Ultrasone bereiding van bloedplaatjesrijk serum

• Bloedplaatjesrijk plasma (PRP) is bloedplasma dat is verrijkt met bloedplaatjes en wordt gebruikt voor medische en esthetische behandelingen.
• Ultrasone lysis en conditionering vormen een zeer effectieve methode om bloedplaatjesrijk plasma te bereiden.
• Hielscher Ultrasonics biedt diverse ultrasone systemen die voldoen aan de eisen voor bloedbehandeling (bijv. voor bereiding binnen en buiten een cleanroom).

Bloedplaatjesrijk serum

Sonicatie is een betrouwbare en eenvoudige methode om bloedplaatjes in autoloog bloedserum te lyseren en zo de groeifactoren vrij te maken. De van bloedplaatjes afgeleide fracties – ook bekend als autoloog geconditioneerd serum (ACS) – worden gebruikt voor weefselherstel of esthetische behandelingen. Om optimale resultaten te verkrijgen, wordt het PRP vóór de injectie verrijkt.
Om plasma te bereiden dat is verrijkt met celgroeifactoren, is sonicatie een zeer effectieve en efficiënte methode om de celmembranen te lyseren en vrijwel alle celgroeifactoren uit de bloedplaatjes vrij te maken. Door ultrasone lysis en conditionering kan zelfs bloed worden gebruikt waaraan antistollingsmiddelen zijn toegevoegd.
Conditionering van PRP door middel van sonicatie is een praktische en kosteneffectieve manier om geconcentreerde groeifactoren te verkrijgen.

Ultrasone lysis van bloedplaatjesrijk plasma (PRP)

Effecten van ultrasone lysis

Ultrasone behandeling van bloedserum leidt tot een homogene lysis van de bloedplaatjes om de daarin ingesloten groeifactoren vrij te maken (groeifactor AB (PDGF-AB), groeifactor AA (PDGF-AA), groeifactor BB (PDGF-BB), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), transformerende groeifactor β (TGF-β), epidermale groeifactor (EGF), insulineachtige groeifactor (IGF), groeifactor voor epitheelcellen ECGF en fibroblastische groeifactor (FGF)). De bloedplaatjes en hun alfagranula worden door sonicatie ontwricht, waarbij gebruik wordt gemaakt van het verschijnsel akoestische cavitatie. Het gebruik van ultrasone cavitatie voor de lysis van bloedplaatjes vermindert de mogelijke negatieve invloed van de methode met herhaald invriezen en ontdooien op de activiteit van de groeifactoren.

Protocol voor ultrasone bereiding van PRP

Een vers afgenomen autoloog bloedmonster van ca. 16mL wordt in een buis voorzichtig 8–10 keer omgekeerd, zodat het bloed en de antistollingsmiddelen goed worden gemengd. Daarna wordt het monster gedurende 20 min bij 1800 g op kamertemperatuur gecentrifugeerd. Na het centrifugeren vormen de bloedplaatjes en mononucleaire cellen een witachtige laag onderaan de plasmalaag, die bekendstaat als bloedplaatjesrijk plasma (PRP). De bovenste laag staat bekend als bloedplaatjesarm plasma (PPP). De mononucleaire cellen kunnen worden verwijderd of in het monster blijven. Vaak blijven de mononucleaire cellen in het PRP-monster om extra stappen te vermijden die een risico op contaminatie met zich meebrengen.
Opmerking: De ultrasone behandeling van autoloog PRP moet onder steriele omstandigheden worden uitgevoerd.
PRP en PPP worden gescheiden en verzameld. Aan het PPP wordt 1,5mL 10% calciumchlorideoplossing toegevoegd, terwijl aan het PRP 0,5mL 5% ethanol wordt toegevoegd. Beide suspensies worden voorzichtig bewogen en blijven gedurende 5 min op kamertemperatuur staan. Ten slotte wordt 1mL PPP aan de PRP-suspensie toegevoegd, waarna deze blijft staan totdat zich een fibrinestolsel vormt.
Ultrasone behandeling: Omdat de gevormde bloedplaatjesgel als reservoir voor de vrijgemaakte groeifactoren dient, moet de fibrinegel worden ontwricht om de beschikbare groeifactoren vrij te maken. De parameters voor de ultrasone lysis en het vrijmaken van groeifactoren zijn als volgt: Behandel het monster in de buis door sonicatie met een UP200Ht of UP200St (200W, 26kHz) met sonotrode S26d2. Om oververhitting van het bloedmonster te voorkomen, kan sonicatie in pulscycli worden uitgevoerd (bijv. 10 sec. aan, 30 sec. uit). Het monster moet ter koeling op ijs worden geplaatst, zodat de temperatuur optimaal tussen 2 – 5°C wordt gehouden. Na sonicatie wordt het monster gedurende 5 min. bij 16.000 g op kamertemperatuur gecentrifugeerd. Het supernatant wordt verzameld en kan bij -70°C worden bewaard.
Bij de methode met sonicatie was de bloedplaatjesconcentratie in de PRP-fractie 1,7 – 4,5 keer hoger dan het gemiddelde aantal bloedplaatjes in volbloed volgens de literatuur.

PRP is gecombineerd met therapie met stamcellen uit vetweefsel (autologe stamcellen die ultrasoon uit vetweefsel zijn vrijgemaakt, met PRP zijn gemengd en voor herstel weer in het weefsel van de patiënt zijn geïnjecteerd).

Ultrasone apparatuur

Hielscher Ultrasonics is expert op het gebied van geavanceerde en betrouwbare ultrasone technologie. Onze ultrasone apparaten worden wereldwijd gebruikt voor lysis, extractie en monsterbereiding – zowel direct als indirect. Autoclaveerbare en voor eenmalig gebruik bestemde accessoires zorgen voor een contaminatievrije behandeling van autologe bloedmonsters. De meeste van onze systemen kunnen worden gebruikt voor ultrasone lysis van stamcellen en PRP, waardoor onze ultrasone apparaten economisch nog efficiënter zijn.
De onderstaande tabel vermeldt onze ultrasone apparaten die geschikt zijn voor de bereiding van bloedplaatjesrijk plasma, met voor elk apparaat het aanbevolen monstervolume. Grotere sonicatoren en systemen op maat zijn eveneens beschikbaar.

Neem vandaag nog contact met ons op! Wij helpen u graag bij het vinden van het optimale ultrasone apparaat!