ლიპოსომები საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდით Sonication-ის გამოყენებით
ლიპოსომები არის მრავალმხრივი ნანომატარებლები, რომლებიც გამოიყენება წამლების მიწოდებაში მათი ბიოთავსებადობისა და ჰიდროფილური და ჰიდროფობიური პრეპარატების ინკაფსულაციის უნარის გამო. საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდი (ასევე ცნობილია, როგორც ემულსიფიკაციის მეთოდი ან გამხსნელ-აორთქლების მეთოდი) არის ლიპოსომის მომზადების თვალსაჩინო ტექნიკა, რომელიც გთავაზობთ ინკაფსულაციის მაღალ ეფექტურობას. ეს სტატია ფოკუსირებულია ლიპოსომების მომზადებაზე საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდით, რომელიც გაუმჯობესებულია ზონდის ტიპის სონიკიციით, ხაზს უსვამს პროცედურულ ეტაპებს, სარგებელსა და პოტენციურ აპლიკაციებს წამლების მიწოდების სისტემებში.
ლიპოსომის მომზადების მეთოდოლოგია საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდით
ლიპოსომის ფორმირება საპირისპირო აორთქლების მეთოდით გაჟონვის გამოყენებით გულისხმობს ლიპიდების დაშლას ქლოროფორმისა და მეთანოლის ორგანულ გამხსნელ ნარევში (2:1 ვ/ვ), რაც ხელს უწყობს ინვერსიული მიცელების წარმოქმნას. შემდეგ ამ ნარევს ემატება წყლის ბუფერი. კომბინირებული ხსნარი გაჟღენთილია, მაგალითად, ზონდის ტიპის სონიკატორის გამოყენებით, როგორიცაა UP400ST, წყლის ზეთში მიკროემულსიის შესაქმნელად. შემდეგ ორგანული გამხსნელი აორთქლდება მბრუნავი აორთქლების გამოყენებით, რის შედეგადაც მიიღება ბლანტი გელი, რომელიც საბოლოოდ იშლება ლიპოსომების წარმოქმნით. მიკროემულსიის ბუშტების დიდი წყლიანი ბირთვი ხელს უწყობს ჰიდროფილური მოლეკულების ჩაკეტვას, რაც იწვევს ლიპოსომურ გელებს, რომლებიც აჩვენებენ კონტროლირებად გათავისუფლებას და კარგ შეღწევადობის პროფილს. საბოლოოდ, ლიპოსომები მცირდება ერთგვაროვან ზომებამდე სონიკატორის გამოყენებით.
პროტოკოლი / ნაბიჯ-ნაბიჯ ინსტრუქციები:
- ლიპიდების აწონვა და დაშლა:
ზუსტად აწონეთ სულ 40 მგ L-α-ფოსფატიდილქოლინი და ქოლესტერინი მასის თანაფარდობით 4:1 ან 7:3.
აწონილი ლიპიდები იხსნება 10 მლ ქლოროფორმის/მეთანოლის ნარევში (4:1 ვ/ვ) მრგვალ ფსკერის კოლბაში. - ლიპიდური ფილმის ფორმირება:
მიამაგრეთ მრგვალი ფსკერის კოლბა მბრუნავ აორთქლებაზე.
დაატრიალეთ კოლბა 8 xg 40°C ტემპერატურაზე ვაკუუმის პირობებში, სანამ თხელი ლიპიდური ფილმი არ ჩამოყალიბდება კოლბის კედლებზე. - ამოიღეთ გამხსნელი ორთქლი:
ამოიღეთ გამხსნელის ნარევიდან დარჩენილი ორთქლი კოლბის აზოტის გაზით ჩამორეცხვით. - ლიპიდური ფილმის ხელახლა დაშლა:
ხელახლა გახსენით ლიპიდური ფილმი 10 მლ დიეთილის ეთერში შებრუნებული ფაზის ვეზიკულების წარმოქმნით. - წყლის ფაზის მომზადება:
შეურიეთ 5 მლ PBS ბუფერი (0.1 M, pH 7.4), რომელიც შეიცავს აქტიურ ინგრედიენტს ინკაფსულაციისთვის და 20 მგ Tween 80 ორგანულ ფაზას (დიეთილის ეთერი გახსნილი ლიპიდებით). - Sonicate ემულსია:
მოათავსეთ ემულსია ყინულის აბაზანაში.
ემულსიის გაჟღენთვა ზონდის ტიპის სონიკატორის გამოყენებით UP200Ht 26 kHz და 50% პულსის რეჟიმში (0.5 ციკლი = 30 წმ ჩართვა / 30 წმ გამორთვა) და 50% ამპლიტუდა 1 წუთის განმავლობაში. - აორთქლდით გელის ფორმამდე:
დააბრუნეთ გაჟღენთილი ემულსია მბრუნავ აორთქლებაში.
აორთქლდეს ატმოსფერული წნევის ქვეშ 40°C-ზე გელის მიღებამდე. - ლიპოსომების ფორმირება:
შემდგომში აორთქლდით გელი, დაარღვიეთ იგი ნახევრად გამჭვირვალე სითხეში, რაც მიუთითებს ლიპოსომების წარმოქმნაზე. - ლიპოსომის საბოლოო სუსპენზია:
დაამატეთ კიდევ 5 მლ PBS ბუფერი (0.1 M, pH 7.4) ლიპოსომის სუსპენზიას.
ნაზად აურიეთ ნარევი.
დიეთილის ეთერის დარჩენილი ორთქლის ევაკუაცია აზოტის გაზის გამოყენებით. - შენახვა:
შეინახეთ საბოლოო ლიპოსომის სუსპენზია 4°C ტემპერატურაზე მაცივარში საჭიროებამდე.
ეს ინსტრუქციები ასახავს ლიპოსომების მომზადების ეტაპობრივ პროცესს საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდის გამოყენებით ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციით, რაც უზრუნველყოფს მაღალი შიდა წყლის დატვირთვას და აქტიური ნივთიერების ეფექტურ ინკაფსულაციას.
საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდი, განსაკუთრებით ზონდის ტიპის გაჟონვის გამოყენებით, არის ფართოდ მიღებული ტექნიკა ლიპოსომების მოსამზადებლად, განსაკუთრებით მაშინ, როდესაც მიზნად ისახავს მაღალი შიდა წყლის დატვირთვას. ეს მეთოდი ხელსაყრელია ტრადიციული თხელი ფირის ჰიდრატაციის მეთოდთან შედარებით, იმის გამო, რომ მას აქვს ლიპოსომებში უფრო მეტი წყლის ფაზის ჩართვის უნარი.
Probe-Type Sonication-ის უპირატესობები ლიპოსომის ფორმირებისთვის
- გაძლიერებული ჰომოგენურობა: ზონდის ტიპის sonication უზრუნველყოფს თანმიმდევრული ენერგიის შეყვანას, რის შედეგადაც ხდება ლიპოსომების უფრო ერთგვაროვანი ზომის განაწილება.
- გაუმჯობესებული კაფსულაცია: მექანიკური ძალები გახმოვანების დროს აძლიერებს წამლის კაფსულაციას, განსაკუთრებით ჰიდროფილური ნაერთებისთვის.
- მასშტაბურობა: მეთოდები ადვილად მასშტაბირებადია, რაც მათ შესაფერისს ხდის ფართომასშტაბიანი ლიპოსომის წარმოებისთვის.
ლიპოსომების გამოყენება წამლების მიწოდებაში
ემულსიფიკაციისა და გამხსნელ-აორთქლების მეთოდებით მომზადებული ლიპოსომები ზონდის ტიპის სონიკაციით შესაფერისია წამლის მიწოდების სხვადასხვა აპლიკაციებისთვის, მათ შორის:
- წამლის მიზანმიმართული მიწოდება: ლიპოსომების ფუნქციონალიზაცია სპეციფიური ლიგანდებით საშუალებას იძლევა მიზანმიმართული მიწოდება კონკრეტულ ქსოვილებში ან უჯრედებში.
- კონტროლირებადი გამოშვება: ლიპიდური ორფენიანი სტრუქტურა იძლევა წამლის კონტროლირებად გამოყოფას, რაც აძლიერებს თერაპიულ ეფექტურობას.
- მრავალფეროვნება: ეს მეთოდები მოიცავს თერაპიული აგენტების ფართო სპექტრს, მცირე მოლეკულებიდან უფრო დიდ ბიომოლეკულებამდე, როგორიცაა ცილები და ნუკლეინის მჟავები.
საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდი განსაკუთრებით აღინიშნება მისი უფრო მაღალი შიდა წყლის დატვირთვით თხელი ფირის ჰიდრატაციის მეთოდთან შედარებით. ეს მახასიათებელი სასარგებლოა იმ აპლიკაციებისთვის, რომლებიც საჭიროებენ ჰიდროფილური პრეპარატების ან სხვა თერაპიული აგენტების არსებით კაფსულაციას.
საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდი ზონდის ტიპის სონიკაციის გამოყენებით არის ძლიერი და ეფექტური ტექნიკა ლიპოსომის მომზადებისთვის. მისი უნარი, მიაღწიოს უფრო მაღალ შიდა წყალში დატვირთვას, ხდის მას სასურველ მეთოდად ფარმაცევტულ აპლიკაციებში, სადაც გადამწყვეტია ჰიდროფილური ნივთიერებების ინკაფსულაციის მაქსიმიზაცია. გამხსნელის აორთქლების საგულდაგულო კონტროლი და სონიკაციის გამოყენება ამ მეთოდის წარმატების გასაღებია, რაც იწვევს სხვადასხვა თერაპიული მიზნებისათვის შესაფერისი მაღალი ხარისხის ლიპოსომების წარმოებას.
იპოვეთ სწორი სონიკატორი თქვენი ლიპოსომის წარმოებისთვის
Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ ზონდის ტიპის სონიკატორების ფართო პროდუქტს ლიპოსომის ეფექტური წარმოებისთვის, რაც იწვევს ბიოაქტიური მოლეკულების მაღალი ჩაკეტვის ეფექტურობას და მაღალ დატვირთვას.
თქვენ შეგიძლიათ გამოიყენოთ Hielscher sonicators ლიპოსომის მომზადების სხვადასხვა გზებისთვის, როგორიცაა აქ აღწერილი საპირისპირო ფაზის აორთქლების ტექნიკა, ემულსიფიკაციის მეთოდი და თხელი ფენის მეთოდი.
წაიკითხეთ მეტი ულტრაბგერითი ლიპოსომის მომზადების შესახებ თხელი ფენის მეთოდით!
წაიკითხეთ მეტი ულტრაბგერითი მომზადებული ლიპოსომების კაფსულირების შესახებ
- მაღალი ეფექტურობის
- უახლესი ტექნოლოგია
- საიმედოობა & სიმტკიცე
- რეგულირებადი, ზუსტი პროცესის კონტროლი
- პარტია & ხაზში
- ნებისმიერი მოცულობისთვის
- ინტელექტუალური პროგრამული უზრუნველყოფა
- ჭკვიანი ფუნქციები (მაგ., პროგრამირებადი, მონაცემთა პროტოკოლირება, დისტანციური მართვა)
- მარტივი და უსაფრთხო ფუნქციონირება
- დაბალი მოვლა
- CIP (სუფთა ადგილზე)
დიზაინი, წარმოება და კონსულტაცია – ხარისხი დამზადებულია გერმანიაში
Hielscher ულტრაბგერითები ცნობილია მათი უმაღლესი ხარისხისა და დიზაინის სტანდარტებით. გამძლეობა და მარტივი მუშაობა საშუალებას იძლევა ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების გლუვი ინტეგრაცია სამრეწველო ობიექტებში. უხეში პირობები და მომთხოვნი გარემო ადვილად უმკლავდება Hielscher ულტრაბგერითებს.
Hielscher Ultrasonics არის ISO სერთიფიცირებული კომპანია და განსაკუთრებული აქცენტი კეთდება მაღალი ხარისხის ულტრაბგერაზე, რომელიც აღჭურვილია უახლესი ტექნოლოგიით და მომხმარებლის კეთილგანწყობით. რა თქმა უნდა, Hielscher ულტრაბგერითები შეესაბამება CE და აკმაყოფილებს UL, CSA და RoHs მოთხოვნებს.
ქვემოთ მოყვანილი ცხრილი გვიჩვენებს ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების სავარაუდო დამუშავების შესაძლებლობებს:
სურათების მოცულობა | Დინების სიჩქარე | რეკომენდებული მოწყობილობები |
---|---|---|
0.5-დან 1.5მლ-მდე | na | VialTweeter |
1-დან 500 მლ-მდე | 10-დან 200 მლ/წთ-მდე | UP100H |
10-დან 2000 მლ-მდე | 20-დან 400 მლ/წთ-მდე | UP200Ht, UP400 ქ |
0.1-დან 20ლ-მდე | 0.2-დან 4ლ/წთ-მდე | UIP2000hdT |
10-დან 100 ლ-მდე | 2-დან 10ლ/წთ-მდე | UIP4000hdT |
15-დან 150 ლ-მდე | 3-დან 15 ლ/წთ-მდე | UIP6000hdT |
15-დან 150 ლ-მდე | 3-დან 15 ლ/წთ-მდე | UIP6000hdT |
na | 10-დან 100ლ/წთ-მდე | UIP16000 |
na | უფრო დიდი | კასეტური UIP16000 |
Დაგვიკავშირდით! / Გვკითხე ჩვენ!
ლიტერატურა / ლიტერატურა
- Marco Paini, Sean Ryan Daly, Bahar Aliakbarian, Ali Fathi, Elmira Arab Tehrany, Patrizia Perego, Fariba Dehghani, Peter Valtchev (2015): An efficient liposome based method for antioxidants encapsulation. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 136, 2015. 1067-1072.
- Yao, X., Bunt, C., Cornish, J., Quek, S.-Y. and Wen, J. (2014): Preparation, Optimization and Characterization of Bovine Lactoferrin-loaded Liposomes and Solid Lipid Particles Modified by Hydrophilic Polymers Using Factorial Design. Chemical Biology and Drug Design 83, 2014. 560-575.
- Seyedeh Parinaz Akhlaghi, Iris Renata Ribeiro, Ben J. Boyd, Watson Loh (2016): Impact of preparation method and variables on the internal structure, morphology, and presence of liposomes in phytantriol-Pluronic® F127 cubosomes. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 145, 2016. 845-853.
ფაქტები, რომელთა ცოდნაც ღირს
რა არის ლიპოსომები?
ლიპოსომები არის სფერული ვეზიკულები ლიპიდური ორშრიანით, რომლებიც გამოიყენება ნაერთების ინკაფსულაციისთვის. ისინი მზადდება ხსნარში, რომელიც შეიცავს დასაჭერ ნაერთს. ჰიდროფილური ნაერთებისთვის, როგორიცაა ცილები, გამოიყენება წყალხსნარი, ხოლო ჰიდროფობიური მოლეკულები ინკაფსულირებულია ლიპიდებთან შერეულ ორგანულ გამხსნელებში ხსნარების გამოყენებით. ეს მრავალფეროვნება აქცევს ლიპოსომებს წამლების მიწოდებისთვის და სხვა ბიოსამედიცინო გამოყენებისთვის.
რა არის საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდი ლიპოსომის მომზადებისთვის?
ლიპოსომის მომზადებისთვის საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდი გულისხმობს ლიპიდების დაშლას ქლოროფორმის/მეთანოლის ნარევში და თხელი ლიპიდური ფილმის ფორმირებას მბრუნავი აორთქლების გზით. ეს ფილმი შემდეგ ხელახლა იხსნება დიეთილის ეთერში, რათა შეიქმნას შებრუნებული ფაზის ვეზიკულები. წყლის ფაზა, რომელიც შეიცავს აქტიურ ინგრედიენტს და Tween 80-ს, ურევენ ორგანულ ფაზას, ქმნიან წყალ-ზეთში ემულსიას. ემულსია ხდება სონიკირებით ზონდის ტიპის სონიკატორის გამოყენებით, რასაც მოჰყვება შემდგომი მბრუნავი აორთქლება გელის წარმოქმნით, რომელიც საბოლოოდ აყალიბებს ლიპოზომებს დამატებითი აორთქლებისას. საბოლოო სუსპენზია სრულდება PBS ბუფერის დამატებით და ნარჩენი გამხსნელების ამოღებით აზოტის გაზით, რის შედეგადაც წარმოიქმნება ლიპოსომები, რომლებიც ინახება 4°C-ზე.
რა გავლენას ახდენს სონიკაცია ლიპოსომებზე?
Sonication მოქმედებს ლიპოსომებზე ულტრაბგერითი ტალღების გამოყენებით ლიპიდური და წყლის ფაზების დასარღვევად და შერევით, რაც ხელს უწყობს ერთგვაროვანი დისპერსიის წარმოქმნას. ეს პროცესი ხელს უწყობს ლიპოსომების ზომისა და ერთგვაროვნების კონტროლს და ხელს უშლის გადახურებას ენერგიის წყვეტილი აფეთქების გზით. გაჟღერებით გამოწვეული კონტროლირებადი კავიტაცია უზრუნველყოფს აქტიური ინგრედიენტების ეფექტურ ინკაპსულაციას ლიპოსომებში.
რა არის ფაზის გადასვლა ლიპოსომებში?
ლიპოსომებში ფაზის გადასვლა ეხება ლიპიდების ფიზიკურ მდგომარეობაში ტემპერატურით გამოწვეულ ცვლილებას. ფაზის გადასვლის ტემპერატურა არის სპეციფიკური ტემპერატურა, რომლის დროსაც ლიპიდები გადადიან შეკვეთილი გელის ფაზიდან, სადაც ნახშირწყალბადის ჯაჭვები სრულად არის გაშლილი და მჭიდროდ შეფუთული, არეულ თხევად კრისტალურ ფაზაში, სადაც ნახშირწყალბადის ჯაჭვები ხდება შემთხვევით ორიენტირებული და თხევადი. ეს გადასვლა გავლენას ახდენს ლიპოსომის სტაბილურობაზე, გამტარიანობაზე და ინკაფსულურ ნივთიერებებთან ურთიერთქმედებაში.
რა არის ლიპოსომის მომზადების ექსტრუზიის მეთოდი?
ზოგჯერ, თხელი ფენის ჰიდრატაციის მეთოდს ასევე უწოდებენ ექსტრუზიის მეთოდს, რადგან თხელი ფირის ჰიდრატაციის საფეხურს მოჰყვება ექსტრუზიის ნაბიჯი. ექსტრუზიის დროს ლიპოსომები იწელება პოლიკარბონატის მემბრანების მეშვეობით, რათა მიიღონ ერთგვაროვანი პატარა ლიპოსომები. ექსტრუზიის ალტერნატივა, ლიპოსომები ხშირად მცირდება ზონირებით.
რა არის ლიპოსომების გახმოვანების მეთოდი?
Sonication გამოიყენება ლიპოსომის წარმოქმნის სხვადასხვა მეთოდებში. Sonication გამოიყენება ლიპიდების და გამხსნელების ემულსიფიკაციისთვის, ლიპიდური ფირის რეჰიდრატაციისთვის და ლიპოსომის შემცირებისთვის. საპირისპირო ფაზის აორთქლების მეთოდისთვის ლიპიდები ულტრაბგერითი ემულსიფიცირებულია წყლის ფაზით. თხელი ფენის მეთოდისთვის, გამხმარი ლიპიდური ფირის რეჰიდრატაცია ხდება სონიკატორის გამოყენებით, რათა შეიქმნას მრავალფენიანი ვეზიკულური სუსპენზია. ლიპოსომის მომზადების მრავალი ტექნიკა იყენებს სონიკას წარმოქმნილი ლიპოსომების შემდგომი შემცირებისთვის. აქ, sonication შედეგად მიიღება ერთიანად მცირე და სტაბილური ლიპოსომები, რომლებიც შესაფერისია სხვადასხვა გამოყენებისთვის.