Hielscher ultraljud teknik

Ultraljud Prov Prep för ELISA analyser

Analyser som ELISA används i stor utsträckning för in vitro-diagnostik, sjukdomsrelaterad proteindetektion och kvalitetskontroll (t.ex. övervakning av födoämnesallerallen). Ultraljud prov beredning är en snabb, tillförlitlig och reproducerbar teknik för att lyse cell och isolera intracellulära proteiner, DNA, RNA och organeller. Hielscher Ultrasonics erbjuder olika ultraljudslösningar för bekväm beredning av enstaka prover, flera injektionsflaska samt för mikrotiterplattor och 96-brunnsplattor.

Elisa – Enzym-Linked Immunosorbent Assay

ELISA står för enzym-linked immunosorbent assay och är en allmänt använd biokemisk analys teknik av kategorin ligand-bindande analyser. I ELISA tillsätts ett vätskeprov på en stationär fast fas med speciella bindningsegenskaper. Normalt appliceras den stationära fasta fasen som beläggning på en brunnsplatta eller ELISA-platta. Sedan tillsätts olika flytande reagenser sekventiellt, inkuberas och tvättas, så att slutligen en optisk förändring (t.ex. färgutveckling genom produkten av en enzymatisk reaktion) sker i den slutliga vätskan i brunnen. Den optiska förändringen gör det möjligt att mäta mängden av analyten genom en så kallad kvantitativ “läsa". För den kvantitativa avläsningen används en spektrofotometer, fluorometer eller luminometer för att detektera och mäta det överförda ljusets intensitet. Detektionens känslighet påverkas av förstärkningen av signalen under de analytiska reaktionerna. Eftersom enzymreaktioner är väl undersökta och tillförlitliga amplifieringsprocesser, används enzymer för att skapa signalen. Enzymerna är kopplade till detektionsreagenserna i fasta proportioner för att möjliggöra korrekt kvantifiering, vilket också förklarar namnet "enzymlänkad" immunsorbentanalys.
Som ELISA analyser utförs i mikrotiter plattor / 96-brunn plattor, Det är känt som plåt-baserad analys teknik och används t ex i klinisk in-vitro-diagnostik, forskning, läkemedelsutveckling etc. för att upptäcka och kvantifiera antikroppar, peptider, proteiner, och hormoner.
ELISA-tekniken används ofta som ett diagnostiskt verktyg inom medicin, bioteknik, växtpatologi och är också en viktig kvalitetskontrollmätning inom flera branscher.

Komplett VialTweeter setup: VialTweeter sonotrode på ultraljud processor UP200St

Ultraljudsprovet prep enhet VialTweeter används för celllys och proteinutvinning före ELISA-analyser

Informationsförfrågan




Notera vår Integritetspolicy.


Ultraljud Prov Prep innan ELISA

Innan ELISA-analysen kan utföras kräver proverna steg av beredning sådan celllys och extraktion av intracellulära proteiner, DNA, RNA etc. Fördelen med ultraljud cell lysis och protein isolering är dess höga effektivitet, tillförlitlighet och reproducerbarhet. Alla dessa faktorer är viktiga för att få diagnostisk och forskningsresultat av hög kvalitet

Fördelar med Ultraljudslys före ELISA

  • Homogen provbehandling
  • Komplett lys
  • Fullständig proteinextraktion (t.ex. antikroppar, DNA)
  • Optimal anpassning till celltyp
  • För valfri provstorlek
  • Reproducerbara
  • Temperaturreglerad
  • Automatisk dataprotokoll på SD-kort

Protokoll för Pre-ELISA UltraljudsCell Lysis

Probe-typ insonifier UP200St för Lys

  • För CellKulturer: Innan ultraljud cell lysis, centrifug celler för 5 minuter vid 270 x g i en microcentrifug. Avlägsna supernatanten genom aspiration och återanvänd celler i 30 – 100 μL RIPA-buffert. Sedan, ruva cellen pelleten på is i 30 min.
  • Nu, cellprovet är redo för ultraljud lys:
    Använd en ultraljudsator av sondtyp (t.ex. Uf200 ः t med S26d2-sond) eller en ultraljuds flerprovsenhet (t.ex. VialTweeter för samtidig ultraljudsbehandling av upp till 10 injektionsflaska eller UIP400MPT för mikrotiterplattor / 96-brunnsplattor) beroende på den mängd prover du behöver för att förbereda.
    För den probe-typ ultraljudsbehandling av ett enda prov, placera cellerna i 1,5 mL mikrocentrifugrör.
  • Förinställda din ultraljudslängd, total energiinmatning, cykelläge och/eller temperaturgränser i ultrasonicatorns digitala meny. Detta säkerställer mycket tillförlitlig ultraljudsbehandling och repeterbarhet.
  • Inset sonotrode och slå på ultraljud enheten. Flytta försiktigt mikro-spetsen av ultraljudssonden genom provet för att sonikera provet jämnt.
    För de flesta celler, ultraljud lys kommer att slutföras efter 2 -4 cykler av 10 sek ultraljudsbehandling.
  • Efter ultraljudsbehandling, ta bort sonotrode från provet. Proverna ska inkuberas på is i 5 min. Sedan centrifug vid 10.000 x g för 20 min att pelleten skräp. Överför supernatanterna till ett nytt mikrocentrifugrör. Märk analyterna och förvara vid -20°C.
  • Ultraljudssonotroden kan rengöras genom att torka av den ordentligt med alkohol eller sonikera i en bägare fylld med alkohol, t ex 70% etanol. Alla ultraljud sonder gjorda av titan är autoklaverbara.

För Vävnadshomogenater:

  • Skölj vävnaden med iskall PBS (0,01M, pH=7,4) för att avlägsna överflödigt hemolysblod noggrant.
  • Väg vävnaden (njure, hjärta, lunga, mjälte etc.) och macerate det i små bitar, som homogeniseras i PBS. Den volym PBS som krävs är relaterad till vävnadens vikt. Som en tumregel kräver 1g vävnad ca. 9mL PBS. Det rekommenderas att lägga till några proteashämmare till PBS. (RIPA eller hypotonisk lysbuffert som innehåller proteas och fosfatashämmare cocktail kan användas alternativt.)
  • Beroende på vävnadsstorleken kan en kort virvelbehandling (ca 1-2 min. i 15 sek. pulser) vara till hjälp för att förbehandla vävnaden.
  • Montera en mikro-tip, t ex S26d2, till din ultraljudsator. Placera provröret med vävnaden i ett isbad.
  • Sonikera provet med din ultraljudsbehandling, t ex UP200St (80% amplitud) i 1 min. i pulsläge (15sek på, 15sek paus). Förvara provet i isbadet.
  • Homogenatena centrifugeras därefter för att erhålla specifika pooler (cytosolic, kärn- , mitokondrie eller lysosomalt) för att berika proteinet för analys. Genom att centrifugera provet i 5 minuter vid 5000×g, hämtas supernatanten.
Den sonotrode MTP-24-8-96 har åtta ultraljud sonder för ultraljudsbehandling av brunnarna av mikrotiter plattor.

Den sonotrode MTP-24-8-96 har åtta ultraljud sonder för ultraljudsbehandling av brunnarna av mikrotiter plattor.

Tillförlitlig temperaturkontroll under ultraljudsbehandling

Temperatur är en avgörande processpåverkande faktor som är särskilt viktig för behandling av biologiska prover, t ex för att förhindra termisk nedbrytning av proteiner. Som alla mekaniska prov beredning tekniker, skapar ultraljudsbehandling värme. Dock kan proverna temperatur kontrolleras väl vid användning av Hielscher Ultrasonics-apparaterna. Vi presenterar olika alternativ för att övervaka och kontrollera temperaturen på dina prover samtidigt som du förbereder dem med en sond-typ ultraljudsmätare eller VialTweeter pre-analytiskt.

  1. Övervakning av provtemperaturen: Alla Hielscher digitala ultraljud processorer är utrustade med en intelligent programvara och en pluggable temperatursensor. Koppla in temperatursensorn i ultraljudsenheten (t.ex. Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) och sätt in temperaturgivarens spets i ett av provrören. Via digital färgad touch-display, kan du ställa in i menyn av ultraljud processorn ett specifikt temperaturområde för ditt prov ultraljudsbehandling. Ultraljudstorn kommer automatiskt att stanna när maxtemperaturen uppnås och pausa tills provtemperaturen är nere på det lägre värdet av den inställda ∆. Då startar ultraljudsbehandlingen automatiskt igen. Denna smarta funktion förhindrar värmeinducerad nedbrytning.
  2. Angående ultraljuds multiprovenheten VialTweeter kan titanblocket, som håller provrören, förkylas. Sätt i VialTweeter-blocket (endast sonotroden utan givare!) i kylen eller frysen för att förkyla titanblocket hjälper det till att skjuta upp temperaturökningen i provet. Om möjligt kan själva provet förkylas också.
  3. Använd ett isbad eller torris för att svalna under ultraljudsbehandling. Placera ditt prov rör (s) under ultraljudsbehandling i ett isbad. För VialTweeter, använd en grund bricka fylld med torris och placera VialTweeter på torrisen så att värmen snabbt kan avledas.

Kunder över hela världen använder Hielscher sond-ultrasonicators samt flera prov ultraljudsbehandling enheter VialTweeter och UIP400MTP för deras dagliga prov beredning arbete i biologiska, biokemiska, medicinska och kliniska laboratorier. Den intelligenta programvara och temperaturkontroll av Hielscher processorerna, temperatur är tillförlitligt kontrollerad och värmeinducerad prov nedbrytning undvikas. Ultraljud prov beredning med Hielscher ultraljud lösningar levererar mycket tillförlitliga och reproducerbara resultat!

Kontakta oss! / Fråga oss!

Be om mer information

Använd formuläret nedan för att begära ytterligare information om ultraljudprocessorer, applikationer och pris. Vi kommer gärna att diskutera din process med dig och att erbjuda dig ett ultraljudssystem som uppfyller dina krav!









Observera att våra Integritetspolicy.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics tillverkar högpresterande ultraljudshomogenisatorer för blandning av applikationer, spridning, emulgering och utvinning på labb, pilot och industriell skala.

Litteratur / Referenser



Fakta Värt att veta

Typer av ELISA

Det finns flera typer av ELISA, som utmärker sig genom sin funktionsprincip. De är kända som direkta ELISA, indirekt ELISA, smörgås ELISA, konkurrenskraftiga ELISA, och omvänd ELISA. Nedan presenterar vi dig en översikt över de olika ELISA typerna och deras viktigaste egenskaper och skillnader.
ELISA kan köras i ett kvalitativt eller kvantitativt format. Kvalitativa resultat ger ett enkelt positivt eller negativt resultat, medan i kvantitativa ELISA den optiska densiteten (OD) av provet jämförs med en standardkurva, vilket typiskt är en seriell utspädning av en känd koncentrationslösning av målmolekylen.

Direkt ELISA

Den direkta ELISA är den mest enkla analysen form av Elisa, där endast en enzym-märkt primära antikroppar används och sekundära antikroppar inte krävs. Den enzymmärkta primära antikroppen binder direkt till målet, dvs. Den buffrade antigenlösningen tillsätts till varje brunn av en mikrotiterplatta (vanligtvis 96-brunnsplattor, ELISA-plattor), där man fäster vid plastytan genom laddningsinteraktioner. När enzymet som är kopplat till den primära antikroppen reagerar med sitt substrat, producerar det en synlig signal som kan mätas via spektrofotometer, fluorometer eller luminometer.

Indirekt ELISA

För det indirekta ELISA-testet krävs både en primär antikropp och en sekundär antikropp. I motsats till den direkta ELISA, inte den primära antikroppen, men den sekundära antikroppen är dock märkt med ett enzym. Antigenet är immobiliserat till brunnsplattan och bundet av den primära antikroppen. Därefter binder den enzymmärkta sekundära antikroppen till den primära antikroppen. Slutligen reagerar enzymet som är kopplat till den sekundära antikroppen med sitt substrat för att få fram en synlig signal som kan detekteras.

Smörgås ELISA

Även i direkta och indirekta ELISA-tester, är antigenet immobiliserat och belagda till ytan av brunnsplattan, i smörgåsen ELISA antikroppen är immobiliserade till plastytan av ELISA-plattan. De immobiliserade antikropparna i sandwich ELISA kallas capture-antikroppar. Dessutom till fånga antikroppar, i smörgås ELISA också så kallade detektion antikroppar krävs. Detektionsantikroppar omfattar en primärdetektionsantikropp utan etikett och en enzymmärkt sekundär detektionsantikropp.
Stegvis binder antigen av intresse till capture-antikroppen immobiliserad till plattan. Sedan binder den primära detektionsantikroppen till antigenet. Efteråt binder den sekundära detektionsantikroppen till den primära detektionsantikroppen. I det slutliga reaktionssteget reagerar enzymet med sitt substrat för att få fram en synlig signal som kan detekteras optiskt.

Konkurrenskraftig ELISA

Konkurrenskraftig ELISA, även känd som hämning ELISA, är den mest komplexa ELISA typ eftersom det innebär användning av en hämmare antigen. Vart och ett av de tre formaten, direct, indirect, och sandwich ELISA, kan anpassas till det konkurrenskraftiga ELISA-formatet. I konkurrenskraftiga ELISA konkurrerar hämmarantigenen och intresseantens antigen om bindning till den primära antikroppen.
För konkurrenskraftig ELISA inkuberas omärkt antikropp i närvaro av dess antigen, dvs. Dessa bundna antikropps-/antigenkomplex läggs sedan till en antigenbelagd brunn.
Plattan tvättas, så att obundna antikroppar avlägsnas. Konkurrenskraftiga ELISA har sitt namn på grund av att ju mer antigen finns i provet, desto mer bildas antigen-antikroppskomplex. Detta innebär, det finns mindre obundna antikroppar tillgängliga för att binda till antigenet i brunnen och antigenerna måste konkurrera om en tillgänglig antikropp. En sekundär antikropp, som matchar den primära antikroppen, tillsätts. Denna andra antikropp är kopplad till enzymet. När substratet tillsätts, producerar de återstående enzymerna en kromogen eller fluorescerande signal.
Vid denna punkt, är reaktionen stoppas för att undvika den slutliga mättnad av signalen.
Några konkurrenskraftiga ELISA-kit inkluderar ett enzymlänkat antigen istället för en enzymlänkad antikropp. Det märkta antigenet konkurrerar om primära antikroppsbindningsställen med provantigenen (omärkt). Ju mindre antigen i provet, desto mer märkt antigen behålls i brunnen och desto starkare signal.

Omvänd ELISA

Omvänd ELISA använder inte brunnsplattor, utan lämnar antigenerna upphängda i testvätskan. Det omvända ELISA-testet mäter mängden bunden antikropp via antigen. Det har utvecklats speciellt för att upptäcka och undersöka West Nile virus kuvert protein och hur det kan hitta virusspecifika antikroppar.

Enzymatisk markör Som används för ELISA

Listan nedan ger de vanligaste enzymatiska markörerna som används i ELISA-analyser, som gör att resultaten av analysen kan mätas vid färdigställandet.

  • OPD (o-fenylenediamine dihydroklorid) blir bärnsten för att upptäcka HRP (Pepparrot Peroxidas), som ofta används för att som konjugerat protein.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetramethylbenzidin) blir blå när HRP upptäcks och blir gul efter tillsats av svavelsyra eller fosforsyra.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etylbensothiazoline-6-sulfiensyra]-diammoniumsalt) blir grön när detekterar HRP.
  • PNPP (p-Nitrofenylfosfat, Deodiumsalt) blir gul när alkalisk fosfatas upptäcks.