Soluções tampão preparadas por ultrassonicação

Os tampões de lise podem ser preparados de forma eficiente e rápida utilizando homogeneizadores ultrassónicos de tecidos. Como os sonicadores são uma ferramenta ideal para misturar, dissolver e dispersar, permitem preparar tampões de lise de forma fiável e simples.

Preparação ultrassónica de tampões de lise

Os homogeneizadores ultrassónicos de tecidos são uma ferramenta comum para a rutura celular, a lise e a extração, estando, por isso, disponíveis na maioria dos laboratórios. Uma aplicação secundária dos sonicadores de sonda é a preparação de tampões de lise.

Um tampão de lise é uma solução utilizada para romper (lisar) células e libertar o seu conteúdo para análise posterior. A composição específica do tampão de lise pode variar consoante o tipo de células submetidas a lise e a aplicação subsequente. No entanto, um tampão de lise típico contém componentes como detergentes, sais e inibidores de proteases. Os sais tamponantes (p. ex., Tris-HCl) e os sais iónicos (p. ex., NaCl) são habitualmente utilizados para regular o pH e a osmolaridade do lisado.
Para preparar um tampão de lise, os componentes são misturados nas concentrações e no pH adequados. A mistura é geralmente agitada com um agitador ou por movimentos de vaivém até os componentes estarem dissolvidos e a solução estar homogénea.
A homogeneização ultrassónica é um método que pode ajudar a preparar um bom tampão de lise, melhorando a mistura e a dissolução dos componentes. Neste método, aplicam-se à mistura ondas ultrassónicas – normalmente na gama de 20 a 30 kHz – que criam bolhas de cavitação que colapsam e geram energia local intensa, provocando cisalhamento mecânico e a mistura dos componentes.
O processo de homogeneização ultrassónica pode ajudar a desfazer quaisquer grumos ou agregados dos componentes e a garantir que a solução fica uniformemente misturada. Consequentemente, um tampão de lise assim melhorado pode permitir uma rutura celular mais eficiente e rendimentos mais elevados de material extraído. Além disso, a homogeneização ultrassónica pode reduzir o tempo necessário para preparar um tampão de lise em comparação com os métodos tradicionais de agitação com agitador ou por movimentos de vaivém.
De um modo geral, a homogeneização ultrassónica é uma ferramenta poderosa para melhorar a qualidade e a eficiência da preparação de tampões de lise.

Protocolo para a preparação ultrassónica de tampões de lise

Este é um protocolo geral para preparar um tampão de lise utilizando um sonicador de sonda:
 
Materiais:

• Detergente(s) à escolha (p. ex., Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sal ou sais à escolha (p. ex., NaCl, KCl)
• Inibidores de proteases (p. ex., PMSF, aprotinina, leupeptina)
• Sonicador
• Agitador
• Água desionizada
• Medidor de pH ou tiras de pH

 
 
Instruções passo a passo:

1. Determine a composição do tampão de lise com base nas células ou no tecido que irá submeter a lise e nas aplicações subsequentes em que irá utilizar o lisado. Prepare as soluções-mãe de detergentes, sais e inibidores de proteases nas concentrações pretendidas.
2. Adicione as soluções-mãe de detergentes, sais e inibidores de proteases a um copo de precipitação ou a um balão.
3. Adicione água desionizada até atingir o volume de tampão pretendido.
4. Misture os componentes utilizando um agitador para obter uma solução pré-misturada.
5. Meça o pH do tampão utilizando um medidor de pH ou tiras de pH e ajuste-o, conforme necessário, com pequenas quantidades de ácido ou base.
6. Utilize o sonicador de sonda para homogeneizar a solução pré-misturada, de modo a obter uma solução altamente homogénea. Para tal, submeta a solução a sonicação durante alguns segundos, até estar completamente misturada e quaisquer grumos ou agregados estarem desfeitos. A duração e a potência da sonicação podem ser otimizadas em função do tampão de lise específico e do sonicador utilizado.
7. Após a ultrassonicação, volte a medir o pH do tampão e ajuste-o conforme necessário.
8. Filtre o tampão através de um filtro de 0,2 micrómetros para remover quaisquer detritos ou agregados que possam ter-se formado durante a sonicação.
9. O tampão de lise está agora pronto a utilizar.

 
Nota: A composição exata e o pH do tampão de lise podem variar consoante as células ou o tecido submetidos a lise e as aplicações subsequentes. O protocolo acima constitui uma orientação geral e pode necessitar de otimização para aplicações específicas.
 
Os homogeneizadores ultrassónicos são habitualmente utilizados para a rutura celular e a extração de moléculas intracelulares. Por isso, muitas aplicações de lise utilizam a sonicação com sonda não só para a preparação do tampão de lise, mas também para a rutura celular mecânica e a extração.
Isto faz dos homogeneizadores ultrassónicos de tecidos uma ferramenta versátil para os laboratórios e explica a utilização generalizada de sonicadores em microbiologia, biotecnologia e ciências da vida.

Homogeneizadores ultrassónicos de laboratório

A Hielscher Ultrasonics fabrica e fornece homogeneizadores ultrassónicos e sondas (sonotrodos) para diversas potências nominais e volumes de amostra. Isto permite-nos oferecer-lhe o equipamento de rutura ultrassónica mais adequado à preparação das suas amostras. Privilegiamos a mais elevada qualidade, um conforto de utilização excecional e resultados de sonicação fiáveis. Todos os sonicadores digitais dispõem de software inteligente, programação e predefinição de protocolos de sonicação, controlo remoto através do navegador, controlo de temperatura, iluminação da amostra e registo automático de dados num cartão SD integrado.

Conceção, fabrico e consultoria – Qualidade fabricada na Alemanha

Os sonicadores Hielscher são bem conhecidos pelos seus padrões de qualidade e conceção do mais elevado nível. A robustez e a facilidade de utilização permitem integrar os nossos sonicadores sem dificuldades em instalações industriais. Os sonicadores Hielscher lidam facilmente com condições adversas e ambientes exigentes.

A Hielscher Ultrasonics é uma empresa certificada segundo normas ISO e dá especial importância a sonicadores de elevado desempenho que incorporam tecnologia de ponta e facilidade de utilização. Naturalmente, os sonicadores Hielscher cumprem as normas CE e satisfazem os requisitos UL, CSA e RoHs.

A tabela abaixo apresenta uma visão geral dos nossos diversos sonicadores de laboratório: