Hielscher Ultrazvočna tehnologija

Ultrazvočna lysis drosophila melanogaster vzorci

Drosophila melanogaster is widely used in laboratories as model organism. Therefore, pre-analytical preparation steps such as lysis, cell disruption, protein extraction and DNA shearing of Drosophila melanogaster samples must be frequently carried out. Ultrasonic dismembrators are reliable and efficient and can used to perform various tasks such as lysis, protein extraction or DNA fragmentation at ease by only adjusting ultrasonic process parameters. Ultrasonic homogenizers are thereby flexible tools with a broad range of applications.

Ultrazvočna lysis in ekstrakcija beljakovin

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Lysis, topitev celic, homogenizacija tkiv in pridobivanje beljakovin so tipične naloge za ultrazvočne dismembratorje v bioloških laboratorijih. Ultrazvočni disembratorji in celični motilci so primerni za homogenizacijo živalskih tkiv, žuželk (npr. Drosophila melanogaster, C. elegans) ali rastlinskih osebkov. Naslednje uporabe ultrasonication so lysis celic suspenzije in peleti, kot tudi ekstrakcija znotrajceličnih beljakovin.
Ultrazvočna lysis in ekstrakcija beljakovin so zelo zanesljivi in pomnoževalni procesi, ki se lahko izvajajo na podlagi uveljavljenih protokolov. Ker ultrazvočno intenzivnost procesa je mogoče natančno prilagoditi preko sonication parametrov, kot so amplitude, cikel / impulzni način, temperatura in volumen vzorca, enkrat dokazano protokoli se lahko ponovi z enakim izidom znova in znova.

Prednosti ultrazvočne priprave vzorca

  • visoko učinkovite
  • Nastavljivo na določen vzorec materiala
  • Primerno za vsako prostornino
  • Netehalna obdelava
  • ponovljive rezultate
  • Preprosta in varna

Ultrazvočna DNA in RNA fragmentacija

After cell lysis and protein extraction, a common required step in sample preparation is the shearing and fragmentation of DNA, RNA, and chromatin, e.g. before chromatin immunoprecipitation (ChIP). DNA and RNA fragmentation can be reliably achieved by breaking the covalent bonds that hold the DNA together by physical forces. Using physical shearing such as sonication, at first the DNA strands are broken, then the DNA is fragmented into smaller pieces.
Ultrazvočna razdrobljenost DNK je zanesljiva in učinkovita pri hlajenju DNK na ciljno dolžino, npr. 500bp (osnovni pari). Glavne prednosti ultrazvočne razdrobljenosti DNK vključujejo natančna kontrola ultrazvočnih procesnih parametrov in intenzivnosti. Ultrazvočne proces parametre lahko prilagodite z ugasnjenjem sonication intenzivnost, ciklov in časa natančno. To omogoča ustvarjanje želenih velikosti DNK in ciljno dolžino DNK je mogoče zanesljivo proizvajati, kot tudi razmnoževanje. Ultrazvočno omejevanje DNK je idealno tudi za ustvarjanje fragmentov DNK visoke molekulske mase.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

ultrazvočni UP200Ht with 2mm microtip S26d2 for the sonication of Drosophila samples

Prošnja za informacije




Upoštevajte naše Politika zasebnosti.


Protokoli za ultrazvočno lyzo drosophila melanogaster

Spodaj najdete različne protokole za ultrazvočno podprto lysis, ekstrakcijo beljakovin, in DNA ali kromatin fragmentacijo Drosophila vzorcev.

Ultrazvočna lysis za navzkrižno povezovanje imunoprecipitacije (CLIP) Assay

CLIP assay was performed as previously reported with some modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were UV crosslinked (3 × 2000 μJ/cm2), homogenized on ice in 1 mL RCB buffer (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 2.5 mM MgCl2, 0.1% Triton X-100, 250 mM sucrose, 1 mM DTT, 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors, 1 mM PMSF) supplemented with 300 U RNAseOUT and placed on ice for 30 min. The homogenate was sonicated on ice, at 80% power, five times in 20 s bursts with a 60 s rest in between using the Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz) centrifugirana (16000 × g 5 min pri 4 °C). Topni izvleček je bil predhodno razčlenjen z 20 μl Protein-G dinabead za 20 min pri 4 °C. Po odstranitvi vzorcev za imunoblotiranje in kvantitacijo vnosa RNK (1 %), je bil HP1 imunoprecipitiran z anti-HP1 9A9 protitelesom iz 450 μl vnaprej pripravljenega ekstrakta z inkubacijo za 4 h s 50 μl Protein-G dinabeadi. Imunoprecipitate so s RCB 4-krat umili. Za izvleček imunoprecipitiranih RNA so peletirane kroglice v 100 μL vode, obdelane z UltraPure DEPC, 5 min. 900 μL Qiazol Reagentu dodali v nadnatant, ki je bil okreval za pripravo RNK. RNK prečiščena je bila uporabljena kot predloga za sintezo cDNA z uporabo Oligo dT, naključnih heksamerjev in SuperScript povratne prepisa III v skladu s protokolom proizvajalca.
(Cassale et al. 2019)

Ultrazvočna lysis za kromatin Imunoprecipitation Assay

Chromatin immunoprecipitation was performed according to the method described by Menet with minor modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were homogenized in 1 mL of NEB buffer (10 mM HEPES-Na at pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.1 mM EGTA-Na at pH 8, 0.5 mM EDTA-Na at pH 8, 1 mM DTT, 0.5% NP-40, 0.5 mM Spermidine, 0.15 mM Spermine, 1× EDTA- free Complete Protease Inhibitors) with a homogenizer / immersion disperser 1 min (at 3000 rpm). The homogenate was transferred to a pre-chilled glass dounce and 15 full strokes were applied with a tight pestle. Free nuclei were then centrifuged at 6000xg for 10 min at 4°C. The nuclei-containing pellets were resuspended in 1 mL of NEB and centrifuged at 20000 × g for 20 min on sucrose gradient (0.65 mL of 1.6 M sucrose in NEB, 0.35 mL of 0.8 M sucrose in NEB). The pellet was resuspended in 1 mL of NEB and formaldehyde to a final concentration of 1%. Nuclei were cross-linked for 10 min at room temperature and quenched by adding 1/10 vol of 1.375 M glycine. The nuclei were collected by centrifugation at 6000 × g for 5 min. Nuclei were washed twice in 1 mL of NEB and resuspended in 1 mL of Lysis Buffer (15 mM HEPES-Na at pH 7.6, 140 mM NaCl, 0.5 mM EGTA, 1 mM EDTA at pH 8, 1% Triton X-100, 0.5 mM DTT, 0.1% Na Deoxycholate, 0.1% SDS, 0.5% N-lauroylsarcosine and 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors). Nuclei were sonicated using a Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz) šestkrat za 20 s na in 1 min na ledu. Sonicana jed so centrifugirana pri 13000 × g 4 min pri 4 °C. Večina soniciranega kromatina je bila v dolžini od 500 do 1000 osnovnih parov (bp). Za vsako imunoprecipitacijo je bilo inkubiranih 15 μg kromatina v prisotnosti 10 μg monoklonalnega protitelesa HP1 9A9 (3 h pri 4 °C v vrtečem kolesu). Nato je bilo dodanih 50 μl dinabead proteina G, inkubacijo pa so nadaljevali čez noč pri 4 °C. Supernatanti so bili zavrženi in vzorci so bili dvakrat napihnjeni v Lysis Bufferju (vsak pomiva 15 min pri 4 °C) in dvakrat v TE Buffer (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl pri pH 8). Kromatin je bil izvlečen iz beads v dveh korakih; prvi v 100 μl Eluition Buffer 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl pri pH 8) pri 65 °C za 15 min, sledi centrifugacija in okrevanje supernatanta. V 100 μl TE + 0,67% SDS je bil ponovno izvleček materiala iz posode. Kombinirani eluat (200 μl) je bil inkubirana čez noč pri 65 °C za vzvratne navzkrižne povezave in zdravljen s 50 μg/ml RNaseA 15 min pri 65 °C in za 500 μg/ml Proteinase K pri 3 h pri 65 °C. Vzorci so bili ekstrahirani fenol-kloroform in etanol obujani. DNK so ponovno našli v 25 μl vode. Za maksimizacijo molekularnih analiz z imunoprecipitiranim DNK so se geni kandidatk v parih povečali z optimiziranim protokolom dupleks-PCR z uporabo dveh različnih nastavitev primerkov s podobnimi temperaturami taljenja v eni reakciji.
(Casale et al. 2019)

UP200St TD_CupHorn za posredno sonication vzorcev

UP200St TD_CupHorn za posredno sonication vzorcev, kot sta DNA in kromatin omejevanje

Visokozmoglivni ultrazvočni celični disruptorji za biološke vzorce

Hielscher Ultrasonics je vaš dolgo izkušen partner, ko gre za visoko zmogljivost ultrasonicators za motnje celic, lysis, pridobivanje beljakovin, DNA, RNK, in kromatin fragmentacijo, kot tudi druge korake pred analitično pripravo vzorca. Hielscher ponuja celovit portfelj ultrazvočnih laboratorijskih homogenizatorjev in enot za pripravo vzorcev, Hielscher ima idealno ultrazvočno napravo za vašo biološko aplikacijo in zahteve.
Sonda tipa insonifier UP200St za lizoKlasična sonda tipa ultrasonicator z mikro-konico, kot je UP200St (200W; glej sliko levo) ali eno od ultrazvočnih enot za pripravo vzorca VialTweeter ali UP200St_TD_CupHorn z VialHolder so najljubši modeli v raziskovalnih in analitičnih laboratorijih. Klasična ultrazvočna sonda je idealna, ko pripravite manj vzorcev je treba lysed, izvleči ali fragmenti. Enote za pripravo vzorca VialTweeter in UP200St_TD_CupHorn omogočajo sočasno sonikacijo do 10 ali 5 vial.
Če je treba obdelati visoka števila vzorcev (npr. plošče z 96 dobro, mikrotiterske plošče itd.), UIP400MTP je idealna nastavitev sonication. UIP400MTP deluje kot večji cuphorn, ki je napolnjen z vodo in ima dovolj prostora za držo plošč mikro vodnjakov. UIP400MTP, ki ga napaja 400 vatov močan ultrazvočni procesor, zagotavlja zelo enotno in intenzivno sonikacijo večplastnih plošč, da bi zmotil celice, vzorce lize, topilne pelete, ekstrahiral beljakovine ali omejevalni DNK.

Natancen nadzor prek pametne programske opreme

Hielscher je industrijski procesorji serije HDT lahko udobno in uporabniku prijazno upravljanje preko brskalnika daljinskega upravljalnika.Vse Hielscher sonication rešitve od 200 vatov navzgor so opremljene z digitalnim barvnim zaslonom na dotik in inteligentno programsko opremo. Prek pametnega protokoliranja podatkov se vsi ultrazvočni procesni parametri samodejno shranijo kot CSV datoteka na vgrajeni SD-kartici takoj, ko se ultrazvočnikator zažene. Zato je raziskovanje in protokoliranje veliko bolj priročno. Po poskusih sonikacije ali pripravi vzorca lahko preprosto pregledate parametre sonication vsakega sonication teči in jih primerjati.
Via the intuitive menu, numerous parameter can be preset before sonication: For instance, to control the temperature in the sample and to prevent its thermal degradation, an upper limit of sample temperature can be set. A pluggable temperature sensor, which comes with the ultrasonic unit, gives the ultrasonic processor feedback on the actual sonication temperature. When the upper temperature limit is reached, the ultrasonic device pauses until the lower limit of the set ∆T is reached and starts then automatically sonicating again.
Če je potrebna sonication s specifičnim vnosom energije, lahko prednastavite končno ultrazvočno energijo sonication teka. Seveda je lahko tudi ultrazvočno utripanje in način cikla individualno nastavljen.
Če želite znova uporabiti svoje najuspešnejše parametre sonication, lahko shranite različne načine sonication (npr. čas sonikacije, intenzivnost, način cikla itd.) kot vnaprej nastavljene načine, tako da so lahko enostavni in hitro začeti znova.
Za večjo operativno udobje lahko vse digitalne ultrazvočne enote upravljate prek daljinskega upravljalnika brskalnika v vsakem skupnem brskalniku (npr. InternetExplorer, Safari, Chrome itd.). LAN povezava je preprosta nastavitev plug-n-play in ne zahteva dodatne namestitve programske opreme.
V Hielscherju vemo, da uspešno sonication bioloških vzorcev zahteva natančnost in ponovljivost. Zato smo naše ultrazvočne naprave oblikovali kot pametne naprave z vsemi funkcijami, ki omogočajo učinkovito, zanesljivo, pomnoževalno in priročno pripravo vzorca.

Stopite v stik z nami in nam povejte o vaših bioloških vzorcih in potrebnih korakih priprave. Predlagali vam bomo najbolj primerno ultrazvočno napravo za pripravo vzorcev in vam pomagali z dodatnimi informacijami, kot so protokoli in priporočila.

The table below gives you an indication of the approximate processing capacity of our ultrasonic systems from ultrasonic micro-tips and classic ultrasonic homogenizers to MultiSample ultrasonicators for the convenient, reliable preparation of numerous samples:

serija Volume Pretok Priporočena naprave
96-dobro / mikrotiter plošče ni podatkov UIP400MTP
10 vial 0,5 do 1,5 ml ni podatkov VialTweeter na UP200St
CupHorn za posredno sonication, npr. ni podatkov UP200St_TD_CupHorn
0.01 do 250mL 5 do 100mL/min UP50H
0.01 do 500mL 10 do 200 ml / min UP100H
0.02 do 1L 20 do 400ml / min UP200Ht / UP200St
10 do 2000 ml 20 do 400ml / min UP200Ht, UP400St
00,25 do 5L 0.05 do 1L/min UIP500hdT

Kontaktiraj nas! / Vprašajte nas!

Vprašajte za več informacij

Prosimo, uporabite spodnji obrazec, da zahteva dodatne informacije o ultrazvočni procesorji, aplikacije in ceno. Mi bo z veseljem razpravljali vaš proces z vami in vam ponudimo ultrazvočni sistem, ki izpolnjuje vaše zahteve!









Prosimo, upoštevajte naše Politika zasebnosti.


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Ultrazvočna enota za pripravo več vzorcev VialTweeter omogoča hkratno sonikacijo do 10 vial. S priklopno napravo VialPress lahko do 4 dodatne cevi pritisnete na sprednjo stran za intenzivno sonication.

Literatura/reference



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrazvočne visoke zmogljivosti! Hielscherjeva paleta izdelkov zajema celoten spekter od kompaktnega laboratorijskega ultrazvočnikatorja nad enotami na vrhu klopi do polnoindustrijskih ultrazvočnih sistemov.


Dejstva je treba vedeti

Metabolomika

Metabolomics is the study of small molecules, known as metabolites, present within cells, biofluids, tissues or organisms. These small molecules and their interactions within a biological system are summarized under the umbrella term “metabolome” and the research field is called metabolomics. The metabolome research is closely connected with the rapidly emerging field of precision medicine. The understanding of the metabolome and its relation to various diseases helps to develop disease prevention and clinical care strategies whilst individual variability in environment, lifestyle, genetics, and molecular phenotype. In order to release metabolite molecules from cells, ultrasonication is frequently used in biological laboratories for pre-analytical sample preparation such as cell disruption, lysis and the extraction of proteins, lipids and other molecules.