Soluções-tampão preparadas com ultra-sons

Os tampões de lise podem ser preparados de forma eficiente e rápida utilizando homogeneizadores de tecidos por ultra-sons. Uma vez que os ultrassons são uma ferramenta de sonho para misturar, dissolver e dispersar, permitem uma preparação fiável e fácil de utilizar dos tampões de lise.

Preparação ultra-sónica de tampões de lise

Os homogeneizadores ultra-sónicos de tecidos são uma ferramenta comum para a rutura, lise e extração de células, estando por isso disponíveis na maioria dos laboratórios. Uma aplicação secundária para os ultrassons de tipo sonda é a preparação de tampões de lise.

O tampão de lise é uma solução utilizada para abrir (lisar) as células e libertar o seu conteúdo para análise a jusante. A composição específica do tampão de lise pode variar consoante o tipo de células que estão a ser lisadas e a aplicação a jusante. No entanto, um tampão de lise típico contém componentes como detergentes, sais e inibidores de proteases. Os sais tampão (por exemplo, Tris-HCl) e os sais iónicos (por exemplo, NaCl) são normalmente utilizados para regular o pH e a osmolaridade do lisado.
Para preparar um tampão de lise, os componentes são misturados nas concentrações e pH adequados. A mistura é normalmente agitada até os componentes se dissolverem e a solução ficar homogénea.
A homogeneização por ultra-sons é um método que pode ser utilizado para ajudar a criar um bom tampão de lise, melhorando a mistura e a dissolução dos componentes. Neste método, as ondas de ultra-sons – normalmente na gama de 20 a 30 kHz – são aplicados à mistura, o que cria bolhas de cavitação que colapsam e geram intensa energia local, levando ao cisalhamento mecânico e à mistura dos componentes.
O processo de homogeneização por ultra-sons pode ajudar a desfazer quaisquer aglomerados ou agregados dos componentes e garantir que a solução é misturada uniformemente. Consequentemente, esse tampão de lise melhorado pode levar a uma rutura celular mais eficiente e a maiores rendimentos de material extraído. Além disso, a homogeneização por ultra-sons pode reduzir o tempo necessário para produzir um tampão de lise, em comparação com os métodos tradicionais de agitação ou vibração.
Em geral, a homogeneização por ultra-sons é uma ferramenta poderosa para melhorar a qualidade e a eficiência da preparação do tampão de lise.

Protocolo para a preparação do tampão de lise por ultra-sons

Este é um protocolo geral para a preparação de um tampão de lise utilizando um ultrassom tipo sonda:
 
Materiais:

• Detergente(s) à escolha (por exemplo, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sal(es) à escolha (por exemplo, NaCl, KCl)
• Inibidores da protease (por exemplo, PMSF, aprotinina, leupeptina)
• Ultrasonicador
• Agitador
• Água desionizada
• Medidor de pH ou tiras de pH

 
 
Instruções passo a passo:

1. Determinar a composição do tampão de lise com base nas células ou tecidos que vai lisar e nas aplicações a jusante para as quais vai utilizar o lisado. Preparar as soluções de stock de detergentes, sais e inibidores de proteases nas concentrações desejadas.
2. Adicionar as soluções-mãe de detergentes, sais e inibidores de proteases a um copo ou balão.
3. Adicionar água desionizada para aumentar o volume até à quantidade desejada de tampão.
4. Misturar os componentes com um agitador de modo a obter uma solução pré-misturada.
5. Medir o pH do tampão utilizando um medidor de pH ou tiras de pH, e ajustar o pH conforme necessário com pequenas quantidades de ácido ou base.
6. Utilizar o ultrassom de tipo sonda para homogeneizar a solução de pré-mistura, de modo a obter uma solução altamente homogénea. Por conseguinte, ultra-sonificar a solução durante alguns segundos até que a solução esteja completamente misturada e quaisquer aglomerados ou agregados sejam quebrados. A duração e a potência da sonicação podem ser optimizadas com base no tampão de lise específico e no ultrassom utilizado.
7. Após a ultrassonografia, medir novamente o pH do tampão e ajustar conforme necessário.
8. Filtrar o tampão através de um filtro de 0,2 microns para remover quaisquer detritos ou agregados que possam ter-se formado durante a sonicação.
9. O tampão de lise está agora pronto a ser utilizado.

 
Nota: A composição exacta e o pH do tampão de lise podem variar em função das células ou tecidos a lisar e das aplicações a jusante. O protocolo acima é uma orientação geral e pode ter de ser optimizado para aplicações específicas.
 
Os homogeneizadores ultra-sónicos são normalmente utilizados para a rutura celular e a extração de moléculas intracelulares. Por conseguinte, muitas aplicações de lise utilizam a sonicação do tipo sonda não só para a preparação do tampão de lise, mas também para a rutura e extração mecânica das células.
Isto faz com que os homogeneizadores de tecidos ultra-sónicos sejam uma ferramenta versátil para os laboratórios e explica a ampla utilização de ultra-sons em microbiologia, biotecnologia e ciências da vida.

Homogeneizadores ultra-sónicos de laboratório

A Hielscher Ultrasonics fabrica e fornece homogeneizadores e sondas de ultra-sons (sonotrodos) com várias potências e volumes de amostra. Isto permite-nos oferecer-lhe o disruptor ultrassónico mais adequado para a sua preparação de amostras. Concentramo-nos na mais elevada qualidade, no excelente conforto do utilizador e em resultados de sonicação fiáveis. Todos os ultrassons digitais dispõem de software inteligente, programação e pré-definição de protocolos de sonicação, controlo remoto do navegador, controlo da temperatura, iluminação da amostra, bem como gravação automática de dados num cartão SD incorporado.

Conceção, fabrico e consultoria – Qualidade fabricada na Alemanha

Os ultrassons Hielscher são conhecidos pelos seus elevados padrões de qualidade e design. A robustez e a facilidade de operação permitem a integração harmoniosa dos nossos ultrassons nas instalações industriais. As condições difíceis e os ambientes exigentes são facilmente controlados pelos ultrassons Hielscher.

A Hielscher Ultrasonics é uma empresa certificada pela ISO e dá especial ênfase aos ultrassons de alto desempenho com tecnologia de ponta e facilidade de utilização. Naturalmente, os ultrassons da Hielscher estão em conformidade com a CE e cumprem os requisitos da UL, CSA e RoHs.

A tabela abaixo dá-lhe uma visão geral dos nossos vários ultrassons de laboratório: