एफएफपीई उच्च-थ्रूपुट नमूना तैयारी: प्रोटीन निष्कर्षण और न्यूक्लिक एसिड बाल काटना

उच्च-थ्रूपुट अल्ट्रासोनिकेटर UIP400MTP के साथ, Hielscher Ultrasonics फॉर्मेलिन निर्धारण और पैराफिन एम्बेडेड (FFPE) ऊतक तैयारी की चुनौतियों का समाधान करता है। जानें कि कैसे अल्ट्रासोनिकेशन एफएफपीई डिपैराफिनाइजेशन, ऊतक लाइसिस, होमोजेनाइजेशन, प्रोटीन निष्कर्षण और डीएनए / आरएनए कतरनी के लिए बड़ी संख्या में एफएफपीई नमूने को संसाधित करता है! अल्ट्रासोनिक FFPE ऊतक तैयारी का लाभ ले लो – मल्टीवेल प्लेटों में बड़े नमूना संख्या प्रसंस्करण! उच्च गुणवत्ता वाले नमूने प्राप्त करें और विश्वसनीय शोध परिणामों के लिए उच्च नमूना संख्या प्राप्त करें! और आखिरी, लेकिन कम से कम समय और पैसा बचाने के लिए नहीं!

एफएफपीई नमूना तैयार करना उच्च-थ्रूपुट सोनिकेशन द्वारा सुगम

फॉर्मेलिन निर्धारण और पैराफिन एम्बेडिंग (एफएफपीई) ठोस ऊतकों के संरक्षण और संग्रह के लिए सबसे आम तरीका है। एफएफपीई ऊतक नमूनों से बायोमोलेक्यूल्स का निष्कर्षण अक्सर संग्रहीत नमूनों की गुणवत्ता के कारण महत्वपूर्ण चुनौतियां प्रस्तुत करता है। ये नमूने, जो आणविक जीव विज्ञान और नैदानिक अनुसंधान में अमूल्य संपत्ति हैं, पूर्वव्यापी अध्ययन और नैदानिक बायोमार्कर सत्यापन के लिए जैविक जानकारी का एक समृद्ध स्रोत प्रदान करते हैं। हालांकि, ऊतक वास्तुकला और आकृति विज्ञान को संरक्षित करते हुए फॉर्मेलिन निर्धारण और पैराफिन एम्बेडिंग की प्रक्रिया, उच्च गुणवत्ता वाले न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन के निष्कर्षण को जटिल बनाती है। फॉर्मेलिन न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन के क्रॉस-लिंकिंग को प्रेरित करता है, जिससे आणविक विखंडन और रासायनिक संशोधन होते हैं। जानें कि कैसे उच्च-थ्रूपुट अल्ट्रासोनिकेटर UIP400MTP एफएफपीई नमूना तैयार करने की चुनौतियों पर काबू पाता है!

कुशल FFPE नमूना तैयार करने के लिए अल्ट्रासोनिकेटर

  • उपयोग में आसान वर्कफ़्लो: सरलीकृत प्रक्रियाएँ जो उपयोगकर्ता के अनुकूल हैं।
  • Deparafinization, प्रोटीन निष्कर्षण, डीएनए /
  • रैपिड हाई-थ्रूपुट प्रोसेसिंग: मल्टी-वेल प्लेटों की कुशल हैंडलिंग।
  • प्रभावी Deparaffinization: प्रोटीन के बेहतर घुलनशीलता।
  • गैर विषैले सॉल्वैंट्स: xylene जैसे हानिकारक कार्बनिक सॉल्वैंट्स के उपयोग से बचा जाता है।

 

UIP400MTP मल्टीवेल प्लेट अल्ट्रासोनिकेटर प्रोटीन निष्कर्षण और डीएनए और आरएनए कतरनी के लिए उच्च-थ्रूपुट में एफएफपीई नमूनों को संसाधित कर सकता है

UIP400MTP उच्च-थ्रूपुट सोनिकेटर मल्टीवेल प्लेटों में उच्च-थ्रूपुट एफएफपीई नमूना प्रसंस्करण के लिए

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FFPE नमूना तैयारी Ultrasonication का उपयोग कर - Hielscher द्वारा UIP400MTP multwell प्लेट sonicator
 

एफएफपीई ऊतक से प्रोटीन निष्कर्षण तकनीकों में प्रगति

Hielscher Ultrasonics उच्च-थ्रूपुट FFPE नमूना तैयार करने में चुनौतियों का समाधान करता है। सोनिकेशन अल्ट्रासोनिक तरंगों को यांत्रिक कंपन और केंद्रित गुहिकायन उत्पन्न करने के लिए नियोजित करता है, प्रभावी रूप से सेलुलर संरचनाओं को बाधित करता है और बायोमोलेक्यूल्स के घुलनशीलता को बढ़ाता है। इस तकनीक ने एफएफपीई ऊतकों से न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन निष्कर्षण की दक्षता और उपज बढ़ाने के साथ-साथ पुस्तकालय की तैयारी के लिए डीएनए और आरएनए कतरनी के लिए लोकप्रियता हासिल की है। यह उजागर करना बहुत महत्वपूर्ण है कि UIP400MTP मल्टीवेल प्लेट सोनिकेटर का उपयोग करके अल्ट्रासोनिकेशन डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए इन बायोमोलेक्यूल्स की अखंडता को बनाए रखता है।

 

वीडियो अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी प्रणाली UIP400MTP, जो उच्च तीव्रता अल्ट्रासाउंड का उपयोग कर किसी भी मानक बहु अच्छी तरह से प्लेटों के विश्वसनीय नमूना तैयारी के लिए अनुमति देता है से पता चलता है। UIP400MTP के विशिष्ट अनुप्रयोगों में सेल लाइसिस, डीएनए, आरएनए और क्रोमैटिन कर्तन के साथ-साथ प्रोटीन निष्कर्षण भी शामिल है।

मल्टी-वेल प्लेट सोनीशन के लिए अल्ट्रासोनिकेटर UIP400MTP

वीडियो थंबनेल

 

न्यूक्लिक एसिड बाल काटना उच्च throughput अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग कर

96-अच्छी तरह से प्लेटों और अन्य मल्टीवेल प्लेटों को सोनिकेटर UIP400MTP का उपयोग करके सबसे अच्छा संसाधित किया जाता है। यह अल्ट्रासोनिक प्रणाली उच्च-थ्रूपुट में लाइसिस, डीएनए विखंडन और सेल घुलनशीलता प्रसंस्करण नमूनों के लिए आदर्श है।उच्च-थ्रूपुट सेटिंग्स में उपयोग के लिए मल्टी-वेल अल्ट्रासोनिकेटर UIP400MTP एफएफपीई नमूनों की तैयारी को नए स्तर पर लाता है। यह मल्टीवेल-प्लेट सोनीशन विधि कई नमूनों के एक साथ प्रसंस्करण के लिए एक कुशल और विश्वसनीय समाधान प्रदान करती है। यह डीएनए, आरएनए और प्रोटीन के तेजी से और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य निष्कर्षण की सुविधा प्रदान करता है, जो अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (एनजीएस), मात्रात्मक पीसीआर और प्रोटिओमिक विश्लेषण सहित विभिन्न विश्लेषणात्मक तकनीकों के लिए महत्वपूर्ण हैं। आयाम, अवधि और तापमान जैसे सोनीशन मापदंडों का अनुकूलन, निकाले गए बायोमोलेक्यूल्स की गुणवत्ता और मात्रा को और बढ़ाता है।

मल्टीवेल प्लेटों के लिए UIP400MTP सोनिकेटर एफएफपीई ऊतक से डीएनए और आरएनए के विखंडन और कतरनी के लिए महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है। इस प्रणाली की असाधारण विशेषताओं में से एक डीएनए और आरएनए के संकीर्ण टुकड़े आकार को प्राप्त करने की इसकी क्षमता है, जो 150-200 बेस जोड़े (बीपी) के छोटे टुकड़े या 15-20 किलोबेस जोड़े (केबीपी) के लंबे टुकड़े प्राप्त करने के लिए सोनिकेशन तीव्रता की सटीक ट्यूनेबिलिटी प्रदान करता है। यह बहुमुखी प्रतिभा लघु-पठन और लंबे समय तक पढ़े जाने वाले अनुक्रमण अनुप्रयोगों दोनों के लिए UIP400MTP को अपरिहार्य बनाती है, जो अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (एनजीएस) और पूरे-जीनोम अनुक्रमण (डब्ल्यूजीएस) के लिए उच्च गुणवत्ता वाले परिणाम सुनिश्चित करती है। जीनोमिक्स के सभी क्षेत्रों में शोधकर्ताओं के लिए टुकड़े के आकार पर इसका सटीक नियंत्रण महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह विनिर्देशों के अनुसार नमूने तैयार करने की अनुमति देता है।

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एफएफपीई नमूनों से कुशल बायोमोलेक्यूल रिकवरी के लिए UIP400MTP मल्टीवेल प्लेट सोनिकेटर की खोज करें, निकाले गए न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन की अखंडता को बनाए रखें और परिणामों की प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करें। यह तकनीक अन्य प्रारंभिक और विश्लेषणात्मक वर्कफ़्लोज़ के साथ मूल रूप से एकीकृत करती है, एफएफपीई ऊतक अभिलेखागार का उपयोग करके आणविक जांच को सुव्यवस्थित और बढ़ाती है।

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जुड़नार और उनके प्रभाव

फिक्सेशन नमूना तैयार करने में एक महत्वपूर्ण कदम है जो सेलुलर संरचनाओं को संरक्षित करता है, जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं को रोकता है, और गिरावट को रोकता है। विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर विभिन्न जुड़नार नियोजित किए जाते हैं। दो सबसे आम जुड़नार फॉर्मलाडेहाइड और पैराफॉर्मलडिहाइड हैं, जो प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड को क्रॉसलिंक करते हैं, कोशिकाओं और ऊतकों की आकृति विज्ञान और एंटीजेनेसिटी को संरक्षित करते हैं। अन्य जुड़नार, जैसे इथेनॉल, मेथनॉल, और ग्लूटार्डाल्डिहाइड, विशिष्ट अनुप्रयोगों के लिए उपयोग किए जाते हैं।

फॉर्मलडिहाइड और पैराफॉर्मलडिहाइड फिक्सेटिव अमीनो समूहों के बीच मेथिलीन पुल बनाते हैं, जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन क्रॉसलिंकिंग होती है। यह प्रक्रिया प्रभावी रूप से सेलुलर घटकों को स्थिर करती है, बाद के विश्लेषण चरणों के दौरान उनकी अखंडता को संरक्षित करती है। इन जुड़नार के प्रभाव एकाग्रता, पीएच और तापमान जैसे कारकों से प्रभावित हो सकते हैं, और सेलुलर संरचनाओं के इष्टतम संरक्षण को सुनिश्चित करने के लिए इन मापदंडों का अनुकूलन महत्वपूर्ण है।

 
अल्ट्रासोनिक FFPE तैयारी के लाभ
 

अल्ट्रासोनिकेशन तय कोशिकाओं और ऊतकों को बाधित करने के लिए एक शक्तिशाली तकनीक है जो पारंपरिक तकनीकों को उत्कृष्ट बनाती है। यह पारंपरिक lysis विधियों पर कई उल्लेखनीय लाभ प्रदान करता है:

  • गति और दक्षता: अल्ट्रासोनिक लसीका कोशिकाओं और ऊतकों का तेजी से विघटन प्रदान करता है, यांत्रिक या रासायनिक लसीका विधियों की तुलना में प्रसंस्करण समय को काफी कम करता है। अल्ट्रासोनिक जांच द्वारा उत्पन्न उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगें यांत्रिक कतरनी बल बनाती हैं, जिससे तय सेलुलर संरचनाओं में व्यवधान होता है। यह तेज और कुशल व्यवधान शोधकर्ताओं को कम समय सीमा के भीतर बड़े नमूना संस्करणों को संसाधित करने में सक्षम बनाता है।
  • कोमल और समायोज्य: अल्ट्रासोनिक लसीका एक कोमल व्यवधान तंत्र प्रदान करता है जो प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड और एंजाइम जैसे संवेदनशील बायोमोलेक्यूल्स को नुकसान को कम करता है। यांत्रिक तरीकों के विपरीत जो अत्यधिक गर्मी या कतरनी बल उत्पन्न करते हैं, अल्ट्रासोनिक लसीका इंट्रासेल्युलर घटकों की अखंडता और कार्यक्षमता को संरक्षित करते हुए कोशिकाओं को बाधित करने के लिए नियंत्रित गुहिकायन का उपयोग करता है।
  • बहुमुखी प्रतिभा: अल्ट्रासोनिक लसीका को विभिन्न जुड़नार पर लागू किया जा सकता है, जिससे शोधकर्ताओं को तय किए गए नमूनों की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ काम करने की अनुमति मिलती है। चाहे फॉर्मलाडेहाइड, पैराफॉर्मेल्डिहाइड, या वैकल्पिक जुड़नार का उपयोग करके, अल्ट्रासोनिक लसीका लगातार कुशल व्यवधान प्रदान करता है, सेलुलर घटकों की इष्टतम वसूली सुनिश्चित करता है।
  • उच्च उपज और गुणवत्ता: अल्ट्रासोनिक लसीका समान रूप से तय कोशिकाओं और ऊतकों को बाधित करने की क्षमता के कारण बरकरार सेलुलर घटकों की उच्च पैदावार की सुविधा प्रदान करता है। यह प्रोटीन विश्लेषण, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण, और एंजाइमी assays जैसे बहाव अनुप्रयोगों को विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम देने में सक्षम बनाता है।
  • स्वचालन संगतता: अल्ट्रासोनिक लसीका आसानी से स्वचालित प्रणालियों में एकीकृत किया जा सकता है, जिससे उच्च-थ्रूपुट नमूना प्रसंस्करण की अनुमति मिलती है। यह संगतता शोधकर्ताओं को अपने वर्कफ़्लो को सुव्यवस्थित करने और उत्पादकता बढ़ाने में सक्षम बनाती है, विशेष रूप से बड़े पैमाने पर अध्ययन में।
96-वेल प्लेट सोनिकेटर सेल लाइसिस, डीएनए निष्कर्षण, डीएनए विखंडन, सेल घुलनशीलता और प्रोटीन शुद्धि के लिए UIP400MTP।

96-वेल प्लेट सोनिकेटर UIP400MTP माइक्रोटिटर और मल्टीवेल प्लेटों के सोनिकेशन के लिए

अल्ट्रासोनिक लसीका ने तय कोशिकाओं और ऊतकों के विघटन में क्रांति ला दी है, जो पारंपरिक लसीका विधियों पर कई फायदे प्रदान करता है। इसकी गति, दक्षता, चयनात्मकता, बहुमुखी प्रतिभा, उच्च उपज और स्वचालन संगतता इसे आणविक जीव विज्ञान और जैव प्रौद्योगिकी अनुसंधान में एक अनिवार्य उपकरण बनाती है। गैर-संपर्क sonicators के साथ-साथ जांच-प्रकार sonicator की पेशकश, Hielscher Ultrasonics आपके जीवन विज्ञान अनुप्रयोग के लिए सबसे उपयुक्त अल्ट्रासोनिक homogenizer प्रदान करता है। चाहे आप एकल नमूने, कई नमूने या बहुत अधिक नमूना संख्याओं को एक साथ संसाधित करना चाहते हैं, हम आपको अपने शोध और नैदानिक आवश्यकताओं से मेल खाने वाले सर्वश्रेष्ठ सोनिकेटर की पेशकश करेंगे।
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UIP400MTP मल्टीवेल-प्लेट सोनिकेटर के साथ एफएफपीई नमूना तैयारी

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  • अपने स्वयं के उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करें
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  • समायोज्य, सटीक प्रक्रिया नियंत्रण
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उच्च throughput नमूना तैयारी के लिए sonicator! UIP400MTP प्लेट सोनिकेटर 96-अच्छी प्लेटों में जैविक नमूनों के लाइसिस, प्रोटीन निष्कर्षण, डीएनए विखंडन और सेल घुलनशीलता की सुविधा प्रदान करता है।

प्लेट सोनिकेटर किसी भी 96-अच्छी प्लेटों, माइक्रोटिटर प्लेटों और बहु-अच्छी प्लेटों के लिए UIP400MTP।

डिजाइन, विनिर्माण और परामर्श – गुणवत्ता जर्मनी में निर्मित

Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर अपने उच्चतम गुणवत्ता और डिजाइन मानकों के लिए प्रसिद्ध हैं। मजबूती और आसान संचालन औद्योगिक सुविधाओं में हमारे अल्ट्रासोनिकेटर के सुचारू एकीकरण की अनुमति देता है। उबड़-खाबड़ परिस्थितियों और मांग वाले वातावरण को आसानी से Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर द्वारा नियंत्रित किया जाता है।

Hielscher Ultrasonics एक आईएसओ प्रमाणित कंपनी है और अत्याधुनिक तकनीक और उपयोगकर्ता-मित्रता की विशेषता वाले उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिकेटर पर विशेष जोर देती है। बेशक, Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर सीई अनुपालन हैं और यूएल, सीएसए और आरओएच की आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।

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मल्टी-वेल-प्लेट में उच्च-थ्रूपुट आरएनए-अनुक्रमण

UIP400MTP अल्ट्रासोनिकेटर : मल्टी-वेल-प्लेट में उच्च-थ्रूपुट एफएफपीई नमूना प्रस्तुत करना



अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
नीचे, हम अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्नों का उत्तर देते हैं, जो एफएफपीई ऊतक तैयार करने और एफएफपीई नमूनों के अल्ट्रासोनिकेशन के लिए प्रासंगिक हैं।

एफएफपीई ऊतक कैसे तैयार किया जाता है?

एफएफपीई ऊतक तैयारी के लिए कदम: उच्च गुणवत्ता वाले एफएफपीई नमूने उत्पन्न करने के लिए ताजा ऊतक की सावधानीपूर्वक हैंडलिंग और प्रसंस्करण महत्वपूर्ण है। सटीक डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए सेलुलर आर्किटेक्चर, न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन के संरक्षण को सुनिश्चित करना आवश्यक है। प्रत्येक चरण - संग्रह से एम्बेडिंग तक - हिस्टोलॉजिकल परीक्षा, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और आणविक अध्ययन सहित विभिन्न विश्लेषणों के लिए नमूने की अखंडता को बनाए रखने के लिए सटीकता की आवश्यकता होती है। उचित रूप से निष्पादित, यह निर्धारण और एम्बेडिंग प्रक्रिया यह सुनिश्चित करती है कि संरक्षित ऊतक विवो स्थिति में सटीक रूप से प्रतिबिंबित करता है, विश्वसनीय नैदानिक और अनुसंधान परिणामों को सक्षम करता है।
हम आपको एफएफपीई ऊतक नमूनों की एम्बेडिंग प्रक्रिया के 6 प्रमुख चरणों के माध्यम से चलते हैं।

  • ऊतक संग्रह
    जीवित स्तनधारियों और ऊतक संस्कृतियों से बायोप्सी एफएफपीई नमूना तैयार करने के लिए ताजा ऊतक प्राप्त करने के लिए दोनों व्यवहार्य स्रोत हैं।
    एक सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग करना महत्वपूर्ण है: संदूषण से बचने के लिए बाँझ उपकरणों और दस्ताने का उपयोग करें। आदर्श रूप में, एक बाँझ वातावरण में ऊतकों को इकट्ठा करें, जैसे सर्जिकल सूट या लामिना का प्रवाह हुड।
    चूंकि नमूना बहुत नाजुक है, इसकी संवेदनशील हैंडलिंग आवश्यक है: प्रसंस्करण में देरी को कम करें और छांटना के बाद तुरंत ऊतक प्रसंस्करण शुरू करें। ऑटोलिसिस और गिरावट को रोकने के लिए यह महत्वपूर्ण है। ऊतक को कमरे के तापमान पर रखें; ठंड से बचें क्योंकि इससे बर्फ क्रिस्टल गठन और ऊतक क्षति हो सकती है।
  • ऊतक निर्धारण
    सबसे पहले, ऊतक को एक लगानेवाला समाधान के साथ इलाज किया जाता है: 10% तटस्थ-बफर फॉर्मेलिन (एनबीएफ) का उपयोग करें, जो पानी में 4% फॉर्मलाडेहाइड के बराबर है, एक तटस्थ पीएच में बफर किया जाता है।
    ऊतक को पूरी तरह से फॉर्मेलिन में डुबोएं। कम से कम 10: 1 के एक लगानेवाला से ऊतक मात्रा अनुपात सुनिश्चित करें. ऊतक प्रकार और आकार के आधार पर निर्धारण समय आमतौर पर 6 से 24 घंटे तक होता है। यह महत्वपूर्ण है कि लगानेवाला ऊतक को अच्छी तरह से प्रवेश कर सकता है। हालांकि, ओवर-फिक्सेशन से क्रॉस-लिंकिंग हो सकती है जो एंटीजन पुनर्प्राप्ति को जटिल बनाती है, जबकि अंडर-फिक्सेशन के परिणामस्वरूप खराब ऊतक संरक्षण हो सकता है।
  • ऊतक ट्रिमिंग
    दूसरे, ऊतक को लगभग 3-5 मिमी की मोटाई में ट्रिम करें ताकि लगानेवाला के पर्याप्त प्रवेश की अनुमति मिल सके। प्रासंगिक हिस्टोलॉजिकल संरचनाओं को पकड़ने के लिए ऊतक का उचित अभिविन्यास सुनिश्चित करें। यह निष्कर्षण प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाता है जब ऊतक बाद में विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है।
  • फिक्स किए गए नमूने को संसाधित करना
    अब, निश्चित ऊतक निर्जलित होना चाहिए: निर्धारण के बाद, पैराफिन मोम द्वारा पूरी तरह से प्रवेश सुनिश्चित करने के लिए ऊतक को निर्जलित करने की आवश्यकता होती है। पानी निकालने के लिए इथेनॉल (70%, 80%, 90% और 100%) की एक वर्गीकृत श्रृंखला के माध्यम से ऊतक को पास करें।
    जाइलीन के साथ समाशोधन: पैराफिन मोम पानी में अघुलनशील है, लेकिन जाइलीन में घुलनशील है। इसलिए, ऊतक में पानी को जाइलीन से बदला जाना चाहिए। हालांकि, xylene स्वयं पानी में अघुलनशील है लेकिन शराब में घुलनशील है, एक मध्यवर्ती चरण की आवश्यकता होती है जहां पानी को पहले शराब से बदल दिया जाता है। इथेनॉल को हटाने के लिए xylene या एक xylene विकल्प में ऊतक विसर्जित करें और पैराफिन घुसपैठ के लिए ऊतक तैयार करें।
    पैराफिन का उपयोग कर घुसपैठ: पिघला हुआ पैराफिन मोम में ऊतक एम्बेड करें, पूर्ण घुसपैठ सुनिश्चित करना। इस कदम में आम तौर पर पूरी तरह से संसेचन सुनिश्चित करने के लिए पैराफिन के कई परिवर्तन शामिल होते हैं।
  • ऊतक एम्बेड करना
    इस चरण में, ऊतक को एक ऊतक ब्लॉक में ढाला जाता है: ऊतक को वांछित अभिविन्यास के साथ एक मोल्ड में रखें और उस पर पिघला हुआ पैराफिन डालें। पैराफिन को कमरे के तापमान पर या ठंडी प्लेट पर ठंडा करके जमने दें।
  • सेक्शनिंग और माउंटिंग
    माइक्रोटॉमी: एम्बेडेड ऊतक को टुकड़ा करने के लिए, पैराफिन ब्लॉक से पतले वर्गों (आमतौर पर 4-5 माइक्रोमीटर) को काटने के लिए एक माइक्रोटोम का उपयोग करें। फिर नमूना घुड़सवार है, बाद में धुंधला और सूक्ष्म विश्लेषण के लिए कांच स्लाइड पर वर्गों रखकर.
    अंत में, ऊतक विज्ञान की गुणवत्ता की जांच करें: उचित निर्धारण और प्रसंस्करण सुनिश्चित करने के लिए माइक्रोस्कोप के तहत पहले वर्गों का मूल्यांकन करें। ऊतक प्रकार और मनाया गुणवत्ता के आधार पर जरूरत के रूप में प्रोटोकॉल समायोजित करें.

 
एफएफपीई ऊतकों का उपयोग आरएनए, डीएनए और प्रोटीन को पुनर्प्राप्त करने के साथ-साथ कैंसर या अन्य बीमारी के संकेतों की खोज के लिए किया जा सकता है। उन्हें वर्षों तक संग्रहीत किया जा सकता है, और यह एक अनिवार्य हिस्सा है कि शोधकर्ता और डॉक्टर निदान और अनुसंधान के लिए ऊतक के नमूनों का लाभ कैसे उठाते हैं।

एफएफपीई ऊतक के साथ आम समस्याएं और चुनौतियां क्या हैं?

फॉर्मेलिन-फिक्स्ड, पैराफिन-एंबेडेड (एफएफपीई) ऊतक के नमूने व्यापक रूप से अनुसंधान और निदान में उपयोग किए जाते हैं, लेकिन वे कई चुनौतियों और आम समस्याओं को पेश करते हैं:

  • बायोमोलेक्यूल्स का क्षरण: लंबे समय तक निर्धारण डीएनए, आरएनए और प्रोटीन के क्षरण का कारण बन सकता है, जिससे डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए उच्च गुणवत्ता वाले न्यूक्लिक एसिड या प्रोटीन निकालना मुश्किल हो जाता है। ऊतक संरक्षण के लिए सही निर्धारण (अंडर- और ओवर-निर्धारण से बचना) आवश्यक है।
  • क्रॉस-लिंकिंग: फॉर्मेलिन निर्धारण प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड के क्रॉस-लिंकिंग का कारण बनता है, जो आणविक विश्लेषण में बाधा डाल सकता है और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और अन्य परख की सटीकता को प्रभावित कर सकता है।

  • एंटीजन मास्किंग: निर्धारण प्रक्रिया एंटीजेनिक साइटों को मुखौटा कर सकती है, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और अन्य प्रतिरक्षाविज्ञानी परख में एंटीबॉडी बाध्यकारी की प्रभावशीलता को कम कर सकती है। इसके लिए अक्सर एंटीजन पुनर्प्राप्ति की आवश्यकता होती है, एक प्रक्रिया जिसके माध्यम से एक एपिटोप के मास्किंग को उलट दिया जाता है और एपिटोप-एंटीबॉडी बाइंडिंग को बहाल किया जाता है। हालांकि, पूर्ण एंटीजेनेसिटी हमेशा बहाल नहीं की जा सकती है।
  • परिवर्तनीय निर्धारण गुणवत्ता: निर्धारण समय और शर्तों में अंतर असंगत नमूना गुणवत्ता के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, reproducibility और परिणामों की तुलनात्मकता को प्रभावित. विश्वसनीय निर्धारण प्रोटोकॉल का उपयोग करें और अंडर- और ओवर-निर्धारण से बचें।
  • डीएनए क्षति और विखंडन: एफएफपीई नमूनों के फॉर्मेलिन निर्धारण से विभिन्न प्रकार के डीएनए क्षति हो सकती है, जिसमें साइटोसिन डीमिनेशन (सी से टी म्यूटेशन), ऑक्सीडेटिव क्षति (जैसे, 8-ऑक्सो-गुआनिन जी से टी म्यूटेशन के लिए अग्रणी), साथ ही शारीरिक व्यवधान जैसे निक, अंतराल और एबासिक साइटें जो डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि में बाधा डालती हैं। फॉर्मेलिन निर्धारण प्रक्रिया डीएनए के विखंडन का कारण बन सकती है, पीसीआर और अनुक्रमण जैसे आनुवंशिक और जीनोमिक विश्लेषण को जटिल बना सकती है।
  • आरएनए गुणवत्ता: एफएफपीई ऊतकों से निकाले गए आरएनए को अक्सर खंडित और रासायनिक रूप से संशोधित किया जाता है, जिससे उच्च गुणवत्ता वाले ट्रांसक्रिप्टोमिक विश्लेषण करना चुनौतीपूर्ण हो जाता है।
  • प्रोटीन संशोधन: फॉर्मेलिन प्रोटीन में रासायनिक संशोधनों को प्रेरित कर सकता है, उनकी संरचना और कार्य को प्रभावित कर सकता है, जो प्रोटिओमिक विश्लेषण में हस्तक्षेप कर सकता है।
  • नमूना प्रसंस्करण कलाकृतियों: एम्बेडिंग और सेक्शनिंग प्रक्रिया के दौरान, यांत्रिक तनाव और गर्मी कलाकृतियों को पेश कर सकते हैं और ऊतक को और नुकसान पहुंचा सकते हैं।
  • बैच-टू-बैच परिवर्तनशीलता: विभिन्न बैचों के बीच निर्धारण और एम्बेडिंग प्रोटोकॉल में भिन्नता परिणामों में महत्वपूर्ण परिवर्तनशीलता का कारण बन सकती है, अध्ययनों के बीच तुलना को जटिल बना सकती है।
  • भंडारण के मुद्दे: एफएफपीई ब्लॉकों के दीर्घकालिक भंडारण से समय के साथ अतिरिक्त गिरावट और न्यूक्लिक एसिड अखंडता का नुकसान हो सकता है, जिससे पूर्वव्यापी अध्ययन के लिए अभिलेखीय नमूनों की व्यवहार्यता प्रभावित हो सकती है।

अनुकूलित प्रोटोकॉल का उपयोग करना, सावधानीपूर्वक नमूना हैंडलिंग, और उन्नत तकनीकों को लागू करने से एफएफपीई ऊतकों से प्राप्त डेटा की गुणवत्ता और विश्वसनीयता में सुधार करने में मदद मिलती है।

एफएफपीई और जमे हुए ऊतक के बीच अंतर क्या है?

एफएफपीई (फॉर्मलिन-फिक्स्ड, पैराफिन-एम्बेडेड) ऊतक को ऊतक को ठीक करने के लिए फॉर्मेलिन का उपयोग करके संरक्षित किया जाता है और फिर पैराफिन मोम में एम्बेडेड किया जाता है, जिससे ऊतक आकृति विज्ञान को बनाए रखते हुए कमरे के तापमान पर दीर्घकालिक भंडारण की अनुमति मिलती है। इसके विपरीत, जमे हुए ऊतक को ठंड द्वारा तेजी से संरक्षित किया जाता है, जो न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन की अखंडता को बेहतर ढंग से बनाए रखता है लेकिन बहुत कम तापमान पर भंडारण की आवश्यकता होती है।

FFPE एम्बेडिंग के लिए किन रसायनों का उपयोग किया जाता है?

एफएफपीई एम्बेडिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले रसायनों में सामान्य रूप से निर्धारण के लिए फॉर्मेलिन और एम्बेडिंग के लिए पैराफिन मोम शामिल हैं। एफएफपीई एम्बेडिंग के लिए, ऊतकों को आमतौर पर पैराफॉर्मलडिहाइड पाउडर से बने 10% (वी / वी) तटस्थ बफर फॉर्मेलिन (एफए) या ताजा तैयार 4% (डब्ल्यू / वी) फॉर्मलाडेहाइड समाधान (पीएफए) का उपयोग करके तय किया जाता है। फॉर्मेलिन, जो पानी में फॉर्मलाडेहाइड का एक समाधान है, ऊतक आकृति विज्ञान को संरक्षित करने और अत्यधिक क्रॉस-लिंकिंग को रोकने के लिए एक तटस्थ पीएच में बफर किया जाता है। पैराफॉर्मलडिहाइड-आधारित समाधान भी प्रोटीन को क्रॉस-लिंकिंग करके प्रभावी निर्धारण प्रदान करता है, जिससे पैराफिन मोम में बाद में एम्बेडिंग के लिए ऊतक संरचना को स्थिर किया जाता है। ये रसायन निर्धारण और एम्बेडिंग प्रक्रिया के दौरान ऊतक अखंडता और आकृति विज्ञान को बनाए रखने के लिए आवश्यक हैं।

एफएफपीई नमूनों से पैराफिन कैसे हटाया जाता है?

एफएफपीई नमूनों से पैराफिन को हटाने के लिए, ऊतक वर्गों को आमतौर पर जाइलीन वॉश की एक श्रृंखला के अधीन किया जाता है, इसके बाद अल्कोहल की एक वर्गीकृत श्रृंखला और अंत में पानी के माध्यम से पुनर्जलीकरण होता है। चूंकि xylene अत्यधिक विषाक्त है, श्वसन संबंधी मुद्दों, त्वचा की जलन, और बार-बार एक्सपोजर के साथ संभावित दीर्घकालिक प्रभाव जैसे स्वास्थ्य जोखिम पैदा करता है, अल्ट्रासोनिक पैराफिन हटाने कई प्रयोगशालाओं में एक आशाजनक विकल्प के रूप में उभर रहा है। यह विधि जाइलीन जैसे जहरीले सॉल्वैंट्स की आवश्यकता के बिना कुशलतापूर्वक और सुरक्षित रूप से पैराफिन को हटाने के लिए तीव्र अल्ट्रासोनिक तरंगों का उपयोग करती है, जिससे प्रयोगशाला कर्मियों के जोखिम को कम किया जाता है और एक सुरक्षित कार्य वातावरण बनाया जाता है।

अच्छी एफएफपीई नमूना गुणवत्ता के लिए मुझे अपने ऊतकों को कब तक ठीक करना चाहिए?

निर्धारण अवधि के लिए सामान्य सिफारिशें आमतौर पर 24 से 48 घंटों के लिए फॉर्मेलिन में ऊतक के नमूनों को ठीक करने का सुझाव देती हैं। यह अवधि आम तौर पर ऊतक आकृति विज्ञान और सेलुलर संरचनाओं को संरक्षित करने के लिए पर्याप्त है, जबकि अति-निर्धारण को कम करता है, जिससे न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन के अत्यधिक क्रॉस-लिंकिंग और गिरावट हो सकती है। हालांकि, इष्टतम निर्धारण समय आकार और ऊतक के प्रकार के आधार पर भिन्न हो सकता है, छोटे या अधिक नाजुक नमूनों के साथ कम निर्धारण समय की आवश्यकता होती है। ऊतक ऑटोलिसिस और गिरावट को रोकने के लिए पर्याप्त निर्धारण को संतुलित करना महत्वपूर्ण है, जबकि लंबे समय तक निर्धारण से बचना जो डाउनस्ट्रीम आणविक विश्लेषण को जटिल बना सकता है।

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