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Soluções tampão preparadas com ultrassom

Os tampões de lise podem ser preparados de forma eficiente e rápida usando homogeneizadores de tecidos ultrassônicos. Como os ultrassônicos são uma ferramenta dos sonhos para misturar, dissolver e dispersar, eles permitem uma preparação confiável e fácil de usar de tampões de lise.

Preparação ultrassônica de tampões de lise

Os homogeneizadores ultrassônicos de tecidos são uma ferramenta comum para ruptura, lise e extração celular, portanto, disponíveis na maioria dos laboratórios. Uma aplicação secundária para ultrassonizadores do tipo sonda é a preparação de tampões de lise.

A ruptura celular, a extração de proteínas e a preparação do tampão de lise com ultrassom são um método eficiente de preparação de amostras em laboratórios.O tampão de lise é uma solução usada para quebrar as células abertas (lisar) e liberar seu conteúdo para análise a jusante. A composição específica do tampão de lise pode variar dependendo do tipo de células que estão sendo lisadas e da aplicação a jusante. No entanto, um tampão de lise típico contém componentes como detergentes, sais e inibidores de protease. Sais tamponantes (por exemplo, Tris-HCl) e sais iônicos (por exemplo, NaCl) são comumente usados para regular o pH e a osmolaridade do lisado.
Para fazer um tampão de lise, os componentes são misturados nas concentrações e pH apropriados. A mistura é geralmente agitada ou agitada até que os componentes estejam dissolvidos e a solução homogênea.
A homogeneização ultrassônica é um método que pode ser usado para ajudar a fazer um bom tampão de lise, melhorando a mistura e a dissolução dos componentes. Neste método, ondas de ultrassom – normalmente na faixa de 20 a 30 kHz – são aplicados à mistura, o que cria bolhas de cavitação que colapsam e geram intensa energia local, levando ao cisalhamento mecânico e à mistura dos componentes.
O processo de homogeneização ultrassônica pode ajudar a separar quaisquer aglomerados ou agregados dos componentes e garantir que a solução seja misturada uniformemente. Consequentemente, esse tampão de lise aprimorado pode levar a uma ruptura celular mais eficiente e maiores rendimentos de material extraído. Além disso, a homogeneização ultrassônica pode reduzir o tempo necessário para fazer um tampão de lise em comparação com os métodos tradicionais de agitação ou agitação.
No geral, a homogeneização ultrassônica é uma ferramenta poderosa para melhorar a qualidade e a eficiência da preparação do tampão de lise.

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O homogeneizador ultrassônico UP200Ht montado em um suporte é usado em inúmeras aplicações em pesquisa, indústria e produção.

O homogeneizador de laboratório ultrassônico UP200Ht é popular em laboratórios de pesquisa para preparação de amostras, lise, extração, fragmentação e dissolução de DNA.

Protocolo para preparação de tampão de lise ultrassônica

Este é um protocolo geral para fazer um tampão de lise usando um ultrassonicador do tipo sonda:
 
Materiais:

  • Detergente(s) de sua escolha (por exemplo, Triton X-100, SDS, CHAPS)
  • Sal (s) de escolha (por exemplo, NaCl, KCl)
  • Inibidores da protease (por exemplo, PMSF, aprotinina, leupeptina)
  • ultrassonicador
  • Agitador
  • Água deionizada
  • Medidor de pH ou tiras de pH

 
 
Instruções passo a passo:

  1. Determine a composição do tampão de lise com base nas células ou tecidos que você lidará e nas aplicações a jusante para as quais usará o lisado. Prepare as soluções de estoque de detergentes, sais e inibidores de protease nas concentrações desejadas.
  2. Adicione as soluções de estoque de detergentes, sais e inibidores de protease a um béquer ou frasco.
  3. Adicione água deionizada para aumentar o volume até a quantidade desejada de tampão.
  4. Misture os componentes usando um agitador para obter uma solução de pré-mistura.
  5. Meça o pH do tampão usando um medidor de pH ou tiras de pH e ajuste o pH conforme necessário com pequenas quantidades de ácido ou base.
  6. Use o ultrassônico tipo sonda para homogeneizar a solução de pré-mistura para obter uma solução altamente homogênea. Por conseguinte, sonicar a solução durante alguns segundos até que a solução esteja bem misturada e os aglomerados ou agregados se decomponham. A duração e a potência da sonicação podem ser otimizadas com base no tampão de lise específico e no ultrassônico usado.
  7. Após a ultrassonografia, meça novamente o pH do tampão e ajuste conforme necessário.
  8. Filtre o tampão através de um filtro de 0,2 mícron para remover quaisquer detritos ou agregados que possam ter se formado durante a sonicação.
  9. O tampão de lise agora está pronto para uso.

 
Nota: A composição exata e o pH do tampão de lise podem variar dependendo das células ou tecidos que estão sendo lisados e das aplicações a jusante. O protocolo acima é uma diretriz geral e pode precisar ser otimizado para aplicações específicas.
 
Os homogeneizadores ultrassônicos são comumente usados para ruptura celular e extração de moléculas intracelulares. Portanto, muitas aplicações de lise usam sonicação do tipo sonda não apenas para a preparação do tampão de lise, mas também para a ruptura mecânica da célula e extração.
Isso torna os homogeneizadores de tecidos ultrassônicos uma ferramenta versátil para laboratórios e explica o amplo uso de ultrassonizadores em microbiologia, biotecnologia e ciências da vida.

Este videoclipe mostra o homogeneizador ultrassônico Hielscher UP100H, um ultrassônico amplamente utilizado para preparação de amostras em laboratórios.

homogeneizador ultrassônico UP100H

Miniatura do vídeo

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Homogeneizadores ultrassônicos do laboratório

Ultrassônico de laboratório UP200Ht (200W, 26kHz) para preparação de amostras, homogeneização, lise celular, solubilização de suspensões celulares, extração de proteínas, fragmentação de DNA, emulsificação, dispersão e aplicações de mistura.A Hielscher Ultrasonics fabrica e fornece homogeneizadores e sondas ultrassônicas (sonotrodos) em várias classificações de potência e volumes de amostra. Isso nos permite oferecer o disruptor ultrassônico mais adequado para a preparação de amostras. Nós nos concentramos na mais alta qualidade, excelente conforto do usuário e resultados confiáveis de sonicação. Todos os ultrassônicos digitais apresentam software inteligente, programação e pré-configuração de protocolos de sonicação, controle remoto do navegador, controle de temperatura, iluminação de amostras, bem como gravação automática de dados em um cartão SD integrado.

Projeto, Fabricação e Consultoria – Qualidade Made in Germany

Os ultrassônicos Hielscher são conhecidos por seus mais altos padrões de qualidade e design. A robustez e a fácil operação permitem a integração suave de nossos ultrasonicadores em instalações industriais. Condições adversas e ambientes exigentes são facilmente manuseados pelos ultrassônicos Hielscher.

A Hielscher Ultrasonics é uma empresa certificada pela ISO e dá ênfase especial aos ultrassônicos de alto desempenho com tecnologia de ponta e facilidade de uso. Obviamente, os ultrassônicos Hielscher são compatíveis com CE e atendem aos requisitos da UL, CSA e RoHs.

A tabela abaixo fornece uma visão geral de nossos vários ultrassonicadores de laboratório:

VialTweeter em UP200St 200W 26kHz ultra-sons de pequenos frascos, por ejemplo Eppendorf de 1,5 ml
UP50H 50W 30kHz homogeneizador de laboratório portátil ou montado em suporte
UP100H 100W 30kHz homogeneizador de laboratório portátil ou montado em suporte
UP200Ht 200W 26kHz homogeneizador de laboratório portátil ou montado em suporte
UP200St 200W 26kHz homogeneizador de laboratório montado em pé
UP400St 400W 24kHz homogeneizador de laboratório montado em pé
SonoStep 200W 26kHz combinação de reator de laboratório, ultrassom, bomba, agitador e vaso
GDmini2 200W 26kHz célula de fluxo livre de contaminação
cuphorn 200W 26kHz banho ultrassônico intenso para frascos e copos
UIP400MTP 400W 24kHz Sistema ultrassônico para placas de poços múltiplos? placas de microtitulação
Cuphorn ultrassônico para a sonicação uniforme e intensa de até 5 tubos fechados e frascos para homogeneização uniforme e rápida de amostras estéreis.

CupHorn ultrassônico para a sonicação intensa de tubos fechados e frascos para homogeneização estéril de amostras.

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O homogeneizador ultrassônico tipo sonda UP400St é usado para dissolver sais e detergentes para formar uma solução tampão de lise homogênea.

Homogeneizador de laboratório ultrassônico UP400St é comumente usado para preparação do tampão de lise e subsequente ruptura celular.



Literatura? Referências


Ultrassom de alto desempenho! A linha de produtos da Hielscher cobre todo o espectro, desde o ultrassônico compacto de laboratório, passando por unidades de bancada, até sistemas ultrassônicos totalmente industriais.

A Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrassônicos de alto desempenho de labrador Para tamanho industrial.

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