Staphylococcus Biofilm Kultivatioun an Detachement Protokoll

Standardiséierte Methoden si wesentlech fir zouverlässeg Fuerschungsresultater. Hei fannt Dir e Kultivatiouns- an Detachementprotokoll fir Staphylokokke Biofilmen. Dëse Protokoll konzentréiert sech op streamlined High-Throughput-Probepräparatioun mat UIP400MTP Multi-Well Platte-Sonicator fir effizient, High-Throughput-Biofilm-Detachement an 96-Well Placken. De Protokoll enthält och Schlëssel Schrëtt fir Biofilm Kultivatioun, Wäschen, a Visualiséierung, mat engem Fokus op d'Minimaliséierung vun der Variabilitéit an der Reproduktioun ze garantéieren.

Staphylococcus Biofilm an Antibiotik Fuerschung

Staphylococcus Biofilme spillen eng kritesch Roll bei persistent Infektiounen wéinst hirer Resistenz géint Antibiotike an Immunreaktiounen. Biofilmbildung bitt e Schutzëmfeld fir Bakterien, wat Infektiounen schwéier ze behandelen mécht. Fuerschung iwwer Biofilme konzentréiert sech dacks op d'Versteesdemech vun hirer Formation, Verhalen an Empfindlechkeet fir Antimikrobielen, mat engem Akzent op High-Throughput Methoden fir experimentell Workflows ze streamlinéieren.
Den UIP400MTP Multi-Well Platte-Sonicator bitt e wesentleche Virdeel an der Biofilmfuerschung andeems de séieren an effiziente Detachement vu Biofilme vu 96-Well Placken erméiglecht. Dësen Apparat liwwert eenheetlech Ultraschallenergie un all Brunnen, garantéiert konsequent Resultater wärend d'Verännerlechkeet miniméiert.

Protokoll fir Staphylococcus Biofilm Kultivatioun an Detachement

Hei drënner guidéiere mir Iech mat enger step-by-step Instruktioun duerch de Prozess vun der Kultivatioun an der Ofdreiwung vun engem Staphylococcus Biofilm. Als exemplaresch analytesche Schrëtt weisen mir Iech wéi Dir déi kultivéiert Biomass spektrofotometresch quantifizéiere kënnt duerch Kristallviolett Faarf.

Kultivatioun vu Staphylococcus Biofilm

Material néideg:

• Steril flaach Buedem 96-Well Polystyrol Tissue Kultur-behandelt Mikrotiterplacke mat Deckel
• Tryptesch Soja Bouillon (TSB) mat 0,25% Glukos
• Biologesch Sécherheet Cabinet

Schrëtt:

1. Bereet e sterilt Aarbechtsëmfeld an engem biologesche Sécherheetskabinett fir d'Kontaminatioun ze minimiséieren.
2. Füügt TSB mat 0,25% Glukos an d'Mikrotiterplack Wells. TSB ouni Glukos ënnerstëtzt allgemeng keng Biofilmbildung a sollt nëmmen als Kontroll benotzt ginn wann néideg.
3. Inokuléiert d'Brunnen mat bakterielle Stämme virbereet wéi hei ënnendrënner beschriwwen:
4. Bereet bakteriell Suspensionen, suergt keng viraus existéierend Zellcluster andeems d'Suspensionen mat Hëllef vun Sonikatioun homogeniséiert ginn oder andeems Cluster mat enger 23-Meter Nadel a kuerzen Wirbelen opbriechen.
5. D'Plack mat sengem Deckel zoumaachen an ënner Bedéngungen optimal fir Biofilmbildung inkubéieren (zB 37 ° C fir 24 Stonnen).
6. Féiert d'Experiment an triplicate fir all bakteriell Stamm (dräi Wells pro Stamm) fir Zouverlässegkeet ze garantéieren.
7. Allokéiert sechs Wells pro Plack fir negativ Kontrollen. Bis zu 30 Stämme kënnen pro 96-Well Plack getest ginn.

Biofilm Visualiséierung a Wäschen

1. No der Inkubatioun, entsuergt d'Medium virsiichteg fir de Biofilm ze stéieren.
2. Wash all Well véier Mol mat physiologeschen Salzlinn fir planktonesch Bakterien ze entfernen.
3. Inspektéiert de Buedem vun de Brunnen fir wäiss Flecken, déi d'Präsenz vu Biofilm weisen.

Biofilm Detachement Mat Hëllef vum Multi-Well Plate Sonicator UIP400MTP

Apparat Setup a Parameteren:

• UIP400MTP Multi-Well Platen Sonicator
• Operatiounsastellungen: 60% Amplitude, Zyklusmodus mat 60 Sekonnen ON / 30 Sekonnen OFF

Schrëtt:

1. Setzt déi gewascht Mikrotiterplack op d'UIP400MTP Plattform.
2. Sonicate d'Proben op recommandéiert Astellungen (60% Amplitude, 60 Sekonnen ON, 30 Sekonnen OFF). Passt d'Astellunge fir d'Bakteriestamm un.
3. Fänkt de Sonikatiounsprozess un fir de Biofilm ze trennen. D'Ultraschallwellen stéieren d'Biofilm Matrix, befreien déi adherent Bakterien.
4. D'UIP400MTP suergt fir eenheetlech Belaaschtung iwwer all Wells fir konsequent Detachement Resultater.

Analytesch Schrëtt: Quantifikatioun vun ofgebauter Staphylococcus Biofilm Biomass mat Hëllef vu Crystal Violet (CV)

Material néideg:

• 0.1% Kristallsglas produzéiert violett (CV) Léisung
• 95% Ethanol oder 30% Essigsäure (fir Solubiliséierung)
• Mikroplate Lieser kapabel fir op 570 nm ze liesen
• Sterile Mikrotiterplacke fir Faarwen

Schrëtt:

1. Virbereedung vun der Faarfplack: Transfert 100 μL vun der ofgebauter Biofilm-Suspension vun all Well vun der sonikéierter Plack an entspriechend Wells vun enger propperer, steriler 96-Well Mikrotiterplack. Dëst garantéiert eng kloer an eenheetlech Ëmwelt fir staining.
2. Den ofgebauten Biofilm stainéieren: Füügt 150 μL vun 0,1% Kristallviolett Léisung an all Brunn mat der ofgebauter Biofilm Suspension. Pipette sanft fir eng gläichméisseg Vermëschung vun der Biofilmsuspension a Kristallviolett ze garantéieren.
3. Inkubatioun: Loosst d'Plack bei Raumtemperatur fir 15 Minutten inkubéieren fir d'Kristallviolett z'erméiglechen d'Biomass effektiv ze fléien.
4. Wäschen: No der Inkubatioun, suergfälteg d'Kristall violett Léisung aus de Brunnen ewechzehuelen ouni d'Biomass ze stéieren. Wash all Well dräimol mat sterile physiologeschen Salins fir ongebonnen Fleck ze entfernen.
5. Dréchent: Loosst d'Plack Loft dréchen bei Raumtemperatur oder ënner enger steriler Loftfloss Hood. Vermeiden Heizung, well dëst d'Resultater änneren kann.
6. Solubiliséierung: Füügt 200 μL 95% Ethanol (oder 30% Essigsäure, jee no Standard Labopraktiken) un all Well fir de gebonnen Kristallviolett ze solubiliséieren. Mix sanft andeems Dir d'Platte 10 Minuten laang bei Raumtemperatur pipetéiert oder schüttelt.
7. Miessung: Mooss d'optesch Dicht (OD) vun der solubiliséierter Kristallviolett Léisung bei 570 nm mat engem Mikroplate Lieser.
8. Donnéeën Analyse: Subtract der Moyenne OD570 Wäert vun negativ Kontrollen (Wunnen mat TSB awer kee bakteriell inoculum) aus experimentell Wells fir Hannergrond staining ze Kont. Rekord an analyséiert d'Donnéeën.

Bemierkung: Maacht d'Experiment an triplicate fir all Konditioun fir d'Reproduzibilitéit ze garantéieren. Vergewëssert Iech eng korrekt Handhabung vu Kristallviolett an Ethanol, respektéiert d'Sécherheets- an Entsuergungsprotokoller.
 

D'Haaptvirdeeler vum UIP400MTP op ee Bléck:

• High-Throughput Veraarbechtung: Speziell fir Multi-Well Placken entworf, wat Iech erlaabt Iech verschidde Proben gläichzäiteg ze veraarbechten.
• Uniform Ultrasonic Verdeelung: Assuréiert d'selwecht Ultraschallintensitéit iwwer Brunnen, liwwert konsequent Resultater iwwer all Proben.
• Benotzt all Standardplack: D'UIP400MTP kann all Standard Multi-Well Platen, Petri Platen a Rouer Racken handhaben. Keng deier propriétaire Placke néideg!
• User-frëndlech Interface: Einfach ze konfiguréieren an ze kontrolléieren, sou datt et en exzellent Tool ass fir d'Produktivitéit vum Labo ze erhéijen. Programméierbar Astellungen an Automatisatioun erliichteren Prozessstandardiséierung!