Soluções tampão preparadas com ultrassom

Os tampões de lise podem ser preparados de forma eficiente e rápida usando homogeneizadores de tecidos ultrassônicos. Como os ultrassônicos são uma ferramenta dos sonhos para misturar, dissolver e dispersar, eles permitem uma preparação confiável e fácil de usar de tampões de lise.

Preparação ultrassônica de tampões de lise

Os homogeneizadores ultrassônicos de tecidos são uma ferramenta comum para ruptura, lise e extração celular, portanto, disponíveis na maioria dos laboratórios. Uma aplicação secundária para ultrassonizadores do tipo sonda é a preparação de tampões de lise.

O tampão de lise é uma solução usada para quebrar as células abertas (lisar) e liberar seu conteúdo para análise a jusante. A composição específica do tampão de lise pode variar dependendo do tipo de células que estão sendo lisadas e da aplicação a jusante. No entanto, um tampão de lise típico contém componentes como detergentes, sais e inibidores de protease. Sais tamponantes (por exemplo, Tris-HCl) e sais iônicos (por exemplo, NaCl) são comumente usados para regular o pH e a osmolaridade do lisado.
Para fazer um tampão de lise, os componentes são misturados nas concentrações e pH apropriados. A mistura é geralmente agitada ou agitada até que os componentes estejam dissolvidos e a solução homogênea.
A homogeneização ultrassônica é um método que pode ser usado para ajudar a fazer um bom tampão de lise, melhorando a mistura e a dissolução dos componentes. Neste método, ondas de ultrassom – normalmente na faixa de 20 a 30 kHz – são aplicados à mistura, o que cria bolhas de cavitação que colapsam e geram intensa energia local, levando ao cisalhamento mecânico e à mistura dos componentes.
O processo de homogeneização ultrassônica pode ajudar a separar quaisquer aglomerados ou agregados dos componentes e garantir que a solução seja misturada uniformemente. Consequentemente, esse tampão de lise aprimorado pode levar a uma ruptura celular mais eficiente e maiores rendimentos de material extraído. Além disso, a homogeneização ultrassônica pode reduzir o tempo necessário para fazer um tampão de lise em comparação com os métodos tradicionais de agitação ou agitação.
No geral, a homogeneização ultrassônica é uma ferramenta poderosa para melhorar a qualidade e a eficiência da preparação do tampão de lise.

Protocolo para preparação de tampão de lise ultrassônica

Este é um protocolo geral para fazer um tampão de lise usando um ultrassonicador do tipo sonda:
 
Materiais:

• Detergente(s) de sua escolha (por exemplo, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sal (s) de escolha (por exemplo, NaCl, KCl)
• Inibidores da protease (por exemplo, PMSF, aprotinina, leupeptina)
• ultrassonicador
• Agitador
• Água deionizada
• Medidor de pH ou tiras de pH

 
 
Instruções passo a passo:

1. Determine a composição do tampão de lise com base nas células ou tecidos que você lidará e nas aplicações a jusante para as quais usará o lisado. Prepare as soluções de estoque de detergentes, sais e inibidores de protease nas concentrações desejadas.
2. Adicione as soluções de estoque de detergentes, sais e inibidores de protease a um béquer ou frasco.
3. Adicione água deionizada para aumentar o volume até a quantidade desejada de tampão.
4. Misture os componentes usando um agitador para obter uma solução de pré-mistura.
5. Meça o pH do tampão usando um medidor de pH ou tiras de pH e ajuste o pH conforme necessário com pequenas quantidades de ácido ou base.
6. Use o ultrassônico tipo sonda para homogeneizar a solução de pré-mistura para obter uma solução altamente homogênea. Por conseguinte, sonicar a solução durante alguns segundos até que a solução esteja bem misturada e os aglomerados ou agregados se decomponham. A duração e a potência da sonicação podem ser otimizadas com base no tampão de lise específico e no ultrassônico usado.
7. Após a ultrassonografia, meça novamente o pH do tampão e ajuste conforme necessário.
8. Filtre o tampão através de um filtro de 0,2 mícron para remover quaisquer detritos ou agregados que possam ter se formado durante a sonicação.
9. O tampão de lise agora está pronto para uso.

 
Nota: A composição exata e o pH do tampão de lise podem variar dependendo das células ou tecidos que estão sendo lisados e das aplicações a jusante. O protocolo acima é uma diretriz geral e pode precisar ser otimizado para aplicações específicas.
 
Os homogeneizadores ultrassônicos são comumente usados para ruptura celular e extração de moléculas intracelulares. Portanto, muitas aplicações de lise usam sonicação do tipo sonda não apenas para a preparação do tampão de lise, mas também para a ruptura mecânica da célula e extração.
Isso torna os homogeneizadores de tecidos ultrassônicos uma ferramenta versátil para laboratórios e explica o amplo uso de ultrassonizadores em microbiologia, biotecnologia e ciências da vida.

Homogeneizadores ultrassônicos do laboratório

A Hielscher Ultrasonics fabrica e fornece homogeneizadores e sondas ultrassônicas (sonotrodos) em várias classificações de potência e volumes de amostra. Isso nos permite oferecer o disruptor ultrassônico mais adequado para a preparação de amostras. Nós nos concentramos na mais alta qualidade, excelente conforto do usuário e resultados confiáveis de sonicação. Todos os ultrassônicos digitais apresentam software inteligente, programação e pré-configuração de protocolos de sonicação, controle remoto do navegador, controle de temperatura, iluminação de amostras, bem como gravação automática de dados em um cartão SD integrado.

Projeto, Fabricação e Consultoria – Qualidade Made in Germany

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A tabela abaixo fornece uma visão geral de nossos vários ultrassonicadores de laboratório: