VialTweeter sonikatoru ilə alfa-sinukleinin fraqmentasiyası
Elmi tədqiqatlarda α-sinuklein fibrilləri və lentləri daha kiçik fibril fraqmentləri və ya hətta ayrı-ayrı zülal molekulları əldə etmək üçün fraqmentlərə bölünür; bunları müxtəlif eksperimental üsullarla daha asan təhlil etmək mümkündür. VialTweeter sonikatoru alfa-sinukleinin səmərəli və etibarlı fraqmentasiyası üçün ən çox istifadə olunan ultrasəs cihazlarından biridir.
Tədqiqatlarda α-sinuklein
Alfa-sinuklein fibrilləri Parkinson xəstəliyi və Levi cisimcikli demensiya da daxil olmaqla demensiyanın müəyyən formaları kimi neyrodegenerativ xəstəliklərlə sıx əlaqəli olan zülal aqreqatlarıdır. Alfa-sinuklein fibrillərinə yönəlmiş tədqiqatlar onların xəstəliyin irəliləməsindəki rolunu anlamağı və potensial terapevtik müdaxilələr hazırlamağı hədəfləyir. Alfa-sinuklein fibrillərini daha kiçik fraqmentlərə parçalamaqla tədqiqatçılar onların spesifik struktur xüsusiyyətlərini araşdıra bilərlər. Məsələn, alfa-sinuklein fibrillərinin fraqmentasiyası tədqiqatçılara onların zülallar, lipidlər və ya kiçik molekullar kimi digər molekullarla qarşılıqlı təsirlərini araşdırmağa imkan verir. Daha kiçik fraqmentlər əldə etməklə bu qarşılıqlı təsir tərəfdaşları üçün bağlanma sahələri və onlara affinlik daha səmərəli araşdırıla bilər. Daha kiçik α-Syn fibrilləri və lentləri həmçinin dəyişmiş toksiklik və biokimyəvi təsirlər göstərə bilər. Buna görə də nümunənin sürətli və sadə emalı zamanı təkrarlana bilən nəticələr verən etibarlı və səmərəli fraqmentasiya üsulu mühüm əhəmiyyət daşıyır.
Alpha-Syn-in ultrasəslə fraqmentasiyası: VialTweeter sonikatoru tam eyni şəraitdə eyni vaxtda 10-a qədər flakonu ultrasəslə emal edən, geniş tətbiq olunan ultrasəs nümunə hazırlama sistemidir. Proqramlaşdırıla bilən parametrlər eyni təcrübələrin sadə və sürətli şəkildə yenidən aparılmasına imkan verir və bu, alfa-sinuklein fibrillərinin fraqmentasiyasında yüksək dərəcədə etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr verir.
VialTweeter sonikatoru bir neçə alfa-sinuklein nümunəsinin eyni vaxtda ultrasəslə fraqmentasiyası üçün.
Sonikatorla α-sinuklein nümunələrinin hazırlanması
Alfa-sinuklein fibrillərinin öyrənilməsinə yanaşmalardan biri onların ultrasəslə emal kimi üsullardan istifadə edilərək ekstraksiyasını və fraqmentasiyasını əhatə edir. Ultrasəslə emal zülal aqreqatlarını dağıtmaq və parçalamaq üçün yüksək intensivlikli, aşağı tezlikli ultrasəs dalğalarından istifadə edən prosesdir; nəticədə daha kiçik fibrillər və ya ayrı-ayrı zülal molekulları ayrılır. VialTweeter sonikatoru α-synuclein ilə bağlı tədqiqatlarda bu məqsədlə geniş istifadə olunan cihazdır.
Çoxsaylı tədqiqatlarda α-synuclein fibrillərinin səmərəli və etibarlı fraqmentasiyası üçün Hielscher VialTweeter cihazından istifadə edən, alfa-sinuklein fibrillərinin ultrasəslə emalına dair dəqiq nümunə hazırlama protokolları təsvir olunur. Fibrilləri ultrasəslə fraqmentlərə bölməklə tədqiqatçılar alınan məhsulları təhlil edə və onların strukturunu, toksikliyini və digər molekullarla qarşılıqlı təsirlərini araşdıra bilərlər. Bu tədqiqatlar neyrodegenerasiyanın əsasında duran mexanizmlər haqqında mühüm məlumatlar verir və potensial olaraq yeni terapevtik hədəfləri müəyyənləşdirə bilər. VialTweeter sonikatorundan istifadə edən, geniş tətbiq olunan α-synuclein ultrasəs emalı protokolları etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr əldə etməyə imkan verir.
Yuxarıdakı şəkillər: fraqmentlərə bölünməmiş alfa-sinuklein fibrilləri
Aşağıdakı şəkillər: VialTweeter sonikatoru ilə ultrasəslə fraqmentlərə bölünmüş alfa-sinuklein fibrilləri
(tədqiqat və şəkillər: ©Dieriks et al., 2022)
α-sinuklein fibrillərinin ultrasəslə fraqmentasiyası – protokollar
Çoxsaylı tədqiqatçılar vahid ölçülü α-sinuklein fibril fraqmentləri əldə etmək üçün üstünlük verdikləri fraqmentasiya üsulu kimi VialTweeter sonikatorundan istifadə etdiklərinə görə, artıq işlənib hazırlanmış protokollar asanlıqla əldə edilə bilər. Aşağıda nümunə kimi bir neçə fraqmentasiya protokolu təqdim olunur.
ClearTau aqreqasiya nüvələrinin hazırlanması: ClearTau fibrilləri dH2O-da 10 μM konsentrasiyayadək durulaşdırıldı və VialTweeter ilə təchiz olunmuş UP200St sonikatorundan istifadə edilərək sınaq borusunun daxilində 70 % amplitudada, 1 s aktiv və 1 s fasilə dövrü ilə 50 s ərzində ultrasəslə emal edildi. Aqreqasiya nüvələri elektron mikroskopiya ilə xarakterizə edildi.
ThS flüoressensiyasının ölçülməsi: ClearTau fibrilləri dH2O içərisində 2,5 μM konsentrasiyayadək durulaşdırıldı və VialTweeter ilə təchiz olunmuş UP200St cihazından istifadə edilərək sınaq borusunun daxilində 70 % amplitudada, 1 s aktiv və 1 s fasilə dövrü ilə 50 s ərzində ultrasəslə emal edildi. Nəzarət kimi 2,5 μM tam uzunluqlu Tau 4R2N monomerindən istifadə edildi. 100 μl reaksiya qarışığına 100 μl ThS (10 μM) əlavə edildi və nəticədə zülalın yekun konsentrasiyaları 1,25 μM oldu. ThS flüoressensiyası bir zaman nöqtəsində FLUOstar Omega mikroplanşet oxuyucusuna yerləşdirilmiş şəffaf dibli 96 yuvalı planşetlərdən istifadə edilərək ölçüldü; həyəcanlandırma 445 nm dalğa uzunluğunda aparıldı və emissiya 485 nm dalğa uzunluğunda qeydə alındı.
(bax: Limorenko et al., 2023)
Ultrasəslə emal vasitəsilə α-sinukleinin vahid uzunluğunun əldə edilməsi: α-syn fibrillərinin və lentlərinin uzunluq heterogenliyi 75% amplitudaya və 0,5 s impulslara qurulmuş VialTweeter cihazında, 2-ml Eppendorf sınaq borularında, buz üzərində 20 min ərzində ultrasəslə emal edilərək azaldıldı.
(bax: Bousset et al., 2013)
İnsan mənşəli rekombinant monomerik WT və ya S129A a-Syn zülalının və onların əmələ gətirdiyi fibrilyar polimorfların, eləcə də a-Syn 1–110 zülalının keyfiyyətinə nəzarət aparıldı. Daha sonra endositoz üçün uyğun, orta ölçüsü 42–52 nm olan fibrilyar hissəciklər əldə etmək üçün fibrilyar polimorflar VialTweeter ultrasəs cihazında 2-mL Eppendorf sınaq borularında 20 min ərzində ultrasəslə emal edilərək fraqmentlərə bölündü.
(bax: Shrivastava et al., 2020)
Beş fibrilyar α-Syn polimorfunun xarakteristikası. (A) Mənfi boyanmış α-Syn fibrilyar polimorflarının – fibrils, ribbons, fibrils-91, fibrils-65 və fibrils-110 – VialTweeter ilə fraqmentasiyadan əvvəlki (yuxarı sıra) və sonrakı (aşağı sıra) transmissiya elektron mikroqrafiyaları göstərilir. (B) Fraqmentlərə bölünmüş fibrilyar polimorfların uzunluq paylanması göstərilir. Histoqramların tərtib edildiyi fibrilyar birləşmələrin sayı (n) qeyd olunur.
(tədqiqat və şəkillər: Shrivastava et al., 2020)
TEM təhlili ilə müəyyən edilmiş orta ölçüsü 42–52 nm olan fibrilyar hissəciklər əldə etmək üçün α-Syn fibrilləri VialTweeter cihazında 2 ml Eppendorf sınaq borularında 20 min ərzində ultrasəslə emal edilərək fraqmentlərə bölündü.
(bax: Negrini et al., 2022)
Yenidən suspenziyaya salınmış fibrils91 (PBS içərisində) hüceyrə kulturlarına əlavə edilməzdən əvvəl Vial Tweeter sonikatorundan istifadə edilərək 2 mL Eppendorf sınaq borularında 20 min ərzində ultrasəslə emal olunaraq fraqmentlərə bölündü, alikvotlara ayrıldı, maye azotda sürətlə donduruldu və istifadəyədək -80 ̊C temperaturda saxlanıldı.
(bax: Vajhøj et al., 2021)
Çoxyuvalı planşetlərdə alfa-sinuklein fibrillərinin fraqmentasiyası üçün UIP400MTP sonikatoru.
α-Syn fraqmentasiyası üçün VialTweeter və laboratoriya sonikatorları
Hielscher Ultrasonics qabaqcıl ultrasəs cihazlarının aparıcı istehsalçısı kimi bütün dünyada tanınır. Dünyanın əsas tədqiqat laboratoriyalarında etibar qazanmış və geniş tətbiq olunan ultrasəs cihazlarımız mühüm təcrübələriniz üçün misilsiz keyfiyyət və performans təklif edir.
Hielscher VialTweeter və istənilən digər Hielscher sonikatoru ilə misilsiz istifadəçi rahatlığı yaşayacaqsınız, çünki onlar təkrarlana bilən nəticələr, istifadə asanlığı və fasiləsiz iş üçün diqqətlə layihələndirilib. Avtomatik məlumat qeydəalma funksiyaları sayəsində siz tədqiqatınıza diqqət yetirə bilərsiniz, ultrasəs cihazlarımız isə təkrarlana bilmə və dəqiqlik üçün mühüm məlumatları diqqətlə qeydə alır.
Ardıcıl və təkrarlana bilən nəticələri əminliklə əldə edin!
Ultrasəs cihazlarımız Almaniyada layihələndirilir və istehsal olunur. Alman dəqiqliyi və ən yüksək mühəndislik keyfiyyəti alfa-sinuklein fibrillərinin fraqmentasiyası kimi nümunə hazırlama işlərinin hər dəfə etibarlı və dəqiq aparılmasını təmin edir. Qeyri-ardıcıl nəticələrə görə narahatlığa son – ultrasəs texnologiyamız tədqiqatınızın elmi tərəqqinin ön sıralarında qalmasını təmin edir.
Üstəlik, bu, hamısı deyil! Mükəmməlliyə sadiqliyimiz məhsullarımızdan da kənara çıxır. Biz yarana biləcək hər hansı sualınızı və ya narahatlığınızı həll etmək üçün ekspert dəstəyi göstərən müstəsna müştəri xidmətimizlə fəxr edirik. İşinə sadiq komandamız tədqiqat yolunuzun hər addımında sizə kömək etməyə və ultrasəs cihazlarımızdan maksimum faydalanmağınızı təmin etməyə hazırdır.
İnnovasiyanı, etibarlılığı və müstəsna istifadəçi təcrübəsini seçin – alfa-sinuklein fibrillərinin fraqmentasiyası üçün VialTweeter kimi laboratoriya sonikatorlarımızı seçin. Artıq işlənib hazırlanmış protokollardan faydalanın və mühüm tədqiqatlarında texnologiyamıza etibar edən aparıcı tədqiqatçıların sırasına qoşulun. Ən müasir ultrasəs cihazlarımızla tədqiqatınızı daha yüksək səviyyəyə qaldırın və demensiya və neyrodegenerativ xəstəliklərin tədqiqində yeni sərhədləri araşdırın.
- yüksək səmərəlilik
- ən müasir texnologiya
- etibarlılıq və möhkəmlik
- nəticələrin təkrarlana bilməsi
- tənzimlənə bilən, dəqiq proses nəzarəti
- istənilən həcm üçün
- intellektual proqram təminatı
- ağıllı funksiyalar (məsələn, proqramlaşdırma imkanı, məlumatların protokollaşdırılması, məsafədən idarəetmə)
- istifadəsi asan və təhlükəsiz
- az texniki xidmət tələbi
- CIP (yerində təmizləmə)
Layihələndirmə, istehsal və məsləhət xidmətləri – Almaniya istehsalının keyfiyyəti
Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Möhkəmlik və istifadə asanlığı ultrasəs cihazlarımızın sənaye müəssisələrinə problemsiz inteqrasiyasına imkan verir. Hielscher ultrasəs cihazları sərt şəraitin və yüksək tələblər qoyan mühitlərin öhdəsindən asanlıqla gəlir.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikatlı şirkətdir və ən müasir texnologiyaya və istifadəçi rahatlığına malik yüksək performanslı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə, Hielscher sonikatorları CE tələblərinə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
Aşağıdakı cədvəl laboratoriya ölçülü ultrasəs cihazlarımızın təxmini emal gücü haqqında məlumat verir:
| Tövsiyə olunan cihazlar | Partiyanın həcmi | Axın sürəti |
|---|---|---|
| UIP400MTP | çoxyuvalı / mikrotitr planşetləri | n.a. |
| Ultrasonic CupHorn | Flakonlar və ya laboratoriya stəkanı üçün CupHorn | n.a. |
| GDmini2 | ultrasəs mikroaxın reaktoru | n.a. |
| VialTweeter | 0,5 – 1,5mL | n.a. |
| UP100H | 1 – 500mL | 10 – 200mL/min |
| UP200Ht, UP400St | 10 – 2000mL | 20 – 400mL/min |
Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizə sual verin!
VialTweeter analizdən əvvəl nümunə hazırlama mərhələsi kimi alfa-sinuklein fibrilinin fraqmentasiyası üçün geniş istifadə olunur
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Tez-tez verilən suallar
Alfa-sinuklein amiloiddirmi?
Bəli, alfa-sinuklein amiloidəbənzər fibrillər əmələ gətirə bilər. O, Parkinson xəstəliyinin və digər sinukleinopatiyaların səciyyəvi patoloji əlaməti olan Levi cisimciklərinin əsas komponentlərindən biridir. Onun aqreqasiyası klassik amiloidlərə bənzər, nüvələşmədən asılı polimerləşmə prosesi üzrə gedir.
Amiloid-beta ilə alfa-sinuklein arasında nə fərq var?
Amiloid-beta (Aβ) və alfa-sinuklein (α-syn) neyrodegenerativ xəstəliklərdə patoloji aqreqatlar əmələ gətirən fərqli zülallardır. Amiloid prekursor zülalından (APP) yaranan Aβ əsasən Alzheimer xəstəliyi ilə əlaqəlidir və hüceyrədənkənar lövhələr əmələ gətirir. α-syn isə Parkinson xəstəliyində və əlaqəli pozuntularda hüceyrə daxilində aqreqasiya edən presinaptik neyron zülalıdır. Hər ikisi β-təbəqələrlə zəngin amiloid strukturlar nümayiş etdirsə də, öz ardıcıllıqları, aqreqasiya yolları və xəstəliyə xas patologiyaları ilə fərqlənirlər.
Amiloid hansı növ zülaldır?
Amiloid çarpaz β-təbəqə strukturu alan və həll olmayan fibrillər şəklində aqreqasiya edən, yanlış qatlanmış fibrilyar zülaldır. Bu zülallar adətən normalda həll olan prekursorlardan yaranır; həmin prekursorlar konformasiya dəyişikliklərinə məruz qalaraq öz-özünə yığılmağa və çökməyə səbəb olur. Amiloidlər müxtəlif neyrodegenerativ və sistem xəstəlikləri ilə əlaqəlidir; bu xəstəliklərdə onların aqreqasiyası hüceyrə toksikliyinə və toxuma zədələnməsinə töhfə verir. 96 yuvalı planşetlər üçün UIP400MTP sonikatorunun tədqiqat məqsədləri üçün standartlaşdırılmış amiloid fibrillərinin sürətlə əmələ gətirilməsinə necə kömək etdiyini öyrənin!
Amiloidlər hansı xəstəliklərə səbəb olur?
Amiloidlər ümumilikdə amiloidozlar adlandırılan çoxsaylı xəstəliklərdə iştirak edir. Bunlara aşağıdakılar daxildir:
- Neyrodegenerativ xəstəliklər: Alzheimer xəstəliyi (Aβ), Parkinson xəstəliyi (α-syn), Hantinqton xəstəliyi (mutant hantinqtin) və prion xəstəlikləri (PrPSc). (Yüksək nümunə emal qabiliyyəti ilə prionların aşkarlanması üçün ultrasəslə dəstəklənən PMCA haqqında daha ətraflı oxuyun!)
- Sistem amiloidozları: Yüngül zəncir (AL) amiloidozu, transtiretin (ATTR) amiloidozu və ikincili (AA) amiloidoz.
- Lokal amiloidozlar: Tip 2 diabetdə adacıq amiloid polipeptidi (IAPP).
Amiloidlə əlaqəli hər bir xəstəlik hüceyrə funksiyasının pozulmasına və toksikliyə səbəb olan zülalın yanlış qatlanması, aqreqasiyası və çökməsi ilə xarakterizə olunur.
Hielscher Ultrasonics yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir – laboratoriya ölçüsündən tutmuş sənaye ölçüsünədək.