ASTM E2799-22-Protokoll fir d’Evaluatioun vun der antimikrobieller Wierksamkeet

Den Hielscher UIP400MTP ass e leeschtungsstaarken an effizienten Ultraschallapparat fir Multiwell-Placken, deen entwéckelt gouf, fir den Ultraschallbehandlungsschrëtt am ASTM E2799-22-Protokoll ze vereinfachen. Duerch déi gläichméisseg Verdeelung vun Ultraschallenergie iwwer déi ganz Mikrotiterplack suergt den UIP400MTP fir eng konsequent an zouverlässeg Ofléisung vu Biofilmer vu Stëftdeckelen, ouni d’Zellen ze beschiedegen oder d’Integritéit vun de Prouwen ze beeinträchtegen. Seng Kapazitéit fir en héije Prouwenduerchsaz a seng benotzerfrëndlech Bedéngung reduzéieren d’Veraarbechtungszäit däitlech a verbesseren dobäi d’Reproduzéierbarkeet. Dat mécht en zu enger idealer Léisung fir Laboratoiren, déi Tester fir d’Liewensfäegkeet vu Biofilmer an d’antimikrobiell Wierksamkeet duerchféieren.

ASTM E2799

ASTM E2799 ass eng standardiséiert Testmethod, déi entwéckelt gouf, fir d’Wierksamkeet vun antimikrobielle Mëttele géint Biofilmer ze evaluéieren, mat engem besonnesche Fokus op Pseudomonas aeruginosa. Biofilmer si komplex mikrobiell Gemeinschaften, déi un Uewerflächen haften an eng erhéicht Resistenz géint antimikrobiell Behandlungen opweisen. Doduerch stelle si eng bedeitend Erausfuerderung am Gesondheetswiesen, an der Industrie an am Ëmweltberäich duer. Dës Method benotzt den Test fir d’minimal Biofilmeradikatiounskonzentratioun (MBEC), fir en zouverlässegen a reproduzéierbare Kader fir d’Teste vun Desinfektiounsmëttelen ënner realistesche Biofilmbedingungen ze bidden.

Wéi dréit d’Ultraschallbehandlung zu ASTM E2799 bäi?

D’Ultraschallbehandlung spillt eng entscheedend Roll am ASTM E2799-Protokoll, well si d’Ofléisung vu Biofilmer vun Testuewerflächen erliichtert an esou eng genee Bewäertung vun der mikrobieller Liewensfäegkeet no der Behandlung erméiglecht. Duerch den Asaz vu kontrolléierter Ultraschallenergie erreecht de Protokoll eng effizient a konsequent Opbriechung vum Biofilm, ouni d’Zellen ze beschiedegen, wat präzis a reproduzéierbar Resultater erméiglecht. Dat mécht ASTM E2799 zu engem wesentlechen Instrument, fir d’Biofilmfuerschung virunzebréngen an effikass antimikrobiell Strategien z’entwéckelen.

Wéi de MBEC-Test am Aklang mat ASTM E2799-22 duerchgefouert gëtt

Den ASTM E2799-22-Protokoll beschreift d’Schrëtt fir d’Evaluatioun vun der Wierksamkeet vun antimikrobielle Mëttele géint Biofilmer. Beim Asaz vum Hielscher UIP400MTP-Ultraschallapparat fir Mikrotiterplacke kann de Protokoll ugepasst ginn, fir dës fortgeschratt Ultraschallmethod fir d’Ofléisung vu Biofilmer anzebannen. Hei drënner ginn d’Schrëtt beschriwwen, déi un den Asaz vum Ultraschallapparat UIP400MTP fir Mikroplacken ugepasst sinn:

1. Virbereedung vu Biofilmer
   Bereet eng steril Mikrotiterplack mat 96 Verdéiwungen an ofhuelbare Stëftdeckele vir.
   Beimpft d’Verdéiwunge mat enger standardiséierter Bakteriesuspensioun an engem gëeegente Wuesstumsmedium.
   Setzt de Stëftdeckel op d’Plack a gitt sécher, datt d’Stëfter vollstänneg an d’Bakteriesuspensioun agedaucht sinn.
   Inkubéiert d’Plack ënner kontrolléierte Bedéngungen (z. B. Temperatur an Zäit), fir d’Bildung vu Biofilmer op de Stëfter z’erméiglechen.
2. Behandlung mat antimikrobielle Mëttelen
   Ersetzt no der Biofilmbildung de Medium duerch frësche Medium, deen déi ze testend antimikrobiell Mëttelen a verschiddene Konzentratiounen enthält.
   Setzt de Stëftdeckel erëm op an inkubéiert ënner de Bedéngungen, déi am Testplang festgeluecht sinn.
3. Virbereedung fir d’Ofléisung vu Biofilmer
   Spullt no der Behandlung de Stëftdeckel, andeems Dir en an eng steril Spullléisung daucht, fir Reschter vun antimikrobielle Mëttelen a labber unhaftend planktonesch Zellen ze entfernen.
4. Ofléisung vu Biofilmer mam Ultraschallapparat UIP400MTP
   Bereet eng frësch Mikrotiterplack mat 96 Verdéiwunge vir, déi e Recuperatiounsmedium (z. B. eng neutraliséierend Bouillon) enthält.
   Léist d’Biofilmer of, andeems Dir de Stëftdeckel an d’Verdéiwunge vun der Plack mam Recuperatiounsmedium setzt.
   Setzt d’Plack an den Ultraschallapparat UIP400MTP a gitt sécher, datt den Deckel an d’Plack korrekt ausgeriicht sinn.
   Stellt den Ultraschallapparat op 70%–80% Amplitud a behandelt 3–4 Minutte laang am Zyklusmodus mat Ultraschall, fir eng konsequent Ofléisung vu Biofilmer ouni Zelllys ze garantéieren.
5. Bewäertung vun der Liewensfäegkeet vu Biofilmer
   Veraarbecht no der Ultraschallbehandlung de Recuperatiounsmedium, deen déi ofgeléiste Biofilmzellen enthält, mat standardiséierte mikrobiologeschen oder analyteschen Techniken, wéi zum Beispill:
   • Ziele vu koloniebildenden Eenheeten (CFU): Maacht seriell Verdënnungen a plattéiert op Agar, fir liewensfäeg Zellen ze zielen.
   • Miessunge vun der optescher Dicht (OD): Benotzt eng spektrophotometresch Analys, fir d’Zelldicht ze bewäerten.
   • Fluoreszenzbaséiert Liewensfäegkeetstester: Quantifizéiert lieweg an dout Zelle mat fluoreszente Faarfstoffer.
6. Datenanalys
   Vergläicht d’Liewensfäegkeetsdate vu behandelten an onbehandelte Biofilmer, fir d’Wierksamkeet vun den antimikrobielle Mëttelen ze bestëmmen.
   Berechent déi minimal Biofilmeradikatiounskonzentratioun (MBEC) op Basis vun der Konzentratioun, déi néideg ass, fir liewensfäeg Biofilmzellen ze eliminéieren.
7. Qualitéitskontroll
   Suergt fir konsequent Ultraschallbehandlungsbedéngungen, andeems Dir den UIP400MTP reegelméisseg kalibréiert an iwwerpréift, datt de Prozess vun der Biofilmofléisung net zu enger bedeitender Zelllys oder Zellzerstéierung féiert.
   Benotzt gëeegent Kontrollen, wéi onbehandelt Biofilmer a Blannprouwen, déi nëmme Medium enthalen, fir d’Resultater ze validéieren.

D’Biofilmzellen, déi sech op de Stëfter gebilt haten, goufen duerch eng Ultraschallbehandlung (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Däitschland, UIP250MTP) vu 5 min a Placke mat 96 Verdéiwungen ofgeléist, déi frësche Kulturmedium fir d’Recuperatioun vun den Zellen enthale hunn.
(Bild a Studie: ©de Oliveira et al., 2016)

Duerch d’Integratioun vum UIP400MTP an den ASTM E2799-22-Aarbechtsoflaf gëtt de Prozess vun der Biofilmofléisung fir Konstanz, Effizienz an Uwendunge mat héijem Prouwenduerchsaz optiméiert.