Hielscher ultraljud teknik

Cell Lys av BL21 Celler genom Ultraljud

BL21 celler är en stam av E. coli som används i stor utsträckning i forskningslaboratorier, bioteknik och industriell produktion på grund av deras förmåga att uttrycka proteiner mycket effektiv. Ultraljudscell störningar, lys och protein extraktion är den gemensamma metoden för att isolera och samla in de riktade proteiner från cellulära inre av BL21 celler. Ultraljud stör cellen helt och frigör alla fångade proteiner, vilket gör 100% av proteinet tillgängligt.

BL21 Celler för Protein Expression

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21-cell är en kemiskt kompetent E. coli bakteriestam som lämpar sig för omvandling och hög nivå proteinuttryck med hjälp av en T7 RNA polymeras-IPTG induktionssystem. BL21 celler tillåter högeffektiva protein uttryck av någon gen som är under kontroll av en T7 promotor. E. coli-stammen BL21(DE3) är en T7-RNA-polymerasbaserad proteinproduktionsstam kombinerad med T7 promotorbaserade uttrycksvektorer och tillämpas i stor utsträckning i laboratorier och industri för att producera rekombinanta proteiner. I BL21(DE3) transkriberas uttryck för genen som kodar det rekombinanta proteinet av den kromosomtalt kodade T7 RNA-polymerasen (T7 RNAP), som transkriberar åtta gånger snabbare än konventionell E. coli RNAP. Detta gör stammen BL21(DE3) mycket effektiv och förvandlar sin till en av de mest föredragna proteinuttryck cellsystem.

Protokoll för Ultraljudslysning och proteinutvinning från BL21 Celler

Cell lys av BL21 celler utförs mestadels med hjälp av ultraljud i kombination med natrium lauroyl sarkosase (även känd som sarkosyl) som lysis buffert. Fördelarna med ultraljud cell störningar och protein extraktion ligger i tillförlitligheten, reproducerbarhet samt enkel, säker och snabb drift av ultrasonicators. Protokollet nedan ger en stegvis riktning för ultraljud BL21 cell lys:

Probe-typ insonifier UP200St för Lys

Ultraljudscell disruptor UP200St med mikro-tip S26d2 för lys- och proteinutvinning

Informationsförfrågan




Notera vår Integritetspolicy.


  • För att avlägsna förklädeproteinerna återanvändes BL21 bakteriell pellets i 50 ml iskall Sodium Tris-EDTA (STE) buffert (bestående i 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl kompletteras med 100 mM PMSF).
  • Den, 500 ul av lysozym (10 mg/ ml) tillsätts och cellerna inkuberas på is i 15 min.
  • Efteråt tillsätts 500 ul DTT och 7 ml sarkosyl (10% (w/v) som utgörs i STE-buffert).
  • Det är viktigt att hålla alla reningsbuffertar iskalla och att upprätthålla proverna på is hela tiden. Alla reningssteg bör om möjligt utföras i kylrummet.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • För ultraljudslys och proteinextraktion är proverna sonikerade i VialTweeter MultiSample Ultrasonicator för 4 x 30 sek vid 100% amplitud med ett 2 min intervall mellan varje ultraljudsbehandling. Alternativt kan en ultraljudshomogeniserare av sondtyp med mikrospets t.ex. Uf200 ः t med S26d2 (3 x 30 sek, 2 min. paus mellan ultraljudscykler, 80% amplitud) kan användas.
  • För ytterligare reningssteg måste proverna hållas på is eller alternativt förvaras vid -80°C tills vidare bearbetning.

Ultraljud Lys under Prescise temperaturkontroll

Den exakta och tillförlitliga temperaturkontrollen är avgörande vid hantering av biologiska prover. Höga temperaturer initierar termiskt inducerad proteinnedbrytning i prover.
Som alla mekaniska prov beredning tekniker, skapar ultraljudsbehandling värme. Dock kan proverna temperatur kontrolleras väl vid användning av VialTweeter. Vi presenterar dig olika alternativ för att övervaka och kontrollera temperaturen på dina prover samtidigt som du förbereder dem med VialTweeter och VialPress för analys.

  1. Övervakning av provtemperaturen: Ultraljudsprocessorn UP200St, som driver VialTweeter, är utrustad med en intelligent programvara och en pluggbar temperatursensor. Koppla in temperaturgivaren i UP200St och sätt in temperaturgivarens spets i ett av provrören. Via digital färgad touch-display kan du i menyn på UP200St ställa in ett specifikt temperaturområde för din provsensikering. Ultraljudstorn kommer automatiskt att stanna när maxtemperaturen uppnås och pausa tills provtemperaturen är nere på det lägre värdet av den inställda ∆. Då startar ultraljudsbehandlingen automatiskt igen. Denna smarta funktion förhindrar värmeinducerad nedbrytning.
  2. Blocket VialTweeter kan förkylas. Sätt i VialTweeter-blocket (endast sonotroden utan givare!) i kylen eller frysen för att förkyla titanblocket hjälper det till att skjuta upp temperaturökningen i provet. Om möjligt kan själva provet förkylas också.
  3. Använd torris för att svalna under ultraljudsbehandling. Använd en grund bricka fylld med torris och placera VialTweeter på isen så att värmen snabbt kan avledas.

Kunder över hela världen använder VialTweeter och VialPress för sitt dagliga provberedningsarbete i biologiska, biokemiska, medicinska och kliniska laboratorier. Den intelligenta programvaran och temperaturkontroll av UP200St-processorn, temperaturen är tillförlitligt kontrollerad och värmeinducerad provnedbrytning undviks. Ultraljud provpreparering med Den VialTweeter och VialPress levererar mycket tillförlitliga och reproducerbara resultat!

Hitta optimal Ultraljud Disruptor för din Lysis Application

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics är länge erfarna tillverkare av högpresterande ultraljudsceller disrupters och homogenisatorer för laboratorier, bänk-top och industriella system skala. Din bakteriell cellodling storlek, din forskning eller produktion mål och volymen av cellen att bearbeta per timme eller dag är väsentliga faktorer för att hitta rätt ultraljud cell disruptor för din ansökan.
Hielscher Ultrasonics erbjuder olika lösningar för samtidig ultraljudsbehandling av multi-prover (upp till 10 injektionsflaska med VialTweeter) och massa prover (dvs. microtiterplattor / ELISA-plattor med UIP400MTP), samt den klassiska prob-typ lab ultrasonicator med olika effektnivåer från 50 till 400 watt till helt industriella ultraljud processorer med upp till 16,000watt per enhet för kommersiella cell störningar och proteinutvinning i stora produktion. Alla Hielscher ultrasonicators är byggda för 24/7/365 drift under full belastning. Robusthet och tillförlitlighet är kärnfunktioner i våra ultraljudsenheter.
Alla digitala ultraljudshomogenisatorer är utrustade med smart programvara, färgad touchskärm och automatisk data protocolling, vilket gör ultraljudsenheten till ett bekvämt arbetsredskap i labb- och produktionsanläggningar.
Låt oss veta, vilken typ av celler, vilken volym, med vilken frekvens och med vilket mål du har att bearbeta dina biologiska prover. Vi kommer att rekommendera dig den mest lämpliga ultraljudscell disruptor för din process krav.

Tabellen nedan ger dig en indikation på den ungefärliga bearbetningskapaciteten hos våra ultraljudssystem från kompakta handhållna homogenisatorer och MultiSample Ultrasonicators till industriella ultraljudsprocessorer för kommersiella tillämpningar:

batch Volym Flödeshastighet Rekommenderade Devices
96-brunn / mikrotiter plattor n.a. UIP400MTP
10 vials à 0,5 till 1,5 mL n.a. VialTweeter på UP200St
0.01 till 250mL 5 till 100mL/min UP50H
0.01 till 500mL 10 till 200 ml / min UP100H
10 till 2000 ml 20 till 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 till 20L 0.2 till 4L / min UIP2000hdT
10 till 100 liter 2 till 10 1 / min UIP4000hdT
n.a. 10 till 100 l / min UIP16000
n.a. större kluster av UIP16000

Kontakta oss! / Fråga oss!

Be om mer information

Använd formuläret nedan för att begära ytterligare information om ultraljudprocessorer, applikationer och pris. Vi kommer gärna att diskutera din process med dig och att erbjuda dig ett ultraljudssystem som uppfyller dina krav!









Observera att våra Integritetspolicy.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultraljud Uf200 ः t med 2mm mikrotip S26d2 för ultraljudsbehandling av små prover

Litteratur / Referenser



Fakta Värt att veta

Escherichia Coli Bakterier

Escherichia coli är en bakterietyp, som är icke-sporbildande, Gram-negativ och kännetecknas av sin form av en rak stav. E.coli bakterier finns i miljön, livsmedel, och tarmar av människor och djur. E. coli är vanligtvis motil med hjälp av peritrichous flagella, men det finns nonmotile typer också. E.coli är så kallade fakultativt anaeroba kemoorganotroph organismer, vilket innebär att de är kapabla till både andningsorganen och fermentativa metabolism. De flesta E.coli typer är godartade och fylla användbara funktioner i kroppen, t ex undertrycka tillväxten av skadliga bakteriearter, syntes av vitaminer etc..
Escherichia coli-bakteriecell av den så kallade B-typen är en särskild kategori av E.coli-stammar, som ofta används i forskning för att undersöka mekanismer som bakteriofagkänslighet eller restriktionssystem. Vidare värderas E.coli-bakterier som pålitlig arbetshäst för proteinuttryck i bioteknik- och life science-laboratorier. Till exempel, E.coli används för att syntetisera föreningar såsom proteiner och oligosackarider i industriell skala. På grund av specifika funktioner såsom proteas brist, låg acetat produktion på en hög nivå av glukos, och förbättrad permeabilitet, E. coli B-celler är han oftast används värdceller för produktion av genetiskt modifierade proteiner.

Rekombinant Protein

Rekombinanta proteiner (rProt) får en betydande betydelse i grenrör grenar, bland annat inom den kemiska produktionen, farmaceutiska, kosmetiska, human-och djurmedicin, jordbruk, livsmedel samt avfallsbehandling industrier.
Produktionen av rekombinant protein kräver användning av ett uttryckssystem. Som uttrycker cellsystem för produktion av rekombinant DNA, både prokaryota och eukaryota celler kan användas. Medan bakterieceller används mest för proteinuttryck på grund av faktorer som låg kostnad, enkel skalbarhet och enkla medieförhållanden, däggdjur, jäst, alger, insekt och cellfria system är etablerade alternativ. Proteintypen, funktionell aktivitet, samt det erforderliga utbytet av uttryckt protein påverkar valet av det cellsystem som används för proteinuttryck.
För att kunna uttrycka rekombinant protein måste en viss cell vara transfekterad med en DNA-vektor som innehåller mallen av rekombinant DNA. Cellerna transfekterade med mallen odlas sedan. Som följd av den cellulära mekanismen transkriberar cellerna och översätter proteinet av intresse och producerar därigenom det riktade proteinet.
Eftersom de uttryckta proteinerna är instängda i cellulär matrisen, cellen måste lysed (störd och bruten) för att frigöra proteiner. I ett efterföljande reningssteg separeras och renas proteinet.
Det första rekombinanta protein som användes vid behandling var rekombinant humant insulin 1982. Idag produceras mer än 170 typer av rekombinant protein världen över för medicinska behandlingar. Vanligt förekommande rekombinanta proteiner som används i medicin är till exempel rekombinanta hormoner, interferoner, interleukins, tillväxtfaktorer, tumör nekros faktorer, blodet koagulering faktorer, trombolytiska läkemedel, och enzymer för behandling av stora sjukdomar såsom diabetes, dvärgväxt, hjärtinfarkt, congestive hjärtsvikt, cerebral apoplexi, multipel skleros, neutropeni, trombocytopeni, anemi, hepatit, reumatoid artrit, astma, Crohns sjukdom, och cancerformer. (jfr Phuc V. Pham, i Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultraljud med hög prestanda! Hielschers produktsortiment täcker hela spektrumet från den kompakta lab ultrasonicator över bänk-top enheter till full-industriella ultraljud system.