Hielscher Ultrasəs Texnologiyası

ELISA Testləri üçün Ultrasonik Nümunə Hazırlığı

ELISA kimi analizlər in vitro diaqnostika, xəstəliklə əlaqəli protein aşkarlanması və keyfiyyətə nəzarət üçün geniş istifadə olunur (məsələn, qida alerjenlərinin monitorinqi). Ultrasonik nümunə hazırlanması hüceyrəni lyce etmək və hüceyrədaxili zülalları, DNT, RNT və orqanoidləri təcrid etmək üçün sürətli, etibarlı və təkrarlanan bir texnikadır. Hielscher Ultrasonics, tək nümunələrin, çoxlu flakonların, eyni zamanda mikrotiter plitələr və 96 quyulu plitələrin rahat hazırlanması üçün müxtəlif ultrasəs həlləri təklif edir.

ELISA – Enzimlə əlaqəli immunosorbent analizi

ELISA, fermentə bağlı immunosorbent analizinin mənasını verir və ligand bağlayıcı analizlər kateqoriyasında geniş istifadə olunan biyokimyəvi analiz üsuludur. ELISA-da, maye nümunəsi xüsusi bağlanma xüsusiyyətlərinə malik stasionar qatı faza əlavə olunur. Normal olaraq, dayanıqlı qatı faz bir quyu plitəsinə və ya ELISA plitəsinə örtük kimi tətbiq olunur. Sonra müxtəlif maye reaktivlər ardıcıl olaraq əlavə olunur, inkubasiya olunur və yuyulur, beləliklə quyudakı son mayedə optik dəyişiklik (məsələn, fermentativ reaksiya məhsulu ilə rəng inkişafı) baş verir. Optik dəyişiklik analitik kəmiyyətini sözdə kəmiyyət ilə ölçməyə imkan verir “oxu ”. Kəmiyyət oxuması üçün ötürülən işığın intensivliyini aşkarlamaq və ölçmək üçün bir spektrofotometr, florometr və ya luminometr istifadə olunur. Algılanmanın həssaslığı analitik reaksiyalar zamanı siqnalın gücləndirilməsindən təsirlənir. Enzim reaksiyalarının yaxşı araşdırıldığı və etibarlı gücləndirmə prosesləri olduğundan fermentlər siqnal yaratmaq üçün istifadə olunur. Fermentlər dəqiq kəmiyyət təyin etmək üçün sabit nisbətlərdə aşkarlama reaktivləri ilə əlaqələndirilir və bu da "fermentə bağlı" immunosorbent analizi adını izah edir.
ELISA analizləri mikrotiter plitələr / 96 quyu plitələrində aparıldığından, plitə əsaslı analiz üsulu kimi tanınır və antikorların, peptidlərin, zülalların aşkarlanması və miqdarının müəyyənləşdirilməsi üçün klinik in-vitro diaqnostikada, tədqiqatda, dərman inkişafında və s. və hormonlar.
ELISA texnikası tibbdə, biotexnologiyada, bitki patologiyasında tez-tez bir diaqnostik vasitə kimi istifadə olunur və eyni zamanda bir çox sənayedə əhəmiyyətli bir keyfiyyətə nəzarət ölçüsüdür.

Tam VialTweeter quraşdırma: ultrasəs prosessor VialTweeter sonotrode UP200St

Ultrasonik nümunə hazırlayıcı bölmə VialTweeter ELISA analizlərindən əvvəl hüceyrə lizisi və protein çıxarılması üçün istifadə olunur

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


ELISA-dan əvvəl Ultrasonik Nümunə Hazırlığı

ELISA analizinin aparılmasından əvvəl, nümunələr hüceyrə lizisinin hazırlanması və hüceyrədaxili zülalların, DNT, RNT və s. Çıxarılmasının hazırlanması mərhələlərini tələb edir. Ultrasonik hüceyrə lizisinin və zülal izolyasiyasının üstünlüyü yüksək effektivlik, etibarlılıq və təkrarlanabilirlikdir. Bütün bu amillər yüksək keyfiyyətli diaqnostika və tədqiqat nəticələrini əldə etmək üçün vacibdir

ELISA-dan əvvəl Ultrasonik Lizizin üstünlükləri

  • Homojen nümunə müalicəsi
  • Tam lizis
  • Tam protein çıxarılması (məsələn, antikorlar, DNT)
  • Hüceyrə tipinə optimal uyğunlaşma
  • Hər hansı bir nümunə ölçüsü üçün
  • reproducible
  • İstilik nəzarətindədir
  • SD-kartda avtomatik protokollaşdırma

Pre-ELISA Ultrasonik Hüceyrə Lizisi üçün Protokol

lizisi üçün UP200St insonifier Probe tipli

  • Hüceyrə Mədəniyyətləri üçün: Ultrasonik hüceyrə lizisindən əvvəl mikrosentrifuqada 270 xg-də 5 dəqiqə santrifüj hüceyrələri. Supernatantı aspirasiya ilə çıxarın və 30 - 100 μL RIPA tamponunda hüceyrələri bərpa edin. Sonra, hüceyrə qranulunu 30 dəqiqə buz üzərində inkübe edin.
  • İndi hüceyrə nümunəsi ultrasəs lizisinə hazırdır:
    Bir prob tipi ultrasəs cihazı istifadə edin (məsələn Uf200 ः t S26d2 sondası ilə) və ya ultrasəsli bir çox nümunəli cihaz (məsələn, 10 flakona qədər eyni vaxtda sonikasiya üçün VialTweeter və ya mikrotiter plitələr / 96 quyulu plitələr üçün UIP400MPT) hazırlamağınız lazım olan nümunələrin miqdarına görə.
    Tək bir nümunənin prob tipli sonikasiyası üçün hüceyrələri 1,5 ml mikrosentrifuqa borulara yerləşdirin.
  • Ultrasonik cihazın rəqəmsal menyusunda ultrasəs müddəti, ümumi enerji girişi, dövr rejimi və / və ya temperatur limitlərini əvvəlcədən qurun. Bu son dərəcə etibarlı sonikasiya və təkrarlanabilirlik təmin edir.
  • Sonotrodu yerləşdirin və ultrasəs cihazını işə salın. Nümunəni bərabər şəkildə sonikasiya etmək üçün ultrasəs probunun mikro ucunu nümunədən keçirin.
    Əksər hüceyrələr üçün ultrasəs lizisi 2 saniyəlik 10 saniyəlik sonikasiyadan sonra tamamlanacaqdır.
  • Sonikasiyadan sonra sonotrodu nümunədən çıxarın. Nümunələr 5 dəqiqə buz üzərində inkübe edilməlidir. Sonra, dağıntıları parçalamaq üçün 20 dəqiqə 10.000 xg-də santrifüj edin. Supernatantları yeni bir mikrosentrifuqa borusuna köçürün. Analitikləri etiketləyin və -20 ° C-də saxlayın.
  • Ultrasonik sonotrod, alkoqolla doldurulmuş stəkanda alkoqol və ya sonikat ilə düzgün şəkildə silinərək təmizlənə bilər, məsələn% 70 etanol. Titandan hazırlanmış bütün ultrasəs probları avtoklavdır.

Toxuma homojenatları üçün:

  • Artıq hemoliz qanını hərtərəfli təmizləmək üçün toxuma buz kimi PBS (0.01M, pH = 7.4) ilə yuyun.
  • Toxuma çəkin (böyrək, ürək, ağciyər, dalaq və s.) Və PBS-də homogenləşdirilmiş kiçik hissələrə bölün. Tələb olunan PBS həcmi toxumanın ağırlığı ilə əlaqədardır. Bir qayda olaraq, 1g toxuma təxminən tələb olunur. 9 ml PBS. PBS-ə bir az proteaz inhibitoru əlavə etmək tövsiyə olunur. (Alternativ olaraq proteaz və fosfataz inhibitor kokteyli olan RIPA və ya hipotonik lizis tamponu istifadə edilə bilər.)
  • Toxuma ölçüsündən asılı olaraq qısa bir burulğan müalicəsi (təqribən 1-2 dəq. 15 saniyəlik nəbzdə) toxumanın əvvəlcədən müalicəsi üçün faydalı ola bilər.
  • Ultrasonikatorunuza mikro ucu, məsələn S26d2 quraşdırın. Nümunə borusunu toxuma ilə buz banyosuna qoyun.
  • Nümunəni ultrasonikatorunuzla səsləndirin, məsələn 1 dəqiqə UP200St (% 80 genlik). nəbz rejimində (15 saniyə açıq, 15 saniyəlik fasilə). Nümunəni buz banyosunda saxlayın.
  • Homojenatlar daha sonra analiz üçün zülalı zənginləşdirmək üçün xüsusi hovuzlar (sitosolik, nüvə, mitokondrial və ya lizosomal) əldə etmək üçün santrifüj edilir. Nümunəni 5000 × g-də 5 dəqiqə santrifüj etməklə, üst qat götürülür.
Sonotrode MTP-24-8-96, mikrotiter plitələrin quyularının sonikasiyası üçün səkkiz ultrasəs sondasına malikdir.

Sonotrode MTP-24-8-96, mikrotiter plitələrin quyularının sonikasiyası üçün səkkiz ultrasəs sondasına malikdir.

Sonication zamanı etibarlı temperatur nəzarət

Temperatur, bioloji nümunələrin müalicəsi üçün xüsusilə vacib olan, məsələn, zülalların termal deqradasiyasının qarşısını almaq üçün vacib olan prosesi təsir edən bir faktordur. Bütün mexaniki nümunə hazırlama üsulları kimi sonikasiya istilik yaradır. Bununla birlikdə, Hielscher Ultrasonics cihazları istifadə edilərkən nümunələrin temperaturu yaxşı idarə edilə bilər. Numunələrinizi proba tipli ultrasonikator və ya VialTweeter ilə əvvəlcədən analitik şəkildə hazırlayarkən istiliyinizi izləmək və idarə etmək üçün müxtəlif variantları təqdim edirik.

  1. Nümunə istiliyinin monitorinqi: Bütün Hielscher rəqəmsal ultrasəs prosessorları ağıllı bir proqramla və bağlana bilən bir temperatur sensoru ilə təchiz olunmuşdur. Temperatur sensörünü ultrasəs cihazına qoşun (məsələn, Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) və temperatur borusunun ucunu nümunə borularından birinə daxil edin. Rəqəmsal rəngli toxunma ekranı ilə ultrasəs prosessorunun menyusunda nümunə sonikasiya üçün müəyyən bir temperatur aralığını təyin edə bilərsiniz. Ultrasonikator maksimum temperatura çatdıqda avtomatik olaraq dayanacaq və nümunə temperaturu təyin olunmuş temperaturun ən aşağı qiymətinə düşənə qədər fasilə verin. Sonra sonication yenidən avtomatik olaraq başlayır. Bu ağıllı xüsusiyyət istidən qaynaqlanan deqradasiyanın qarşısını alır.
  2. Ultrasonik çoxsaylı nümunə VialTweeter vahidinə gəldikdə, nümunə boruları tutan titan blok əvvəlcədən soyudula bilər. Titan blokunu əvvəlcədən soyutmaq üçün VialTweeter blokunu (yalnız çeviricisiz sonotrod!) Soyuducuya və ya dondurucuya qoyun, nümunədəki temperatur artımını təxirə salmağa kömək edir. Mümkünsə, nümunənin özü də əvvəlcədən soyudula bilər.
  3. Sonikasiya zamanı sərinləmək üçün buz banyosundan və ya quru buzdan istifadə edin. Sonikasiya zamanı nümunə borunuzu (lərinizi) buz banyosuna qoyun. VialTweeter üçün quru buzla doldurulmuş dayaz bir qabdan istifadə edin və istilik sürətlə dağılmaq üçün VialTweeter'i quru buzun üzərinə qoyun.

Dünyadakı müştərilər, gündəlik bioloji, biyokimyəvi, tibbi və klinik laboratoriyalarda nümunə hazırlamaq üçün Hielscher prob-ultrasonikatorlarından və VialTweeter və UIP400MTP çoxsaylı sonikasiya vahidlərindən istifadə edirlər. Hielscher prosessorlarının ağıllı proqram təminatı və istilik nəzarəti, istilik etibarlı şəkildə idarə olunur və istidən qaynaqlanan nümunə deqradasiyasından qaçınılır. Hielscher ultrasəs həlləri ilə ultrasəs nümunəsi hazırlığı olduqca etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr verir!

Bizimlə əlaqə saxlayın! Bizdən soruşun!

Daha ətraflı məlumat üçün müraciət edin

Zəhmət olmasa, ultrasəs prosessorları, tətbiqetmələr və qiymətlər haqqında əlavə məlumat tələb etmək üçün aşağıdakı formadan istifadə edin. Prosesinizi sizinlə müzakirə etməkdən və tələblərinizə cavab verən bir ultrasəs sistemini təklif etməkdən məmnun olarıq!









Xahiş edirik unutmayın Gizlilik Siyasəti.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics, laboratoriya, pilot və sənaye miqyasında tətbiqetmələri qarışdırmaq, dağılmaq, emulsiya etmək və hasil etmək üçün yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir.

Ədəbiyyat / İstinadlar



Bilmək lazımdır

ELISA növləri

Fəaliyyət prinsipi ilə seçilən bir neçə ELISA növü var. Doğrudan ELISA, dolayı ELISA, sendviç ELISA, rəqabətli ELISA və tərs ELISA kimi tanınırlar. Aşağıda, sizə müxtəlif ELISA növləri və onların əsas xüsusiyyətləri və fərqləri haqqında ümumi məlumat təqdim edirik.
ELISA keyfiyyət və ya kəmiyyət formatında aparıla bilər. Keyfiyyətli nəticələr sadə bir müsbət və ya mənfi nəticə verir, kəmiyyət ELISA-sında nümunənin optik sıxlığı (OD) standart bir döngə ilə müqayisə olunur, bu, adətən hədəf molekulunun bilinən konsentrasiyalı məhlulunun ardıcıl seyreltilməsidir.

Birbaşa ELISA

Doğrudan ELISA, yalnız bir ferment etiketli birincil antikorun istifadə edildiyi və ikincil antikorların tələb olunmadığı Elisanın ən sadə analiz formasıdır. Ferment etiketli birincil antikor birbaşa hədəfə, yəni antigenə bağlanır. Tamponlanmış antigen məhlulu, mikrotitr lövhəsinin hər bir quyusuna (ümumiyyətlə 96 quyu lövhəsi, ELISA lövhələri) əlavə olunur, burada yük qarşılıqlı təsirləri ilə plastik səthə yapışır. Birincil antikorla əlaqəli ferment substratı ilə reaksiya verdikdə, spektrofotometr, florometr və ya lüminometr vasitəsilə ölçülən görünən bir siqnal yaradır.

Dolayı ELISA

Dolayı ELISA testi üçün həm birincil antikor, həm də ikincil antikor tələb olunur. Bununla birlikdə, birbaşa ELISA-nın əksinə, birincil antikor deyil, ikincil antikor bir ferment ilə etiketlənir. Antigen quyu plitəsinə immobilizasiya olunur və birincil antikorla bağlanır. Daha sonra, ferment etiketli ikincil antikor birincil antikora bağlanır. Nəhayət, ikincil antikorla əlaqəli ferment, aşkar edilə bilən görünən bir siqnal yaratmaq üçün substratı ilə reaksiya verir.

Sendviç ELISA

Doğrudan və dolayı ELISA testlərində antigen immobilizasiya edilir və quyu plitəsinin səthinə örtülür, sendviç ELISA-da antikor ELISA plitəsinin plastik səthinə immobilizasiya olunur. Sendviç ELISA-dakı hərəkətsiz antikorlar tutma antikorları olaraq bilinir. Tutma antikorlarına əlavə olaraq, sendviç ELISA-da sözdə aşkarlama antikorları da tələb olunur. Algılama antikorlarına etiketlənməmiş birincil aşkarlama antikoru və bir ferment etiketli ikincil aşkarlama antikoru daxildir.
Addım-addım, maraq antigeni lövhəyə immobilizasiya olunmuş tutma antikoruna bağlanır. Sonra birincil aşkarlama antikoru antigenə bağlanır. Daha sonra ikincil aşkarlama antikoru birincil aşkarlama antikoruna bağlanır. Son reaksiya mərhələsində ferment, substratı ilə reaksiya verərək optik olaraq aşkar edilə bilən görünən bir siqnal yaradır.

Rəqabətli ELISA

İnhibisiya ELISA olaraq da bilinən rəqabətli ELISA, bir inhibitor antigenin istifadəsini əhatə etdiyi üçün ən mürəkkəb ELISA növüdür. Doğrudan, dolayı və sendviç ELISA olan üç formatdan hər biri rəqabətli ELISA formatına uyğunlaşdırıla bilər. Rəqabətli ELISA-da inhibitor antigen və maraq antigeni birincil antikora bağlanmaq üçün rəqabət aparır.
Rəqabətli ELISA üçün etiketlənməmiş antikor antigeninin, yəni nümunəsinin iştirakı ilə inkübe edilir. Bu bağlı antikor / antigen kompleksləri daha sonra antigen örtüklü bir quyuya əlavə olunur.
Plitə yuyulur, beləliklə əlaqəsiz antikorlar çıxarılır. Rəqabətçi ELISA, nümunədə daha çox antigen olduğu üçün daha çox antigen-antikor kompleksi meydana gətirdiyinə görə adını alır. Bu o deməkdir ki, quyudakı antigenlə bağlanmaq üçün daha az əlaqəsiz antikor mövcuddur və antigenlər mövcud bir antikor üçün yarışmalıdır. Birincil antikora uyğun gələn ikincil antikor əlavə olunur. Bu ikinci antikor fermentə bağlıdır. Substrat əlavə edildikdə, qalan fermentlər xromogen və ya floresan bir siqnal yaradır.
Bu nöqtədə, siqnalın son dərəcə doymaması üçün reaksiya dayandırılır.
Bəzi rəqabətli ELISA dəstləri, fermentə bağlı bir antikor yerinə bir fermentə bağlı bir antigen daxildir. Etiketlənmiş antigen, nümunə antigeni ilə (etiketsiz) birincil antikor bağlama yerləri üçün rəqabət aparır. Nümunədəki antigen nə qədər az olsa, quyuda daha çox etiketli antigen saxlanılır və siqnal daha güclü olur.

Ters ELISA

Ters ELISA quyu lövhələrindən istifadə etmir, ancaq antigenləri test mayesində saxlayır. Ters ELISA testi antigen vasitəsilə bağlı antikor miqdarını ölçür. Xüsusi olaraq West Nile virus zərf proteinini və virusa spesifik antikorları necə tapa biləcəyini aşkarlamaq və araşdırmaq üçün hazırlanmışdır.

ELISA üçün istifadə olunan fermentativ marker

Aşağıdakı siyahıda ELISA analizlərində istifadə olunan, analizin nəticələrinin başa çatdıqdan sonra ölçülməsinə imkan verən ən çox yayılmış enzimatik markerlər verilir.

  • OPD (o-fenilendiamin dihidroklorid) tez-tez konjuge zülal kimi istifadə olunan HRP (Horseradish Peroxidase) aşkar etmək üçün kəhrəbaya çevrilir.
  • TMB (3,3′, 5,5′-tetrametilbenzidin) HRP aşkar edildikdə mavi olur və kükürd və ya fosfor turşusu əlavə edildikdən sonra sarıya çevrilir.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik turşu] -diamonyum duzu) HRP aşkar edilərkən yaşıl olur.
  • PNPP (p-Nitrofenil Fosfat, Disodium Duz) qələvi fosfataz aşkar edərkən sarıya çevrilir.