Soluções tampão preparadas com ultrassom

Os tampões de lise podem ser preparados de forma eficiente e rápida usando homogeneizadores de tecido ultrassônicos. Uma vez que os ultra-sonicators são uma ferramenta de sonho para misturar, dissolver e dispersar, eles permitem uma preparação confiável e fácil de usar de buffers de lise.

Preparação ultra-sônica de tampões de lise

Homogeneizadores de tecido ultra-sônicos são uma ferramenta comum para ruptura celular, lise e extração, portanto, disponível na maioria dos laboratórios. Uma aplicação secundária para ultrasonicators do tipo sonda é a preparação de buffers de lise.

A ruptura celular, extração de proteínas e preparação de tampão de lise com ultrassom é um método eficiente de preparação de amostras em laboratórios.O tampão de lise é uma solução usada para quebrar células abertas (lise) e liberar seu conteúdo para análise a jusante. A composição específica do tampão de lise pode variar dependendo do tipo de células lisadas e da aplicação a jusante. No entanto, um tampão de lise típico contém componentes como detergentes, sais e inibidores de protease. Sais tamponantes (por exemplo, Tris-HCl) e sais iônicos (por exemplo, NaCl) são comumente usados para regular o pH e a osmolaridade do lisado.
Para fazer um tampão de lise, os componentes são misturados nas concentrações e pH apropriados. A mistura é geralmente agitada ou agitada até que os componentes sejam dissolvidos e a solução seja homogênea.
A homogeneização ultra-sônica é um método que pode ser usado para ajudar a fazer um bom tampão de lise, melhorando a mistura e dissolução dos componentes. Neste método, ondas de ultrassom – normalmente na faixa de 20 a 30 kHz – são aplicados à mistura, o que cria bolhas de cavitação que colapsam e geram intensa energia local, levando ao cisalhamento mecânico e mistura dos componentes.
O processo de homogeneização ultra-sônica pode ajudar a quebrar quaisquer aglomerados ou agregados dos componentes e garantir que a solução seja uniformemente misturada. Consequentemente, esse tampão de lise melhorado pode levar a uma ruptura celular mais eficiente e maiores rendimentos do material extraído. Além disso, a homogeneização ultra-sônica pode reduzir o tempo necessário para fazer um tampão de lise em comparação com os métodos tradicionais de agitação ou agitação.
No geral, a homogeneização ultra-sônica é uma ferramenta poderosa para melhorar a qualidade e a eficiência da preparação do tampão de lise.

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UP200Ht homogeneizador ultra-sônico montado em um suporte é usado inúmeras aplicações em pesquisa, indústria e produção.

O homogeneizador de laboratório ultra-sônico UP200Ht é popular em laboratórios de pesquisa para preparação de amostras, lise, extração, fragmentação e dissolução de DNA.

Protocolo para preparação de tampão de lise ultra-sônica

Este é um protocolo geral para fazer um buffer de lise usando um ultrasonicator do tipo sonda:
 
Materiais:

  • Detergente(s) de escolha (por exemplo, Triton X-100, SDS, CHAPS)
  • Sal(es) de escolha (por exemplo, NaCl, KCl)
  • Inibidores de protease (por exemplo, PMSF, aprotinina, leupeptina)
  • ultrasonicator
  • Agitador
  • Água deionizada
  • Medidor de pH ou tiras de pH

 
 
Instruções passo a passo:

  1. Determine a composição do tampão de lise com base nas células ou tecido para as quais você estará lisando e as aplicações a jusante para as quais você usará o lisado. Preparar as soluções estoque de detergentes, sais e inibidores de protease nas concentrações desejadas.
  2. Adicione as soluções-mãe de detergentes, sais e inibidores de protease a um copo ou frasco.
  3. Adicione água deionizada para elevar o volume até a quantidade desejada de tampão.
  4. Misture os componentes usando um agitador para obter uma solução de pré-mistura.
  5. Meça o pH do tampão usando um medidor de pH ou tiras de pH e ajuste o pH conforme necessário com pequenas quantidades de ácido ou base.
  6. Use o ultrasonicator do tipo sonda para homogeneizar a solução de pré-mistura para que uma solução altamente homogênea seja obtida. Portanto, sonice a solução por alguns segundos até que a solução seja completamente misturada e quaisquer aglomerados ou agregados sejam quebrados. A duração e o poder da sonicação podem ser otimizados com base no buffer de lise específico e no ultrasonicator usado.
  7. Após a ultrassonografia, volte a medir o pH do tampão e ajuste conforme necessário.
  8. Filtre o tampão através de um filtro de 0,2 mícron para remover quaisquer detritos ou agregados que possam ter se formado durante a sonicação.
  9. O buffer de lise agora está pronto para uso.

 
Nota: A composição exata e o pH do tampão de lise podem variar dependendo das células ou tecidos lisados e das aplicações a jusante. O protocolo acima é uma diretriz geral e pode precisar ser otimizado para aplicações específicas.
 
Homogeneizadores ultra-sônicos são comumente usados para ruptura celular e extração de moléculas intracelulares. Portanto, muitas aplicações de lise usam sonicação do tipo sonda não apenas para a preparação do tampão de lise, mas também para a ruptura mecânica da célula e extração.
Isso torna os homogeneizadores de tecido ultrassônicos uma ferramenta versátil para laboratórios e explica o amplo uso de ultrasonicators em microbiologia, biotecnologia e ciências da vida.

Este vídeo mostra o homogeneizador ultrassônico Hielscher UP100H, um ultrassonônico amplamente utilizado para preparação de amostras em laboratórios.

Homogeneizador ultrassônico UP100H

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homogeneizadores de laboratório de ultra-som

Ultrassonicator de laboratório UP200Ht (200W, 26kHz) para preparação de amostras, homogeneização, lise celular, solubilização de suspensões celulares, extração de proteínas, fragmentação de DNA, emulsificação, dispersão e aplicações de mistura.Hielscher Ultrasonics fabrica e fornece homogeneizadores ultra-sônicos e sondas (sonotrodos) em várias classificações de potência e volumes de amostra. Isto permite-nos oferecer-lhe o disruptor ultra-sónico mais adequado para a sua preparação de amostras. Nós nos concentramos na mais alta qualidade, excelente conforto do usuário e resultados de sonicação confiáveis. Todos os ultrasonicators digitais possuem software inteligente, programação e pré-configuração de protocolos de sonicação, controle remoto do navegador, controle de temperatura, iluminação de amostras, bem como gravação automática de dados em um cartão SD integrado.

Design, Fabricação e Consultoria – Qualidade Made in Germany

Os ultrasonicators Hielscher são bem conhecidos por seus mais altos padrões de qualidade e design. A robustez e a fácil operação permitem a integração suave de nossos ultrasonicators em instalações industriais. Condições adversas e ambientes exigentes são facilmente manuseados por ultrassonicators Hielscher.

A Hielscher Ultrasonics é uma empresa certificada ISO e coloca ênfase especial em ultrasonicators de alto desempenho com tecnologia de ponta e facilidade de uso. Naturalmente, os ultrasonicators Hielscher são compatíveis com CE e atendem aos requisitos da UL, CSA e RoHs.

A tabela abaixo dá-lhe uma visão geral dos nossos vários ultrassons de laboratório:

VialTweeter em UP200St200w26kHzultra-sons de pequenos frascos, por ejemplo Eppendorf de 1,5 ml
UP50H50w30kHzhomogeneizador de laboratório portátil ou standmounted
UP100H100w30kHzhomogeneizador de laboratório portátil ou standmounted
UP200Ht200w26kHzhomogeneizador de laboratório portátil ou standmounted
UP200St200w26kHzhomogeneizador de laboratório standmounted
UP400St400w24kHzhomogeneizador de laboratório standmounted
SonoStep200w26kHzreactor de laboratório combinando, ultra-sons, bomba, agitador e recipiente
GDmini2200w26kHzcélula de fluxo livre de contaminação
Cuphorn200w26kHzBanho ultra-sônico intenso para frascos e copos
UIP400MTP400w24kHzSistema ultra-sônico para placas multi-poço / placas de microtitulação
Cuphorn ultra-sônico para a sonicação uniforme e intensa de até 5 tubos fechados e frascos para injetáveis para homogeneização de amostra estéril uniforme e rápida.

cuphorn ultra-sônica para a sonicação intensa de tubos fechados e frascos para homogeneização estéril de amostras.

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O homogeneizador do tipo sonda ultra-sônica UP400St é usado para dissolver sais e detergentes para formar uma solução tampão de lise homogênea.

Homogeneizador de laboratório ultra-sônico UP400St é comumente usado para preparação de tampão de lise e subsequente ruptura celular.



Literatura / Referências


Ultrassônicos de alto desempenho! A gama de produtos da Hielscher abrange todo o espectro desde o ultrassônico de laboratório compacto sobre unidades de bancada até sistemas ultrassônicos industriais completos.

Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrassônicos de alto desempenho de Laboratório para tamanho industrial.


Ficaremos felizes em discutir seu processo.

Vamos entrar em contato.