Priprava vzorca z ultrazvočnim VialTweeterjem

Priprava vzorca pred analizo lahko zahteva različne predanalitične procese, kot so homogenizacija tkiva, liza, ekstrakcija beljakovin, DNA, RNA, organelov in drugih znotrajceličnih snovi, raztapljanje in razplinjevanje. VialTweeter je edinstvena ultrazvočna naprava, ki hkrati pripravi več vzorčnih epruvet pod popolnoma enakimi pogoji. Zaradi posredne ultrazvočne razbijanje zaprtih epruvet se izognemo navzkrižni kontaminaciji in izgubi vzorca.

Ultrazvočna priprava vzorca

Ultrasonication je običajna tehnika obdelave vzorcev, da se vzorec pripravi za analize, kot so verižna reakcija polimerov (PCR), Western Blots, testi, molekularno zaporedje, kromatografija itd. Ultrasonication je tehnika, ki se pogosto uporablja v laboratorijih za predanalitično obdelavo vzorcev. Glavna prednost ultrazvočnega razbijanja je, da princip delovanja ultrazvoka temelji na čisto mehanskih silah. Ultrazvočna liza in motnje celic se dosežejo s sonomehanskimi strižnimi silami, kar daje ultrazvočni poseg prednost, da se topila, ki se uporabljajo za ekstrakcijo beljakovin, lahko uporabljajo tudi med lizo. Ultrazvočni motilci celic, kot je VialTweeter, razbijejo celične stene? membrane in spodbujajo prenos mase med notranjostjo celice in topilom. S tem se analit (npr. DNK, RNA, beljakovine, organele itd.) učinkovito prenese iz celičnega matriksa v topilo. To pomeni, da se koraki gašenja in ekstrakcije prekrivajo s procesom ultrazvočne motnje celic, zaradi česar je ultrazvočna liza zelo učinkovita. Poleg tega ultrazvočna priprava vzorcev ne zahteva detergentov in drugih reagentov za lizo, ki bi lahko spremenili in uničili strukturo lizata in so znani po kasnejših težavah s čiščenjem. Druga metoda lize, encimska motnja, zahteva dolge inkubacijske čase in pogosto daje neponovljive rezultate. Ultrazvočna priprava vzorca premaguje pogoste težave pri pripravi vzorca, kot so homogenizacija tkiva, motnje celic, liza, ekstrakcija beljakovin in raztapljanje lizata. Ker je intenzivnost ultrazvočne obdelave mogoče natančno nadzorovati in prilagoditi biološkemu vzorcu, se izognemo razgradnji in izgubi vzorca. Samodejno nadzorovana in nadzorovana temperatura vzorca, impulzni način in trajanje ultrazvočnega razbijanja zagotavljajo optimalne rezultate.
 

VialTweeter je še posebej primeren za laboratorijsko delo, ki zahteva hkratno pripravo več vzorcev pod enakimi pogoji. VialTweeter je ultrazvočni blok sonotroda, ki lahko sprejme do 10 vial (npr. Eppendorf, centrifuga, NUNC cevi, krio-viale) in jih intenzivno ultrazvočno razbija v natančno nadzorovanih pogojih. Ker je ultrazvočna energija povezana skozi stene vial v vzorčni medij, viale med zdravljenjem ostanejo zaprte. S tem se popolnoma izognemo izgubi vzorca in navzkrižni kontaminaciji.

Viale in epruvete, ki se prilegajo VialTweeterju

VialTweeter je primeren za 10 običajnih stožčastih epruvet ali epruvet z okroglim dnom, kot so Eppendorf, centrifuge, krio-viale in različne vrste vial NUNC, luknje pa se lahko na zahtevo prilagodijo drugim velikostim vial in epruvet. Prosimo, sporočite nam, katere vrste epruvet želite uporabiti, da bomo lahko ustrezno spremenili vaš VialTweeter. Za večje epruvete, kot so Falcon epruvete in druge testne posode, čaše in posode, je VialPress priročna rešitev.
Preberite več o modelu VialTweeter VT26dxx, prilagojenem za vašo velikost epruvete, npr. Soncon cevi!

VialTweeter z VialPress

Medtem ko je sam VialTweeter s svojimi 10 luknjami za cevi že edinstvena in zelo funkcionalna ultrazvočna naprava, dodatek VialPress naredi VialTweeter še bolj vsestranski in prilagodljiv za delovanje. VialPress je dodatna oprema za VialTweeter, ki je sestavljena iz vpenjalne palice, ki omogoča pritrditev večjih epruvet za vzorce, kot so cevi Falcon ali druge majhne do srednje velike testne čaše na sprednji strani VialTweeter. Slika na levi prikazuje VialTweeter, ki drži 10 Eppendorfovih vial v bloku, medtem ko VialPress pritrdi eno večjo epruveto na sprednjo stran za ultrazvočno razbijanje VialPress lahko sprejme do 5 večjih epruvet za intenzivno ultrazvočno razbijanje.

VialTweeter Protokoli za pripravo vzorcev

VialTweeter se pogosto uporablja za sonikiranje bioloških vzorcev. Pred analizo je treba vzorce pripraviti za biokemične ali biofizikalne analize in teste, npr. z lizo, homogenizacijo tkiva, ekstrakcijo beljakovin, striženjem DNA/RNA, razplinjevanjem itd. VialTweeter zanesljivo izpolnjuje te ultrazvočne procese in zagotavlja ponovljive rezultate. Pogosta uporaba VialTweeterja je liza? motnje celic tkiv sesalcev (človeških in živalskih), pa tudi bakterijskih celic in virusnih delcev. Biološki vzorci, ki jih uspešno obdela VialTweeter, vključujejo človeške pljučne epitelijske celice, hematopoetske matične celice, celice mieloične levkemije, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, kompleks mikobakterij? Mycobacterium tuberculosis (MTBC) in številne druge bakterijske, botanične in mikrobne celice.
Spodaj lahko najdete nekaj izbranih protokolov z VialTweeterjem.

Liza E.Coli z VialTweeterjem za določanje glutationa in vivo

Bakterije Escherichia coli seva MG1655 so gojili v minimalnem mediju MOPS v skupni prostornini 200 ml, dokler ni bil dosežen A600 0,5. Kultura je bila razdeljena na 50-ml kulture za zdravljenje stresa. Po 15 minutah inkubacije z 0,79 mM alicina, 1 mM diamidom ali dimetil sulfoksidom (kontrola) so bile celice pobrane pri 4.000 g pri 4 °C za 10 minut. Celice so bile dvakrat oprane s pufrom KPE pred resuspenzijo peletov v 700 μl pufra KPE. Za deproteinizacijo je bilo dodanih 300 μl 10% (m/v) sulfosalicilne kisline pred motnjo celic z ultrazvokom (3 x 1 min; ultrazvočni zvočnik VialTweeter). Supernatanti so bili zbrani po centrifugiranju (30 min, 13.000 g, 4 °C). Koncentracije sulfosalicilne kisline so se zmanjšale na 1% z dodatkom 3 volumnov pufra KPE. Meritve skupnega glutationa in GSSG so bile izvedene, kot je opisano zgoraj. Koncentracije celičnega glutationa so bile izračunane na podlagi volumna celic E. coli 6,7×10-15 litra in gostote celic A600 0,5 (kar ustreza 1×108 celicam ml-1 kulture). Koncentracije GSH so bile izračunane tako, da se od skupnega glutationa odšteje 2[GSSG]. (Müller et al. 2016)

Fragmentacija alfa-sinukleinskih fibril z VialTweeterjem

Sonicator VialTweeter se pogosto uporablja za zanesljivo in učinkovito fragmentacijo alfa-sinukleinskih vlaken in trakov. Kliknite tukaj, če želite najti podrobne opise, protokole in reference za fragmentacijo alfa-sinukleina z VialTweeterjem!

Liza celic z VialTweeterjem pred atomsko absorpcijsko spektrometrijo grafitne peči

Bacillus subtilis 168 (trpC2) je bil izpostavljen 15-minutnemu antibiotičnemu stresu, nato so celice zbrali pri 3.320 x g, petkrat oprali s 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, resuspendirali v 10 mM Tris, pH 7,5 in prekinili z ultrazvočno razlago v instrumentu Hielscher VialTweeter. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter Priprava vzorca pred masno spektrometrijo

Liofilizirane celične pelete človeških CD34-ΰ� hematopoetskih matičnih? matičnih celic so resuspendirali v 10μΰ�l (200μl za razsuti pripravek HEK293 za serijo redčenja peptidov) 8 M sečnine v 100 mM amonijevem hidrogenkarbonatu in lizirali s pomočjo ultrazvočnega razbijanja s Hielscher VialTweeterjem pri amplitudi 60%, cikel 60% in trajanje 20 sekund trikrat z vmesnim hlajenjem na ledu. (Amon et al. 2019)

Protokoli za pripravo vzorcev z uporabo VialPress

Sveža solata (Lactuca sativa) je bila homogenizirana v 0,5 M pufru HEPES (pH 8, prilagojen KOH) v razmerju 1 g rastline (sveža teža) na 200, 100, 50 ali 20 ml puferske raztopine. Razmerje med maso rastline in prostornino pufrske raztopine je bilo spremenjeno, da se je skupni volumen homogenata ohranil med 3,5 in 12 ml. Razmerje med maso rastline in prostornino puferske raztopine je bilo spremenjeno, da se je skupni volumen homogenata ohranil med 3,5 in 12 ml, kar je omogočilo homogenizacijo s sondo. Homogenati so bili nato podvrženi posredni ultrazvočni obdelavi z uporabo UP200St z VialTweeterjem, opremljenim z 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Nemčija) za 3 minute (80% impulza in 100% moči). Z uporabo te naprave se je izognila kontaminaciji. (Laughton et al. 2019)

Zanesljiv nadzor temperature med ultrazvočnim razbijanjem z VialTweeterjem

Temperatura je ključni dejavnik, ki vpliva na proces, ki je še posebej pomemben za obdelavo bioloških vzorcev. Kot vse mehanske tehnike priprave vzorcev, ultrazvočna obdelava ustvarja toploto. Vendar pa je temperaturo vzorcev mogoče dobro nadzorovati pri uporabi VialTweeterja. Predstavljamo vam različne možnosti za spremljanje in nadzor temperature vaših vzorcev, medtem ko jih pripravljate z VialTweeter in VialPress za analizo.

1. Spremljanje temperature vzorca: Ultrazvočni procesor UP200St, ki poganja VialTweeter, je opremljen z inteligentno programsko opremo in vtičnim temperaturnim senzorjem. Priključite temperaturni senzor v UP200St in vstavite konico temperaturnega senzorja v eno od epruvet za vzorce. Prek digitalnega barvnega zaslona na dotik lahko v meniju UP200St nastavite določeno temperaturno območje za ultrazvočno razbijanje vzorca. Ultrazvočni aparat se bo samodejno ustavil, ko bo dosežena najvišja temperatura, in se ustavil, dokler se temperatura vzorca ne zniža na nižjo vrednost nastavljene temperature ∆. Nato se ultrazvočno razbijanje spet začne samodejno. Ta pametna funkcija preprečuje degradacijo, ki jo povzroča toplota.
2. Blok VialTweeter je mogoče predhodno ohladiti. Postavite blok VialTweeter (samo sonotrode brez pretvornika!) v hladilnik ali zamrzovalnik, da se titanov blok predhodno ohladi, pomaga odložiti dvig temperature v vzorcu. Če je mogoče, se lahko tudi sam vzorec predhodno ohladi.
3. Uporabite suhi led za hlajenje med ultrazvočnim razbijanjem. Uporabite plitki pladenj, napolnjen s suhim ledom, in postavite VialTweeter na suh led, da se toplota lahko hitro razprši.

Kupci po vsem svetu uporabljajo VialTweeter in VialPress za vsakodnevno pripravo vzorcev v bioloških, biokemičnih, medicinskih in kliničnih laboratorijih. Inteligentna programska oprema in nadzor temperature procesorja UP200St omogoča zanesljivo nadzor temperature in preprečitev toplotne razgradnje vzorca. Ultrazvočna priprava vzorcev z VialTweeter in VialPress zagotavlja zelo zanesljive in ponovljive rezultate!

Tehnične podrobnosti o VialTweeterju

VialTweeter je blok sonotroda, izdelana iz titana, ki lahko drži do 10 vial v luknjah v bloku. Poleg tega je mogoče do 5 večjih epruvet pritrditi na sprednji del VialTweeter s pomočjo VialPress. VialTweeter je zasnovan tako, da je ultrazvočna energija enakomerno porazdeljena v vsako vstavljeno vialo, da se zagotovijo zanesljivi in enotni rezultati ultrazvočnega razbijanja. Majhen pivot prilagodi VialTweeter sonotrode na neravno podlago in poravna epruvete navpično.

Prednosti VialTweeterja na prvi pogled

• Intenzivna ultrazvočna obdelava do 10 vial hkrati
• Posredna ultrazvočna intenzivnost pri visoki ultrazvočni intenzivnosti skozi steno posode v vzorec
• Posredno ultrazvočno razbijanje preprečuje navzkrižno kontaminacijo in izgubo vzorca
• Ponovljivi rezultati zaradi nastavljive in nadzorovane amplitude ultrazvočnega razbijanja
• VialPress vam omogoča sonikiranje večjih epruvet
• Nastavljiva amplituda od 20 do 100%
• Nastavljiv impulzni način od 0 do 100%
• Možnost avtoklaviranja

VialTweeter poganja UP200St, 200 vatov zmogljiv ultrazvočni procesor. UP200St je opremljen z inteligentno programsko opremo, ki omogoča natančen nadzor nad vsemi pomembnimi parametri ultrazvočnega procesa, kot so amplituda, čas ultrazvočne obdelave, pulziranje in temperatura. Zaradi tega je VialTweeter zanesljivo orodje za uspešne ponovljive rezultate procesov v bioloških in biokemičnih laboratorijih.
Amplitudo je mogoče prilagoditi med 20 in 100% in s tem omogoča prilagoditev ultrazvočne intenzivnosti vašemu vzorcu. Na primer, striženje in fragmentacija DNK in RNA zahteva blažjo amplitudo, da se prepreči proizvodnja premajhnih fragmentov DNK, homogenizacija tkiva mišjih možganov potrebuje visoko intenzivno ultrazvočno razbijanje. Izberite idealno amplitudo, intenzivnost in trajanje ultrazvočnega razbijanja s pametnim in intuitivnim menijem na procesorju UP200St. Do menija in nastavitev je mogoče enostavno dostopati in upravljati prek barvnega zaslona na dotik. V nastavitvah lahko vnaprej nastavite parametre ultrazvočne obdelave, kot so amplituda, način pulziranja? cikla, trajanje ultrazvočne obdelave, skupni vnos energije in temperaturne omejitve. Pri raziskavah in proizvodnji je ponovljivost poskusov in rezultatov preskusov ključnega pomena. To pomeni, da je natančno beleženje procesnih pogojev in protokolov ultrazvočne obdelave izjemno pomembno. Samodejno protokoliranje podatkov zapiše vse podatke o ultrazvočnem razbijanju v datoteko CSV na integrirani kartici SD, tako da lahko enostavno preverite in primerjate različne ultrazvočne teke. Do vseh ultrazvočnih procesnih podatkov lahko enostavno dostopate in jih delite kot datoteko CSV.
Hielscher Ultrasonics si prizadeva zagotoviti napredno tehnologijo za lažje in izboljšanje vašega raziskovalnega dela!