Hielscher Ultrazvočna tehnologija

Celična lyza bl21 celic z ultrasonication

BL21 celice so sev E. coli, ki se pogosto uporablja v raziskovalnih laboratorijih, biotehnologiji in industrijski proizvodnji zaradi svoje zmožnosti za izražanje beljakovin zelo učinkovito. Ultrazvočna motnja celic, lysis in ekstrakcija beljakovin je skupna metoda za izoliranje in zbiranje ciljnih beljakovin iz celične notranjosti BL21 celic. Ultrasonication moti celico v celoti in sprošča vse zajete beljakovine, zaradi česar je 100% beljakovin na voljo.

BL21 Celice za izražanje beljakovin

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 celica je kemično usposobljen bakterijski sev E. coli, primeren za transformacijo in visoko raven izražanja beljakovin z uporabo indukcijskega sistema T7 RNA polimeraze-IPTG. BL21 celice omogočajo visokoučinkovito izražanje beljakovin katerega koli gena, ki je pod nadzorom nosilca T7. Sev E. coli BL21(DE3) je sev beljakovin na osnovi T7 RNA polimeraze v kombinaciji z vektorji izrazov, ki temeljijo na T7, in se v laboratorijih in industriji široko uporablja za proizvodnjo rekombinantnih beljakovin. V BL21(DE3) je izraz gena, ki kodira rekombinantno beljakovino, transkribirana s kromosomsko kodirana T7 RNK polimeraza (T7 RNAP), ki se prenaša osemkrat hitreje od običajne E. coli RNAP. Zaradi tega je sev BL21(DE3) zelo učinkovit in ga spremeni v enega najbolj želenih proteinskih izraznih celičnih sistemov.

Protokol za ultrazvočno lyzo in ekstrakcijo beljakovin iz CELIC BL21

Celična lyza celic BL21 se večinoma izvaja z ultrasonikacijo v kombinaciji z natrijevim lauroil sarkozinat (znan tudi kot sarkosil) kot odbojnik za lizo. Prednosti ultrazvočne motnje celic in ekstrakcije beljakovin ležijo v zanesljivosti, razmnoževanju kot tudi preprostem, varnem in hitrem delovanju ultrazvočnihtorjev. Spodnji protokol daje smer po korakih za ultrazvočno BL21 celično lyzo:

Sonda tipa insonifier UP200St za lizo

Ultrazvočni celični motilec UP200St z mikro-konico S26d2 za pridobivanje lyze in beljakovin

Prošnja za informacije




Upoštevajte naše Politika zasebnosti.


  • Da bi odstranili beljakovine iz pragona, so bili bakterijski peleti BL21 ponovno na voljo v 50 ml ledu hladnega natrijevega tris-EDTA (STE) puferja (sestavljen iz 10 mM Tris-HCL, pH 8,0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, ki je dopolnjen s 100 mM PMSF).
  • Doda se 500 ul lysozyma (10 mg/ ml), celice pa se inkubujejo na ledu 15 min.
  • Nato se doda 500 ul DTT in 7 ml sarkosila (10% (w/v) iz ste puferja.
  • Nujno je, da ostanejo vsi odbojniki za čiščenje ledeno hladni in da se vzorci ves čas vzdržujejo na ledu. Če je mogoče, je treba v hladnem prostoru izvesti vse korake za čiščenje.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Za ultrazvočno izvlečenje in ekstrakcijo beljakovin so vzorci razčlenjeni v VialTweeter MultiSample Ultrasonicator 4 x 30 sek na 100% amplitude z 2 min intervalom med vsako sonication. Ultrazvočni homogenizer tipa sonde z mikro-konico, npr. UP200Ht s S26d2 (3 x 30 sek, 2 min. premor med ultrazvočnimi cikli, 80% amplitude) se lahko uporablja.
  • Za nadaljnje korake prečiščevanja je treba vzorce hraniti na ledu ali pa jih do nadaljnje obdelave hraniti na -80 °C.

Ultrazvočna lysis pod natančno kontrolo temperature

Pri rokovanju z biološkimi vzorci je ključnega pomena natančna in zanesljiva kontrola temperature. Visoke temperature sprožijo termo-inducirana razgradnja beljakovin v vzorcih.
Kot vse mehanske tehnike priprave vzorcev, sonication ustvarja toploto. Vendar pa je pri uporabi zdravila VialTweeter temperatura vzorcev lahko dobro nadzorovana. Predstavljamo vam različne možnosti za spremljanje in nadzor temperature vaših vzorcev, medtem ko jih pripravljate z VialTweeter in VialPress za analizo.

  1. Spremljanje temperature vzorca: Ultrazvočni procesor UP200St, ki vozi VialTweeter, je opremljen z inteligentno programsko opremo in vtičnim senzorjem temperature. Senzor temperature priključite v UP200St in vstavite konico temperaturnega tipala v eno od vzorčnih cevi. Z digitalnim barvnim zaslonom na dotik lahko v meniju UP200St nastavite določen temperaturni razpon za vzorčenje. Ultrasonicator se samodejno ustavi, ko doseže največjo temperaturo in ustavi, dokler temperatura vzorca ne pade na nižjo vrednost nastavljene temperature ∆. Nato se sonication začne samodejno znova. Ta pametna funkcija preprečuje degradacijo, ki jo povzroči toplota.
  2. Blok VialTweeter se lahko predhodno ohladi. Blok VialTweeter (samo sonotrode brez pretvornika!) dajte v hladilnik ali zamrzovalnik, da se blok titana pred hlajenjem preloži pri preložitvi dviga temperature v vzorcu. Če je mogoče, se lahko tudi sam vzorec predhodno ohladi.
  3. Med sonikacijo uporabite suhi led. Uporabite plitvi pladenj, napolnjen s suhim ledom, in postavite VialTweeter na led, da lahko toplota hitro izpušča.

Stranke po vsem svetu uporabljajo VialTweeter in VialPress za vsakodnevno pripravo vzorcev v bioloških, biokemičnih, medicinskih in kliničnih laboratorijih. Inteligentna programska oprema in nadzor temperature procesorja UP200St, temperatura je zanesljivo nadzorovana in toplotno povzročeni razgradnja vzorca izogiba. Ultrazvočni vzorec priprava z VialTweeter in VialPress prinaša zelo zanesljive in pomnoževalne rezultate!

Poiščite optimalen ultrazvočni motilec za aplikacijo za lysis

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics je že dolgo izkušen proizvajalec visoko zmogljičnih ultrazvočnih celičnih motilcev in homogenizatorjev za laboratorije, sisteme na vrhu klopi in industrijske lestvice. Vaša velikost bakterijske celične kulture, vaš cilj raziskav ali proizvodnje in prostornina celice za proces na uro ali dan so bistveni dejavniki, da najdete pravi ultrazvočni motilec celic za vašo aplikacijo.
Hielscher Ultrasonics ponuja različne rešitve za hkratno sonikacijo več vzorcev (do 10 vial z VialTweeter) in masnih vzorcev (npr. Mikrotiterske ploče / ELISA ploče s UIP400MTP), te klasični ultrasonikator sonde tipa laboratorija s različitim nivoom napajanja od 50 do 400 vata do popolnoma industrijskih ultrazvočnih procesora s do 16.000watta po enoti za omembo komercialnih celica i ekstrakcije proteina u velikim proizvodnjama. Vsi Hielscher ultrasonicatorji so zgrajeni za operacijo 24/7/365 pod polno obremenitvijo. Robustnost in zanesljivost sta osrednji značilnosti naših ultrazvočnih naprav.
Vsi digitalni ultrazvočni homogenizatorji so opremljeni s pametno programsko opremo, barvnim zaslonom na dotik in samodejnim protokolom podatkov, zaradi česar je ultrazvočna naprava v priročno delovno orodje v laboratorijih in proizvodnih objektih.
Povejte nam, kakšne celice, kakšen volumen, s kakšno frekvenco in s kakšnim ciljem morate obdelati svoje biološke vzorce. Priporočamo vam najbolj primeren ultrazvočni celični motilec za vaše procesne zahteve.

Spodnja tabela vam prikazuje približno zmogljivost obdelave naših ultrazvočnih sistemov od kompaktnih ročnih homogenizatorjev in MultiSample Ultrasonicators do industrijskih ultrazvočnih procesorjev za komercialne aplikacije:

serija Volume Pretok Priporočena naprave
96-dobro / mikrotiter plošče ni podatkov UIP400MTP
10 vial 0,5 do 1,5 ml ni podatkov VialTweeter na UP200St
0.01 do 250mL 5 do 100mL/min UP50H
0.01 do 500mL 10 do 200 ml / min UP100H
10 do 2000 ml 20 do 400ml / min UP200Ht, UP400St
00,1 do 20L 00,2 do 4L / min UIP2000hdT
10 do 100L 2 do 10L / min UIP4000hdT
ni podatkov 10 do 100L / min UIP16000
ni podatkov večja gruča UIP16000

Kontaktiraj nas! / Vprašajte nas!

Vprašajte za več informacij

Prosimo, uporabite spodnji obrazec, da zahteva dodatne informacije o ultrazvočni procesorji, aplikacije in ceno. Mi bo z veseljem razpravljali vaš proces z vami in vam ponudimo ultrazvočni sistem, ki izpolnjuje vaše zahteve!









Prosimo, upoštevajte naše Politika zasebnosti.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrazvočni UP200Ht z 2mm mikrotip S26d2 za sonication majhnih vzorcev

Literatura/reference



Dejstva je treba vedeti

Bakterije Escherichia Coli

Escherichia coli je vrsta bakterij, ki ni sporno tvorba, Gram-negativna in je značilna njegova oblika ravne palice. Bakterije E.coli so prisotne v okolju, živilih in črevesju ljudi in živali. E. coli je običajno gibljiv z uporabo peritrichous flagella, vendar obstajajo nemotilne vrste, preveč. E.coli so tako imenovani fakultetno anaerobni kemorganotrofni organizmi, kar pomeni, da so sposobni tako dihalnega kot fermentativnega metabolizma. Večina vrst E.coli je benignih in izpolnjuje koristne funkcije v telesu, npr. zatiranje rasti škodljivih bakterijskih vrst, sintezo vitaminov itd..
Bakterijska celica Escherichia coli tako imenovanega tipa B je posebna kategorija sevov E.coli, ki se pogosto uporabljajo v raziskavah za raziskovanje mehanizmov, kot so občutljivost za bakterije ali sistemi za spreminjanje omejitev. Poleg tega se bakterije E.coli vrednotijo kot zanesljivi delovni konjeniki za izražanje beljakovin v laboratorijih biotehnologije in znanosti o življenju. Na primer, E.coli se uporablja za sintezo spojin, kot so beljakovine in oligosaharidi v industrijskem obsegu. Zaradi specifičnih lastnosti, kot so pomanjkanje proteaze, nizka proizvodnja acetata na visoki ravni glukoze in povečana premostitev, E. coli B celice so najpogosteje uporablja gostiteljske celice za proizvodnjo gensko inženiring proteinov.

Rekombinantne beljakovine

Rekombinantne beljakovine (rProt) pridobivajo pomemben pomen v različnih vejah, vključno s kemično proizvodnjo, farmacevtsko, kozmetično, humano in živalsko medicino, kmetijstvom, živili in industrijo obdelave odpadkov.
Za proizvodnjo rekombinantnih beljakovin je potrebna uporaba ekspresivnega sistema. Kot izražanje celičnih sistemov za proizvodnjo rekombinantne DNK, se lahko uporabljajo tako prokariotične kot evkariotične celice. Medtem ko se bakterijske celice najpogosteje uporabljajo za izražanje beljakovin zaradi dejavnikov, kot so nizki stroški, enostavna skalabilnost in enostavne medijske razmere, sesalci, kvas, alge, insekti in sistemi brez celic so vzpostavljene alternative. Vrsta beljakovin, funkcionalna aktivnost, kot tudi zahtevani donos izraženih beljakovin vplivajo na izbiro celičnih sistemov, ki se uporabljajo za izražanje beljakovin.
Da bi izrazili rekombinantne beljakovine, je treba določeno celico transfekcijo z vektorjem DNK, ki vsebuje predlogo rekombinantne DNK. Celice, ki so prevažene s predlogo, so nato kulturene. Kot posledica celičnih mehanizmov celice transcrib in prevajajo beljakovine interesa, s čimer proizvajajo ciljno beljakovino.
Ker so izražene beljakovine vtisnjene v celično matriko, je treba celico lysed (motiti in zlomiti) za sproščanje beljakovin. V koraku, ki sledi očiščenju, se beljakovina loči in prečisti.
Prvi rekombinantni protein, uporabljen pri zdravljenju, je bil rekombinantni humani insulin leta 1982. Danes se več kot 170 vrst rekombinantnih beljakovin proizvaja po vsem svetu za medicinska zdravljenja. Pogosto uporabljene rekombinantne beljakovine, ki se uporabljajo v medicini, so na primer rekombinantni hormoni, interferoni, interlevkinsi, rastni dejavniki, dejavniki nekroze tumorja, faktorji strjevanja krvi, trombolitična zdravila, i encime za lečenje velikih bolezni, na primer, diabetesa, patuljka, infarkta miokardi, kongestivnog zatajenja srca, cerebralne apopleksije, multipla skleroza, neutropenija, trombocitopenija, anemija, hepatitis, reumatoidni artritis, astma, Crohnova bolezen, i terapije raka. (prim. Phuc V. Pham, v Omics Technologies in Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrazvočne visoke zmogljivosti! Hielscherjeva paleta izdelkov zajema celoten spekter od kompaktnega laboratorijskega ultrazvočnikatorja nad enotami na vrhu klopi do polnoindustrijskih ultrazvočnih sistemov.