Puferske raztopine, pripravljene z ultrasonicacijo
Lizni pufri se lahko učinkovito in hitro pripravijo z uporabo ultrazvočnih tkivnih homogenizatorjev. Ker so ultrazvočni aparati sanjsko orodje za mešanje, raztapljanje in razprševanje, omogočajo zanesljivo in uporabniku prijazno pripravo liznih pufrov.
Ultrazvočna priprava liznih pufrov
Ultrazvočni homogenizatorji tkiv so običajno orodje za motnje celic, lizo in ekstrakcijo, zato so na voljo v večini laboratorijev. Sekundarna uporaba ultrazvočnih sond je priprava liznih pufrov.
Lizni pufer je raztopina, ki se uporablja za razbijanje (liznih) celic in sprostitev njihove vsebine za nadaljnjo analizo. Specifična sestava pufra za lizo se lahko razlikuje glede na vrsto celic, ki se lizirajo, in nadaljnjo uporabo. Vendar pa tipičen pufer za lizo vsebuje sestavine, kot so detergenti, soli in zaviralci proteaze. Puferske soli (npr. Tris-HCl) in ionske soli (npr. NaCl) se običajno uporabljajo za uravnavanje pH in osmolarnosti lizata.
Za pripravo pufra za lizo se sestavine zmešajo v ustreznih koncentracijah in pH. Zmes se običajno meša ali stresa, dokler se sestavine ne raztopijo in raztopina ni homogena.
Ultrazvočna homogenizacija je metoda, ki jo lahko uporabimo za pomoč pri izdelavi dobrega pufra za lizo z izboljšanjem mešanja in raztapljanja komponent. Pri tej metodi ultrazvočni valovi – običajno v območju od 20 do 30 kHz – se nanesejo na mešanico, ki ustvarja kavitacijske mehurčke, ki se zrušijo in ustvarijo intenzivno lokalno energijo, kar vodi do mehanskega striženja in mešanja komponent.
Postopek ultrazvočne homogenizacije lahko pomaga razbiti vse grudice ali agregate komponent in zagotoviti, da se raztopina enakomerno zmeša. Posledično lahko takšen izboljšan pufer za lizo privede do učinkovitejših motenj celic in večjih donosov ekstrahiranega materiala. Poleg tega lahko ultrazvočna homogenizacija skrajša čas, potreben za izdelavo pufra za lizo v primerjavi s tradicionalnimi metodami mešanja ali tresenja.
Na splošno je ultrazvočna homogenizacija močno orodje za izboljšanje kakovosti in učinkovitosti priprave pufra za lizo.

Ultrazvočni laboratorijski homogenizator UP200Ht je priljubljen v raziskovalnih laboratorijih za pripravo vzorcev, lizo, ekstrakcijo, fragmentacijo in raztapljanje DNK.
Protokol za pripravo ultrazvočnega pufra za lizo
To je splošni protokol za izdelavo liznega pufra z uporabo ultrazvočnega zvočnega aparata tipa sonde:
Materiali:
- Detergenti po izbiri (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Sol (soli) po izbiri (npr. NaCl, KCl)
- Zaviralci proteaze (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
- ultrazvočni aparat
- Mešalo
- Deionizirana voda
- pH meter ali pH trakovi
Navodila po korakih:
- Določite sestavo pufra za lizo na podlagi celic ali tkiva, ki jih boste lizirali, in nadaljnjih aplikacij, za katere boste uporabljali lizat. Pripravite osnovne raztopine detergentov, soli in zaviralcev proteaze v želenih koncentracijah.
- Osnovne raztopine detergentov, soli in zaviralcev proteaze dodamo v čašo ali bučko.
- Dodamo deionizirano vodo, da se volumen poveča na želeno količino pufra.
- Sestavine zmešamo z mešalom, da dobimo raztopino za predhodno mešanje.
- Izmerite pH pufra s pH-metrom ali pH trakovi in po potrebi prilagodite pH z majhnimi količinami kisline ali baze.
- Ultrazvočni aparat s sondo homogenizira raztopino predmešanja, tako da dobimo zelo homogeno raztopino. Zato raztopino nekaj sekund sonikirajte, dokler raztopina ni temeljito premešana in se vse grudice ali agregati razgradijo. Trajanje in moč ultrazvočnega razbijanja je mogoče optimizirati na podlagi specifičnega pufra za lizo in uporabljenega ultrazvočnega aparata.
- Po ultrazvočni obdelavi ponovno izmerite pH pufra in ga po potrebi prilagodite.
- Pufer filtrirajte skozi 0,2 mikronski filter, da odstranite vse ostanke ali agregate, ki so morda nastali med ultrazvočnim razbijanjem.
- Pufer za lizo je zdaj pripravljen za uporabo.
Opomba: Natančna sestava in pH pufra za lizo se lahko razlikujeta glede na celice ali tkiva, ki se lizirajo, in nadaljnjo uporabo. Zgornji protokol je splošna smernica in ga bo morda treba optimizirati za posebne aplikacije.
Ultrazvočni homogenizatorji se običajno uporabljajo za motnje celic in ekstrakcijo znotrajceličnih molekul. Zato številne aplikacije za lizo uporabljajo sondno ultrazvočno razbijanje ne samo za pripravo pufra za lizo, ampak tudi za mehanske motnje celic in ekstrakcijo.
Zaradi tega so ultrazvočni homogenizatorji tkiva vsestransko orodje za laboratorije in pojasnjujejo široko uporabo ultrazvočnih aparatov v mikrobiologiji, biotehnologiji in znanosti o življenju.
Ultrazvočni laboratorijski homogenizatorji
Hielscher Ultrasonics proizvaja in dobavlja ultrazvočne homogenizatorje in sonde (sonotrode) z različnimi močmi in volumni vzorcev. To nam omogoča, da vam ponudimo najprimernejši ultrazvočni motilec za pripravo vzorca. Osredotočeni smo na najvišjo kakovost, izjemno udobje uporabnika in zanesljive rezultate ultrazvočne obdelave. Vsi digitalni ultrazvočni aparati imajo pametno programsko opremo, programiranje in prednastavitev ultrazvočnih protokolov, daljinski upravljalnik brskalnika, nadzor temperature, osvetlitev vzorca in samodejno snemanje podatkov na vgrajeno SD kartico.
Projektiranje, izdelava in svetovanje – Kakovost izdelana v Nemčiji
Hielscher ultrazvočni aparati so znani po svojih najvišjih standardih kakovosti in oblikovanja. Robustnost in enostavno upravljanje omogočata nemoteno integracijo naših ultrazvočnih aparatov v industrijske objekte. Težke pogoje in zahtevna okolja zlahka obvladajo Hielscher ultrasonicatorji.
Hielscher Ultrasonics je podjetje s certifikatom ISO in daje poseben poudarek visoko zmogljivim ultrazvočnim aparatom z najsodobnejšo tehnologijo in prijaznostjo do uporabnika. Seveda so Hielscher ultrazvočni aparati skladni s CE in izpolnjujejo zahteve UL, CSA in RoHs.
Spodnja tabela vam daje pregled naših različnih laboratorijskih ultrazvočnih aparatov:
VialTweeter na UP200St | 200W | 26kHz | ultrazvok majhnih vial, npr. Eppendorf 1,5 ml |
UP50H | 50W | 30kHz | ročni ali stoječi laboratorijski homogenizator |
UP100H | 100W | 30kHz | ročni ali stoječi laboratorijski homogenizator |
UP200Ht | 200W | 26kHz | ročni ali stoječi laboratorijski homogenizator |
UP200St | 200W | 26kHz | Stoječi laboratorijski homogenizator |
UP400St | 400W | 24kHz | Stoječi laboratorijski homogenizator |
SonoStep | 200W | 26kHz | Kombiniranje laboratorijskih reaktorjev, ultrazvok, črpalka, mešalo in posoda |
GDmini2 | 200W | 26kHz | pretočna celica brez kontaminacije |
Cuphorn | 200W | 26kHz | intenzivna ultrazvočna kopel za viale in čaše |
UIP400MTP | 400W | 24kHz | Ultrazvočni sistem za plošče z več vdolbicami? mikrotitro plošče |

Ultrazvočni CupHorn za intenzivno ultrazvočno razbijanje zaprtih epruvet in vial za sterilno homogenizacijo vzorcev.
Kontaktirajte nas! / Vprašajte nas!

Ultrazvočni laboratorijski homogenizator UP400St se običajno uporablja za pripravo pufra za lizo in kasnejšo motnjo celic.
Literatura / Reference
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.

Hielscher Ultrasonics proizvaja visoko zmogljive ultrazvočne homogenizatorje iz laboratorij k industrijska velikost.