Buffertlösningar beredda med ultraljudsbehandling

Lysbuffertar kan beredas effektivt och snabbt med vävnadshomogenisatorer med ultraljud. Eftersom ultraljudsapparater är drömverktyg för blandning, upplösning och dispergering möjliggör de tillförlitlig och användarvänlig beredning av lysbuffertar.

Beredning av lysbuffertar med ultraljud

Vävnadshomogenisatorer med ultraljud är vanliga verktyg för cellsönderdelning, lys och extraktion och finns därför i de flesta laboratorier. Ett ytterligare användningsområde för ultraljudsapparater med sond är beredning av lysbuffertar.

En lysbuffert är en lösning som används för att bryta upp (lysera) celler och frigöra deras innehåll för efterföljande analys. Lysbuffertens specifika sammansättning kan variera beroende på vilken typ av celler som lyseras och den efterföljande tillämpningen. En typisk lysbuffert innehåller dock komponenter som detergenter, salter och proteashämmare. Buffrande salter (t.ex. Tris-HCl) och joniska salter (t.ex. NaCl) används vanligen för att reglera lysatets pH och osmolaritet.
För att bereda en lysbuffert blandas komponenterna i lämpliga koncentrationer och vid lämpligt pH. Blandningen omrörs eller skakas vanligtvis tills komponenterna har lösts upp och lösningen är homogen.
Ultraljudshomogenisering är en metod som kan användas för att underlätta beredningen av en bra lysbuffert genom att förbättra blandningen och upplösningen av komponenterna. Med denna metod appliceras ultraljudsvågor – normalt i intervallet 20 till 30 kHz – på blandningen, vilket skapar kavitationsbubblor som kollapsar och genererar intensiv lokal energi. Detta leder till mekanisk skjuvning och blandning av komponenterna.
Ultraljudshomogeniseringen kan bidra till att bryta upp eventuella klumpar eller aggregat av komponenterna och säkerställa att lösningen blandas jämnt. En sådan förbättrad lysbuffert kan följaktligen leda till effektivare cellsönderdelning och högre utbyte av extraherat material. Dessutom kan ultraljudshomogenisering minska tiden som krävs för att bereda en lysbuffert jämfört med traditionella omrörnings- eller skakningsmetoder.
Sammantaget är ultraljudshomogenisering ett kraftfullt verktyg för att förbättra kvaliteten och effektiviteten vid beredning av lysbuffertar.

Protokoll för beredning av lysbuffert med ultraljud

Detta är ett allmänt protokoll för beredning av en lysbuffert med en ultraljudsapparat med sond:
 
Material:

• Valfri detergent eller valfria detergenter (t.ex. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Valfritt salt eller valfria salter (t.ex. NaCl, KCl)
• Proteashämmare (t.ex. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Ultraljudsapparat
• Omrörare
• Avjoniserat vatten
• pH-mätare eller pH-remsor

 
 
Stegvisa instruktioner:

1. Bestäm lysbuffertens sammansättning utifrån de celler eller den vävnad som du ska lysera och de efterföljande tillämpningar som du ska använda lysatet för. Bered stamlösningarna av detergenter, salter och proteashämmare i önskade koncentrationer.
2. Tillsätt stamlösningarna av detergenter, salter och proteashämmare i en bägare eller kolv.
3. Tillsätt avjoniserat vatten för att öka volymen till önskad mängd buffert.
4. Blanda komponenterna med en omrörare för att få en förblandad lösning.
5. Mät buffertens pH med en pH-mätare eller pH-remsor och justera vid behov pH med små mängder syra eller bas.
6. Använd ultraljudsapparaten med sond för att homogenisera den förblandade lösningen så att en mycket homogen lösning erhålls. Ultraljudsbehandla därför lösningen i några sekunder tills den är grundligt blandad och eventuella klumpar eller aggregat har brutits upp. Ultraljudsbehandlingens varaktighet och effekt kan optimeras utifrån den specifika lysbuffert och ultraljudsapparat som används.
7. Mät buffertens pH igen efter ultraljudsbehandlingen och justera vid behov.
8. Filtrera bufferten genom ett filter med porstorleken 0,2 mikrometer för att avlägsna eventuella rester eller aggregat som kan ha bildats under ultraljudsbehandlingen.
9. Lysbufferten är nu klar att användas.

 
Obs: Lysbuffertens exakta sammansättning och pH kan variera beroende på vilka celler eller vilken vävnad som lyseras och de efterföljande tillämpningarna. Protokollet ovan är en allmän riktlinje och kan behöva optimeras för specifika tillämpningar.
 
Ultraljudshomogenisatorer används vanligen för cellsönderdelning och extraktion av intracellulära molekyler. Därför används ultraljudsbehandling med sond i många lystillämpningar inte bara för beredning av lysbufferten utan även för mekanisk cellsönderdelning och extraktion.
Detta gör vävnadshomogenisatorer med ultraljud till mångsidiga verktyg för laboratorier och förklarar den omfattande användningen av ultraljudsapparater inom mikrobiologi, bioteknik och livsvetenskap.

Ultraljudshomogenisatorer för laboratorier

Hielscher Ultrasonics tillverkar och levererar ultraljudshomogenisatorer och sonder (sonotroder) för olika effektnivåer och provvolymer. Detta gör att vi kan erbjuda dig den ultraljudsapparat för cellsönderdelning som är bäst lämpad för din provberedning. Vi fokuserar på högsta kvalitet, enastående användarkomfort och tillförlitliga resultat vid ultraljudsbehandling. Alla digitala ultraljudsapparater har smart programvara, programmering och förinställning av ultraljudsbehandlingsprotokoll, fjärrstyrning via webbläsare, temperaturkontroll, provbelysning samt automatisk dataregistrering på ett inbyggt SD-kort.

Konstruktion, tillverkning och rådgivning – kvalitet tillverkad i Tyskland

Hielschers ultraljudsapparater är välkända för sina högsta kvalitets- och konstruktionsstandarder. Robusthet och enkel användning gör det möjligt att smidigt integrera våra ultraljudsapparater i industrianläggningar. Hielschers ultraljudsapparater klarar enkelt tuffa förhållanden och krävande miljöer.

Hielscher Ultrasonics är ett ISO-certifierat företag och lägger särskild vikt vid högpresterande ultraljudsapparater med den senaste tekniken och hög användarvänlighet. Hielschers ultraljudsapparater uppfyller självklart CE-kraven samt kraven enligt UL, CSA och RoHs.

Tabellen nedan ger dig en översikt över våra olika ultraljudsapparater för laboratorier: