Puferske raztopine, pripravljene z ultrasonicacijo

Lizni pufri se lahko učinkovito in hitro pripravijo z uporabo ultrazvočnih tkivnih homogenizatorjev. Ker so ultrazvočni aparati sanjsko orodje za mešanje, raztapljanje in razprševanje, omogočajo zanesljivo in uporabniku prijazno pripravo liznih pufrov.

Ultrazvočna priprava liznih pufrov

Ultrazvočni homogenizatorji tkiv so običajno orodje za motnje celic, lizo in ekstrakcijo, zato so na voljo v večini laboratorijev. Sekundarna uporaba ultrazvočnih sond je priprava liznih pufrov.

Lizni pufer je raztopina, ki se uporablja za razbijanje (liznih) celic in sprostitev njihove vsebine za nadaljnjo analizo. Specifična sestava pufra za lizo se lahko razlikuje glede na vrsto celic, ki se lizirajo, in nadaljnjo uporabo. Vendar pa tipičen pufer za lizo vsebuje sestavine, kot so detergenti, soli in zaviralci proteaze. Puferske soli (npr. Tris-HCl) in ionske soli (npr. NaCl) se običajno uporabljajo za uravnavanje pH in osmolarnosti lizata.
Za pripravo pufra za lizo se sestavine zmešajo v ustreznih koncentracijah in pH. Zmes se običajno meša ali stresa, dokler se sestavine ne raztopijo in raztopina ni homogena.
Ultrazvočna homogenizacija je metoda, ki jo lahko uporabimo za pomoč pri izdelavi dobrega pufra za lizo z izboljšanjem mešanja in raztapljanja komponent. Pri tej metodi ultrazvočni valovi – običajno v območju od 20 do 30 kHz – se nanesejo na mešanico, ki ustvarja kavitacijske mehurčke, ki se zrušijo in ustvarijo intenzivno lokalno energijo, kar vodi do mehanskega striženja in mešanja komponent.
Postopek ultrazvočne homogenizacije lahko pomaga razbiti vse grudice ali agregate komponent in zagotoviti, da se raztopina enakomerno zmeša. Posledično lahko takšen izboljšan pufer za lizo privede do učinkovitejših motenj celic in večjih donosov ekstrahiranega materiala. Poleg tega lahko ultrazvočna homogenizacija skrajša čas, potreben za izdelavo pufra za lizo v primerjavi s tradicionalnimi metodami mešanja ali tresenja.
Na splošno je ultrazvočna homogenizacija močno orodje za izboljšanje kakovosti in učinkovitosti priprave pufra za lizo.

Protokol za pripravo ultrazvočnega pufra za lizo

To je splošni protokol za izdelavo liznega pufra z uporabo ultrazvočnega zvočnega aparata tipa sonde:
 
Materiali:

• Detergenti po izbiri (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sol (soli) po izbiri (npr. NaCl, KCl)
• Zaviralci proteaze (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultrazvočni aparat
• Mešalo
• Deionizirana voda
• pH meter ali pH trakovi

 
 
Navodila po korakih:

1. Določite sestavo pufra za lizo na podlagi celic ali tkiva, ki jih boste lizirali, in nadaljnjih aplikacij, za katere boste uporabljali lizat. Pripravite osnovne raztopine detergentov, soli in zaviralcev proteaze v želenih koncentracijah.
2. Osnovne raztopine detergentov, soli in zaviralcev proteaze dodamo v čašo ali bučko.
3. Dodamo deionizirano vodo, da se volumen poveča na želeno količino pufra.
4. Sestavine zmešamo z mešalom, da dobimo raztopino za predhodno mešanje.
5. Izmerite pH pufra s pH-metrom ali pH trakovi in po potrebi prilagodite pH z majhnimi količinami kisline ali baze.
6. Ultrazvočni aparat s sondo homogenizira raztopino predmešanja, tako da dobimo zelo homogeno raztopino. Zato raztopino nekaj sekund sonikirajte, dokler raztopina ni temeljito premešana in se vse grudice ali agregati razgradijo. Trajanje in moč ultrazvočnega razbijanja je mogoče optimizirati na podlagi specifičnega pufra za lizo in uporabljenega ultrazvočnega aparata.
7. Po ultrazvočni obdelavi ponovno izmerite pH pufra in ga po potrebi prilagodite.
8. Pufer filtrirajte skozi 0,2 mikronski filter, da odstranite vse ostanke ali agregate, ki so morda nastali med ultrazvočnim razbijanjem.
9. Pufer za lizo je zdaj pripravljen za uporabo.

 
Opomba: Natančna sestava in pH pufra za lizo se lahko razlikujeta glede na celice ali tkiva, ki se lizirajo, in nadaljnjo uporabo. Zgornji protokol je splošna smernica in ga bo morda treba optimizirati za posebne aplikacije.
 
Ultrazvočni homogenizatorji se običajno uporabljajo za motnje celic in ekstrakcijo znotrajceličnih molekul. Zato številne aplikacije za lizo uporabljajo sondno ultrazvočno razbijanje ne samo za pripravo pufra za lizo, ampak tudi za mehanske motnje celic in ekstrakcijo.
Zaradi tega so ultrazvočni homogenizatorji tkiva vsestransko orodje za laboratorije in pojasnjujejo široko uporabo ultrazvočnih aparatov v mikrobiologiji, biotehnologiji in znanosti o življenju.

Ultrazvočni laboratorijski homogenizatorji

Hielscher Ultrasonics proizvaja in dobavlja ultrazvočne homogenizatorje in sonde (sonotrode) z različnimi močmi in volumni vzorcev. To nam omogoča, da vam ponudimo najprimernejši ultrazvočni motilec za pripravo vzorca. Osredotočeni smo na najvišjo kakovost, izjemno udobje uporabnika in zanesljive rezultate ultrazvočne obdelave. Vsi digitalni ultrazvočni aparati imajo pametno programsko opremo, programiranje in prednastavitev ultrazvočnih protokolov, daljinski upravljalnik brskalnika, nadzor temperature, osvetlitev vzorca in samodejno snemanje podatkov na vgrajeno SD kartico.

Projektiranje, izdelava in svetovanje – Kakovost izdelana v Nemčiji

Hielscher ultrazvočni aparati so znani po svojih najvišjih standardih kakovosti in oblikovanja. Robustnost in enostavno upravljanje omogočata nemoteno integracijo naših ultrazvočnih aparatov v industrijske objekte. Težke pogoje in zahtevna okolja zlahka obvladajo Hielscher ultrasonicatorji.

Hielscher Ultrasonics je podjetje s certifikatom ISO in daje poseben poudarek visoko zmogljivim ultrazvočnim aparatom z najsodobnejšo tehnologijo in prijaznostjo do uporabnika. Seveda so Hielscher ultrazvočni aparati skladni s CE in izpolnjujejo zahteve UL, CSA in RoHs.

Spodnja tabela vam daje pregled naših različnih laboratorijskih ultrazvočnih aparatov: