การเตรียมตัวอย่างด้วยอัลตราโซนิกสำหรับการวิเคราะห์ THC
- การสกัดด้วยอัลตราโซนิกเป็นวิธีที่ได้รับการพิสูจน์แล้วสำหรับการผลิต THC และยังสามารถใช้เพื่อการวิเคราะห์ได้ด้วย
- การใช้คลื่นอัลตราโซนิกเป็นวิธีเตรียมตัวอย่างที่ใช้กันทั่วไปสำหรับการวิเคราะห์ปริมาณ THC ทั้งหมดในผลิตภัณฑ์กัญชา
- ตัวอย่างจะผ่านการสกัดด้วยอัลตราโซนิกก่อนการวิเคราะห์ด้วย TLC, GC และ HPLC
การสกัด THC ด้วยอัลตราโซนิก
THC หรือ tetrahydrocannabinol (delta-9-tetrahydrocannabinol) เป็นสารเคมีที่ก่อให้เกิดผลต่อจิตใจส่วนใหญ่ของกัญชา สำหรับพืชกัญชา มีสายพันธุ์ที่รู้จักมากกว่า 400 สายพันธุ์ กัญชาอาจมี THC ต่ำเพียง 0.3 wt% ขึ้นอยู่กับสายพันธุ์นั้น ๆ ส่วนสายพันธุ์อื่นอาจมีปริมาณ THC สูงถึง 20 wt%.
ผลิตภัณฑ์กัญชาแต่ละชนิดยังแตกต่างกันอย่างมาก โดยความเข้มข้นเฉลี่ยของ THC ในกัญชาอยู่ระหว่าง 1 ถึง 5%; ในแฮชิชมีปริมาณ THC ระหว่าง 5 ถึง 15% และในน้ำมันแฮชิชมีค่าเฉลี่ย 20% ปริมาณ THC ในกัญชาที่ใช้แต่ละครั้งเพื่อสันทนาการมีความแปรผันสูง และยิ่งกัญชามีปริมาณ THC ต่ำ ผู้ใช้ก็ยิ่งต้องบริโภคมากขึ้นเพื่อให้ได้รับผลที่ต้องการ
การเตรียมตัวอย่างด้วยอัลตราโซนิกใช้เพื่อวิเคราะห์ปริมาณ THC
- เพื่อควบคุมคุณภาพผลิตภัณฑ์ THC สำหรับการใช้เพื่อสันทนาการ,
- เพื่อประเมินคุณภาพผลิตภัณฑ์ THC ทางเภสัชกรรม,
- เพื่อแยกความแตกต่างระหว่างกัญชาสำหรับใช้เป็นยาเสพติดกับกัญชงสำหรับผลิตเส้นใย
สำหรับการวิเคราะห์ THC นิยมใช้วิธีโครมาโทกราฟีต่อไปนี้: โครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง (TLC), แก๊สโครมาโทกราฟี (GC) และโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC)
ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างด้วยอัลตราโซนิกสำหรับการวิเคราะห์ด้วย TLC
การเตรียมตัวอย่าง: ในการเตรียมตัวอย่าง วัสดุพืชแห้งต้องผ่านการมาเซอเรชันและบดให้เป็นผงเนื้อเดียวกัน สำหรับการสกัดด้วยอัลตราโซนิก ให้ผสมผงพืชกัญชา 500mg กับสารผสม methanol-chloroform 5mL (อัตราส่วน 9 : 1) ในขวดไวอัล สามารถทำการโซนิเคชันได้โดยใช้ เครื่องอัลตราโซนิก ที่มีหัวปลายขนาดเล็ก หรือใช้ VialTweeter หรือ CupHorn สำหรับการใช้คลื่นอัลตราโซนิก ระยะเวลาโซนิเคชันประมาณ 5 min. จากนั้นปล่อยตัวอย่างไว้เป็นเวลาอย่างน้อย 5 min. เจือจางของเหลวใสส่วนบนด้วยสารผสมสำหรับการสกัด (v/v: 1 : 10) THC อิสระ: 1μL บนแผ่น TLC
การดีคาร์บอกซิเลชัน: ระเหยสารสกัด 100μL จนแห้ง ให้ความร้อนแก่สารตกค้างที่ 180℃ เป็นเวลา 4 min. เติม methanol-chloroform 500μL (v/v 9 : 1) ทำการโซนิเคชันเป็นเวลา 5 min. เจือจางของเหลวใสส่วนบนด้วยสารผสมสำหรับการสกัด (v/v: 1 : 10)
การสอบเทียบ: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
ซิลิกาเจลสำหรับ TLC F-254, Merck 5729
เครื่องสแกน TLC II, ซอฟต์แวร์ CATS3, Camag Muttenz ตัวชะ:
Ethylacetat : Toluol : Chloroform = 3 : 17 : 0.25 (v/v/v)
การทำอนุพันธ์หลังการแยกด้วยโครมาโทกราฟี: Fast Blue Salt 0.1% ใน NaOH 0.1 M
การวัดความหนาแน่นเชิงแสงที่ 550 nm
Tetrahydrocannabinol (Δ9-THC) สำหรับการวิเคราะห์และการสกัด
ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างด้วยอัลตราโซนิกสำหรับการวิเคราะห์ด้วย GC
การเตรียมตัวอย่าง: วัสดุพืชแห้งผ่านการมาเซอเรชันและบดให้เป็นผงเนื้อเดียวกัน สำหรับการสกัด ให้ผสมผงพืชกัญชา 500mg กับสารผสม methanol-hexane 10mL (อัตราส่วน 9 : 1) ในขวดไวอัล สามารถทำการโซนิเคชันได้โดยใช้ อุปกรณ์อัลตราโซนิกแบบโพรบ ที่มีหัวปลายขนาดเล็ก หรือใช้ VialTweeter หรือ CupHorn สำหรับการใช้คลื่นอัลตราโซนิก ทำการโซนิเคชันตัวอย่างเป็นเวลา 15–20 min. เขย่าตัวอย่างแล้วปล่อยไว้เป็นเวลาอย่างน้อย 5 min. เจือจางของเหลวใสส่วนบนด้วยสารผสมสำหรับการสกัด (v/v 1: 20)
การดีคาร์บอกซิเลชัน: ในชิ้นส่วนสอดแทรก
อุณหภูมิหัวฉีด 250℃
การสอบเทียบ: 5 ng/μL ถึง 250 ng/μL
GC: HP 6890 พร้อม 5973 MSD และเครื่องป้อนตัวอย่างอัตโนมัติ 7683 ปริมาตรฉีด: 1μL, ระยะเวลาที่ไม่แยกกระแส: 2 min.
คอลัมน์: HP-5 MS, 30m, เส้นผ่านศูนย์กลาง 250 μm, ความหนาฟิล์ม 0.25 μm
แก๊สพา: He, 35 psi, อัตราการไหลคงที่: 4 mL/min.
ตู้อบ: 100℃ เป็นเวลา 1min.; เพิ่มอุณหภูมิในอัตรา 15℃ /min. จนถึง 280℃; คงไว้ที่ 280℃ เป็นเวลา 5 min. MSD: การสแกน: m/e 35 – 550
ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างด้วยอัลตราโซนิกสำหรับการวิเคราะห์ด้วย HPLC
การเตรียมตัวอย่าง (เช่นเดียวกับการเตรียมสำหรับ GC): วัสดุพืชแห้งผ่านการมาเซอเรชันและบดให้เป็นผงเนื้อเดียวกัน สำหรับการสกัด ให้ผสมผงพืชกัญชา 500mg กับสารผสม methanol-hexane 10mL (อัตราส่วน 9 : 1) ในขวดไวอัล สามารถทำการโซนิเคชันได้โดยใช้ เครื่องอัลตราโซนิกแบบโพรบ ที่มีหัวปลายขนาดเล็ก หรือใช้ VialTweeter หรือ CupHorn สำหรับการใช้คลื่นอัลตราโซนิก ทำการโซนิเคชันตัวอย่างเป็นเวลา 15–20 min. เขย่าตัวอย่างแล้วปล่อยไว้เป็นเวลาอย่างน้อย 5 min. เจือจางของเหลวใสส่วนบนด้วยสารผสมสำหรับการสกัด (v/v 1: 20)
VialTweeter สำหรับการเตรียมตัวอย่างด้วยอัลตราโซนิก
คอลัมน์ก่อนคอลัมน์หลัก: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
คอลัมน์: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
ตัวชะ: แบบไอโซเครติก TEAP 25 mmol/L ในสัดส่วน 36%, acetonitrile 64% ตรวจวัดปริมาณที่ 210nm
การสอบเทียบ: 0.001 – 0.10 μg/μL
การสอบเทียบ: 0.01 – 0.50 μg/μL
เวลาคงอยู่: สำหรับ CBD: 6.2 min.; สำหรับ CBN: 8.0 min.; สำหรับ THC: 9.4 min.; สำหรับ THC-A: 11.0 min
ขีดจำกัดการตรวจพบ (LOD): CBD 0.5%, CBN 0.5%, THC 0.15%, THC-A 1%
UP200St พร้อมหัวปลายขนาดเล็กสำหรับการโซนิเคชันตัวอย่าง
เอกสาร/เอกสารอ้างอิง
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): การวิเคราะห์ทางเคมีนิติวิทยาศาสตร์ของพืชกัญชาที่มี THC จากวิธีโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง ผ่าน GC ไปสู่วิธี HPLC Applica 2006.
ข้อเท็จจริงที่ควรรู้
กัญชา ประกอบด้วยดอกแห้ง ใบที่อยู่ใต้ดอก และลำต้นของพืชกัญชาเพศเมีย รูปแบบนี้มีการบริโภคแพร่หลายที่สุด และมี THC ประมาณ 3% ถึง 20% กัญชาบางรูปแบบที่ผ่านการปรับปรุงพันธุ์อย่างเข้มข้นมีปริมาณ THC มากกว่า 30% กัญชาเป็นวัตถุดิบสำหรับผลิตภัณฑ์กัญชาที่มี THC รูปแบบอื่นทั้งหมด การเปลี่ยนแคนนาบินอยด์ที่มีปริมาณมากที่สุด คือ tetrahydrocannabinolic acid (THCA) ให้เป็น THC ที่ออกฤทธิ์ต่อจิตประสาท ต้องเริ่มกระบวนการดีคาร์บอกซิเลชัน ดังนั้น กัญชาและสารสกัดจึงต้องได้รับความร้อนหรือกำจัดน้ำออกเพื่อให้เกิดการดีคาร์บอกซิเลชัน
คีฟ หมายถึงผงที่มีไตรโคมอยู่มาก ซึ่งได้จากการร่อนใบและดอกกัญชา สามารถบริโภคในรูปผง หรืออัดและนำไปใช้ในแฮชิชแบบก้อน
แฮชิช หรือแฮช เป็นเรซินเข้มข้นในรูปก้อนแบนหรือก้อนกลม ผลิตจากคีฟที่อัดแน่น หรือจากเรซินที่ขูดออกจากผิวพืชแล้วปั้นเป็นก้อนกลม มีสีหลากหลายตั้งแต่ดำจนถึงน้ำตาลทอง ขึ้นอยู่กับความบริสุทธิ์และแหล่งที่มา สามารถบริโภคทางปากหรือสูบ เช่น ด้วยไปป์ มอระกู่ บ้อง บ้องน้ำขนาดเล็ก เครื่องทำไอ หรือมีดร้อน สูบในรูปมวน ผสมกับช่อดอกกัญชาหรือยาสูบ สูบผ่านขวด หรือใช้เป็นส่วนผสมในอาหาร
ทิงเจอร์กัญชา หมายถึงสารสกัดแคนนาบินอยด์ในแอลกอฮอล์ แคนนาบินอยด์ถูกสกัดจากพืชกัญชาโดยใช้สุราที่มีความเข้มข้นแอลกอฮอล์สูง ซึ่งส่วนใหญ่เป็นแอลกอฮอล์จากธัญพืช เพื่อผลิตทิงเจอร์
น้ำมันแฮชิช เป็นเมทริกซ์แคนนาบินอยด์ที่มีลักษณะเป็นเรซิน ผลิตโดยการสกัดด้วยตัวทำละลาย และทำให้เป็นมวลแข็งหรือหนืด น้ำมันแฮชิชเป็นหนึ่งในผลิตภัณฑ์กัญชาที่มีฤทธิ์แรงที่สุด เนื่องจากมีสารออกฤทธิ์ต่อจิตประสาทในปริมาณสูง เมื่อไม่นานมานี้ การใช้น้ำมันแฮชิชที่สกัดด้วย butane และคาร์บอนไดออกไซด์ภาวะเหนือวิกฤตได้รับความนิยมเพิ่มขึ้น
สารสกัดแบบแช่ หมายถึงสารสกัดกัญชาแบบแช่ชนิดต่าง ๆ ซึ่งแตกต่างกันตามตัวทำละลายที่ไม่ระเหยหลากหลายชนิดที่สามารถใช้ผลิตสารสกัดกัญชาแบบแช่ได้ ในการเตรียมสารสกัดดังกล่าว ให้นำวัสดุพืชกัญชาผสมกับตัวทำละลาย จากนั้นบีบอัดและกรองเพื่อถ่ายโอนน้ำมันจากพืชเข้าสู่ตัวทำละลาย ตัวทำละลายที่นิยมใช้ ได้แก่ เนยโกโก้ เนยจากนม น้ำมันปรุงอาหาร glycerine และผลิตภัณฑ์ให้ความชุ่มชื้นแก่ผิว
กัญชาทางการแพทย์ หมายถึงการใช้พืชกัญชาเป็นสมุนไพรบำบัดตามคำแนะนำของแพทย์ รวมถึงการใช้ THC และแคนนาบินอยด์สังเคราะห์ โดยทั่วไปการใช้ดังกล่าวต้องมีใบสั่งแพทย์ และการจำหน่ายมักดำเนินการภายในกรอบที่กฎหมายท้องถิ่นกำหนด งานวิจัยหลายชิ้นแสดงให้เห็นว่าการใช้กัญชาหรืออนุพันธ์ของกัญชามีผลต้านอาการต่าง ๆ เช่น อาการคลื่นไส้และอาเจียนที่เกิดจากเคมีบำบัด อาการปวดจากพยาธิสภาพของระบบประสาท และโรคปลอกประสาทเสื่อมแข็ง