı proqram təminatı və qoşula bilən temperatur sensoru ilə təchiz edilmişdir. Temperatur sensorunu UP200St-ə qoşun və temperatur sensorunun ucunu nümunə borularından birinə daxil edin. Rəqəmsal rəngli toxunma displey vasitəsilə siz UP200St menyusunda nümunə sonikasiya üçün xüsusi temperatur diapazonunu təyin edə bilərsiniz. Maksimum temperatura çatdıqda ultrasəs cihazı avtomatik olaraq dayanacaq və nümunənin temperaturu təyin edilmiş temperaturun ∆ aşağı dəyərinə enənə qədər fasilə verəcəkdir. Sonra sonikasiya avtomatik olaraq yenidən başlayır. Bu ağıllı xüsusiyyət istidən qaynaqlanan deqradasiyanın qarşısını alır.
- VialTweeter bloku əvvəlcədən soyudula bilər. Titan blokunu əvvəlcədən soyutmaq üçün VialTweeter blokunu (yalnız çeviricisiz sonotrode!) soyuducuya və ya dondurucuya qoyun, nümunədə temperaturun yüksəlməsini təxirə salmağa kömək edir. Mümkünsə, nümunənin özü də əvvəlcədən soyudula bilər.
- Sonikasiya zamanı sərinləmək üçün quru buzdan istifadə edin. Quru buzla doldurulmuş dayaz nimçədən istifadə edin və VialTweeter-i quru buzun üzərinə qoyun ki, istilik sürətlə dağılsın.
Lizis Tətbiqiniz üçün Optimal Ultrasonik Hüceyrə Dağıdıcısını tapın
Hielscher Ultrasonics, laboratoriyalar, tezgah üstü və sənaye miqyaslı sistemlər üçün yüksək performanslı ultrasəs hüceyrə pozucuları və homogenizatorların uzun müddətdir təcrübəli istehsalçısıdır. Bakterial hüceyrə mədəniyyətinin ölçüsü, tədqiqat və ya istehsal məqsədiniz və saatda və ya gündə emal ediləcək hüceyrənin həcmi tətbiqiniz üçün düzgün ultrasəs hüceyrə pozucusunu tapmaq üçün vacib amillərdir.
Hielscher Ultrasonics çoxlu nümunələrin (10 flakona qədər), eləcə də kütləvi nümunələrin (yəni, mikrotitr plitələr / 96 quyu boşqabları), 50-dən fərqli güc səviyyələrinə malik klassik zond tipli laboratoriya ultrasəs cihazının eyni vaxtda sonikasiyası üçün müxtəlif həllər təklif edir. Böyük istehsalda kommersiya hüceyrəsinin pozulması və zülal çıxarılması üçün vahid başına 16,000 vata qədər olan tam sənaye ultrasəs prosessorlarına 400 vatt. Bütün Hielscher ultrasəs cihazları tam yük altında 24/7/365 əməliyyatı üçün qurulmuşdur. Sağlamlıq və etibarlılıq ultrasəs cihazlarımızın əsas xüsusiyyətləridir.
Bütün rəqəmsal ultrasəs homojenizatorları ağıllı proqram təminatı, rəngli sensor displey və məlumatların avtomatik protokollaşdırılması ilə təchiz olunub ki, bu da ultrasəs cihazı laboratoriya və istehsalat obyektlərində rahat iş alətinə çevirir.
Bioloji nümunələrinizi hansı hüceyrələrə, hansı həcmdə, hansı tezlikdə və hansı hədəflə emal etməli olduğunuzu bizə bildirin. Proses tələbləriniz üçün sizə ən uyğun ultrasəs hüceyrə pozucusunu tövsiyə edəcəyik.
Aşağıdakı cədvəl sizə ultrasəs sistemlərimizin kompakt əl homogenizatorlarından və MultiSample Ultrasonikatorlardan kommersiya tətbiqləri üçün sənaye ultrasəs prosessorlarına qədər təxmini emal qabiliyyətinin göstəricisini verir:
| Partiya Həcmi | Axın | Tövsiyə olunan Cihazlar |
|---|---|---|
| 96 quyu / mikrotitr plitələr | na | UIP400MTP |
| 0,5-1,5 mL olan 10 flakon | na | UP200St-də VialTweeter |
| 0.01 - 250 ml | 5 ilə 100 ml/dəq | UP50H |
| 0.01 - 500 ml | 10-200 ml/dəq | UP100H |
| 10 ilə 2000 ml | 20 - 400 ml/dəq | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 - 20L | 0.2 ilə 4L/dəq | UIP2000hdT |
| 10-100 l | 2 ilə 10 L / dəq | UIP4000hdT |
| na | 10-100 l/dəq | UIP16000 |
| na | daha böyük | klaster UIP16000 |
Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizdən soruşun!
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Chen J.-X; Cipriani P.G.; Mecenas D.; Polanowska J.; Piano F.; Gunsalus K.C.; Selbach M. (2016): In Vivo Interaction Proteomics in Caenorhabditis elegans Embryos Provides New Insights into P Granule Dynamics. Molecular & Cellular Proteomics 15.5; 2016. 1642-1657.
- Jonathan Alcántar-Fernández, Rosa E. Navarro, Ana María Salazar-Martínez, Martha Elva Pérez-Andrade, Juan Miranda-Ríos (2018): Caenorhabditis elegans respond to high-glucose diets through a network of stress-responsive transcription factors. PLoS One 13(7); 2018.
- Segref, A.; Cabello, J.; Clucas, C.; Schnabel, R.; Johnstone I.L. (2010): Fate Specification and Tissue-specific Cell Cycle Control of the Caenorhabditis elegans Intestine. Molecular Biology of the Cell Vol. 21, 2010. 725–738.
- Henderson S.T., Bonafe M., Johnson T.E. (2006): daf-16 protects the nematode Caenorhabditis elegans during food deprivation. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2006; 61:444–60.
Bilməyə Dəyər Faktlar
Caenorhabditis elegans
C. elegans uzunluğu təxminən 1 mm olan sərbəst yaşayan şəffaf nematoddur (yumru qurd), bakteriyalarla (məsələn, E. coli) qidalanır və nisbətən qısa həyat dövrünə malikdir. 20 °C-də C. elegans (N2) laboratoriya ştammı orta hesabla 2-3 həftə, nəsil müddəti isə 3-4 gündür. C. elegans çox sayda yetişdirildikdə və bu, dəqiq nəzarət edilən laboratoriya şəraitində asanlıqla həyata keçirilə bilər, onlar yeni dərmanların iş prinsipi, eləcə də onların insan xəstəliklərində mürəkkəb molekulyar proseslər daxilində təsirləri və qarşılıqlı əlaqəsi üçün asanlıqla yoxlanıla bilər. Qısa genom, qısa həyat dövrü və laboratoriya şəraitində sadə işləmə C. elegans-ı genomika, proteomika, inkişaf biologiyası, xəstəliklərin tədqiqatı, dərman inkişafı və s. kimi tədqiqatlar üçün ideal model orqanizmə çevirir.
Caenorhabditis elegans qurdları erkək və ya hermafrodit ola bilər. Hermafroditlərin həm kişi, həm də qadın reproduktiv orqanları var. Ancaq dişi qurdlar yoxdur. Hermafroditlər ya öz-özünə mayalandıra bilər, ya da erkək qurdlarla çoxalda bilər. C. elegans hər gün 1000-dən çox yumurta istehsal edə bilər.
C. elegans sinir sistemi ilə ən sadə orqanizmlərdən biri olduğundan, nematod qurdu 1963-cü ildən tədqiqat üçün nümunə orqanizm kimi istifadə olunur. Neyronlar fəaliyyət potensialını işə salmır və gərginliyə bağlı natrium kanallarını ifadə etmir. Hermafroditdə bu sistem konnektom kimi tanınan nümunəsi hərtərəfli xəritələnmiş 302 neyrondan ibarətdir.
C. elegans genomunda olan genlərin çoxunun insanlarda funksional analoqları var ki, bu da onu insan xəstəlikləri üçün son dərəcə faydalı model edir və məsələn, inkişaf biologiyasını, qocalmanı və uzunömürlülüyə təsir edən amilləri öyrənmək üçün istifadə olunur. Bundan əlavə, C. elegans mutantları nevroloji pozğunluqlar (məsələn, Alzheimer), anadangəlmə ürək xəstəliyi və böyrək xəstəlikləri də daxil olmaqla bir çox insan xəstəlikləri üçün modellər təqdim edir.
Bu amillər C. elegans-ı bir çox tədqiqat sahələri üçün çox qiymətli model etdi. Nəticə etibarilə, C. elegans bütün genomunun ardıcıllığına malik olan ilk çoxhüceyrəli orqanizm idi. Genomda təxminən 20.470 protein kodlayan gen var. C. elegans genlərinin təxminən 35%-i insan homoloqlarına malikdir. Maraqlıdır ki, insan genlərinin C. elegans-a daxil olduqda onların C. elegans homoloqlarını əvəz etdiyi dəfələrlə göstərilmişdir. Əksinə, bir çox C. elegans genləri məməlilərin genləri ilə eyni şəkildə fəaliyyət göstərə bilər.
C. elegansın ömrü təqribəndir. 3 həftədir və altı həyat mərhələsindən ibarətdir: embriogenez (yumurta mərhələsi), dörd sürfə mərhələsi (L1 - L4) və yetkinlik mərhələsi. Nematodlar 560 hüceyrədən ibarət L1 sürfələri kimi yumurtadan çıxır. Sürfələrin hər mərhələsində böyümə hüceyrə bölünməsi və hüceyrə hipertrofiyası ilə baş verir. Kütikulyar ərimə sürfələrin hər bir mərhələsini pozur. Sərt ətraf mühit şəraiti inkişaf etməkdə olan qurd üçün şəraitin böyüklərin məhsuldarlığını dəstəkləmək ehtimalının az olduğunu bildirirsə, C. elegans onun inkişafını dəyişdirə və sürfələrin dauer mərhələsinə keçdiyi alternativ L3 sürfə mərhələsi yarada bilər. Bu vəziyyətdə heyvanlar qeyri-adi stressə dözümlüdür və uzunömürlüdürlər və üç aydan doqquz aya qədər yaşaya bilirlər. Dauer sürfələri həm ağız, həm də anal boşluqlarını möhürləyərək, bağırsaqlarını daraldaraq və daf-16/FOXO-dan asılı genetik proqramı işə salmaqla özlərini çətinliklərdən təcrid edirlər ki, bu da digər şeylərlə yanaşı, dauerə xas cuticle ifadəsinə gətirib çıxarır. (müq. Henderson və başqaları, 2006)
C. elegans Dauer sürfələri
Dauer sürfələri alternativ inkişaf mərhələsinə qədəm qoymuş nematod sürfələri üçün termindir. "Dauer sürfələri" termini xüsusilə Caenorhabditis elegans da daxil olmaqla rhabditidlər ailəsinin qurdları üçün istifadə olunur. “Dauer” sözü alman mənşəlidir və “müddət” deməkdir” mənasında “bir müddət”. Dauer sürfələri bir növ durğunluğa girir və sərt şəraitdə sağ qala bilir. Sürfənin dauer mərhələsinə daxil olub-olmaması ətraf mühit şəraitindən asılıdır. Dauer sürfələri biologiyada geniş şəkildə öyrənilir, çünki sürfələr sərt mühitlərdə yaşamaq və uzun müddət yaşamaq üçün qeyri-adi qabiliyyət nümayiş etdirirlər. Məsələn, C. elegans dauer sürfələri normal reproduktiv inkişaf zamanı təxminən üç həftəlik orta ömür müddətindən xeyli artıq, dörd aya qədər yaşaya bilər.
C. elegans Həyat Dövrünə ümumi baxış
C. elegans Əlverişli Mühitlərdə İnkişaf:
Caenorhabditis elegans (C. elegans) əlverişli və əlverişsiz ekoloji şəraitdə müxtəlif inkişaf proqressivliyini göstərir.
C. elegans Əlverişli Şərtlərə Cavab:
Əlverişli şəraitdə mikroskopik dəyirmi qurd Caenorhabditis elegans (C. elegans) yaxşı müəyyən edilmiş inkişaf yolunu izləyir. Ətraf mühit şəraiti optimal olduqda, adətən 15°C ilə 20°C arasında olan temperaturda nematod adətən öz həyat dövrünü olduqca sürətlə keçir.
- Reproduktiv inkişaf: C. elegans öz həyat dövrünə embrion kimi başlayır. Daha sonra L1-dən L4-ə qədər qısaldılmış dörd fərqli sürfə mərhələsindən keçir.
- Yetkinlik mərhələsi: Dörd sürfə mərhələsini tamamladıqdan sonra C. elegans yalnız 3-5 gün ərzində yetkinlik mərhələsinə çatır. Bu mərhələdə onlar çoxalma qabiliyyətinə malikdirlər və ətraf mühit amillərindən asılı olaraq daha 2-3 həftə yaşamağa davam edirlər.
C. elegans Əlverişsiz Şərtlərə Cavab:
Bununla belə, C. elegans davamlı orqanizmdir və dauer əmələ gəlməsi adlanan proses vasitəsilə əlverişsiz şəraitə uyğunlaşa bilir.
- Dauer Formasiyası: Ətraf mühit şəraiti əlverişsiz olduqda, məsələn, həddindən artıq sıxlıq, məhdud qida təchizatı və ya yüksək temperatur, C. elegans adlı qeyri-adi üçüncü sürfə mərhələsinə keçə bilər. “dauer,” L3d kimi qısaldılmışdır.
- Dauer sağ qalma: Dauer sürfələri sərt şəraitdə yaşamaq üçün xüsusi olaraq uyğunlaşdırılmışdır. Onlar bu mərhələdə enerjiyə qənaət edərək və çətin mühitlərə tab gətirərək bir neçə ay yaşaya bilərlər.
Əlverişli mühitlərdə bərpa:
C. elegansın diqqətəlayiq cəhəti, şərait yaxşılaşdıqda normal həyat dövrünə qayıtmaq qabiliyyətidir.
- Əlverişli şərtlərə qayıdın: C. elegans dauer sürfələri yenidən bol qida, aşağı populyasiya sıxlığı və uyğun temperatur kimi əlverişli şəraitlə qarşılaşdıqda, ətraf mühitdəki dəyişikliyi hiss edirlər.
- Bərpa və çoxalma: Bu təkmilləşdirilmiş şərtlərə cavab olaraq, dauer sürfələri adlı bir proses keçir “bərpa.” Bərpa zamanı onlar yenidən sürfə mərhələlərinə keçirlər və nəticədə normal ömür sürən reproduktiv yetkinlərə çevrilirlər.
Ətraf mühit şəraitinə cavab olaraq inkişaf mərhələləri arasında keçid etmək qabiliyyəti C. elegans biologiyasının xüsusi bir aspektidir. Bu, onlara müxtəlif şəraitdə effektiv şəkildə sağ qalmağa və çoxalmağa imkan verir, onları elmi tədqiqatlar, xüsusən inkişaf, genetika və qocalmanın öyrənilməsində qiymətli model orqanizmə çevirir.


