Ultrazvuková príprava séra bohatého na krvné doštičky

• Plazma bohatá na krvné doštičky (PRP) je krvná plazma obohatená o krvné doštičky, ktorá sa používa na liečebné a estetické ošetrenia.
• Ultrazvuková lýza a kondicionovanie sú veľmi účinnou metódou prípravy plazmy bohatej na krvné doštičky.
• Hielscher Ultrasonics ponúka rôzne ultrazvukové systémy spĺňajúce požiadavky na spracovanie krvi (napr. na prípravu v čistom priestore aj mimo neho).

Sérum bohaté na krvné doštičky

Sonikácia je spoľahlivá a jednoduchá metóda lýzy krvných doštičiek v autológnom krvnom sére na uvoľnenie rastových faktorov. Frakcie získané z krvných doštičiek – známe aj ako autológne kondicionované sérum (ACS) – sa používajú na obnovu tkanív alebo estetické ošetrenia. Na dosiahnutie optimálnych výsledkov sa PRP pred injekčným podaním obohacuje.
Pri príprave plazmy obohatenej o bunkové rastové faktory je sonikácia veľmi účinnou a efektívnou metódou lýzy bunkových membrán a uvoľnenia takmer všetkých bunkových rastových faktorov z krvných doštičiek. Pri ultrazvukovej lýze a kondicionovaní možno použiť aj krv ošetrenú antikoagulanciami.
Kondicionovanie PRP sonikáciou je pohodlný a nákladovo efektívny spôsob získavania koncentrovaných rastových faktorov.

Ultrazvuková lýza plazmy bohatej na krvné doštičky (PRP)

Účinky ultrazvukovej lýzy

Ultrazvukové spracovanie krvného séra vedie k homogénnej lýze krvných doštičiek s cieľom uvoľniť rastové faktory, ktoré sú v nich uzavreté (rastový faktor AB (PDGF-AB), rastový faktor AA (PDGF-AA), rastový faktor BB (PDGF-BB), vaskulárny endotelový rastový faktor (VEGF), transformujúci rastový faktor β (TGF-β), epidermálny rastový faktor (EGF), rastový faktor podobný inzulínu (IGF), rastový faktor epitelových buniek ECGF a fibroblastový rastový faktor (FGF)). Krvné doštičky a ich alfa-granuly sa rozrušujú sonikáciou s využitím javu akustickej kavitácie. Využitie ultrazvukovej kavitácie na lýzu krvných doštičiek znižuje možný negatívny vplyv metódy opakovaného zmrazovania a rozmrazovania na aktivitu rastových faktorov.

Protokol ultrazvukovej prípravy PRP

Približne 16mL čerstvo odobratej vzorky autológnej krvi sa v skúmavke opatrne prevráti 8–10-krát, aby sa krv a antikoagulanciá dobre premiešali. Potom sa vzorka centrifuguje pri 1800 g počas 20 min pri izbovej teplote. Po centrifugácii vytvoria krvné doštičky a mononukleárne bunky na spodku plazmatickej vrstvy belavú vrstvu, ktorá je známa ako plazma bohatá na krvné doštičky (PRP). Vrchná vrstva je známa ako plazma chudobná na krvné doštičky (PPP). Mononukleárne bunky možno odstrániť alebo ponechať vo vzorke. Mononukleárne bunky sa často ponechávajú vo vzorke PRP, aby sa predišlo ďalším krokom, ktoré prinášajú riziko kontaminácie.
Poznámka: Ultrazvukové spracovanie autológnej PRP sa musí vykonávať za sterilných podmienok.
PRP a PPP sa oddelia a odoberú. Do PPP sa pridá 1,5mL 10% roztoku chloridu vápenatého, zatiaľ čo do PRP sa pridá 0,5mL 5% etanolu. Obe suspenzie sa jemne premiešajú a nechajú stáť 5 min pri izbovej teplote. Nakoniec sa do suspenzie PRP pridá 1mL PPP a suspenzia sa nechá stáť, kým sa nevytvorí fibrínová zrazenina.
Ultrazvukové spracovanie: Keďže vytvorený doštičkový gél slúži ako zásobáreň uvoľnených rastových faktorov, fibrínový gél sa musí rozrušiť, aby sa uvoľnili dostupné rastové faktory. Parametre ultrazvukovej lýzy a uvoľňovania rastových faktorov sú nasledujúce: Vzorku v skúmavke sonikujte pomocou prístroja UP200Ht alebo UP200St (200W, 26kHz) so sonotródou S26d2. Aby sa predišlo prehriatiu vzorky krvi, sonikáciu možno vykonávať v pulzných cykloch (napr. 10 sek. zapnuté, 30 sek. vypnuté). Vzorka by sa mala chladiť na ľade, aby sa teplota optimálne udržiavala v rozmedzí 2 – 5°C. Po sonikácii sa vzorka centrifuguje pri 16 000 g počas 5 min. pri izbovej teplote. Supernatant sa odoberie a možno ho skladovať pri -70°C.
Pri metóde so sonikáciou sa koncentrácia krvných doštičiek vo frakcii PRP zvýšila 1,7 – 4,5-násobne v porovnaní s priemerným počtom krvných doštičiek v plnej krvi uvádzaným v literatúre.

PRP sa kombinovala s terapiou kmeňovými bunkami získanými z tukového tkaniva (autológne kmeňové bunky uvoľnené ultrazvukom z tukového tkaniva, zmiešané s PRP a injekčne podané späť do tkaniva pacienta na jeho obnovu).

Ultrazvukové zariadenia

Hielscher Ultrasonics je odborníkom na sofistikovanú a spoľahlivú ultrazvukovú technológiu. Naše ultrazvukové prístroje sa na celom svete používajú na lýzu, extrakciu a prípravu vzoriek – priamym aj nepriamym spôsobom. Autoklávovateľné aj jednorazové príslušenstvo zabezpečuje bezkontaminačné spracovanie vzoriek autológnej krvi. Väčšinu našich systémov možno použiť na ultrazvukovú lýzu kmeňových buniek a PRP, vďaka čomu sú naše ultrazvukové prístroje z ekonomického hľadiska ešte efektívnejšie.
Nasledujúca tabuľka uvádza naše ultrazvukové prístroje vhodné na prípravu plazmy bohatej na krvné doštičky a príslušné odporúčané objemy vzoriek. K dispozícii sú aj väčšie ultrazvukové prístroje a systémy na mieru.

Kontaktujte nás ešte dnes! Radi vám pomôžeme nájsť optimálny ultrazvukový prístroj!