Hielscher ultraljud teknik

Protokoll för SARS-CoV-2 Coronavirus inaktivering med ultraljudsbehandling

Hielscher VialTweeter är en unik ultraljud multi-provberedning enhet, som används för att inaktivera coronaviruset SARS-COV-2. Den VialTweeter tillåta att förbereda upp till 10 prov injektionsflaska samtidigt och är därigenom den idealiska enheten för massa prov bearbetning.

Inaktivering av SARS-CoV-2 Coronavirus med VialTweeteren

Efter att ha tagit bort fixativet, monolayers tvättades tre gånger med fosfat-buffrad saltlösning (PBS) innan skrapa celler i 1mL MEM/ 5% FBS och sonicated (3 × 10 andra på, 10 sekunder av vid 100% effekt och amplitud) med hjälp av Hielscher ultraljud processor UP200St med VialTweeter Bifogad fil. Supernatanter klargjordes genom centrifugering vid 3000 × g i 10 minuter. 

Läs hela protokollet här för SARS-CoV-2 coronavirus inaktivering av Welch et al. (2020) nedan:

Celler och Virus

Vero E6-celler (Vero C1008; ATCC CRL-1586) var odlade i modifierade Eagles minsta väsentliga medium (MEM) kompletteras med 10% (v/v) fetala kalv serum (FCS). Virus som används var SARS-CoV-2 stam hCOV-19/England/2/2020, isolerats av PHE från den första patienten klustret i Storbritannien den 29/01/2020. Detta virus erhölls vid passage 1 och används för inaktivering studier vid passage 2 eller 3.
För reagens och kemikalier som används för SARS-CoV-2 inaktivering samt avlägsnande av reagenscyttoxicitet vänligen se den vetenskapliga rapporten från Welch et al. (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Virusinaktivering genom tvättmedel – SARS-CoV-2 Coronavirus inaktiveringsprotokoll av Welch et al. 2020

SARS-CoV-2 inaktivering

För kommersiella produkter, viruspreparat (vävnadskulturvätska, titers som sträcker sig från 1 × 106 till 1 × 108 PFU/ml) behandlades i tre exemplar med reagens i koncentrationer och för kontakttider som rekommenderas i tillverkarnas bruksanvisning, där sådan finns, eller för koncentrationer och tider som särskilt efterfrågas av testlaboratorier. Där ett intervall av koncentrationer gavs av tillverkaren, testades det lägsta förhållandet mellan produkt och prov (dvs. lägsta rekommenderade koncentration av testprodukt). Preparattransportrörsreagenser testades med hjälp av ett förhållande mellan en volym vävnadsodlingsvätska till tio volymer reagens, om inte ett volymförhållande mellan provvätska och reagens angavs av tillverkaren. Rengöringsmedel, fixeringsmedel och lösningsmedel testades vid de angivna koncentrationerna för de angivna tiderna. Alla inaktiveringssteg utfördes i omgivnings rumstemperatur (18 – 25°C). För testning av alternativa provtyper spetsades virus i den angivna provmatrisen vid förhållandet 1:9, därefter behandlades med testreagens enligt ovan. Alla experiment inkluderade tre exemplarkontroll mock-behandlade prover med en motsvarande volym PBS i stället för testreagens. Omedelbart efter den erforderliga kontakttiden bearbetades 1mL behandlat prov med hjälp av den lämpligt valda filtreringsmatrisen. Reagens borttagning för inaktivering testning utfördes i en större spin kolumn format med pierce 4mL rengöringsmedel borttagning Spin Kolumner (Thermo Fisher), eller genom att fylla tomma Pierce 10mL kapacitet centrifug kolumner (Thermo Fisher) med SM2 Bio-Pärlor, Sephacryl S-400HR eller Sephadex LH-20 att ge 4mL packade pärlor / harts. För rening med användning av Amicon-filter renades 2 × 500μl prover med hjälp av två centrifugalfilter med den metod som tidigare beskrivits, sedan sammanfördes tillsammans. För formaldehyd och formaldehyd med glutaraldehyd bort, användes ett filter med 1× 500μl provvolym, återanvänds efter bearbetning i 500μl PBS, och läggas till 400ul MEM/5% FBS. För inaktivering av infekterade VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmonolayers, 12,5 cm2 kolvar av Vero E6-celler (2,5 × 106 celler/kolv i 2,5mL MEM/5% FBS) smittades vid MOI 0,001 och inkuberades vid 37°C/5% CO2 i 24 timmar. Supernatant togs bort, och celler fast med hjälp av 5mL av formaldehyd, eller formaldehyd och glutaraldehyd vid rumstemperatur i 15 eller 60 minuter. Fixativet togs bort, och monolayers tvättas tre gånger med PBS innan skrapa celler i 1mL MEM/5% FBS och sonicated (3 × 10 andra på, 10 sekunder av vid 100% effekt och amplitud) med hjälp av en UP200St med VialTweeter fastsättning (Hielscher Ultraljud Technology). Supernatanter klargjordes genom centrifugering vid 3000 × g i 10 minuter.

VialTweeter för den intensiva ultraljudsbehandling av slutna flaskor

VialTweeter för intensiv ultraljudsbehandling av slutna injektionsflaska

Informationsförfrågan




Notera vår Integritetspolicy.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Uppgifter om reagensen som används för SARS-CoV-2 coronavirus inaktivering med ultraljuds-VialTweeter enligt protokollet av Welch et al. 2020

Det fullständiga protokollet inklusive användning av Hielscher VialTweeter finns här:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter för ultraljud virus inaktivering

Fördelar med VialTweeter i korthet

  • Ultraljudsbehandling av upp till 10 injektionsflaska samtidigt
  • Ingen korskontaminering
  • Ingen provförlust
  • Automatisk datainspelning
  • Enkelt och säkert att använda
VialTweeter används även för

  • Cell Lys
  • Viruspartikelavbrott
  • Nukleinsyraextraktion: DNA/RNA-isolering
  • DNA/RNA-fragmentering
  • Lysate solubilisering
  • Sofistikerade Ultraljud Dismembrators och Störceller Cell

    Den multi-sample ultraljudsdonator VialTweeter är bara en av många ultraljud lösningar för provberedning i biologiska, biokemiska och kliniska laboratorier. Hielscher Ultrasonics erbjuder den idealiska ultraljud dismembrator för din ansökan, t ex cell lys, cell utvinning, vävnad homogenisering, lysate solubilisering, upplösning, prov avgasning etc.
    Låt oss veta hur många prover du har att bearbeta per timme och dag, om du föredrar direkt eller indirekt ultraljudsbehandling och vad målet för ultraljud provbehandling är. Vi kommer att rekommendera dig den mest lämpliga ultraljudsenheten för din dagliga arbetsrutin!
    Hielscher Ultrasonics digitala ultraljud processorer är utrustade med smart programvara, automatisk datainspelning, enkel förinställning alternativ för temperaturkontroll, ultraljudsbehandling varaktighet, cykel /puls läge samt prov belysning och webbläsare fjärrkontroll. Vi strävar efter att göra våra ultraljudsenheter så smarta som möjligt så att din forskning och arbetsrutin blir så bekväm och framgångsrik som möjligt.
    Klicka här, för att hitta fler applikationer inklusive protokoll av ultraljud prov beredning med Den VialTweeter!

    Kontakta oss! / Fråga oss!

    Be om mer information

    Använd formuläret nedan för att begära ytterligare information om ultraljudprocessorer, applikationer och pris. Vi kommer gärna att diskutera din process med dig och att erbjuda dig ett ultraljudssystem som uppfyller dina krav!









    Observera att våra Integritetspolicy.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics tillverkar högpresterande ultraljudshomogenisatorer för blandning av applikationer, spridning, emulgering och utvinning på labb, pilot och industriell skala.

    Litteratur / Referenser



    Fakta Värt att veta

    Vad är Vero Cells?

    Vero E6, även känd som Vero C1008 (ATCC Nr. CRL-1586) är kloncelllinje från Vero 76 och används i forskningen av SARS-CoV och SARS-CoV-2 coronaviruses. Veroceller är en härstamning av celler som används i cellkulturer. Den "Vero’ härstamning var isolerade från njure epitelial celler extraheras från en afrikansk grön apa (Chlorocebus sp.).
    Vero E6-celler visar viss kontakthämning, så är lämpliga för att sprida virus som replikerar långsamt. Vero E6 cellinjer används vanligen för att undersöka cytopatologi av coronaviruses SARS-CoV och SARS-CoV-2 som Vero celler (afrikansk grön apa njurceller) uppvisar ett rikligt uttryck för angiotensin-konvertera enzym 2 (ACE2) receptorer. ACE2-receptorer är en stor dockningsplats för SARS-CoV-2 coronavirus.
    Till exempel fann Ogando et al. (2020) att SARS-CoV-2 – i jämförelse med SARS-CoV – genererade högre nivåer av intracellulärt viralt RNA, men påfallande omkring 50 gånger mindre infektiös viral avkomma återfanns från odlingsmediet. Vidare fastställde de att känsligheten hos de två virusen för tre etablerade hämmare av coronavirusreplikation (Remdesivir, Alisporivir och klorokin) är mycket lika, men att SARS-CoV-2-infektionen var väsentligen mer känslig för förbehandling av celler med pegylerad interferon alfa. En viktig skillnad mellan de två virusen är det faktum att – vid passaging i Vero E6-celler – SARS-CoV-2 är tydligen under starkt urval tryck att förvärva adaptiva mutationer i dess spike protein gen. Dessa mutationer ändra eller ta bort en förmodade "furin-liknande klyvning webbplats" i regionen som förbinder S1 och S2 domäner och resultera i en mycket framträdande fenotypiska förändring i plakett analyser.