ปรับปรุงการวิเคราะห์ HPLC ด้วยการเตรียมตัวอย่างที่เชื่อถือได้
การแยกด้วยโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) ยังคงเป็นหนึ่งในเทคนิคการวิเคราะห์ที่สำคัญที่สุดสำหรับการระบุและวัดปริมาณสารประกอบในเมทริกซ์ที่ซับซ้อน ตั้งแต่การควบคุมคุณภาพทางเภสัชกรรมไปจนถึงการตรวจสอบสิ่งแวดล้อมและการวิเคราะห์อาหาร วิธีการ HPLC ได้รับการยอมรับในด้านความไว ความจำเพาะ และความสม่ำเสมอ อย่างไรก็ตาม ความน่าเชื่อถือของข้อมูลโครมาโทกราฟีขึ้นอยู่กับขั้นตอนสำคัญหนึ่งอย่าง: การเตรียมตัวอย่าง HPLC
การวิจัยและขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างแสดงให้เห็นว่าการสกัดและการเตรียมตัวอย่างโดยใช้คลื่นเสียงความถี่สูงช่วยเพิ่มประสิทธิภาพ ความแม่นยำ และความเร็วของการวิเคราะห์ด้วย HPLC อย่างมีนัยสำคัญ การใช้พลังงานอัลตราโซนิกเพื่อทำลายเมทริกซ์และเพิ่มการถ่ายโอนสารวิเคราะห์เข้าสู่ตัวทำละลาย ทำให้ห้องปฏิบัติการสามารถได้ผลการวิเคราะห์ที่แม่นยำยิ่งขึ้น ใช้เวลาในการสกัดสั้นลง และให้ผลลัพธ์ที่ซ้ำได้มากขึ้น
ทำไมการเตรียมตัวอย่างจึงมีความสำคัญใน HPLC
ในกระบวนการวิเคราะห์หลายขั้นตอน เมทริกซ์ของตัวอย่าง – เช่น วัสดุจากพืช เนื้อเยื่อชีวภาพ ดิน หรือน้ำ – ประกอบด้วยสารผสมที่ซับซ้อนซึ่งสามารถรบกวนการแยกสารด้วยโครมาโทกราฟีได้ ดังนั้น การเตรียมตัวอย่างที่มีประสิทธิภาพจึงมีความจำเป็นเพื่อแยกสารที่ต้องการวิเคราะห์ กำจัดสารรบกวน และทำให้สารเป้าหมายเข้มข้นก่อนนำไปฉีดเข้าสู่ระบบ HPLC
เทคนิคการสกัดแบบดั้งเดิมมักเกี่ยวข้องกับขั้นตอนที่ยาวนาน ปริมาณสารละลายอินทรีย์จำนวนมาก และขั้นตอนการทำความสะอาดหลายขั้นตอน วิธีการเหล่านี้อาจทำให้เกิดความแปรปรวน เพิ่มต้นทุนการดำเนินงาน และขยายระยะเวลาการวิเคราะห์ทั้งหมด
การเตรียมตัวอย่างด้วยคลื่นเสียงความถี่สูง (Ultrasonic) เป็นทางเลือกที่มีประสิทธิภาพ โซนิเคชัน (Sonication) คือการนำพลังงานเสียงความถี่สูงเข้าสู่ตัวกลางของเหลว ทำให้เกิดฟองอากาศขนาดเล็กมากในลักษณะคาวิเทชัน (Cavitation) เมื่อฟองอากาศเหล่านี้ยุบตัวลง จะเกิดแรงเฉือนเฉพาะจุดและผลกระทบจากการผสมในระดับจุลภาค ซึ่งช่วยทำลายโครงสร้างของสารประกอบแข็งและเร่งการถ่ายโอนมวลสาร กระบวนการนี้ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพในการสกัดสารได้อย่างมาก
UIP400MTP เครื่องสะท้อนเสียงที่มีปริมาณงานสูง พร้อม Tube-Rack สำหรับขวด Autosampler
หลักฐานทางวิทยาศาสตร์: การสั่นด้วยคลื่นเสียงช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพการวิเคราะห์
มีการศึกษาวิจัยที่ผ่านการตรวจสอบโดยผู้เชี่ยวชาญหลายฉบับได้แสดงให้เห็นถึงข้อดีของการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงในกระบวนการทำงานของ HPLC
ตัวอย่างเช่น วิธีการที่พัฒนาขึ้นเพื่อตรวจสอบสารตกค้างของยาฆ่าแมลงในตัวอย่างน้ำใช้วิธีการสั่นด้วยคลื่นเสียงร่วมกับเทคนิค LC–MS/MS เพื่อวัดความเข้มข้นของยาฆ่าแมลงคาร์บาเรล ในแนวทางนี้ ตัวอย่างน้ำถูกสกัดด้วยอะซีโตไนไตรล์ภายใต้การบำบัดด้วยคลื่นเสียงอัลตราโซนิกก่อนการวิเคราะห์ด้วยโครมาโตกราฟี วิธีการนี้ให้ผลการวิเคราะห์ที่แข็งแกร่ง รวมถึงการคืนค่าระหว่าง 89.53% ถึง 101.72% ซึ่งยืนยันความถูกต้องและความน่าเชื่อถือของขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างด้วยคลื่นเสียงอัลตราโซนิก
ขั้นตอนการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงช่วยให้การถ่ายโอนสารวิเคราะห์จากเมทริกซ์น้ำเข้าสู่ตัวทำละลายอินทรีย์มีประสิทธิภาพ ลดการใช้ตัวทำละลายและขจัดความจำเป็นในการทำความสะอาดอย่างละเอียด วิธีการวิเคราะห์ที่ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องแสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์เชิงเส้น ความแม่นยำ และขีดจำกัดการวัดปริมาณที่ดีเยี่ยม ซึ่งเน้นย้ำถึงประสิทธิภาพของการใช้คลื่นเสียงในกระบวนการโครมาโตกราฟีสมัยใหม่ (ดู Roudani และคณะ, 2018)
การศึกษาอีกชิ้นหนึ่งได้แนะนำเทคนิคการกระจายตัวในเฟสของแข็งด้วยแมทริกซ์ร่วมกับคลื่นอัลตราโซนิก (UA-MSPD) สำหรับการวิเคราะห์โอลีโรเปอินในใบมะกอกโดยใช้การวิเคราะห์ HPLC ในเทคนิคนี้ ผงพืชและวัสดุดูดซับถูกผสมกันแล้วนำไปสัมผัสกับคลื่นอัลตราโซนิกในระหว่างขั้นตอนการชะล้าง คลื่นอัลตราโซนิกช่วยเพิ่มการหลุดออกของสารวิเคราะห์จากผิววัสดุดูดซับ ในขณะเดียวกันก็ช่วยปรับปรุงการสกัดสารจากเมทริกซ์ของตัวอย่าง (ดู Rashidipour และ Heydari, 2018)
กระบวนการอัลตราโซนิกที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมได้นำไปสู่การปรับปรุงทางวิเคราะห์อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งรวมถึง:
- เส้นโค้งการสอบเทียบเชิงเส้นที่มีค่าสัมประสิทธิ์การถดถอยเชิงเส้น R² = 0.9979
- ขีดจำกัดการตรวจจับต่ำสุดที่ 0.03 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร
- อัตราการฟื้นตัวระหว่าง 90.2% ถึง 96.7%
ผลลัพธ์เหล่านี้ยืนยันว่าการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงไม่เพียงแต่เร่งการเตรียมตัวอย่างเท่านั้น แต่ยังเพิ่มปริมาณสารสกัดได้มากกว่าเทคนิคการกระจายของแข็งในเมทริกซ์แบบดั้งเดิมอีกด้วย
เครื่องสะท้อนเสียงแบบโพรบ UP200St สำหรับการเตรียมตัวอย่าง HPLC
ข้อได้เปรียบหลักของการเตรียมตัวอย่างด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงสำหรับ HPLC
การนำการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงมาใช้เพิ่มขึ้นในห้องปฏิบัติการวิเคราะห์นั้นได้รับแรงผลักดันจากประโยชน์ที่วัดได้หลายประการ
- ประสิทธิภาพการสกัดที่สูงขึ้น
การเกิดโพรงอากาศเชิงเสียงทำลายเมทริกซ์ของแข็งและปรับปรุงการแทรกซึมของตัวทำละลาย ซึ่งช่วยเพิ่มการปลดปล่อยสารวิเคราะห์และเพิ่มอัตราการกู้คืน โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับสารประกอบในระดับร่องรอยในตัวอย่างที่ซับซ้อน - ลดเวลาการเตรียมตัวอย่าง
การสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงสามารถเตรียมตัวอย่างให้เสร็จสิ้นได้ภายในไม่กี่วินาทีหรือไม่กี่นาที ตัวอย่างเช่น การตั้งค่าพารามิเตอร์การสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงที่เหมาะสมใน UA-MSPD สามารถกู้คืนสารวิเคราะห์ได้อย่างมีประสิทธิภาพภายในเวลาประมาณ 30 วินาทีของการสั่นสะเทือน ซึ่งแสดงให้เห็นว่ากระบวนการวิเคราะห์สามารถเร่งความเร็วได้อย่างมากเพียงใด - การใช้ตัวทำละลายที่ลดลง
เนื่องจากอัลตราซาวด์ช่วยเพิ่มการถ่ายโอนมวล ปริมาณตัวทำละลายที่มักต้องการจึงน้อยลง การใช้ตัวทำละลายที่ลดลงช่วยปรับปรุงความยั่งยืนของห้องปฏิบัติการและลดต้นทุนการดำเนินงาน - การปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำ
การกระจายพลังงานอัลตราโซนิกที่สม่ำเสมอช่วยให้การสลายตัวอย่างและการสกัดตัวอย่างมีความสม่ำเสมอในทุกตัวอย่างที่ทำการทดลองซ้ำ ซึ่งนำไปสู่ความแม่นยำที่ดีขึ้นในการวัดวิเคราะห์ - ความเข้ากันได้กับวิธีการโครมาโทกราฟีสมัยใหม่
การสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงสามารถผสานรวมกับระบบ HPLC, UHPLC และ LC-MS ได้อย่างง่ายดาย ทำให้เหมาะสำหรับสภาพแวดล้อมการวิเคราะห์ที่ต้องการปริมาณงานสูง
โครมาโตแกรม HPLC ของสารประกอบฟีนอลิกจากสารสกัดที่แยกด้วยอัลตราโซนิกของใบ Annona muricata โดยใช้เครื่องอัลตราโซนิก UP400S
(การศึกษาและกราฟิก: ©Nolasco-González et al., 2022)
โซลูชันการโซนิเคชันเชิงปฏิบัติสำหรับการเตรียมตัวอย่าง HPLC
สำหรับห้องปฏิบัติการที่ดำเนินการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูง เครื่องโซนิคเอเตอร์ของ Hielscher ให้การควบคุมที่แม่นยำต่อพารามิเตอร์ต่างๆ เช่น แอมพลิจูด เวลา และโหมดพัลส์ ดังนั้น เครื่องโซนิคเอเตอร์ในห้องปฏิบัติการของ Hielscher จึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับห้องปฏิบัติการวิเคราะห์
เลือกเครื่องโซนิเคเตอร์ในห้องปฏิบัติการที่เหมาะสมที่สุดสำหรับตัวอย่าง HPLC ของคุณ
| เครื่องโซนิเคเตอร์ รุ่น | ข้อได้เปรียบสำหรับ HPLC | การใช้งานที่ดีที่สุดในการเตรียมตัวอย่าง HPLC |
| VialTweeter เครื่องโซนิคเตอร์หลายหลอด |
• การสั่นด้วยคลื่นเสียงพร้อมกันสูงสุด 10 ขวดที่ปิดผนึกด้วยพลังงานอัลตราโซนิกที่เท่ากัน • สะอาดปราศจากเชื้อ: ไม่มีการปนเปื้อนข้ามเนื่องจากตัวอย่างถูกปิดสนิท • เงื่อนไขการสกัดที่สามารถทำซ้ำได้สูงในแต่ละชุด • การเกิดโพรงอากาศที่มีประสิทธิภาพสำหรับตัวอย่างวิเคราะห์ปริมาณน้อย |
• การเตรียมตัวอย่างปริมาณมากสำหรับสิ่งแวดล้อม อาหาร หรือยา • การติดตามการสกัดสารวิเคราะห์ก่อนการวิเคราะห์ด้วย HPLC, UHPLC หรือ LC-MS • ขั้นตอนการทำงานที่เป็นมาตรฐานซึ่งต้องการการปฏิบัติที่เหมือนกันสำหรับตัวอย่างหลายตัว |
| เครื่องสะท้อนเสียงไมโครเพลท UIP400MTP |
• การสั่นด้วยคลื่นเสียงแบบไม่สัมผัสสำหรับไมโครเพลตทั้งแผ่น (รูปแบบ 96 หลุม, 384 หลุม) • การกระจายพลังงานอัลตราโซนิกที่สม่ำเสมอในบ่อทั้งหมด • ช่วยให้สามารถทำงานอัตโนมัติและผสานระบบหุ่นยนต์สำหรับกระบวนการวิเคราะห์ • ประสิทธิภาพสูงพร้อมการควบคุมความแรงและระยะเวลาการส่งคลื่นเสียงได้อย่างแม่นยำ |
• กระบวนการทำงานแบบคัดกรองด้วย UHPLC ที่มีประสิทธิภาพสูง • ฐานข้อมูลสารประกอบทางเภสัชกรรมและการเตรียมตัวอย่างเมตาโบโลมิกส์ • การสกัดแบบใช้แผ่นสำหรับกระบวนการวิเคราะห์ด้วย LC-MS หรือ UHPLC |
| เครื่องโซนิคสำหรับห้องปฏิบัติการพร้อมหัวไมโคร (การสั่นด้วยคลื่นเสียงโดยตรง) |
• ความเข้มของคลื่นอัลตราโซนิกสูงสุดสำหรับการทำลายเมทริกซ์อย่างมีประสิทธิภาพ • การสกัดสารวิเคราะห์จากตัวอย่างที่เป็นของแข็ง มีความหนืด หรือมีความไม่สม่ำเสมอได้อย่างรวดเร็วมาก • ปรับค่าแอมพลิจูดและพารามิเตอร์พัลส์ได้ เพื่อปรับสภาพการสกัดให้เหมาะสมที่สุด • พลังงานคาวิเตชันสูงช่วยเพิ่มการกู้คืนสารวิเคราะห์และเพิ่มประสิทธิภาพการสกัด |
• การสกัดจากเมทริกซ์ที่ยาก เช่น เนื้อเยื่อพืช ตัวอย่างอาหาร หรือพอลิเมอร์ • การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันก่อนการสกัดด้วยวิธี SPE, การกรอง หรือการสกัดแบบของเหลว-ของเหลว • การพัฒนาวิธีการสำหรับการเตรียมตัวอย่างด้วย HPLC โดยใช้คลื่นเสียงความถี่สูง |
| คัพฮอร์น (“อ่างอาบน้ำความเข้มข้นสูง” สำหรับบีกเกอร์และหลอดทดลอง |
• การสั่นสะเทือนทางอ้อมช่วยป้องกันการปนเปื้อนของหัววัด • สนามอัลตราโซนิกที่สม่ำเสมอสำหรับหลอดหลายหลอดพร้อมกัน • เหมาะอย่างยิ่งสำหรับตัวอย่างที่ปราศจากเชื้อ อันตราย หรือไวต่อความเปลี่ยนแปลง ซึ่งต้องคงสภาพปิดผนึกไว้ • ทำให้การจัดการง่ายขึ้นในขณะที่ยังคงรักษาพลังงานคาวิเทชันที่แข็งแกร่ง |
• การสกัดขนานตัวอย่าง HPLC หลายตัวอย่างในหลอดปั่นเหวี่ยงที่ปิดผนึก • การเตรียมตัวอย่างทางชีวภาพ เภสัชกรรม หรือสิ่งแวดล้อม • ขั้นตอนการทำงานที่ต้องการการสั่นสะเทือนทางอ้อมที่ปราศจากการปนเปื้อน |
ความเกี่ยวข้องทางวิทยาศาสตร์สำหรับเคมีวิเคราะห์
เมื่อเคมีวิเคราะห์ก้าวไปสู่การปฏิบัติการในห้องปฏิบัติการที่รวดเร็วและยั่งยืนมากขึ้น การเตรียมตัวอย่างด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงได้กลายเป็นเทคโนโลยีที่ทรงพลังในการสนับสนุนการพัฒนาวิธีการวิเคราะห์ที่รวดเร็ว โดยใช้ตัวทำละลายน้อยลง เพิ่มประสิทธิภาพในการสกัด และให้พารามิเตอร์การตรวจสอบที่แข็งแกร่ง
งานวิจัยที่เพิ่มขึ้นเกี่ยวกับการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงแสดงให้เห็นว่าการเตรียมตัวอย่างด้วย HPLC ที่ใช้การโซนิเคชันช่วยไม่ได้เป็นเพียงความสะดวกเท่านั้น – นี่เป็นวิธีการที่ได้รับการยืนยันทางวิทยาศาสตร์ซึ่งช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการวิเคราะห์ โดยการผสมผสานการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงกับเทคนิคโครมาโทกราฟีสมัยใหม่ ห้องปฏิบัติการสามารถตรวจจับสารวิเคราะห์ในปริมาณน้อยได้อย่างน่าเชื่อถือในตัวอย่างที่มีองค์ประกอบซับซ้อนมากขึ้นเรื่อยๆ
กระบวนการทำงาน HPLC ที่เสริมด้วยโซนิเคชัน
ด้วยความก้าวหน้าอย่างต่อเนื่องในด้านเครื่องมือวิเคราะห์และเทคโนโลยีการเตรียมตัวอย่าง การสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงมีแนวโน้มที่จะมีบทบาทสำคัญมากยิ่งขึ้นในห้องปฏิบัติการโครมาโตกราฟี ความสามารถในการปรับปรุงกระบวนการทำงานให้มีประสิทธิภาพมากขึ้น เพิ่มคุณภาพของข้อมูล และลดผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อมนั้นสอดคล้องกับความต้องการที่เปลี่ยนแปลงไปของวิทยาศาสตร์การวิเคราะห์สมัยใหม่
สำหรับนักเคมีวิเคราะห์และห้องปฏิบัติการอุตสาหกรรมที่ต้องการเพิ่มประสิทธิภาพการเตรียมตัวอย่าง HPLC การสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูง (Ultrasonic Extraction) เป็นวิธีที่ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถปรับขนาดได้และมีความน่าเชื่อถือทางวิทยาศาสตร์ ด้วยการผสานการสั่นด้วยคลื่นเสียงเข้ากับกระบวนการเตรียมตัวอย่างตามปกติ ห้องปฏิบัติการสามารถปรับปรุงประสิทธิภาพและความน่าเชื่อถือของการวิเคราะห์ด้วยโครมาโทกราฟีได้อย่างมีนัยสำคัญ
การออกแบบ การผลิต และการให้คําปรึกษา – คุณภาพ ผลิตในประเทศเยอรมนี
เครื่องอัลตราโซนิก Hielscher เป็นที่รู้จักกันดีในด้านคุณภาพและมาตรฐานการออกแบบสูงสุด ความทนทานและใช้งานง่ายช่วยให้สามารถรวมเครื่องอัลตราโซนิกของเราเข้ากับโรงงานอุตสาหกรรมได้อย่างราบรื่น สภาพที่ขรุขระและสภาพแวดล้อมที่ต้องการสามารถจัดการได้ง่ายโดยเครื่องอัลตราโซนิกของ Hielscher
Hielscher Ultrasonics เป็น บริษัท ที่ได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO และให้ความสําคัญเป็นพิเศษกับเครื่องอัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงที่มีเทคโนโลยีล้ําสมัยและเป็นมิตรกับผู้ใช้ แน่นอนว่าเครื่องอัลตราโซนิกของ Hielscher เป็นไปตามมาตรฐาน CE และตรงตามข้อกําหนดของ UL, CSA และ RoHs
วรรณกรรม / อ้างอิง
- M. Rashidipour and R. Heydari (2018): Ultrasonic-Assisted Matrix Solid-Phase Dispersion and High-Performance Liquid Chromatography as an Improved Methodology for Determination of Oleuropein from Olive Leaves. Analytical and Bioanalytical Chemistry Research 52, 2018. 307-316.
- Roudani, A.; Rachid, Mamouni; Nabil, Saffaj; Laknifli, A.; Gharby, Said; Noureddine, El Baraka; Bakka, Abdelhamid; Abdellah, Faouzi (2018): Method validation in the determination of Carbaryl pesticide in water samples using sonication and liquid chromatography-tandem mass spectrometry. JMES 8 (7), 2017. 2409-2420.
- Bimakr M., Ganjloo A., Zarringhalami S., Ansarian E. (2017): Ultrasound-assisted extraction of bioactive compounds from Malva sylvestris leaves and its comparison with agitated bed extraction technique. Food Science and Biotechnology 2017 Nov 30;26(6):1481-1490.
คําถามที่พบบ่อย
HPLC คืออะไร?
โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) เป็นเทคนิคการแยกเชิงวิเคราะห์ที่ใช้ในการระบุ หาปริมาณ และทำให้บริสุทธิ์ส่วนประกอบภายในสารผสม ใน HPLC ของเหลวที่เคลื่อนที่พาตัววิเคราะห์ที่ละลายอยู่ผ่านคอลัมน์ที่บรรจุเฟสคงที่ภายใต้ความดันสูง ความแตกต่างในการปฏิสัมพันธ์ระหว่างตัววิเคราะห์ เฟสคงที่ และเฟสเคลื่อนที่จะทำให้สารประกอบแยกออกจากกันขณะที่เคลื่อนผ่านคอลัมน์เครื่องตรวจจับ เช่น UV-Vis, ฟลูออเรสเซนซ์ หรือแมสสเปกโทรมิเตอร์ วัดสารประกอบที่แยกได้ ช่วยให้สามารถวิเคราะห์เชิงคุณภาพและเชิงปริมาณได้อย่างแม่นยำ
ชนิดของโครมาโตกราฟีของเหลวมีอะไรบ้าง?
โครมาโตกราฟีของเหลวสามารถจำแนกได้ตามกลไกการแยกที่ใช้ระหว่างสารที่วิเคราะห์ เฟสคงที่ และเฟสเคลื่อนที่ประเภทที่พบมากที่สุดคือโครมาโทกราฟีเฟสผกผัน ซึ่งเฟสคงที่ที่ไม่เป็นขั้วจะแยกสารประกอบโดยอาศัยปฏิสัมพันธ์แบบไม่ชอบน้ำ; โครมาโทกราฟีเฟสปกติ ซึ่งใช้เฟสคงที่เป็นขั้วและแยกสารประกอบตามขั้ว; โครมาโทกราฟีแลกเปลี่ยนไอออน ซึ่งเฟสคงที่มีประจุจะแยกสารวิเคราะห์โดยอาศัยปฏิสัมพันธ์แบบไอออนิก; และโครมาโทกราฟีแบบคัดขนาด ซึ่งจะแยกโมเลกุลตามขนาดเชิงพลศาสตร์และน้ำหนักโมเลกุลวิธีการเฉพาะทางเพิ่มเติม ได้แก่ โครมาโทกราฟีแบบแอฟฟินิตี้ และโครมาโทกราฟีแบบปฏิสัมพันธ์กับสารที่ชอบน้ำ (HILIC) ซึ่งมุ่งเน้นการแยกสารโดยอาศัยปฏิสัมพันธ์ระดับโมเลกุลเฉพาะหรือสารที่มีขั้ว
หลอดอะไรที่ใช้สำหรับ HPLC?
การวิเคราะห์ด้วย HPLC โดยทั่วไปจะใช้หลอดแก้วหรือโพลิเมอร์ขนาดเล็กที่ออกแบบมาเพื่อบรรจุตัวอย่างที่เตรียมไว้ก่อนการฉีดเข้าสู่ระบบโครมาโตกราฟีรูปแบบที่พบมากที่สุดคือหลอดไวแอลสำหรับออโต้แซมปลีร์ขนาด 2 มิลลิลิตร ซึ่งสามารถใช้งานร่วมกับออโต้แซมปลีร์ HPLC ได้หลากหลายรุ่น หลอดเหล่านี้มักผลิตจากแก้วบอโรซิลิเกตเพื่อให้มีความทนทานต่อสารเคมีและลดการปฏิสัมพันธ์กับตัวทำละลายและสารวิเคราะห์ให้น้อยที่สุด ขึ้นอยู่กับประเภทของตัวอย่าง หลอดไวแอลอาจมีแผ่นรองสำหรับตัวอย่างปริมาณน้อย ฝาปิดแบบเกลียวหรือแบบกดรีด และซีลปิดที่ทำจากวัสดุ เช่น PTFE/ซิลิโคน เพื่อรักษาความสมบูรณ์ของตัวอย่าง
อะไรคือ Autosampler Vials?
ขวดตัวอย่างอัตโนมัติเป็นภาชนะบรรจุตัวอย่างที่ออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับระบบฉีดตัวอย่างอัตโนมัติในเครื่องมือ HPLC และ UHPLC ขวดเหล่านี้บรรจุสารละลายตัวอย่างที่เตรียมไว้แล้วและวางไว้ในถาดตัวอย่างอัตโนมัติของเครื่องมือ ซึ่งระบบจะดึงปริมาณที่กำหนดไว้โดยอัตโนมัติเพื่อฉีดเข้าสู่คอลัมน์โครมาโทกราฟีขวดตัวอย่างอัตโนมัติถูกผลิตขึ้นด้วยขนาดที่แม่นยำเพื่อให้แน่ใจว่าเข้ากันได้กับเข็มเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ และลดการระเหยของตัวอย่าง การปนเปื้อน หรือการดูดซับ การออกแบบของขวดตัวอย่างช่วยให้สามารถทำการวิเคราะห์ซ้ำได้ และมีประสิทธิภาพสูงในห้องปฏิบัติการโครมาโตกราฟีที่ทันสมัย
ขั้นตอนในการทำ HPLC มีอะไรบ้าง?
กระบวนการทำงานทั่วไปของโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) ประกอบด้วยขั้นตอนต่อเนื่องหลายขั้นตอนที่ช่วยให้การแยกและการตรวจวัดสารวิเคราะห์มีความน่าเชื่อถือ
- ขั้นแรก ทำการเตรียมตัวอย่างเพื่อละลายสารที่ต้องการวิเคราะห์, กำจัดอนุภาค, และมักทำการสกัดหรือทำให้สารเป้าหมายเข้มข้นจากเมทริกซ์ของตัวอย่าง ขั้นตอนนี้อาจรวมถึงการกรอง, การเจือจาง, หรือเทคนิคการสกัดเช่นการสกัดด้วยคลื่นเสียงความถี่สูง, การสกัดแบบของแข็ง, หรือการสกัดแบบของเหลว-ของเหลว
- ต่อไป ตัวอย่างที่ถูกเตรียมไว้จะถูกใส่ลงในขวด HPLC และโหลดเข้าไปในตัวเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ ตัวเก็บตัวอย่างอัตโนมัติจะฉีดปริมาณตัวอย่างที่แม่นยำเข้าไปในเฟสเคลื่อนที่ที่กำลังไหลอยู่
- ขั้นตอนการส่งเฟสเคลื่อนที่จะลำเลียงตัวอย่างที่ฉีดเข้าไปผ่านระบบโดยใช้ปั๊มแรงดันสูง เฟสเคลื่อนที่จะพาตัววิเคราะห์ผ่านคอลัมน์โครมาโตกราฟีด้วยอัตราการไหลที่ควบคุมได้
- ภายในคอลัมน์โครมาโตกราฟี จะเกิดการแยกสารขึ้น คอลัมน์นี้ประกอบด้วยเฟสคงที่ ซึ่งโดยทั่วไปเป็นอนุภาคที่บรรจุอยู่และมีคุณสมบัติทางเคมีที่กำหนดไว้ เมื่อสารตัวอย่างเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ สารเหล่านี้จะมีปฏิสัมพันธ์กับเฟสคงที่และเฟสเคลื่อนที่ต่างกัน ส่งผลให้สารแต่ละชนิดถูกชะล้างออกมาในเวลาที่แตกต่างกัน
- หลังจากการแยก สารประกอบจะผ่านเครื่องตรวจจับ เช่น เครื่องตรวจจับ UV-Vis, ฟลูออเรสเซนซ์ หรือเครื่องตรวจจับแมสสเปกโตรเมทรี เครื่องตรวจจับจะวัดการมีอยู่และความเข้มข้นของสารประกอบที่ถูกล้างออกมา และแปลงสัญญาณเป็นข้อมูลอิเล็กทรอนิกส์
- สุดท้าย การเก็บรวบรวมข้อมูลและการวิเคราะห์ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์โครมาโทกราฟี ระบบจะสร้างโครมาโตแกรมซึ่งมียอดที่สอดคล้องกับสารประกอบแต่ละชนิด เวลาการคงตัวของยอดช่วยในการระบุสารวิเคราะห์ ในขณะที่พื้นที่หรือความสูงของยอดช่วยให้สามารถกำหนดความเข้มข้นของสารเหล่านั้นได้อย่างเชิงปริมาณ
Hielscher Ultrasonics ผลิตโฮโมจีไนเซอร์อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงจาก ห้องทดลอง ถึง ขนาดอุตสาหกรรม