Buffertlösningar förberedda med ultraljud

Lysbuffertar kan framställas effektivt och snabbt med hjälp av ultraljudshomogenisatorer. Eftersom ultraljudsapparater är ett drömverktyg för blandning, upplösning och dispergering, möjliggör de en tillförlitlig och användarvänlig beredning av lysbuffertar.

Ultraljudsberedning av lysbuffertar

Homogenisatorer av ultraljudsvävnad är ett vanligt verktyg för cellstörning, lys och extraktion, och finns därför tillgängliga i de flesta laboratorier. En sekundär tillämpning för ultraljudsapparater av sondtyp är beredning av lysbuffertar.

Lysbuffert är en lösning som används för att bryta upp (lysera) celler och frigöra deras innehåll för nedströmsanalys. Den specifika sammansättningen av lysbufferten kan variera beroende på vilken typ av celler som lyseras och applikationen nedströms. En typisk lyseringsbuffert innehåller dock komponenter som rengöringsmedel, salter och proteashämmare. Buffringssalter (t.ex. Tris-HCl) och jonsalter (t.ex. NaCl) används ofta för att reglera pH och osmolaritet hos lysatet.
För att göra en lysbuffert blandas komponenterna ihop i lämpliga koncentrationer och pH. Blandningen rörs om eller skakas vanligtvis tills komponenterna är upplösta och lösningen är homogen.
Ultraljudshomogenisering är en metod som kan användas för att göra en bra lysbuffert genom att förbättra blandningen och upplösningen av komponenterna. I denna metod, ultraljudsvågor – normalt i intervallet 20 till 30 kHz – appliceras på blandningen, vilket skapar kavitationsbubblor som kollapsar och genererar intensiv lokal energi, vilket leder till mekanisk skjuvning och blandning av komponenterna.
Ultraljudshomogeniseringsprocessen kan hjälpa till att bryta isär eventuella klumpar eller aggregat av komponenterna och säkerställa att lösningen är jämnt blandad. Följaktligen kan en sådan förbättrad lysbuffert leda till effektivare cellstörningar och högre utbyte av extraherat material. Dessutom kan ultraljudshomogenisering minska den tid som krävs för att göra en lysbuffert jämfört med traditionella omrörnings- eller skakmetoder.
Sammantaget är ultraljudshomogenisering ett kraftfullt verktyg för att förbättra kvaliteten och effektiviteten vid beredning av lysbuffert.

Protokoll för förberedelse av ultraljudslysbuffert

Detta är ett allmänt protokoll för att göra en lysbuffert med hjälp av en ultraljudsapparat av sondtyp:
 
Material:

• Valfritt tvättmedel (t.ex. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Valfritt salt (t.ex. NaCl, KCl)
• Proteashämmare (t.ex. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultraljud
• Omrörare
• Avjoniserat vatten
• pH-mätare eller pH-remsor

 
 
Steg-för-steg-instruktioner:

1. Bestäm sammansättningen av lysbufferten baserat på de celler eller vävnader du kommer att lysera, och de nedströmsapplikationer du kommer att använda lysatet för. Bered stamlösningarna av rengöringsmedel, salter och proteashämmare vid önskade koncentrationer.
2. Tillsätt stamlösningarna av rengöringsmedel, salter och proteashämmare i en bägare eller kolv.
3. Tillsätt avjoniserat vatten för att få upp volymen till önskad mängd buffert.
4. Blanda komponenterna med hjälp av en omrörare för att få en förblandad lösning.
5. Mät buffertens pH med hjälp av en pH-mätare eller pH-remsor och justera pH-värdet vid behov med små mängder syra eller bas.
6. Använd ultraljud av sondtyp för att homogenisera förblandningslösningen så att en mycket homogen lösning erhålls. Ultraljudsbehandla därför lösningen i några sekunder tills lösningen är ordentligt blandad och eventuella klumpar eller aggregat bryts ner. Varaktigheten och kraften av ultraljudsbehandling kan optimeras baserat på den specifika lysbuffert och ultraljudsapparat som används.
7. Efter ultraljud, mät buffertens pH igen och justera vid behov.
8. Filtrera bufferten genom ett 0,2 mikron filter för att ta bort skräp eller aggregat som kan ha bildats under ultraljudsbehandling.
9. Lysbufferten är nu klar att användas.

 
Notera: Den exakta sammansättningen och pH-värdet för lyseringsbufferten kan variera beroende på vilka celler eller vävnad som lyseras och vilka tillämpningar som används nedströms. Ovanstående protokoll är en allmän riktlinje och kan behöva optimeras för specifika applikationer.
 
Ultraljudshomogenisatorer används ofta för cellstörning och extraktion av intracellulära molekyler. Därför använder många lysapplikationer sond-typ ultraljudsbehandling inte bara för beredning av lysbufferten, men också för den mekaniska cellstörningen och extraktionen.
Detta gör ultraljudshomogenisatorer till ett mångsidigt verktyg för laboratorier och förklarar den breda användningen av ultraljudsapparater inom mikrobiologi, bioteknik och biovetenskap.

Homogenisatorer för ultraljudslabb

Hielscher Ultrasonics tillverkar och levererar ultraljudshomogenisatorer och sonder (sonotrodes) med olika effektklasser och provvolymer. Detta gör att vi kan erbjuda dig den mest lämpliga ultraljudsstöraren för din provberedning. Vi fokuserar på högsta kvalitet, enastående användarkomfort och tillförlitliga ultraljudsbehandlingsresultat. Alla digitala ultraljudsapparater har smart programvara, programmering och förinställning av ultraljudsbehandling protokoll, webbläsare fjärrkontroll, temperaturkontroll, provbelysning samt automatisk datainspelning på ett inbyggt SD-kort.

Design, tillverkning och rådgivning – Kvalitet tillverkad i Tyskland

Hielscher ultraljudsapparater är välkända för sina högsta kvalitets- och designstandarder. Robusthet och enkel drift möjliggör en smidig integration av våra ultraljudsapparater i industriella anläggningar. Tuffa förhållanden och krävande miljöer hanteras enkelt av Hielscher ultraljudsapparater.

Hielscher Ultrasonics är ett ISO-certifierat företag och lägger särskild vikt vid högpresterande ultraljudsapparater med den senaste tekniken och användarvänligheten. Naturligtvis är Hielscher ultraljudsapparater CE-kompatibla och uppfyller kraven i UL, CSA och RoHs.

Tabellen nedan ger dig en översikt över våra olika ultraljudsapparater för labb: