MBEC Assay Protokoll benotzt den 96-Well Plate Sonicator UIP400MTP

De MBEC Assay gëtt benotzt fir d'Konzentratioun vun antimikrobiellen Agenten ze bestëmmen déi néideg sinn fir Biofilme geformt op Pegdeckelen ze eliminéieren. Fir d'Biofilm Viabilitéit ze bewäerten, mussen d'Biofilme fir d'éischt vun de Pegdeckelen vun enger 96-Well Plack ofgeschaaft ginn. Sonication ass déi zouverlässegst an effizientst Method fir dës Detachement. De Multi-Well Platte Sonicator UIP400MTP ass speziell entwéckelt fir Assayplacke mat maximaler Effizienz a Komfort ze veraarbechten, ze streamlinéieren an ze beschleunegen High-Throughput MBEC Assays.

Sonication fir Biofilm Detachement

Sonication ass e entscheedende Schrëtt an der Minimum Biofilm Eradication Concentration (MBEC) Assays, déi d'effektiv Entloossung vu Biofilmzellen aus hirer Uewerflächefestung erméiglecht. Biofilms sinn inherent strukturéiert Gemeinschafte vu Mikroorganismen, déi an enger extrazellulärer Matrix agespaart sinn, wat se wesentlech méi resistent géint antimikrobiellen Agenten am Verglach zu planktoneschen Zellen mécht. Wärend MBEC Assays benotzt Sonikatioun Ultraschallwellen fir kontrolléiert Kavitatioun ze generéieren, d'Biofilm Matrix ze stéieren an embedded Zellen an eng Suspensioun ze befreien. Dëse Schrëtt garantéiert datt d'Biofilmzellen gleichméisseg am Erhuelungsmedium verspreet sinn, wat präzis Viabilitéitsbewäertungen duerch Plating, Verdünnung oder spektrofotometresch Methoden erliichtert. Ouni adäquate Biofilm-Entloossung kënnen d'Rescht Matrixkomponenten Zellen schützen, wat zu enger Ënnerschätzung vun der antimikrobieller Effizienz féiert. Dofir ass d'Sonicatioun onverzichtbar fir zouverlässeg a reproduzéierbar MBEC Wäerter ze kréien, wat de richtege Eradikatiounspotenzial vun den getesten Agenten reflektéiert. De Multi-Well Platte Sonicator UIP400MTP erlaabt d'einfach High-Throughput Probe Virbereedung an Assayplacken.

Minimum Biofilm Eradication Konzentratioun (MBEC) Assay Protokoll

Schrëtt 1: Biofilmbildung

1. Bereet d'bakteriell Suspension:
   Wuesse Bakterien an passenden Medien fir de Phase Wuesstum ze logéieren.
   Verdünnt d'Bakteriekultur op eng definéiert optesch Dicht (zB OD600 ~ 0,1).
2. Inokulatioun vun der 96-Well Plack:
   Füügt d'bakteriell Suspension (zB 150-200 μL) an all Well vun enger Standard 96-Well Mikrotiterplack.
3. Befestegt de Peg Deckel:
   Setzt de Peg-Deckel op d'inokuléiert Plack fir d'Biofilmbildung op de Peg-Uewerflächen z'erméiglechen.
4. Inkubéiert d'Plack:
   Inkubéiert de Setup bei enger passender Temperatur (zB 37 ° C) fir 24-48 Stonnen ouni ze schüttelen fir de Biofilmwachstum ze förderen.

Schrëtt 2: Behandlung mat Antimikrobiellen Agenten

• Preparéieren antimikrobiell Léisungen:
  Bereet eng Rei vun antimikrobiellen Konzentratioune a frësche Medien.
  Biofilme fir antimikrobiellen Agenten aussetzen:
  Huelt de Peg Deckel aus der Bakteriekultur a spült se a sterile Salzlinn oder PBS fir planktonesch Zellen ze entfernen.
  Setzt de Pegdeckel an eng nei 96-Well Plack mat antimikrobiellen Léisungen.
• Inkubéiert d'Plack:
  Inkubéiert fir eng definéiert Period (zB 24 Stonnen) fir antimikrobieller Belaaschtung z'erméiglechen.

Schrëtt 3: Sonication mat der 96-Well Plate Sonicator UIP400MTP

De Sonicatiounsschrëtt ass kritesch fir Biofilme vun de Pegdeckelen ze trennen fir d'Viabilitéit ze bewäerten. Follegt dës Schrëtt fir den UIP400MTP Sonicator:

1. Bereet de Setup:
   Fëllt eng frësch 96-Well Plack mat Erhuelungsmëttel (zB neutraliséiere Bouillon oder frësch Wuesstumsmedium) an all Brunn.
2. Transfert de Peg Deckel:
   Huelt de Peg Deckel aus der antimikrobieller Behandlungsplack.
   Spülen de Peg Deckel a sterilem Salzlinn oder PBS fir Reschter antimikrobiellen Agenten ze entfernen.
3. Positionéiert d'Plack an d'Sonicator:
   Befestegt de Peg Deckel op d'Erhuelungsmëttelplack.
   Setzt d'Erhuelungsmëttelplack op d'UIP400MTP Sonicator Plattform, fir datt d'Plack zentréiert a stabil ass.
4. Ajustéieren sonication Parameteren:
   Setzt d'Sonicatiounsparameter op der UIP400MTP (Astellunge kënnen un de Biofilm ugepasst ginn):
   Amplitude: 70-100%.
   Sonication Zäit: 1-3 Minutten (ajustéieren baséiert op Biofilm Robustheet) am Zyklus Modus.
5. Sonicate:
   Start der sonication Prozess. D'Ultraschallvibration wäert d'Biofilme vun de Peg-Uewerflächen an d'Erhuelungsmedium entloossen.
6. Monitor de Prozess:
   Benotzt den pluggable Temperatursensor fir d'Probetemperatur an de Brunnen ze iwwerwaachen. D'UIP400MTP kann mat engem Labo Chiller fir Ofkillung verbonne ginn.
7. Post-Sonication Handling:
   Transfert direkt d'Erhuelungsmedium (elo mat ofgebaute Biofilmen) an eng frësch steril Plack fir Downstream Analyse.

(A) Plack mat TSB mat 2% Glukos benotzt fir Biofilm Bildung, Zell Erhuelung, an
Bestëmmung vu MIC a MBCB; (B) Deckel mat Pins fir d'Bildung vu Staphylokokken Biofilmen. Bestëmmung vu MIC a MBCB; (B) Deckel mat Pins fir d'Bildung vu Staphylokokken Biofilmen.
D'Biofilmzellen, déi op de Pins geformt goufen, goufen duerch Sonikatioun (Hielscher Ultraschall Technologie) fir 5 min an 96-Well Placke mat frëschem Kulturmedium fir d'Erhuelung vun den Zellen entlooss.
(Bild a Studie: ©de Oliveira et al., 2016)

Schrëtt 4: Viability Assessment

Plack a Kultur ofgebaute Biofilmer:

1. Féiert seriell Verdünnungen vum Erhuelungsmedium a Plack op Agar fir Koloniebildende Eenheeten (CFU) opzezielen.
   Alternativ benotzt e kolorimetrische oder fluoreszenz-baséierte Viabilitéitsassay.
2. Rekord Resultater:
   Bestëmmt de MBEC als déi niddregst Konzentratioun vun Antimikrobiellen, déi detektéierbar Biofilm Viabilitéit eliminéiert huet.

Design, Fabrikatioun a Berodung – Qualitéit Made in Germany

Hielscher Ultraschaller si bekannt fir hir héchst Qualitéit an Designnormen. Robustheet an einfach Operatioun erlaben déi glat Integratioun vun eisen Ultraschaller an industriellen Ariichtungen. Rau Konditiounen an erfuerderlech Ëmfeld ginn einfach vun Hielscher Sonicatoren gehandhabt.

Hielscher Ultrasonics ass eng ISO zertifizéiert Firma a setzt spezielle Wäert op High-Performance Ultrasonicatoren mat modernste Technologie a Benotzerfrëndlechkeet. Natierlech sinn Hielscher Ultraschaller CE konform an entspriechen d'Ufuerderunge vun UL, CSA a RoHs.

Liest hei wéi den UIP400MTP fir d'Biofilm-Detachement benotzt gëtt als Probepräparatiounsschrëtt wärend dem ASTM E2799 Protokoll fir d'Desinfektiounseffizienz géint Pseudomonas aeruginosa Biofilm ze testen mat der MBEC Assay.