MBEC-Testprotokoll mam UIP400MTP Sonikator fir 96-Kavitéite-Placken

De MBEC-Test gëtt benotzt, fir d’Konzentratioun vun antimikrobiellen Agenten ze bestëmmen, déi néideg ass, fir Biofilmer ze eliminéieren, déi sech op Deckele mat Stëfter gebilt hunn. Fir d’Liewensfäegkeet vum Biofilm ze bewäerten, mussen d’Biofilmer fir d’éischt vun de Stëfter um Deckel vun enger 96-Kavitéite-Plack ofgeléist ginn. D’Ultraschallbehandlung ass déi zouverlässegst an effizientst Method fir dës Ofléisung. Den UIP400MTP Sonikator fir Multiwell-Placken ass speziell dofir entwéckelt, Testplacke mat maximaler Effizienz a maximalem Bedéngkomfort ze verschaffen an esou MBEC-Tester mat héijem Duerchsaz ze vereinfachen an ze beschleunegen.

Ultraschallbehandlung fir d’Ofléisung vu Biofilmer

D’Ultraschallbehandlung ass e wichtege Schrëtt bei Tester fir d’minimal Biofilm-Eradikatiounskonzentratioun (MBEC), well si et erméiglecht, Biofilmzellen effektiv vun der Uewerfläch ofzeléisen, un där si haften. Biofilmer si vun Natur aus strukturéiert Gemeinschafte vu Mikroorganismen, déi an enger extrazellulärer Matrix agebett sinn, wouduerch si däitlech méi resistent géint antimikrobiell Agente si wéi planktonesch Zellen. Bei MBEC-Tester gi bei der Ultraschallbehandlung Ultraschallwelle benotzt, fir kontrolléiert Kavitatioun ze erzeugen, déi d’Biofilmmatrix opbrécht an déi agebett Zellen an eng Suspensioun fräisetzt. Dëse Schrëtt garantéiert, datt d’Biofilmzelle gläichméisseg am Erhuelungsmedium verdeelt sinn, wat eng genee Bewäertung vun hirer Liewensfäegkeet duerch Ausplacken, Verdënnung oder spektrophotometresch Methoden erliichtert. Ouni eng korrekt Ofléisung vum Biofilm kéinte verbleiwend Matrixbestanddeeler d’Zelle schützen, wat zu enger Ënnerschätzung vun der antimikrobieller Wierksamkeet féiere kéint. Dofir ass d’Ultraschallbehandlung onverzichtbar, fir zouverlässeg a reproduzéierbar MBEC-Wäerter ze kréien, déi dat tatsächlecht Eradikatiounspotenzial vun de getesteten Agente reflektéieren. Den UIP400MTP Sonikator fir Multiwell-Placken erméiglecht eng einfach Proufvirbereedung mat héijem Duerchsaz an Testplacken.

Testprotokoll fir d’minimal Biofilm-Eradikatiounskonzentratioun (MBEC)

Schrëtt 1: Bildung vu Biofilmer

1. D’Bakteriesuspensioun virbereeden:
   Kultivéiert Bakterien a gëeegente Medie bis an déi logarithmesch Wuesstemsphas.
   Verdënnt d’Bakteriekultur op eng definéiert optesch Dicht (z. B. OD600 ~0,1).
2. D’96-Kavitéite-Plack inokuléieren:
   Gitt d’Bakteriesuspensioun (z. B. 150–200 µL) an all Kavitéit vun enger Standard-Mikrotiterplack mat 96 Kavitéiten.
3. Den Deckel mat Stëfter opsetzen:
   Setzt den Deckel mat Stëfter op déi inokuléiert Plack, fir d’Bildung vu Biofilmer op de Stëfteruewerflächen ze erméiglechen.
4. D’Plack inkubéieren:
   Inkubéiert den Opbau bei enger gëeegenter Temperatur (z. B. 37°C) fir 24–48 Stonnen ouni ze rëselen, fir de Wuesstem vu Biofilmer ze fërderen.

Schrëtt 2: Behandlung mat antimikrobiellen Agenten

• Antimikrobiell Léisunge virbereeden:
  Bereet eng Rei vun antimikrobiellen Konzentratiounen a frësche Medie vir.
  D’Biofilmer antimikrobiellen Agenten aussetzen:
  Huelt den Deckel mat Stëfter vun der Bakteriekultur a spullt en a steriller Salzléisung oder PBS, fir planktonesch Zellen ze ewechzehuelen.
  Setzt den Deckel mat Stëfter an eng nei 96-Kavitéite-Plack, déi d’antimikrobiell Léisungen enthält.
• D’Plack inkubéieren:
  Inkubéiert fir eng definéiert Zäit (z. B. 24 Stonnen), fir d’Awierkung vun den antimikrobiellen Agenten ze erméiglechen.

Schrëtt 3: Ultraschallbehandlung mam UIP400MTP Sonikator fir 96-Kavitéite-Placken

Den Ultraschallbehandlungsschrëtt ass entscheedend, fir Biofilmer vun de Stëfter um Deckel ofzeléisen an hir Liewensfäegkeet ze bewäerten. Befollegt dës Schrëtt fir den UIP400MTP Sonikator:

1. Den Opbau virbereeden:
   Fëllt all Kavitéit vun enger neier 96-Kavitéite-Plack mat Erhuelungsmedium (z. B. neutraliséierender Bouillon oder frëschem Wuesstemsmedium).
2. Den Deckel mat Stëfter transferéieren:
   Huelt den Deckel mat Stëfter vun der Plack fir d’antimikrobiell Behandlung.
   Spullt den Deckel mat Stëfter a steriller Salzléisung oder PBS, fir Reschter vun antimikrobiellen Agenten ze ewechzehuelen.
3. D’Plack an de Sonikator positionéieren:
   Setzt den Deckel mat Stëfter op d’Plack mam Erhuelungsmedium.
   Stellt d’Plack mam Erhuelungsmedium op d’Plattform vum UIP400MTP Sonikator a vergewëssert Iech, datt d’Plack zentréiert a stabil steet.
4. D’Ultraschallparameter astellen:
   Stellt d’Ultraschallparameter um UIP400MTP an (d’Astellunge kënnen un de Biofilm ugepasst ginn):
   Amplitud: 70–100%.
   Dauer vun der Ultraschallbehandlung: 1–3 Minutten (jee no Robustheet vum Biofilm upassen) am Zyklusmodus.
5. Mat Ultraschall behandelen:
   Start d’Ultraschallbehandlung. D’Ultraschallschwéngung léist d’Biofilmer vun de Stëfteruewerflächen of a bréngt se an d’Erhuelungsmedium.
6. De Prozess iwwerwaachen:
   Benotzt den uschléissbaren Temperatursensor, fir d’Prouftemperatur an de Kavitéiten ze iwwerwaachen. Den UIP400MTP kann un e Labokillapparat ugeschloss ginn, fir ze killen.
7. Handhabung no der Ultraschallbehandlung:
   Transferéiert d’Erhuelungsmedium (dat elo ofgeléiste Biofilmer enthält) direkt an eng nei steril Plack fir uschléissend Analysen.

(A) Plack mat TSB mat 2% Glukos, déi fir d’Bildung vu Biofilmer, d’Erhuelung vun den Zellen an
d’Bestëmmung vu MIC a MBCB benotzt gëtt; (B) Deckel mat Stëfter fir d’Bildung vu Staphylokokke-Biofilmer. Bestëmmung vu MIC a MBCB; (B) Deckel mat Stëfter fir d’Bildung vu Staphylokokke-Biofilmer.
D’Biofilmzellen, déi sech op de Stëfter gebilt haten, goufen duerch eng Ultraschallbehandlung (Hielscher Ultrasound Technology) vu 5 min an 96-Kavitéite-Placken ofgeléist, déi frëscht Kulturmedium fir d’Erhuelung vun den Zellen enthale hunn.
(Bild a Studie: ©de Oliveira et al., 2016)

Schrëtt 4: Bewäertung vun der Liewensfäegkeet

Ofgeléiste Biofilmer ausplacken a kultivéieren:

1. Maacht seriell Verdënnunge vum Erhuelungsmedium a plackt se op Agar aus, fir koloniebildend Eenheeten (CFU) ze zielen.
   Alternativ kënnt Dir e kolorimetreschen oder fluoreszenzbaséierten Test vun der Liewensfäegkeet benotzen.
2. Resultater festhalen:
   Bestëmmt d’MBEC als déi niddregst Konzentratioun vum antimikrobiellen Agent, déi déi noweisbar Liewensfäegkeet vum Biofilm eliminéiert huet.

Design, Fabrikatioun a Berodung – Qualitéit Made in Germany

Hielscher Ultraschallapparater si fir hir héchst Qualitéits- an Designstandarde bekannt. Robustheet an einfach Bedéngung erméiglechen eng reibungslos Integratioun vun eisen Ultraschallapparater an industriell Anlagen. Hielscher Sonikatore bewältegen ouni Problemer haart Bedéngungen an usprochsvoll Ëmfeld.

Hielscher Ultrasonics ass eng ISO-zertifizéiert Entreprise a leet besonnesche Wäert op héichleeschtungsfäeg Ultraschallapparater mat modernster Technologie a Benotzerfrëndlechkeet. Selbstverständlech sinn Hielscher Ultraschallapparater CE-konform an erfëllen d’Ufuerderunge vun UL, CSA a RoHs.

Liest hei, wéi den UIP400MTP am Kader vum ASTM E2799-Protokoll fir d’Ofléisung vu Biofilmer als Schrëtt vun der Proufvirbereedung benotzt gëtt, fir d’Wierksamkeet vun Desinfektiounsmëttel géint Pseudomonas aeruginosa-Biofilmer mam MBEC-Test ze testen.