ProvBeredning med ultraljuds vialTweeter

Ultraljud prov beredning

Ultraljud är en vanlig teknik för provbehandling för att få provet redo för analyser såsom polymerer kedjereaktion (PCR), Western Blots, analyser, molekylär sekvensering, kromatografi etc. Ultraljud är en teknik som ofta används i laboratorier för att behandla prover pre-analytiskt. En stor fördel med ultraljudsbehandling är att arbetsprincipen för ultraljud bygger på rent mekaniska krafter. Ultraljudslys och cellstörning uppnås genom sonomekaniska skjuvkrafter, vilket ger ultraljud fördelen att de lösningsmedel som används för proteinutvinning kan användas även under lysis. Ultraljudscell disruptors såsom den VialTweeter bryta cellväggar / membran och främja massöverföring mellan cellens inre och lösningsmedel. Därigenom överförs analyten (e.g. DNA, RNA, proteiner, organeller Etc.) effektivt från cellmatrisen in i lösningsmedlet. Detta innebär att stegen för släckning och extraktion överlappar ultraljud cellavbrott processen, vilket gör ultraljud lys mycket effektiv. Dessutom kräver ultraljud provberedning inte rengöringsmedel och andra lysreagenser, som kan förändra och förstöra strukturen i lysate och är känd för de efterföljande problem med rening. En annan lysis metod, den enzymatiska störningar kräver långa inkubationstider och levererar ofta icke-reproducerbara resultat. Ultraljud prov beredning övervinner vanliga problem i provberedning såsom vävnad homogenisering, cell störningar, lys, protein extraktion och lysate solubilization. Eftersom ultraljudsbehandlingens intensitet kan kontrolleras och anpassas till det biologiska provet undviks nedbrytning och provförlust. Automatiskt övervakas och kontrollerade prov temperatur, puls läge och ultraljudsbehandling varaktighet säkerställa optimala resultat.

Den VialTweeter är särskilt bekvämt för laboratoriearbete som kräver samtidig beredning av flera prover under samma förhållanden. Den VialTweeter är ett ultraljud block sonotrode som kan hålla upp till 10 injektionsflaska (t.ex. Eppendorf, centriguge, NUNC rör, kryo-injektionsflaska) och sonikerar dem intensivt under exakt kontrollerade förhållanden. Eftersom ultraljudsenergin kopplas ihop genom injektionsflaskans väggar in i provmediet, upprätthåller injektionsflaskan stängda under behandlingen. Därigenom undviks provförlust och korskontaminering helt.

Injektionsflaska och rör som passar VialTweeter

Den VialTweeter är lämpad för att hålla 10 gemensamma koniska eller rund-botten rör som Eppendorf, centrifug, kryo-injektionsflaska och olika NUNC-vialtyper, men hålen kan anpassas till andra injektionsflaska och rör storlekar på begäran. Hör av dig till oss vilken typ av provrör du vill använda så att vi kan modifiera din VialTweeter därefter. För större provrör som Falcon-rör och andra testbehållare, bägare och kärl är VialPressen en bekväm lösning.

Den VialTweeter med VialPress

Medan VialTweeter själv med sina 10 rör hål är redan en unik och mycket funktionell ultraljud enhet, VialPress tillägg gör VialTweeter ännu mer mångsidig och flexibel för drift. Den VialPress är ett tillbehör för Den VialTweeter består i en klämma-på bar som gör det möjligt att fixera större provrör såsom Falcon rör eller andra små till medelstora testbägare till VialTweeter front. Bilden till vänster visar VialTweeter som håller 10 Eppendorf-injektionsflaska i blocket, medan VialPress fixerar ett större provrör till framsidan för ultraljudsbehandling. Den VialPress är kapabel att hålla upp till 5 större provrör för intensiv ultraljudsbehandling.

Protokoll för provberedning av prov för injektionsflaska

Den VialTweeter används ofta för att sonikera biologiska prover. Före analys måste prover beredas för biokemiska eller biofysiska analyser och analyser, t ex genom lys, vävnadshomogenisering, proteinextraktion, DNA / RNA-skjuvning, avgasning etc. Den VialTweeter uppfyller dessa ultraljud processer tillförlitligt och levererar reproducerbara resultat. En vanlig tillämpning av VialTweeter är lys/cellstörningen av däggdjursvävnader (humana och djur) samt bakterieceller och viruspartiklar. Framgångsrikt VialTweeter-behandlade biologiska prover inkluderar mänskliga lungepitelceller, hematopoetiska stamceller, myeloisk leukemiceller, Escherichia coli, Auktor, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter halvmåne, Mycoplasma pneumoniae, mykobakterier / Mycobacterium tuberkulos komplex (MTBC) och många andra bakteriella, botaniska, och mikrobiella celler.
Nedan kan du hitta några utvalda protokoll featuring den VialTweeter.

E.Coli Lysis med VialTweeter för In-Vivo Glutation Bestämning

Escherichia coli bakterier av stammen MG1655 odlades i MOPS minimalt medium i en total volym av 200ml tills en A600 av 0,5 uppnåddes. Kulturen delades upp i 50 ml kulturer för stressbehandling. Efter 15 min inkubation med 0,79 mM allicin, 1 mM diamid eller dimetylsulfoxid (kontroll), skördades celler vid 4 000 g vid 4°C i 10 min. Celler tvättades två gånger med KPE buffert före resuspension av pellets i 700μl KPE buffert. För deproteination tillsattes 300μl av 10% (w/v) sulfosalicylic syra före störningar av celler genom ultraljud (3 x 1 min; VialTweeter ultraljuds- . Supernatanter samlades in efter centrifugeringen (30 min, 13 000g, 4°C). Sulfosalicylic acid koncentrationer minskade till 1% genom tillsats av 3 volymer av KPE buffert. Mätningar av totalt glutation och GSSG utfördes enligt beskrivningen ovan. Cellulära glutation koncentrationer beräknades baserat på en volym av E. coli celler av 6.7×10-15 liter och en cell densitet av A600 0.5 (motsvarande 1×108 celler ml-1 kultur). GSH koncentrationer beräknades genom subtraktion av 2 [GSSG] från totala glutation. (Müller m.fl. 2016)

Cell Lys med VialTweeter före grafitugn Atomabsorptionspektrometri

Bacillus subtilis 168 (trpC2) utsattes för 15 min av antibiotikastress, sedan celler skördades på 3,320 x g, tvättas fem gånger med 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, resuspended i 10 mM Tris, pH 7.5 och störs av ultraljud i en Hielscher VialTweeter instrument. (Wenzel et al. 2014)

Provberedning av vialtweeter före masspektrometri

De lyofilatulerade cellpelletsen av humana CD34􏰀 hematopoetiska stamceller/progenitorceller återanvändes i 10μ􏰇l (200μl för bulk-HEK293-preparatet för peptidutspädningsserien) på 8 M urea i 100 mM ammoniumvätekarbonat och lättförstärkt av ultraljudsbehandling med Hielscher VialTweeter vid en amplitud på 60%, en cykel på 60% och en varaktighet på 20s för tre gånger med mellanliggande kylning på is. (Amon m.fl. 2019)

Prov Beredning Protokoll med hjälp av Den VialPress

Färsk sallad (Lactuca sativa) var homogeniserad i 0,5 M HEPES buffert (pH 8, KOH justeras) vid ett förhållande av 1 g anläggning (färsk vikt) till 200, 100, 50 eller 20 mL buffert lösning. Förhållandet mellan växtmassa och buffertlösningsvolym varierades för att hålla den totala homogena volymen mellan 3,5 och 12 mL. Förhållandet mellan växtmassa och buffertlösningsvolym varierades för att hålla den totala homogenatevolymen mellan 3,5 och 12 mL, vilket möjlig skulle tillåta homogenisering med sonden. Homogenates genomgick sedan indirekt ultraljud med hjälp av en UP200St med VialTweeter utrustad med 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Tyskland) för 3 min (80% puls och 100% effekt). Med hjälp av denna enhet undvek kontaminering. (Laughton et al. 2019)

Tillförlitlig temperaturkontroll under ultraljudsbehandling med VialTweeter

Temperatur är en avgörande processpåverkande faktor som är särskilt viktig för behandling av biologiska prover. Som alla mekaniska prov beredning tekniker, skapar ultraljudsbehandling värme. Dock kan proverna temperatur kontrolleras väl vid användning av VialTweeter. Vi presenterar dig olika alternativ för att övervaka och kontrollera temperaturen på dina prover samtidigt som du förbereder dem med VialTweeter och VialPress för analys.

1. Övervakning av provtemperaturen: Ultraljudsprocessorn UP200St, som driver VialTweeter, är utrustad med en intelligent programvara och en pluggbar temperatursensor. Koppla in temperaturgivaren i UP200St och sätt in temperaturgivarens spets i ett av provrören. Via digital färgad touch-display kan du i menyn på UP200St ställa in ett specifikt temperaturområde för din provsensikering. Ultraljudstorn kommer automatiskt att stanna när maxtemperaturen uppnås och pausa tills provtemperaturen är nere på det lägre värdet av den inställda ∆. Då startar ultraljudsbehandlingen automatiskt igen. Denna smarta funktion förhindrar värmeinducerad nedbrytning.
2. Blocket VialTweeter kan förkylas. Sätt i VialTweeter-blocket (endast sonotroden utan givare!) i kylen eller frysen för att förkyla titanblocket hjälper det till att skjuta upp temperaturökningen i provet. Om möjligt kan själva provet förkylas också.
3. Använd torris för att svalna under ultraljudsbehandling. Använd en grund bricka fylld med torris och placera VialTweeter på torrisen så att värmen snabbt kan avledas.

Kunder över hela världen använder VialTweeter och VialPress för sitt dagliga provberedningsarbete i biologiska, biokemiska, medicinska och kliniska laboratorier. Den intelligenta programvaran och temperaturkontroll av UP200St-processorn, temperaturen är tillförlitligt kontrollerad och värmeinducerad provnedbrytning undviks. Ultraljud provpreparering med Den VialTweeter och VialPress levererar mycket tillförlitliga och reproducerbara resultat!

Tekniska Detaljer om VialTweeter

Den VialTweeter är ett block sonotrode tillverkad av titan som kan hålla upp till 10 injektionsflaska i hålen i blocket. Dessutom kan upp till 5 större provrör spännas fast på VialTweeter fronten med hjälp av VialPress. Den VialTweeter är så utformad att ultraljud energi fördelas enhetligt i varje insatt injektionsflaska för att säkerställa tillförlitlig och enhetlig ultraljudsbehandling resultat. En liten pivot justerar VialTweeter sonotrode till ojämn mark och rikta in provrören vertikalt.

Fördelar med VialTweeter i korthet

• Intensiv ultraljudsbehandling av upp till 10 injektions flaskor samtidigt
• Indirekta ultraljudsbehandling vid hög ultraljud intensitet genom kärl väggen i provet
• Indirekta ultraljudsbehandling undviker korskontaminering och prov förlust
• Reproducerbara resultat på grund av justerbar och kontrollerbar ultraljudsbehandling amplitud
• VialPress ger dig möjlighet att Sonikera större rör
• Justerbar amplitud från 20 till 100%
• Justerbar pulsläge från 0 till 100%
• autoklaverbara

VialTweeter drivs av den UP200St, en 200 watt kraftfull ultraljud processor. DEN UP200St är utrustad med en intelligent programvara som möjliggör exakt kontroll över alla viktiga ultraljud process parametrar såsom amplitud, ultraljudsbehandling tid, pulsering, och temperatur. Detta gör VialTweeter till ett pålitligt verktyg för framgångsrika reproducerbara processresultat i biologiska och biokemiska laboratorier.
Amplitud kan justeras mellan 20 och 100% och gör det möjligt att därigenom anpassa ultraljudsintensiteten till ditt prov. Till exempel, skjuvning och fragmentering av DNA och RNA kräver en mildare amplitud för att förhindra produktion av för små DNA-fragment, vävnad homogenisering av mus hjärnan behöver hög intensitet ultraljudsbehandling. Välj den idealiska amplituden, ultraljudsbehandling intensitet och varaktighet via den smarta och intuitiva menyn på UP200St processor. Menyn och inställningarna kan enkelt nås och manövreras via färgad touchdisplay. I inställningarna kan du förinställda ultraljudsbehandling parametrar såsom amplitud, pulsering / cykel läge, ultraljudsbehandling varaktighet, total energi ingång, och temperaturgränser. Inom forskning och produktion är repeterbarheten av försök och testresultat avgörande. Detta innebär att exakt inspelning av processförhållanden och ultraljudsbehandling protokoll är helt viktigt. Den automatiska data protocolling skriver alla ultraljudsbehandling data i en CSV-fil på en integrerad SD-kort så att du enkelt kan kontrollera och jämföra olika ultraljudsbehandling körs. Alla ultraljud processdata kan lätt nås och delas som CSV-fil.
Hielscher Ultrasonics strävar efter att förse dig med avancerad teknik för att underlätta och förbättra ditt forskningsarbete!