Hielscher Ultrazvočna tehnologija

Protokol za inaktivacijo koronavirusa SARS-CoV-2 s sonication

Hielscher VialTweeter je edinstvena ultrazvočna več-vzorčna pripravljalna enota, ki se uporablja za inaktiviranje koronavirusnega SARS-COV-2. VialTweeter omogoča hkratno pripravo do 10 vzorčnih vial in je zato idealna enota za množično obdelavo vzorcev.

Inaktivacija koronavirusa SARS-CoV-2 z VialTweeterjem

Po odstranitvi fiksacije so enoslojne plasti trikrat oprali s fosfatno buffered saline (PBS), preden so strgali celice v 1mL MEM/5% FBS in sonicirali (3 × 10 sekund na, 10 sekund off pri 100% moči in amplitude) z uporabo Hielscher ultrazvočnega procesorja UP200St z VialTweeter Prilogo. Supernatante so pojasnili s centrifugom pri 3000 × g za 10 min. 

Celoten protokol za inaktivacijo koronavirusa SARS-CoV-2 preberite spodaj:

Celice in virus

Celice Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) je bil kultivran v spremenjenem Orlovem minimalnem bistvenem mediju (MEM), ki je bil dopolnjen z 10 % (v/v) serumom plodnega teleta (FCS). Uporabljeni virus je bil SEV SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, ki ga je phE izoliran iz prvega grozda bolnikov v Združenem kraljestvu dne 29.01.2020. Ta virus je bil pridobljen v prehodu 1 in se je uporabljal za inaktivacijo v prehodu 2 ali 3.
Za reagente in kemikalije, ki se uporabljajo za inaktivacijo SARS-CoV-2, kot tudi odstranitev citotoksičnosti reagenta glejte znanstveno poročilo zdravila Welch et al. (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Inaktivacija virusa s detergenti – SARS-CoV-2 Coronavirus inactivation protocol by Welch et al. 2020

Inaktivacija SARS-CoV-2

Za komercialne izdelke, pripravki za viruse (tekočina za kulturo tkiv, titerji v razponu od 1 × 106 do 1 × 108. PFU/ml) so zdravili v triplikatih z reagenti v koncentracijah in za kontaktne čase, priporočene v navodilih proizvajalcev za uporabo, kadar je to na voljo, ali za koncentracije in čase, ki so jih posebej zahtevali preskusni laboratoriji. Kadar je proizvajalec dal vrsto koncentracij, je bilo testirano najnižje razmerje med proizvodom in vzorcem (to je najnižja priporočena koncentracija preskusnega izdelka). Reagenti transportnih cevi za vzorce so bili testirani z razmerjem med eno prostornino tekočine za kulturo tkiva in deset volumni reagenta, razen če je proizvajalec določil razmerje volumna vzorčne tekočine in reagenta. Detergenti, fiksative in topila so bili testirani v navedenih koncentracijah za navedene čase. Vsi koraki inaktivacije so bili izvedeni pri sobni temperaturi okolja (18 – 25 °C). Za testiranje alternativnih vrst vzorcev je bil virus zasukan v indicirano vzorčno matriko v razmerju 1:9, nato pa so ga obdelali s preskusnimi reagenti kot zgoraj. Vsi poskusi so vključevali trilikate kontrolne vzorce, obdelane z mock, z enakovredno prostornino PBS kot preskusni reagent. Takoj po potrebnem času stika je bilo 1 ml obdelanega vzorca obdelano z ustrezno izbrano filtracijo. Odstranitev reagenta za testiranje inaktivacije je bila izvedena v večjem formatu spin stolpca z uporabo Ožemalnih stolpcev za odstranjevanje detergenta Pierce 4mL (Thermo Fisher) ali z polnjenjem praznih stolpcev centrifuge zmogljivosti Pierce 10mL (Thermo Fisher) z bio-kroglice SM2, Sephacryl S-400HR or Sephadex LH-20 da da 4mL pakirane peads/smole. Za čiščenje s filtri Amicon je bilo 2 × 500μl vzorcev očiščenih z uporabo dveh centrifugalnih filtrov po predhodno opisani metodi, nato pa se je združilo skupaj. Za formaldehid in formaldehid z odstranitvijo glutaraldehida je bil uporabljen en filter z 1× 500μl volumna vzorca, ki se je ponovno uporabil po predelavi v 500μl PBS in dodal 400ul MEM/5% FBS. Za inaktivacijo okuženih VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STenoslojne, 12,5 cm2 bučke celic Vero E6 (2,5 × 106 2,5 ml MEM/5% FBS) so okužili pri MOI 0,001 in inkubatorji pri 37 °C/5% CO2 24 ur. Supernatant je bil odstranjen in celice, fiksne s 5mL formaldehida ali formaldehida in glutaraldehida pri sobni temperaturi 15 ali 60 minut. Fiksative je bil odstranjen in monolaje trikrat oprane s PBS pred strganjem celic v 1mL MEM/5% FBS in sonicated (3 × 10 sekund na, 10 sekund off pri 100% moči in amplitude) z uporabo UP200St z VialTweeter prilogo (Hielscher Ultrasound Technology). Supernatante so pojasnili s centrifugom pri 3000 × g za 10 min.

VialTweeter za intenzivno ultrazvočno razbijanje zaprtih vial

VialTweeter za intenzivno sonication zaprtih vial

Prošnja za informacije




Upoštevajte naše Politika zasebnosti.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Podrobnosti reagenta, ki se uporablja za inaktivacijo koronavirusa SARS-CoV-2 z ultrazvočnim VialTweeterjem v skladu s protokolom Welch et al. 2020

Celoten protokol, vključno z uporabo Hielscher VialTweeter, lahko najdete tukaj:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter za ultrazvočno inaktivacijo virusa

Prednosti VialTweeter na prvi pogled

  • Sonication do 10 vial hkrati
  • Brez navzkrižne kontaminacije
  • Ni izgube vzorca
  • Samodejno snemanje podatkov
  • Enostavna in varna za delovanje
Zdravilo VialTweeter se uporablja tudi za

  • Celično lizo
  • Motnje virusnih delci
  • Ekstrakcija jedrne kisline: izoliranje DNK/RNK
  • Razdrobljenost DNK/RNK
  • Topnost lysata
  • Prefinjen ultrazvočni dismembratorji in celični motilci

    Multi-vzorec ultrasonicator VialTweeter je le ena od mnogih ultrazvočnih rešitev za pripravo vzorca v bioloških, biokemičnih in kliničnih laboratorijih. Hielscher Ultrasonics ponuja idealen ultrazvočni dismembrator za vašo aplikacijo, npr. celično lizo, ekstrakcijo celic, homogenizacijo tkiva, topljivost lisata, raztapljanje, razpihanje vzorcev itd.
    Povejte nam, koliko vzorcev morate obdelati na uro in dan, če imate raje neposredno ali posredno sonication in kaj je cilj ultrazvočne obdelave vzorcev. Priporočamo vam najbolj primerno ultrazvočno enoto za vašo vsakodnevno delovno rutino!
    Hielscher Ultrasonics digitalni ultrazvočni procesorji so opremljeni s pametno programsko opremo, samodejno snemanje podatkov, enostavno prednastavitev možnosti za nadzor temperature, trajanje sonication, cikel / impulz način, kot tudi vzorčno osvetlitev in brskalnik daljinski upravljalnik. Prizadevamo si, da bi naše ultrazvočne naprave čim bolj pametne, tako da vaše raziskave in delovne rutine postanejo čim bolj priročne in uspešne.
    Kliknite tukaj, da bi našli več aplikacij, vključno s protokoli ultrazvočne priprave vzorca z VialTweeter!

    Kontaktiraj nas! / Vprašajte nas!

    Vprašajte za več informacij

    Prosimo, uporabite spodnji obrazec, da zahteva dodatne informacije o ultrazvočni procesorji, aplikacije in ceno. Mi bo z veseljem razpravljali vaš proces z vami in vam ponudimo ultrazvočni sistem, ki izpolnjuje vaše zahteve!









    Prosimo, upoštevajte naše Politika zasebnosti.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics proizvaja visoko zmogljivost ultrazvočnih homogenizatorjev za mešanje aplikacij, disperzijo, emulgiranje in ekstrakcijo na lab, pilot in industrijske lestvice.

    Literatura/reference



    Dejstva je treba vedeti

    Kaj so Vero Cells?

    Vero E6, znan tudi kot Vero C1008 (ŠT. CRL-1586) je celična linija klonov iz Vero 76 in se uporablja pri raziskavah koronavirjev SARS-CoV in SARS-CoV-2. Vero celice so vrsta celic, ki se uporabljajo v celičnih kulturah. "Vero"’ iz ledvičnih epitelnih celic, ki so jih izvlekli iz afriške zelene opice (Chlorocebus sp.).
    Celice Vero E6 kažejo nekaj kontaktne inhibicije, zato so primerne za razmnoževanje virusov, ki se počasi replicirajo. Celične linije Vero E6 se pogosto uporabljajo za preiskavo citopatologije koronavirusov SARS-CoV in SARS-CoV-2 kot Vero celice (afriške zelene opičje ledvične celice) izkažejo obilen izraz angiotenzin-konvertivnega encima 2 (ACE2) receptorjev. ACE2 receptorji so glavno mesto priklanjanja za koronavirus SARS-CoV-2.
    Na primer, Ogando et al. (2020) je ugotovil, da je SARS-CoV-2 – v primerjavi s SARS-CoV – ustvarila višje ravni znotrajcelijo virusne RNK, vendar je bilo presenetljivo približno 50-krat manj nalezljivega virusnega potomca pridobljeno iz kulturnega medija. Poleg tega so ugotovili, da je občutljivost dveh virusov na tri uveljavljene zaviralce koronavirusne replikacije (Remdesivir, Alisporivir in klorokin) zelo podobna, vendar je bila okužba s SARS-CoV-2 bistveno bolj občutljiva na predhodno zdravljenje celic s pegiliranim interferonom alfa. Pomembna razlika med virusoma je dejstvo, da je – po prehodu v celicah Vero E6 – SARS-CoV-2 je očitno pod močnim izbirnim pritiskom, da pridobi prilagodljive mutacije v svojem genu spike proteina. Te mutacije spreminjajo ali brišejo kuritivno "furin podobno mesto dekolteja" v regiji, ki povezuje domene S1 in S2 in povzročijo zelo vidno fenotipsko spremembo v plakovnih preskusih.