Priprava vzorca pred analizo lahko zahteva različne pred analitične procese, kot so homogenizacija tkiva, lyza, ekstrakcija beljakovin, DNK, RNA, organele in druge znotrajcelične snovi, raztapljanje in razpiranje. VialTweeter je edinstvena ultrazvočna naprava, ki hkrati pripravlja več vzorčnih cevi pod popolnoma enakimi pogoji. Zaradi posrednega sonikacije zaprtih epruvet se izogibamo navzkrižnemu onesnaženju in izgubi vzorca.

Ultrazvočni vzorec priprava

Ultrasonication je pogosta tehnika obdelave vzorca, da bi dobili vzorec pripravljen za analize, kot so verižna reakcija polimerov (PCR), Zahodni Blots, analize, molekularno zaporedje, kromatografija itd. Ultrasonication je tehnika, ki se pogosto uporablja v laboratorijih za predhodno analitično zdravljenje vzorcev. Velika prednost sonikacije je, da delovno načelo ultrazvoka temelji na povsem mehanskih silah. Ultrazvočno lysis in motnje celic dosežemo s sonomehanskimi omejevskimi silami, kar daje ultrasonikaciji prednost, da se topila, ki se uporabljajo za ekstrakcijo beljakovin, lahko uporabljajo tudi med lyzo. Ultrazvočne celice motilec, kot je VialTweeter razbiti celične stene / membrane in spodbujati prenos mase med celično notranjostjo in topilo. Zato se analit (npr. DNK, RNK, beljakovine, organele itd.) učinkovito prenese iz celične matrice v topilo. To pomeni, da se koraki ugašanja in ekstrakcije prekrivajo z ultrazvočnim procesom motenj celic, kar naredi ultrazvočno zelo učinkovito. Poleg tega ultrazvočna priprava vzorca ne zahteva detergentov in drugih reagentov za lizo, ki bi lahko spremenili in uničili strukturo lysata in je znan po nadaljnjih težavah s prečiščenjem. Druga metoda za lysis, encimska motnja zahteva dolge čase inkubacije in prinaša pogosto ne-pomnoževalne rezultate. Ultrazvočna priprava vzorca premaga pogoste težave pri pripravi vzorca, kot so homogenizacija tkiva, motnje celic, lyza, ekstrakcija beljakovin in topljivost lysata. Ker je intenzivnost ultrazvočnega zdravljenja mogoče natančno nadzorovati in prilagoditi biološkemu vzorcu, se prepreči razgradnja in izguba vzorca. Samodejno nadzorovana in nadzorovana temperatura vzorca, pulzni način in trajanje sonicije zagotavljajo optimalne rezultate.
 

VialTweeter je še posebej priročen za laboratorijsko delo, ki zahteva sočasno pripravo več vzorcev pod enakimi pogoji. VialTweeter je ultrazvočni blok sonotrode, ki lahko drži do 10 vial (npr. Eppendorf, centriguge, NUNC cevi, krio-viale) in jih intenzivno sonicira pod natančno nadzorovanimi pogoji. Ker je ultrazvočna energija skozi stene vial v vzorčni medij, viale ohranjajo zaprte med zdravljenjem. Zato se izguba vzorca in navzkrižna kontaminacija popolnoma izogibata.

Viale in cevi, ki prilegajo VialTweeter

VialTweeter je primeren za 10 skupnih stožčnih ali okroglih cevi, kot so Eppendorf, centrifuga, cryo-viale in različne vrste viale NUNC, vendar je mogoče luknje prilagoditi drugim velikostm viale in cevi na zahtevo. Prosimo, da nam poveste, katere epruvete želite uporabiti, da lahko ustrezno spremenimo vaš VialTweeter. Za večje epruvete, kot so Falconove cevi in druge preskusne posode, knige in posode, je VialPress priročna rešitev.

VialTweeter z VialPress

Medtem ko je sam VialTweeter s svojimi 10 cevnimi luknjicami že edinstvena in zelo funkcionalna ultrazvočna naprava, dodatek VialPress naredi VialTweeter še bolj vsestransko in prilagodljivo za delovanje. VialPress je dodatek za VialTweeter, ki sestoji iz spone na baru, ki omogoča fiksiranje večjih vzorčnih cevi, kot so Falcon cevi ali druge majhne do srednje velike testne kavče na sprednji strani VialTweeter. Slika na levi strani prikazuje vialo VialTweeter, ki v bloku drži 10 eppendorfskih vial, medtem ko VialPress za sonication pritrdi eno večjo epruveto na sprednji strani. VialPress je sposoben držati do 5 večjih epruvet za intenzivno sonication.

Protokoli za pripravo vzorca VialTweeter

VialTweeter se pogosto uporablja za sonikati biološke vzorce. Pred analizo morajo biti vzorci pripravljeni za biokemične ali biofizične analize in teste, npr. VialTweeter izpolnjuje te ultrazvočne procese zanesljivo in prinaša pomnoževalne rezultate. Pogosta uporaba zdravila VialTweeter je lysis/celična motnja sesalcev (človeških in živalskih) tkiv ter bakterijskih celic in virusnih delcev. Biološki vzorci, zdravljeni z zdravilom VialTweeter, vključujejo človeške pljučne epitelične celice, hematopoetične matične celice, celice mieloične levkemije, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus antracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptokok piogeni, Kaulobacter crescentus, Mikoplazma pljučnica, mycobacteria / Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) in številne druge bakterijske, botanične in mikrobne celice.
Spodaj lahko najdete nekaj izbranih protokolov, ki vključujejo VialTweeter.

E.Coli liza z VialTweeter za In-Vivo Glutathione Determination

Bakterije escherichia coli seva MG1655 so se gojile v MOPS minimalnem mediju v skupnem volumnu 200ml, dokler ni bil dosežen A600 z 0,5. Kultura je bila razdeljena na 50-ml kulture za stresno zdravljenje. Po 15 minutah inkubaacije z 0,79 mM alicina, 1 mM diamida ali dimetil sulfoksida (nadzor) so celice pobirale pri 4000g pri 4 °C 10 min. Celice so pred ponovno suspenzijo peletov v 700μl odbojnika KPE dvakrat umili s kpe puferjem. Za deproteinacijo so dodali 300μl 10% (w/v) sulfosalicilne kisline pred motnjami celic z ultrasonikacijo (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Supernatante so zbirali po centrifugacijah (30 min, 13.000g, 4°C). Koncentracije sulfosalicilne kisline so se zmanjšale na 1 % z dodatkom 3 volumna blažilnika KPE. Meritve skupnega glutaiona in GSSG so bile opravljene, kot je opisano zgoraj. Celične koncentracije glutaiona so izračunane na podlagi volumna celic E. coli 6,7×10-15 litrov in gostote celic A600 0,5 (kar ustreza 1×108 celic ml-1 kulturi). Koncentracije GSH so bile izračunane z odštejem 2[GSSG] od skupnega glutaiona. (Müller et al. 2016)

Fragmentacija fibrila alfa-sinukleina z visokotoncem VialTweeter

Sonikator VialTweeter se pogosto uporablja za zanesljivo in učinkovito fragmentacijo alfa-sinukleinskih fibril in trakov. Kliknite tukaj, če želite najti podrobne opise, protokole in reference za fragmentacijo alfa-sinukleina z VialTweeterjem!

Celična lyza z VialTweeter pred grafitno peč atomsko absorpcijo spektrometrija

Zdravilo Bacillus subtilis 168 (trpC2) je bilo izpostavljeno 15 min potom se požnjele celice na 3.320 x g, petkrat se pirale s 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, ponovno se posušile u 10 mM Tris, pH 7,5 i omelo ultrasonikacijom u hielscher VialTweeter instrumentu. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter Priprava vzorca pred masno spektrometrijo

Poliofilizirane celične pelete humanega CD34􏰀 hematopoetične matične/progenitorske celice so bile ponovno pripravljene v 10μ􏰇l (200μl za razsuti hek293 pripravek za serijo redčevanja peptida) 8 M sečnine u 100 mM amonijevog vodikovog karbonat i lisedana sonication s Hielscher VialTweeter na amplitudi 60%, ciklus 60% i trajanje 20-e za trikrat s srednjim hlajenjem na ledu. (Amon et al. 2019)

Vzorčni protokoli priprave z uporabo VialPress

Sveža solata (Lactuca sativa) je bila homogenizirana v 0,5 M odbojnika HEPES (pH 8, KOH prilagojena) v razmerju 1 g rastline (sveža teža) in 200, 100, 50 ali 20 ml raztopine odbojnika. Razmerje med maso rastlin in prostornino raztopine med med 3,5 in 12 ml je bilo različno, da je bila skupna prostornina homogenata med 3,5 in 12 ml. Razmerje med maso rastlin in prostornino raztopine odbojnika je bilo različno, da je skupna prostornina homogenata med 3,5 in 12 ml, kar je omogočilo homogenizacijo s sondo. Homogenati so nato bili posredno ultrazvočni z uporabo UP200St z VialTweeter opremljen z 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Nemčija) za 3 min (80% impulz in 100% moč). Uporaba te naprave se je izognila onesnaženju. (Laughton et al. 2019)

Zanesljiv nadzor temperature med sonication z VialTweeter

Temperatura je ključni dejavnik, ki vpliva na proces, ki je še posebej pomemben za obdelavo bioloških vzorcev. Kot vse mehanske tehnike priprave vzorcev, sonication ustvarja toploto. Vendar pa je pri uporabi zdravila VialTweeter temperatura vzorcev lahko dobro nadzorovana. Predstavljamo vam različne možnosti za spremljanje in nadzor temperature vaših vzorcev, medtem ko jih pripravljate z VialTweeter in VialPress za analizo.

1. Spremljanje temperature vzorca: Ultrazvočni procesor UP200St, ki vozi VialTweeter, je opremljen z inteligentno programsko opremo in vtičnim senzorjem temperature. Senzor temperature priključite v UP200St in vstavite konico temperaturnega tipala v eno od vzorčnih cevi. Z digitalnim barvnim zaslonom na dotik lahko v meniju UP200St nastavite določen temperaturni razpon za vzorčenje. Ultrasonicator se samodejno ustavi, ko doseže največjo temperaturo in ustavi, dokler temperatura vzorca ne pade na nižjo vrednost nastavljene temperature ∆. Nato se sonication začne samodejno znova. Ta pametna funkcija preprečuje degradacijo, ki jo povzroči toplota.
2. Blok VialTweeter se lahko predhodno ohladi. Blok VialTweeter (samo sonotrode brez pretvornika!) dajte v hladilnik ali zamrzovalnik, da se blok titana pred hlajenjem preloži pri preložitvi dviga temperature v vzorcu. Če je mogoče, se lahko tudi sam vzorec predhodno ohladi.
3. Med sonikacijo uporabite suhi led. Uporabite plitvi pladenj, napolnjen s suhim ledom, in postavite VialTweeter na suhi led, da lahko toplota hitro izpušča.

Stranke po vsem svetu uporabljajo VialTweeter in VialPress za vsakodnevno pripravo vzorcev v bioloških, biokemičnih, medicinskih in kliničnih laboratorijih. Inteligentna programska oprema in nadzor temperature procesorja UP200St, temperatura je zanesljivo nadzorovana in toplotno povzročeni razgradnja vzorca izogiba. Ultrazvočni vzorec priprava z VialTweeter in VialPress prinaša zelo zanesljive in pomnoževalne rezultate!

Tehnične podrobnosti VialTweeter

VialTweeter je blok sonotrode iz titana, ki lahko drži do 10 vial v luknjah znotraj bloka. Poleg tega lahko do 5 večjih epruvet pripnete na sprednji del VialTweeter s pomočjo VialPress. VialTweeter je tako zasnovan, da se ultrasonication energija enotno porazdeli v vsako vstavljeno vialo, da se zagotovijo zanesljivi in enotni rezultati sonication. Majhna vrtilna točka prilagodi VialTweeter sonotrode tako, da je neenotrodirana in navpično poravna preskusne cevi.

Prednosti VialTweeter na prvi pogled

• Intenzivno ultrazvočno razbijanje do 10 vial hkrati
• Posredno ultrazvočno razbijanje pri visoki ultrazvočni intenzivnosti skozi steno plovila v vzorcu
• Posredno ultrazvoka preprečuje navzkrižno kontaminacijo in vzorec izgube
• Ponovljivi rezultati zaradi nastavljiv in obvladljiv ultrazvočno razbijanje amplitude
• VialPress vam omogoča, da sonicate večje cevi
• Nastavljiva amplituda od 20 do 100%
• Nastavljiv pulzni način od 0 do 100%
• avtoklavabilne

VialTweeter se napaja z UP200St, 200 vatov zmogljiv ultrazvočni procesor. UP200St je opremljen z inteligentno programsko opremo, ki omogoča natančni nadzor nad vsemi pomembnimi ultrazvočnimi procesnimi parametri, kot so amplitude, čas sonikacije, pulzacije in temperature. Zaradi tega je VialTweeter zanesljivo orodje za uspešno pomnoževalno procesno rezultate v bioloških in biokemičnih laboratorijih.
Amplitude je mogoče prilagoditi med 20 in 100% in s tem omogoča prilagoditev ultrazvočne intenzivnosti vašemu vzorcu. Na primer, omejevanje in razdrobljenost DNK in RNK zahteva blažjo amplitudo, da se prepreči nastajanje premoglih DNA fragmentov, tkivna homogenizacija mišji možgani potrebujejo visoko intenzivnost sonication. Izberite idealno amplitude, intenzivnost sonication in trajanje preko pametnega in intuitivnega menija v up200St procesorju. Do menija in nastavitev je mogoče enostavno dostopati in upravljati prek barvnega zaslona na dotik. V nastavitvah lahko vnaprej nastavite parametre sonication, kot so amplituda, pulzacija / način cikla, trajanje sonication, skupni vnos energije in omejitve temperature. Pri raziskavah in proizvodnji je ključnega pomena ponovljivost poskusov in rezultatov preskusov. To pomeni, da je natančno beleženje procesnih pogojev in protokolov sonicije popolnoma pomembno. Avtomatsko protokoliranje podatkov vse podatke o sonikaciji vpiše v CSV datoteko na integrirani SD-kartici, tako da lahko enostavno preverite in primerjate različne sonication teke. Do vseh ultrazvočnih procesnih podatkov je mogoče enostavno dostopati in jih deliti kot DATOTEKO CSV.
Hielscher Ultrasonics si prizadeva, da vam z napredno tehnologijo olajša in izboljša svoje raziskovalno delo!