Os tampões de lise podem ser preparados de forma eficiente e rápida usando homogeneizadores de tecido ultrassônicos. Uma vez que os ultra-sonicators são uma ferramenta de sonho para misturar, dissolver e dispersar, eles permitem uma preparação confiável e fácil de usar de buffers de lise.

Preparação ultra-sônica de tampões de lise

Homogeneizadores de tecido ultra-sônicos são uma ferramenta comum para ruptura celular, lise e extração, portanto, disponível na maioria dos laboratórios. Uma aplicação secundária para ultrasonicators do tipo sonda é a preparação de buffers de lise.

O tampão de lise é uma solução usada para quebrar células abertas (lise) e liberar seu conteúdo para análise a jusante. A composição específica do tampão de lise pode variar dependendo do tipo de células lisadas e da aplicação a jusante. No entanto, um tampão de lise típico contém componentes como detergentes, sais e inibidores de protease. Sais tamponantes (por exemplo, Tris-HCl) e sais iônicos (por exemplo, NaCl) são comumente usados para regular o pH e a osmolaridade do lisado.
Para fazer um tampão de lise, os componentes são misturados nas concentrações e pH apropriados. A mistura é geralmente agitada ou agitada até que os componentes sejam dissolvidos e a solução seja homogênea.
A homogeneização ultra-sônica é um método que pode ser usado para ajudar a fazer um bom tampão de lise, melhorando a mistura e dissolução dos componentes. Neste método, ondas de ultrassom – normalmente na faixa de 20 a 30 kHz – são aplicados à mistura, o que cria bolhas de cavitação que colapsam e geram intensa energia local, levando ao cisalhamento mecânico e mistura dos componentes.
O processo de homogeneização ultra-sônica pode ajudar a quebrar quaisquer aglomerados ou agregados dos componentes e garantir que a solução seja uniformemente misturada. Consequentemente, esse tampão de lise melhorado pode levar a uma ruptura celular mais eficiente e maiores rendimentos do material extraído. Além disso, a homogeneização ultra-sônica pode reduzir o tempo necessário para fazer um tampão de lise em comparação com os métodos tradicionais de agitação ou agitação.
No geral, a homogeneização ultra-sônica é uma ferramenta poderosa para melhorar a qualidade e a eficiência da preparação do tampão de lise.

Protocolo para preparação de tampão de lise ultra-sônica

Este é um protocolo geral para fazer um buffer de lise usando um ultrasonicator do tipo sonda:
 
Materiais:

• Detergente(s) de escolha (por exemplo, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sal(es) de escolha (por exemplo, NaCl, KCl)
• Inibidores de protease (por exemplo, PMSF, aprotinina, leupeptina)
• ultrasonicator
• Agitador
• Água deionizada
• Medidor de pH ou tiras de pH

 
 
Instruções passo a passo:

1. Determine a composição do tampão de lise com base nas células ou tecido para as quais você estará lisando e as aplicações a jusante para as quais você usará o lisado. Preparar as soluções estoque de detergentes, sais e inibidores de protease nas concentrações desejadas.
2. Adicione as soluções-mãe de detergentes, sais e inibidores de protease a um copo ou frasco.
3. Adicione água deionizada para elevar o volume até a quantidade desejada de tampão.
4. Misture os componentes usando um agitador para obter uma solução de pré-mistura.
5. Meça o pH do tampão usando um medidor de pH ou tiras de pH e ajuste o pH conforme necessário com pequenas quantidades de ácido ou base.
6. Use o ultrasonicator do tipo sonda para homogeneizar a solução de pré-mistura para que uma solução altamente homogênea seja obtida. Portanto, sonice a solução por alguns segundos até que a solução seja completamente misturada e quaisquer aglomerados ou agregados sejam quebrados. A duração e o poder da sonicação podem ser otimizados com base no buffer de lise específico e no ultrasonicator usado.
7. Após a ultrassonografia, volte a medir o pH do tampão e ajuste conforme necessário.
8. Filtre o tampão através de um filtro de 0,2 mícron para remover quaisquer detritos ou agregados que possam ter se formado durante a sonicação.
9. O buffer de lise agora está pronto para uso.

 
Nota: A composição exata e o pH do tampão de lise podem variar dependendo das células ou tecidos lisados e das aplicações a jusante. O protocolo acima é uma diretriz geral e pode precisar ser otimizado para aplicações específicas.
 
Homogeneizadores ultra-sônicos são comumente usados para ruptura celular e extração de moléculas intracelulares. Portanto, muitas aplicações de lise usam sonicação do tipo sonda não apenas para a preparação do tampão de lise, mas também para a ruptura mecânica da célula e extração.
Isso torna os homogeneizadores de tecido ultrassônicos uma ferramenta versátil para laboratórios e explica o amplo uso de ultrasonicators em microbiologia, biotecnologia e ciências da vida.

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