Fragmentacija alfa-sinukleina z uporabo VialTweeter Sonicator
α-sinukleinske fibrile in trakovi so v znanstvenih raziskavah razdrobljeni, da bi ustvarili manjše fibrilne delčke ali celo posamezne proteinske molekule, ki jih je lažje analizirati z različnimi eksperimentalnimi tehnikami. VialTweeter Sonicator je eden najpogosteje uporabljenih ultrazvočnih aparatov za učinkovito in zanesljivo fragmentacijo alfa-sinukleina.
α-Sinuklein v raziskavah
Alfa-sinukleinske fibrile so beljakovinski agregati, ki so močno povezani z nevrodegenerativnimi motnjami, kot so Parkinsonova bolezen in nekatere oblike demence, vključno z demenco z Lewyjevimi telesi. Raziskave, osredotočene na alfa-sinukleinske fibrile, so namenjene razumevanju njihove vloge pri napredovanju bolezni in razvoju potencialnih terapevtskih posegov. Z razgradnjo alfa-sinukleinskih fibril na manjše fragmente lahko raziskovalci raziščejo njihove specifične strukturne značilnosti. Na primer, fragmentiranje alfa-sinukleinskih fibril omogoča raziskovalcem, da raziščejo njihove interakcije z drugimi molekulami, kot so beljakovine, lipidi ali majhne molekule. Z izdelavo manjših fragmentov je mogoče učinkoviteje raziskati vezavna mesta in afiniteto za te medsebojno delujoče partnerje. Manjši α-Syn fribrils in trakovi lahko kažejo tudi spremenjeno toksičnost in biokemične učinke. Zato je ključnega pomena zanesljiva in učinkovita tehnika fragmentacije, ki daje ponovljive rezultate s hitro in enostavno obdelavo vzorca.
Ultrazvočna alfa-syn fragmentacija: Sonicator VialTweeter je uveljavljen ultrazvočni sistem za pripravo vzorcev, ki sonicira do 10 vial hkrati pod popolnoma enakimi pogoji. Programabilne nastavitve omogočajo preprost in hiter ponovni zagon istih poskusov, kar daje zelo zanesljive in ponovljive rezultate pri fragmentaciji alfa-sinukleinskih vlaken.
VialTweeter sonicator za hkratno ultrazvočno fragmentacijo več vzorcev alfa-sinukleina.
Priprava vzorca α-sinukleina z zvočnim aparatom
Eden od pristopov k proučevanju alfa-sinukleinskih fibril vključuje njihovo ekstrakcijo in fragmentacijo z uporabo tehnik, kot je ultrazvočna obdelava. Sonication je proces, ki uporablja visoko intenzivne, nizkofrekvenčne ultrazvočne valove za prekinitev in razgradnjo beljakovinskih agregatov, kar vodi do sproščanja manjših vlaken ali posameznih beljakovinskih molekul. Sonicator VialTweeter je v ta namen pogosto uporabljena naprava v raziskovalnih študijah, povezanih s α-sinukleinom.
Številne raziskovalne študije opisujejo natančne protokole priprave vzorcev sonikacije alfa-sinukleinskih fibril, ki uporabljajo Hielscher VialTweeter za učinkovito in zanesljivo fragmentacijo α-sinukleinskih fibril. Z ultrazvočno fragmentacijo vlaken lahko raziskovalci analizirajo nastale produkte in preučijo njihovo strukturo, toksičnost in interakcije z drugimi molekulami. Ta raziskava zagotavlja pomemben vpogled v mehanizme, ki so podlaga za nevrodegeneracijo, in potencialno identificira nove terapevtske cilje. Dobro uveljavljeni protokoli ultrazvočnega razbijanja α-sinukleina, ki uporabljajo zvočni aparat VialTweeter, omogočajo zanesljive in ponovljive rezultate.
Zgornje slike: nefragmentirane alfa-sinukleinske fibrile
Spodnje slike: Ultrazvočno fragmentirane alfa-sinukleinske fibrile z zvočnim zvočnikom VialTweeter
(študija in slike: ©Dieriks et al., 2022)
Ultrazvočna fragmentacija α-sinukleinskih vlaken – Protokolov
Ker številni raziskovalci uporabljajo sonikator VialTweeter kot prednostno tehniko fragmentacije za proizvodnjo enotnih fragmentov α-sinukleinskih fibril, so uveljavljeni protokoli na voljo. Spodaj lahko najdete nekaj primernih protokolov razdrobljenosti.
Priprava semena ClearTau: Fibrile ClearTau so bile razredčene na 10 μM v dH2O in sonicirane pri 70 % amplitudi 50 s s 1 s ON 1 s ON 1 s OFF cikel v cevi z uporabo sonikatorja UP200St z VialTweeterjem. Za semena je bila značilna elektronska mikroskopija.
Merjenje fluorescence ThS: Vlakna zdravila ClearTau so razredčili na 2,5 μM v dH2O in sonicirali pri 70 % amplitudi 50 s s 1 s ON 1 s 1 s OFF cikla v epruveti z uporabo UP200St z VialTweeterjem. Kot kontrolni element je bil uporabljen monomer Tau 4R2N s polno dolžino 2,5 μM. Reakciji 100 μl smo dodali 100 μl ThS (10 μM), kar je dalo končne koncentracije beljakovin 1,25 μM. Fluorescenco ThS v eni časovni točki smo izmerili z uporabo 96 prozornih spodnjih plošč, nameščenih v čitalniku mikroplošč FLUOstar Omega z vzbujanjem pri 445 nm in emisijo pri 485 nm.
(prim. Limorenko et al., 2023)
Enotna dolžina α-sinukleina z uporabo ultrazvočnega razbijanja: Dolžina heterogenosti α-syn fibril in trakov je bila zmanjšana z 20-minutno ultrazvočno razbijanjem na ledu v 2-mililitrskih Eppendorfovih epruvetah v VialTweeterju, nastavljenem na 75% amplitudo, 0,5 s impulzov.
(prim. Bousset et al., 2013)
Izveden je bil nadzor kakovosti človeškega rekombinantnega monomernega WT ali S129A a-Syn in fibrilarnih polimorfov, ki jih ustvarjajo, kot tudi a-Syn 1–110. Nato so bili fibrilarni polimorfi fragmentirani s sonicacijo za 20 minut v 2-ml Eppendorfovih ceveh v ultrazvočnem aparatu VialTweeter, da bi ustvarili fibrilarne delce s povprečno velikostjo 42–52 nm, ki so primerni za endocitozo.
(prim. Shrivastava et al., 2020)
Karakterizacija petih fibrilarnih α-syn polimorfov. (A) Prikazane so transmisijske elektronske mikrografije negativno obarvanih α-Syn fibrilarnih polimorfov, trakov, vlakenj-91, vlakenj-65 in vlakenj-110 pred (zgornji pas) in po fragmentaciji z VialTweeterjem (spodnji pas). (B) Prikazana je dolžinska porazdelitev fragmentiranih fibrilarnih polimorfov. Navedeno je število (n) fibrilarnih sklopov, iz katerih so bili izpeljani histogrami.
(študija in slike: Shrivastava et al., 2020)
Vlakna α-Syn so bila 20 minut razdrobljena z ultrazvočnim razbijanjem v 2 ml Eppendorfovih epruvetah v VialTweeterju, da bi ustvarili fibrilarne delce s povprečno velikostjo 42–52 nm, kot je bilo ocenjeno z analizo TEM.
(prim. Negrini et al., 2022)
Resuspendirane fibrile91 (v PBS) so bile pred dodajanjem celičnih kultur razdrobljene z 20-minutno ultrazvočno razbijanjem v 2 ml Eppendorfovih epruvetah z uporabo zvočnika Vial Tweeter, alikvotirane, hitro zamrznjene v tekočem dušiku in shranjene do uporabe pri -80 °C.
(prim. Vajhøj et al., 2021)
Sonicator UIP400MTP za fragmentacijo alfa-sinukleinskih fibril v ploščah z več vdolbicami.
VialTweeter in laboratorijski zvočniki za α-syn fragmentacijo
Hielscher Ultrasonics je svetovno priznan kot vodilni proizvajalec najsodobnejših ultrazvočnih aparatov. Zaupanja vredni in uveljavljeni v večjih raziskovalnih laboratorijih po vsem svetu, naši ultrazvočni aparati ponujajo neprimerljivo kakovost in zmogljivost za vaše kritične poskuse.
S Hielscher VialTweeter in katerim koli drugim Hielscher sonicatorjem boste doživeli neprimerljivo uporabniško udobje, saj so premišljeno zasnovani za ponovljive rezultate, enostavnost uporabe in brezhibno delovanje. S funkcijami samodejnega beleženja podatkov se lahko osredotočite na svoje raziskave, medtem ko naši ultrazvočni aparati natančno beležijo ključne podatke za ponovljivost in natančnost.
Dosezite dosledne in ponovljive rezultate z zaupanjem!
Naši ultrazvočni aparati so zasnovani in izdelani v Nemčiji. Nemška natančnost in najvišja inženirska kakovost za zagotovitev zanesljive in natančne priprave vzorca, kot je fragmentacija alfa-sinukleinskih vlaken vsakič. Nič več skrbi za nedosledne rezultate - naša ultrazvočna tehnologija zagotavlja, da vaše raziskave ostanejo v ospredju znanstvenega napredka.
Ampak to še ni vse! Naša zavezanost odličnosti presega naše izdelke. Ponosni smo na našo izjemno storitev za stranke, ki zagotavlja strokovno podporo za reševanje vseh vprašanj ali pomislekov, ki jih imate. Naša predana ekipa je tu, da vam pomaga na vsakem koraku vaše raziskovalne poti in zagotovi, da boste kar najbolje izkoristili naše ultrazvočne aparate.
Izberite inovativnost, zanesljivost in izjemno uporabniško izkušnjo - izberite naše laboratorijske zvočnike, kot je VialTweeter za fragmentacijo alfa-sinukleinskih fibril. Izkoristite že uveljavljene protokole in se pridružite vrstam vodilnih raziskovalcev, ki zaupajo naši tehnologiji za svoje kritične študije. Dvignite svoje raziskave in raziščite nove meje v raziskavah demence in nevrodegenerativnih bolezni z našimi najsodobnejšimi ultrazvočnimi aparati.
- visoka učinkovitost
- Najsodobnejša tehnologija
- Zanesljivost & Robustnosti
- Obnovljivost
- nastavljiv, natančen nadzor procesa
- za poljubno količino
- Inteligentna programska oprema
- pametne funkcije (npr. programabilno, podatkovno protokoliranje, daljinski upravljalnik)
- enostaven in varen za uporabo
- nizko vzdrževanje
- CIP (čiščenje na mestu)
Projektiranje, izdelava in svetovanje – Kakovost izdelana v Nemčiji
Hielscher ultrazvočni aparati so znani po svojih najvišjih standardih kakovosti in oblikovanja. Robustnost in enostavno upravljanje omogočata nemoteno integracijo naših ultrazvočnih aparatov v industrijske objekte. Težke pogoje in zahtevna okolja zlahka obvladajo Hielscher ultrasonicatorji.
Hielscher Ultrasonics je podjetje s certifikatom ISO in daje poseben poudarek visoko zmogljivim ultrazvočnim aparatom z najsodobnejšo tehnologijo in prijaznostjo do uporabnika. Seveda so Hielscher sonicatorji skladni s CE in izpolnjujejo zahteve UL, CSA in RoHs.
Spodnja tabela vam prikazuje približno zmogljivost obdelave naših ultrazvočnih aparatov v laboratoriju:
| Priporočene naprave | Obseg serije | Pretok |
|---|---|---|
| UIP400MTP | Plošče z več jamicami / mikrotitri | n.a. |
| Ultrazvočni CupHorn | CupHorn za viale ali čašo | n.a. |
| GDmini2 | Ultrazvočni mikro-pretočni reaktor | n.a. |
| VialTweeter | 0.5 do 1.5 ml | n.a. |
| UP100H | 1 do 500 ml | 10 do 200 ml / min |
| UP200Ht, UP400St | 10 do 2000 ml | 20 do 400 ml / min |
Kontaktirajte nas! / Vprašajte nas!
The VialTweeter se običajno uporablja za fragmentacijo alfa-sinukleinskih fibril kot korak predanalitične priprave vzorca
Literatura / Reference
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Hielscher Ultrasonics proizvaja visoko zmogljive ultrazvočne homogenizatorje iz laboratorij k industrijska velikost.