ASTM E2799-22 protocol voor antimicrobiële evaluatie
De Hielscher UIP400MTP is een krachtige en efficiënte multi-well plaat sonicator ontworpen om de sonicatie stap in het ASTM E2799-22 protocol te stroomlijnen. Door het leveren van uniforme ultrasone energie over de gehele microtiterplaat, zorgt de UIP400MTP voor consistente en betrouwbare onthechting van biofilms van pin deksels zonder de cellen te beschadigen of de integriteit van het monster aan te tasten. De hoge verwerkingscapaciteit en gebruiksvriendelijke bediening verkorten de verwerkingstijd aanzienlijk en verbeteren de reproduceerbaarheid, waardoor het een ideale oplossing is voor laboratoria die levensvatbaarheidstests van biofilms en effectiviteitstests op antimicrobiële stoffen uitvoeren.
ASTM E2799
ASTM E2799 is een gestandaardiseerde testmethode ontworpen om de doeltreffendheid van antimicrobiële stoffen tegen biofilms te evalueren, specifiek gericht op Pseudomonas aeruginosa. Biofilms zijn complexe microbiële gemeenschappen die zich aan oppervlakken hechten en een verhoogde resistentie tegen antimicrobiële behandelingen vertonen, waardoor ze een belangrijke uitdaging vormen in de gezondheidszorg, de industrie en het milieu. Deze methode maakt gebruik van de MBEC-test (Minimum Biofilm Eradication Concentration) om een betrouwbaar en reproduceerbaar kader te bieden voor het testen van desinfectiemiddelen onder realistische biofilmomstandigheden.

96-well platen sonicator UIP400MTP voor high-throughput screening
Hoe draagt Sonication bij aan ASTM E2799?
Sonificatie speelt een cruciale rol in het ASTM E2799 protocol door het losmaken van biofilms van testoppervlakken te vergemakkelijken, waardoor een nauwkeurige beoordeling van de microbiële levensvatbaarheid na behandeling wordt gegarandeerd. Door gebruik te maken van gecontroleerde ultrasone energie, bereikt het protocol een efficiënte en consistente verstoring van de biofilm zonder de cellen te beschadigen, waardoor nauwkeurige en reproduceerbare resultaten mogelijk zijn. Dit maakt ASTM E2799 een essentieel hulpmiddel voor het bevorderen van biofilmonderzoek en het ontwikkelen van effectieve antimicrobiële strategieën.
Hoe de MBEC test uit te voeren volgens ASTM E2799-22
Het ASTM E2799-22 protocol beschrijft de stappen voor het evalueren van de werkzaamheid van antimicrobiële middelen tegen biofilms. Bij gebruik van de Hielscher UIP400MTP microtiterplaat sonicator kan het protocol worden aangepast om deze geavanceerde sonicatiemethode voor het losmaken van biofilms toe te passen. Hieronder volgt een beschrijving van de stappen die zijn afgestemd op het gebruik van de microplaat sonicator UIP400MTP:
- Voorbereiding van biofilms
Maak een steriele 96-well microtiterplaat met afneembare knijperdeksels.
Inoculeer de wells met een gestandaardiseerde bacteriesuspensie in een geschikt groeimedium.
Plaats het deksel van de knijper op de plaat en zorg ervoor dat de knijpers volledig ondergedompeld zijn in de bacteriesuspensie.
Incubeer de plaat onder gecontroleerde omstandigheden (bijv. temperatuur en tijd) om biofilmvorming op de pinnen mogelijk te maken. - Behandeling met antimicrobiële middelen
Vervang het medium na de biofilmvorming door vers medium dat de antimicrobiële teststoffen in verschillende concentraties bevat.
Breng het deksel van de knijper weer aan en incubeer onder de omstandigheden zoals gespecificeerd in de testopzet. - Voorbereiding voor biofilmonthechting
Spoel het deksel van de knijper na de behandeling door het in een steriele spoeloplossing onder te dompelen om achtergebleven antimicrobiële middelen en loszittende planktoncellen te verwijderen. - Biofilmverwijdering met de UIP400MTP Sonicator
Maak een nieuwe 96-well microtiterplaat met een medium voor herstel (bijvoorbeeld neutralisatiebouillon).
Maak de biofilms los door het knijperdeksel in de wells van de recovery medium-plaat te plaatsen.
Plaats de plaat in de UIP400MTP sonicator en zorg ervoor dat het deksel en de plaat goed uitgelijnd zijn.
Stel de sonicator in op 70%-80% amplitude en soniceer gedurende 3-4 minuten in de cyclusmodus om een consistente losmaking van de biofilm te garanderen zonder cellyse. - Beoordeling van levensvatbaarheid van de biofilm
Verwerk na sonicatie het recuperatiemedium met losgemaakte biofilmcellen met standaard microbiologische of analytische technieken, zoals:- Tellingen van kolonievormende eenheden (CFU): Voer seriële verdunningen uit en plaats op agar voor telling van levensvatbare cellen.
- Optische dichtheid (OD) metingen: Gebruik spectrofotometrische analyse om de celdichtheid te bepalen.
- Op fluorescentie gebaseerde levensvatbaarheidstests: Kwantificeer levende en dode cellen met behulp van fluorescerende kleurstoffen.
- gegevensanalyse
Vergelijk de levensvatbaarheidsgegevens van behandelde en onbehandelde biofilms om de werkzaamheid van de antimicrobiële middelen te bepalen.
Bereken de minimale biofilmuitroeiingsconcentratie (MBEC) op basis van de concentratie die nodig is om levensvatbare biofilmcellen te elimineren. - kwaliteitscontrole
Zorg voor consistente sonicatiecondities door de UIP400MTP regelmatig te kalibreren en te controleren of het losmaken van de biofilm niet resulteert in significante cellyse of vernietiging.
Neem geschikte controles op, zoals onbehandelde biofilms en blanco's met alleen medium, om de resultaten te valideren.

De biofilmcellen die zich vormden op de pinnen werden losgemaakt door middel van sonicatie (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Duitsland, UIP250MTP) gedurende 5 minuten in 96-well platen met vers kweekmedium voor herstel van de cellen.
(Afbeelding en studie: ©de Oliveira et al., 2016)
Door de UIP400MTP te integreren in de ASTM E2799-22 workflow, wordt het proces van biofilmonthechting geoptimaliseerd voor consistentie, efficiëntie en high-throughput toepassingen.
Literatuur / Referenties
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
veelgestelde vragen
Wat is ASTM E2799?
ASTM E2799 is een standaard testmethode vastgesteld door ASTM International voor het testen van de werkzaamheid van desinfectiemiddelen tegen Pseudomonas aeruginosa biofilm met behulp van de MBEC Assay. De methode wordt op grote schaal gebruikt om biofilmvorming, antimicrobiële werkzaamheid en materiaaloppervlakte-interacties te evalueren, waardoor gestandaardiseerde vergelijkingen in biofilm-gerelateerd onderzoek mogelijk zijn.
Wat is het verschil tussen ASTM E2799-22 en ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 en ASTM E2799-17?
ASTM E2799 is een gestandaardiseerde testmethode die de doeltreffendheid van ontsmettingsmiddelen tegen biofilms van Pseudomonas aeruginosa evalueert aan de hand van de MBEC-test (Minimum Biofilm Eradication Concentration). Deze methode heeft verschillende herzieningen ondergaan om de nauwkeurigheid en toepasbaarheid te verbeteren.
- ASTM E2799-11: Dit was de eerste uitgave van de standaard, waarin de basisprocedures voor het beoordelen van de werkzaamheid van ontsmettingsmiddelen tegen biofilms van P. aeruginosa met behulp van de MBEC-test zijn vastgelegd.
- ASTM E2799-12: Deze herziening omvatte kleine technische updates om de duidelijkheid te verbeteren en onduidelijkheden te verhelpen die in de versie van 2011 waren gesignaleerd.
- ASTM E2799-17: In deze update werden meer significante wijzigingen aangebracht aan het protocol, waaronder aanpassingen aan het biofilmkweekproces, de behandelingstoepassing en neutralisatieprocedures, met als doel de reproduceerbaarheid te verbeteren en aan te sluiten bij de vooruitgang in biofilmonderzoek.
- ASTM E2799-22: De meest recente herziening weerspiegelt de nieuwste wetenschappelijke inzichten en technologische vooruitgang in biofilmstudies. Het omvat verfijnde methodologieën voor biofilmgroei, -behandeling en -analyse, waardoor de testmethode relevant en effectief blijft voor de huidige evaluaties van de doeltreffendheid van desinfectiemiddelen.
Elke herziening van ASTM E2799 is gemaakt om de betrouwbaarheid, reproduceerbaarheid en relevantie van de methode te verbeteren, zodat deze actueel blijft met de wetenschappelijke en technologische vooruitgang op het gebied van biofilmonderzoek.
Wat is het verschil tussen MBEC en MBIC assays?
Het belangrijkste verschil tussen MBEC (Minimum Biofilm Eradication Concentration) en MBIC (Minimum Biofilm Inhibitory Concentration) assays ligt in hun focus:
MBEC-assays de laagste concentratie van een antimicrobiële stof meten die nodig is om vooraf gevormde biofilms volledig uit te roeien, waarbij het vermogen van een stof om in biofilm ingebedde micro-organismen te doden wordt beoordeeld.
MBIC-assays de laagste concentratie van een antimicrobiële stof bepalen die de initiële vorming van biofilms voorkomt en het vermogen om de ontwikkeling van biofilms te remmen evalueren.
Beide tests zijn cruciaal voor het begrijpen van de werkzaamheid van antimicrobiële stoffen tegen biofilms, maar zijn gericht op verschillende stadia van de levenscyclus van de biofilm.
Ontdek hoe de UIP400MTP microplaat sonicator wordt gebruikt voor het verwijderen van biofilm in MBIC assays!

Hielscher Ultrasonics produceert hoogwaardige ultrasone homogenisatoren van lab naar industrieel formaat.