VialTweeter Sonicator istifadə edərək Alpha-Synuclein Fragmentation
α-sinuklein fibrilləri və lentləri daha kiçik fibril parçaları və ya hətta ayrı-ayrı zülal molekulları yaratmaq üçün elmi tədqiqatlarda parçalanır və müxtəlif eksperimental üsullardan istifadə edərək daha asan təhlil edilə bilər. VialTweeter Sonicator, effektiv və etibarlı alfa-sinuklein parçalanması üçün ən çox istifadə edilən ultrasəs cihazlarından biridir.
Tədqiqatda α-Sinuklein
Alfa-sinuklein fibrilləri Parkinson xəstəliyi və Lyui cisimləri ilə demans da daxil olmaqla demansın müəyyən formaları kimi neyrodegenerativ pozğunluqlarla güclü əlaqəli olan zülal aqreqatlarıdır. Alfa-sinuklein fibrillərinə yönəlmiş tədqiqat onların xəstəliyin irəliləməsindəki rolunu anlamaq və potensial terapevtik müdaxilələri inkişaf etdirmək məqsədi daşıyır. Tədqiqatçılar alfa-sinüklein fibrillərini daha kiçik parçalara ayıraraq, onların spesifik struktur xüsusiyyətlərini araşdıra bilərlər. Məsələn, alfa-sinuklein fibrillərinin parçalanması tədqiqatçılara onların zülallar, lipidlər və ya kiçik molekullar kimi digər molekullarla qarşılıqlı təsirini araşdırmaq imkanı verir. Daha kiçik fraqmentlər yaratmaqla, bu qarşılıqlı tərəfdaşlar üçün bağlanma yerləri və yaxınlıq daha effektiv şəkildə araşdırıla bilər. Daha kiçik α-Syn qıvrımları və lentlər də dəyişmiş toksiklik və biokimyəvi təsirlər göstərə bilər. Buna görə də, tez və sadə nümunə müalicəsində təkrarlana bilən nəticələr verən etibarlı və səmərəli parçalanma texnikası çox vacibdir.
Ultrasonik Alpha-Syn Parçalanması: VialTweeter sonikatoru, eyni şəraitdə eyni vaxtda 10 flakonu sonikləşdirən qurulmuş ultrasəs nümunə hazırlama sistemidir. Proqramlaşdırıla bilən parametrlər eyni təcrübələri sadə və tez təkrar etməyə imkan verir ki, bu da alfa-sinuklein fibril parçalanmasında yüksək etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr verir.
VialTweeter sonikatoru çoxlu alfa-sinuklein nümunələrinin eyni vaxtda ultrasəs parçalanması üçün.
Sonicator ilə α-Sinuklein Nümunəsinin Hazırlanması
Alfa-sinuklein fibrillərini öyrənmək üçün bir yanaşma, sonikasiya kimi üsullardan istifadə edərək onların çıxarılması və parçalanmasını əhatə edir. Sonication, protein aqreqatlarını pozmaq və parçalamaq üçün yüksək intensivlikli, aşağı tezlikli ultrasəs dalğalarından istifadə edərək daha kiçik fibrillərin və ya fərdi protein molekullarının sərbəst buraxılmasına səbəb olan bir prosesdir. Sonicator VialTweeter bu məqsədlə α-sinukleinlə əlaqəli tədqiqat işlərində çox istifadə olunan cihazdır.
Çoxsaylı tədqiqatlar effektiv və etibarlı α-sinuklein fibril parçalanması üçün Hielscher VialTweeter istifadə edən alfa-sinuklein fibrillərinin sonikasiyasının dəqiq nümunə hazırlama protokollarını təsvir edir. Tədqiqatçılar lifləri ultrasəs üsulu ilə parçalayaraq, yaranan məhsulları təhlil edə və onların strukturunu, toksikliyini və digər molekullarla qarşılıqlı təsirini araşdıra bilərlər. Bu tədqiqat neyrodejenerasiyanın altında yatan mexanizmlər haqqında mühüm anlayışlar təqdim edir və potensial olaraq yeni terapevtik hədəfləri müəyyən edir. VialTweeter sonikatorundan istifadə edərək yaxşı qurulmuş α-sinuklein sonication protokolları etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr əldə etməyə imkan verir.
Üst şəkillər: parçalanmamış alfa-sinüklein fibrilləri
Aşağı şəkillər: VialTweeter sonikatoru ilə ultrasəslə parçalanmış alfa-sinuklein fibrilləri
(tədqiqat və şəkillər: ©Dieriks et al., 2022)
α-Sinuklein Fibrillərinin Ultrasəs Parçalanması – Protokollar
Çoxsaylı tədqiqatçılar vahid α-sinuklein fibril fraqmentləri istehsal etmək üçün VialTweeter sonikatorundan üstünlük verilən parçalanma texnikası kimi istifadə etdikləri üçün müəyyən edilmiş protokollar asanlıqla mövcuddur. Aşağıda bir neçə nümunəvi parçalanma protokollarını tapa bilərsiniz.
ClearTau toxumunun hazırlanması: ClearTau fibrilləri dH2O-da 10 μM-ə qədər seyreltildi və VialTweeter ilə UP200St sonikatorundan istifadə edərək boruda 1 s ON 1 s OFF dövrü ilə 50 s ərzində 70 % amplituda səslə səsləndi. Toxumlar elektron mikroskopiya ilə xarakterizə olunurdu.
ThS floresan ölçmə: ClearTau fibrilləri dH2O-da 2,5 μM-ə qədər seyreltildi və VialTweeter ilə UP200St istifadə edərək boruda 1 s ON 1 s OFF dövrü ilə 70% amplituda ilə 50 s səslə səsləndi. Nəzarət kimi 2,5 μM tam uzunluqlu Tau 4R2N monomerindən istifadə edilmişdir. 100 μl reaksiyaya 100 μl ThS (10 μM) əlavə edildi və 1,25 μM yekun protein konsentrasiyası əldə edildi. Tək vaxt nöqtəsi ThS flüoresansı, 445 nm-də həyəcanlanma və 485 nm-də emissiya ilə FLUOstar Omega mikroplata oxuyucusunda quraşdırılmış 96 quyu təmiz dib plitələrindən istifadə etməklə ölçüldü.
(müq. Limorenko və başqaları, 2023)
Sonikasiyadan istifadə edərək vahid α-sinuklein uzunluğu: α-sin fibrillərinin və lentlərinin uzunluq heterojenliyi 75% amplituda, 0,5 s impulslarda quraşdırılmış VialTweeter-də 2 ml-lik Eppendorf borularında buz üzərində 20 dəqiqə sonikasiya ilə azaldıldı.
(müq. Bousset və başqaları, 2013)
İnsan rekombinant monomerik WT və ya S129A a-Syn və onların yaratdığı fibrilyar polimorfların, eləcə də a-Syn 1-110-un keyfiyyətinə nəzarət həyata keçirilmişdir. Sonradan, fibrilyar polimorflar, endositoz üçün uyğun olan orta ölçüsü 42-52 nm olan fibrilyar hissəciklər yaratmaq üçün VialTweeter ultrasəs aparatında 2 ml-lik Eppendorf borularında 20 dəqiqə sonikasiya ilə parçalandı.
(bax. Şrivastava və başqaları, 2020)
Beş fibrilyar α-Syn polimorfunun xarakteristikası. (A) VialTweeter (aşağı zolaq) ilə parçalanmadan əvvəl (yuxarı zolaq) və sonra mənfi rənglənmiş α-Syn fibrilyar polimorfların fibrillərin, lentlərin, fibrillərin-91, fibrillərin-65 və fibrillərin-110-un ötürülməsi elektron mikroqrafikləri göstərilir. (B) Parçalanmış fibrilyar polimorfların uzunluq paylanması göstərilir. Histoqramların əldə edildiyi fibrilyar birləşmələrin sayı (n) göstərilir.
(tədqiqat və şəkillər: Shrivastava et al., 2020)
α-Syn fibrilləri TEM analizi ilə qiymətləndirildiyi kimi orta ölçüsü 42-52 nm olan fibrilyar hissəciklər yaratmaq üçün VialTweeter-də 2 ml Eppendorf borularında 20 dəqiqə sonikasiya ilə parçalandı.
(müq. Negrini və başqaları, 2022)
Yenidən dayandırılmış fibrillər91 (PBS-də) hüceyrə kulturalarına əlavə edilməzdən əvvəl Flak Tweeter sonikatorundan istifadə edərək 2 mL Eppendorf borularında 20 dəqiqə müddətində sonikasiya yolu ilə parçalanmış, hissələrə bölünmüş, maye azotda dondurulmuş və -80 ̊C-də istifadə olunana qədər saxlanılmışdır.
(bax. Vajhøj və başqaları, 2021)
Çox quyulu lövhələrdə alfa-sinüklein fibril parçalanması üçün sonicator UIP400MTP.
α-Syn fraqmentasiyası üçün VialTweeter və Laboratoriya Sonicatorları
Hielscher Ultrasonics bütün dünyada qabaqcıl ultrasəs cihazların aparıcı istehsalçısı kimi tanınır. Etibarlı və dünya üzrə əsas tədqiqat laboratoriyalarında qurulmuş ultrasəs aparatlarımız kritik təcrübələriniz üçün misilsiz keyfiyyət və performans təklif edir.
Hielscher VialTweeter və hər hansı digər Hielscher sonikatoru ilə siz misilsiz istifadəçi rahatlığını yaşayacaqsınız, çünki onlar təkrarlana bilən nəticələr, istifadə rahatlığı və qüsursuz əməliyyat üçün düşünülmüş şəkildə hazırlanmışdır. Avtomatik məlumat qeyd etmə xüsusiyyətləri ilə, ultrasəs aparatlarımız təkrar istehsal və dəqiqlik üçün vacib məlumatları dəqiqliklə qeyd edərkən siz diqqətinizi tədqiqatınıza yönəldə bilərsiniz.
İnamla ardıcıl və təkrarlana bilən nəticələr əldə edin!
Bizim ultrasəs aparatlarımız Almaniyada hazırlanmış və istehsal edilmişdir. Hər dəfə alfa-sinuklein fibril parçalanmasını etibarlı və dəqiq nümunə hazırlamaq üçün alman dəqiqliyi və ən yüksək mühəndislik keyfiyyəti. Ardıcıl olmayan nəticələrdən narahat olmayın – bizim ultrasəs texnologiyamız tədqiqatınızın elmi tərəqqinin önündə olmasını təmin edir.
Ancaq bu hamısı deyil! Mükəmməlliyə olan öhdəliyimiz məhsullarımızdan kənara çıxır. Biz müstəsna müştəri xidmətimizlə fəxr edirik, hər hansı sualınız və ya narahatlığınızı həll etmək üçün ekspert dəstəyi veririk. Bizim xüsusi komandamız tədqiqat səyahətinizin hər addımında sizə kömək etmək üçün buradadır və ultrasəs aparatlarımızdan maksimum yararlanmağınızı təmin edir.
Yenilik, etibarlılıq və müstəsna istifadəçi təcrübəsini seçin - alfa-sinuklein fibril parçalanması üçün VialTweeter kimi laboratoriya sonikatorlarımızı seçin. Artıq qurulmuş protokollardan faydalanın və kritik tədqiqatları üçün texnologiyamıza etibar edən aparıcı tədqiqatçılar sırasına qoşulun. Ən müasir ultrasəs aparatlarımızla tədqiqatınızı yüksəldin və demans və neyrodegenerativ xəstəliklərin tədqiqatında yeni sərhədləri kəşf edin.
- yüksək səmərəlilik
- ən müasir texnologiya
- etibarlılıq & möhkəmlik
- reproduktivlik
- tənzimlənən, dəqiq proses nəzarəti
- istənilən həcm üçün
- ağıllı proqram təminatı
- ağıllı funksiyalar (məsələn, proqramlaşdırıla bilən, məlumatların protokollaşdırılması, uzaqdan idarəetmə)
- idarə etmək asan və təhlükəsizdir
- aşağı təmir
- CIP (yerində təmiz)
Dizayn, İstehsalat və Konsaltinq – Keyfiyyətli Almaniya istehsalı
Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Sağlamlıq və asan əməliyyat ultrasəs aparatlarımızın sənaye obyektlərinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Kobud şərtlər və tələbkar mühitlər Hielscher ultrasəs cihazları tərəfindən asanlıqla idarə olunur.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikatlı bir şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadəçi dostu olan yüksək performanslı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə ki, Hielscher sonicators CE uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.
Aşağıdakı cədvəl sizə laboratoriya ölçülü ultrasəs aparatlarımızın təxmini emal qabiliyyətinin göstəricisini verir:
| Tövsiyə olunan Cihazlar | Partiya Həcmi | Axın |
|---|---|---|
| UIP400MTP | çox quyulu / mikrotitr plitələr | na |
| Ultrasonik Kubok Horn | Flakonlar və ya stəkanlar üçün CupBuynuz | na |
| GDmini2 | ultrasəs mikro axın reaktoru | na |
| VialTweeter | 0,5 - 1,5 ml | na |
| UP100H | 1 ilə 500 ml | 10-200 ml/dəq |
| UP200Ht, UP400St | 10 ilə 2000 ml | 20 - 400 ml/dəq |
Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizdən soruşun!
VialTweeter adətən analitik nümunənin hazırlanması mərhələsi kimi alfa-sinuklein fibrilini parçalamaq üçün istifadə olunur.
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Tez-tez soruşulan suallar
Alpha-Synuclein amiloiddirmi?
Bəli, alfa-sinuklein amiloid kimi fibrillər əmələ gətirə bilər. Parkinson xəstəliyinin və digər sinükleinopatiyaların patoloji əlaməti olan Lewy cisimlərinin əsas komponentidir. Onun yığılması klassik amiloidlərə bənzər nüvələşmədən asılı polimerləşmə prosesini izləyir.
Amiloid-Beta və Alfa-Sinuklein arasındakı fərq nədir?
Amiloid-beta (Aβ) və alfa-sinuklein (α-sin) neyrodegenerativ xəstəliklərdə patoloji aqreqatlar meydana gətirən fərqli zülallardır. Amiloid prekursor zülalından (APP) əldə edilən Aβ, ilk növbədə, Alzheimer xəstəliyi ilə əlaqələndirilir və hüceyrədənkənar lövhələr əmələ gətirir. Bunun əksinə olaraq, α-sin Parkinson xəstəliyi və əlaqəli xəstəliklərdə hüceyrədaxili birləşən presinaptik neyron zülaldır. Hər ikisi β vərəqlə zəngin amiloid strukturları nümayiş etdirsələr də, ardıcıllıqları, aqreqasiya yolları və xəstəliyə spesifik patologiyası ilə fərqlənirlər.
Amiloid hansı protein növüdür?
Amiloid çarpaz β təbəqə quruluşunu qəbul edən və həll olunmayan fibrillərə birləşən səhv qatlanmış fibrilyar zülaldır. Bu zülallar adətən öz-özünə yığılmağa və çökməyə səbəb olan konformasiya dəyişikliklərinə məruz qalan normal həll olunan prekursorlardan əldə edilir. Amiloidlər müxtəlif neyrodegenerativ və sistem xəstəlikləri ilə əlaqələndirilir, burada onların yığılması hüceyrə toksikliyinə və toxuma zədələnməsinə səbəb olur. 96 quyu boşqab sonikatoru UIP400MTP-nin tədqiqat məqsədləri üçün standartlaşdırılmış amiloid fibrillərinin sürətlə formalaşmasına necə kömək etdiyini öyrənin!
Amiloidlər hansı xəstəliklərə səbəb olur?
Amiloidlər bir çox xəstəliklərdə iştirak edir, bunlara topluca amiloidozlar deyilir. Bunlara daxildir:
- Neyrodegenerativ xəstəliklər: Alzheimer xəstəliyi (Aβ), Parkinson xəstəliyi (α-syn), Huntington xəstəliyi (mutant huntingtin) və prion xəstəlikləri (PrPSc). (Yüksək ötürücülü prion aşkarlanmasının sonikasiya ilə dəstəklənən PMCA haqqında ətraflı oxuyun!)
- Sistemli amiloidozlar: Yüngül zəncirli (AL) amiloidoz, transtiretin (ATTR) amiloidoz və ikincili (AA) amiloidoz.
- Yerli amiloidozlar: Tip 2 diabetdə adacık amiloid polipeptidi (IAPP).
Hər bir amiloidlə əlaqəli xəstəlik zülalların yanlış qatlanması, yığılması və çökməsi ilə xarakterizə olunur, hüceyrə disfunksiyasına və toksikliyə səbəb olur.
Hielscher Ultrasonics yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir laboratoriya üçün sənaye ölçüsü.