α-sinukleinski fibrili in trakovi so v znanstvenih raziskavah razdrobljeni, da ustvarijo manjše fibrilne delčke ali celo posamezne proteinske molekule, ki jih je lažje analizirati z različnimi eksperimentalnimi tehnikami. VialTweeter Sonicator je eden najpogosteje uporabljenih ultrazvočnikov za učinkovito in zanesljivo fragmentacijo alfa-sinukleina.

α-sinuklein v raziskavah

Fibrile alfa-sinukleina so proteinski agregati, ki so močno povezani z nevrodegenerativnimi motnjami, kot je Parkinsonova bolezen in nekatere oblike demence, vključno z demenco z Lewyjevimi telesci. Cilj raziskav, osredotočenih na alfa-sinukleinske fibrile, je razumeti njihovo vlogo pri napredovanju bolezni in razviti potencialne terapevtske posege. Z razgradnjo alfa-sinukleinskih fibril na manjše fragmente lahko raziskovalci raziščejo njihove specifične strukturne značilnosti. Na primer, fragmentiranje alfa-sinukleinskih fibril omogoča raziskovalcem, da raziščejo njihove interakcije z drugimi molekulami, kot so beljakovine, lipidi ali majhne molekule. Z izdelavo manjših fragmentov je mogoče učinkoviteje raziskati vezavna mesta in afiniteto do teh medsebojno delujočih partnerjev. Manjše fribrile in trakovi α-Syn lahko kažejo tudi spremenjeno toksičnost in biokemične učinke. Zato je zanesljiva in učinkovita tehnika drobljenja, ki daje ponovljive rezultate za hitro in enostavno obdelavo vzorcev, ključnega pomena.
Ultrazvočna fragmentacija alfa-sinov: Sonicator VialTweeter je uveljavljen ultrazvočni sistem za pripravo vzorcev, ki hkrati pod popolnoma enakimi pogoji zvoni do 10 vial. Programabilne nastavitve omogočajo preprosto in hitro ponovno izvajanje istih poskusov, kar daje visoko zanesljive in ponovljive rezultate pri fragmentaciji fibrila alfa-sinukleina.

α-sinukleinska priprava vzorca z zvočnikom

Eden od pristopov k proučevanju alfa-sinukleinskih fibril vključuje njihovo ekstrakcijo in fragmentacijo z uporabo tehnik, kot je ultrazvočno razbijanje. Sonication je proces, ki uporablja visoko intenzivne, nizkofrekvenčne ultrazvočne valove za prekinitev in razgradnjo beljakovinskih agregatov, kar vodi do sproščanja manjših fibril ali posameznih beljakovinskih molekul. Sonikator VialTweeter je v ta namen pogosto uporabljena naprava v raziskovalnih študijah, povezanih s α-sinukleinom.

Številne raziskovalne študije opisujejo natančne protokole priprave vzorcev ultra-sinukleinskih fibril ultrazvočno razbijanje, ki uporabljajo Hielscher VialTweeter za učinkovito in zanesljivo fragmentacijo fibril α-sinukleina. Z ultrazvočnim drobljenjem fibril lahko raziskovalci analizirajo nastale produkte in preučijo njihovo strukturo, toksičnost in interakcije z drugimi molekulami. Ta raziskava zagotavlja pomemben vpogled v mehanizme, na katerih temelji nevrodegeneracija, in potencialno identificira nove terapevtske cilje. Dobro uveljavljeni α-sinukleinski zvočni protokoli, ki uporabljajo sonikator VialTweeter, omogočajo zanesljive in ponovljive rezultate.

Zgornje slike: nefragmentirane fibrile alfa-sinukleina
Spodnje slike: Ultrazvočno fragmentirane alfa-sinukleinske fibrile z zvočnikom VialTweeter
(študija in slike: ©Dieriks et al., 2022)

Ultrazvočna fragmentacija α-sinukleinskih fibril – Protokolov

Ker številni raziskovalci uporabljajo sonikator VialTweeter kot prednostno tehniko fragmentacije za izdelavo enotnih fragmentov fibrila α-sinukleina, so uveljavljeni protokoli takoj na voljo. Spodaj najdete nekaj zglednih protokolov fragmentacije.
 

 
Priprava semena ClearTau: Fibrile ClearTau so razredčili na 10 μM v dH2O in sonikirali pri 70 % amplitudi 50 s ciklom 1 s ON 1 s OFF ciklom v cevi z uporabo sonizatorja UP200St z VialTweeterjem. Za semena je bila značilna elektronska mikroskopija.
ThS merjenje fluorescence: Fibrile ClearTau so razredčili na 2,5 μM v dH2O in sonikirali pri 70 % amplitudi 50 s ciklom 1 s ON 1 s OFF ciklom v cevi z uporabo UP200St z VialTweeterjem. Kot kontrola je bil uporabljen 2,5 μM monomer Tau 4R2N celotne dolžine. 100 μl reakciji smo dodali 100 μl ThS (10 μM), tako da so končne koncentracije beljakovin znašale 1,25 μM. Enkratno točko fluorescence ThS smo izmerili z 96 dobro čistimi spodnjimi ploščami, nameščenimi v čitalniku mikroplošč FLUOstar Omega, z vzbujanjem pri 445 nm in emisijo pri 485 nm.
(prim. Limorenko et al., 2023)
 
Enotna dolžina α-sinukleina z ultrazvočno razbijanjem: Dolžinska heterogenost α-sintetnih fibril in trakov se je zmanjšala z ultrazvočno razbijanjem 20 minut na ledu v 2-ml Eppendorfovih ceveh v VialTweeterju, nastavljenem na 75% amplitude, 0,5 s impulzov.
(prim. Bousset et al., 2013)
 
Izvedena je bila kontrola kakovosti človeških rekombinantnih monomernih WT ali S129A a-Syn in fibrilarnih polimorfov, ki jih ustvarjajo, ter a-Syn 1–110. Nato so bili fibrilarni polimorfi razdrobljeni z ultrazvočnim razbijanjem 20 minut v 2-ml Eppendorfovih ceveh v ultrazvočni napravi VialTweeter, da bi ustvarili fibrilarne delce s povprečno velikostjo 42–52 nm, ki so primerni za endocitozo.
(prim. Shrivastava et al., 2020)
 

Karakterizacija petih fibrilarnih α-sinovskih polimorfov. (A) Prikazane so presevne elektronske mikrografije negativno obarvanih α-Syn fibrilarnih polimorfov, fibril, trakov, fibril-91, fibrils-65 in fibrils-110 pred (zgornji pas) in po fragmentaciji z VialTweeterjem (spodnji pas). (B) Prikazana je porazdelitev dolžine fragmentiranih fibrilarnih polimorfov. Navedeno je število (n) fibrilarnih sklopov, iz katerih so bili izpeljani histogrami.
(študija in slike: Shrivastava et al., 2020)

 
Fibrile α-Syn so bile 20 minut razdrobljene z ultrazvočno razbijanjem v 2 ml Eppendorfovih epruvetah v VialTweeterju, da so nastali fibrilarni delci povprečne velikosti 42–52 nm, kot je ocenjeno z analizo TEM.
(prim. Negrini et al., 2022)
 
Resuspendirani fibrili91 (v PBS) so bili pred dodajanjem celičnim kulturam razdrobljeni z ultrazvočno razbijanjem 20 minut v 2 ml eppendorfskih ceveh z uporabo Sonicatorja Vial Tweeter, aliquoted, bliskavica, zamrznjena v tekočem dušiku in shranjena do uporabe pri -80 ° C.
(prim. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter in laboratorijski sonikatorji za fragmentacijo α-Syn

Hielscher Ultrasonics je po vsem svetu priznan kot vodilni proizvajalec vrhunskih ultrazvočnikov. Zaupanja vredni in uveljavljeni v večjih raziskovalnih laboratorijih po vsem svetu, naši ultrazvočniki ponujajo neprimerljivo kakovost in zmogljivost za vaše kritične eksperimente.
S Hielscher VialTweeter in katerim koli drugim Hielscher zvočnikom boste doživeli neprimerljivo udobje uporabnika, saj so premišljeno zasnovani za ponovljive rezultate, enostavnost uporabe in brezhibno upravljanje. S funkcijami samodejnega snemanja podatkov se lahko osredotočite na svoje raziskave, medtem ko naši ultrazvočniki natančno beležijo ključne podatke za ponovljivost in natančnost.
Samozavestno dosezite dosledne in ponovljive rezultate!
Naši ultrazvočniki so zasnovani in izdelani v Nemčiji. Nemška natančnost in najvišja inženirska kakovost, da se zagotovi zanesljiva in natančna priprava vzorcev, kot je alfa-sinukleinska fibrilna fragmentacija vsakič. Nič več skrbi zaradi nedoslednih rezultatov - naša ultrazvočna tehnologija zagotavlja, da vaše raziskave ostajajo v ospredju znanstvenega napredka.
Ampak to še ni vse! Naša zavezanost k odličnosti presega naše izdelke. Ponosni smo na našo izjemno storitev za stranke, ki zagotavlja strokovno podporo za reševanje vseh vprašanj ali pomislekov, ki jih morda imate. Naša predana ekipa je tu, da vam pomaga na vsakem koraku vašega raziskovalnega potovanja in vam zagotovi, da boste kar najbolje izkoristili naše ultrazvočne naprave.
Izberite inovativnost, zanesljivost in izjemno uporabniško izkušnjo – izberite naše laboratorijske ultrazvočne naprave, kot je VialTweeter, za fragmentacijo fibril alfa-sinukleina. Izkoristite že uveljavljene protokole in se pridružite vrstam vodilnih raziskovalcev, ki zaupajo naši tehnologiji za njihove kritične študije. Dvignite svoje raziskave in raziščite nove meje v raziskavah demence in nevrodegenerativnih bolezni z našimi najsodobnejšimi ultrazvočniki.

Oblikovanje, izdelava in svetovanje – Kakovost izdelana v Nemčiji

Hielscher ultrasonicatorji so dobro znani po svojih najvišjih standardih kakovosti in oblikovanja. Robustnost in enostavno delovanje omogočata nemoteno vključitev naših ultrazvočnihtorjev v industrijske objekte. Z grobimi pogoji in zahtevnimi okolji lahko ravnajo Hielscher ultrasonicatorji.

Hielscher Ultrasonics je podjetje s certifikatom ISO in daje poseben poudarek visoko zmogljivim ultrazvočnim napravam z najsodobnejšo tehnologijo in prijaznostjo do uporabnika. Seveda so Hielscher sonicatorji skladni s CE in izpolnjujejo zahteve UL, CSA in RoHs.
 
Spodnja tabela vam prikazuje približno zmogljivost obdelave naših laboratorijskih ultrazvočnikov: