अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग करके मशरूम से बीटा-ग्लूकन का निष्कर्षण
सामग्री और उपकरण
- मशरूम (उदाहरण के लिए, 100 ग्राम कटा हुआ या कटा हुआ मशरूम)
- ठंडा आसुत जल (जैसे, 500 एमएल)
- ब्लेंडर या ग्राइंडर
- ग्लास बीकर या फ्लास्क
- फ़िल्टर पेपर या वैक्यूम निस्पंदन सेटअप
- सेंट्रीफ्यूज (वैकल्पिक)
- वर्षा के लिए अल्कोहल (जैसे, इथेनॉल)
- फ्रिज
- ओवन सुखाने का काम
बीटा-ग्लूकन निष्कर्षण प्रोटोकॉल
- मशरूम को पीसलें या कुचल दें (जैसे, चागा या शेर)’ माने मशरूम) लगभग 1 से 3 मिलीमीटर के मोटे कणों में। उदाहरण के लिए, सूखे मशरूम कणों के 100 ग्राम का उपयोग करें।
- फिर एक ग्लास बीकर या फ्लास्क में मशरूम के कण जोड़ें।
- इसके बाद, निकाले जाने वाले मशरूम के कणों वाले बीकर में 500 मिलीलीटर आसुत जल जोड़ें। पानी-से-मशरूम अनुपात विशिष्ट मशरूम प्रकार और कण आकार के आधार पर भिन्न हो सकता है।
- घोल को हिलाने के बाद, मिश्रण को अल्ट्रासोनिक लैब होमोजिनाइज़र (उदाहरण के लिए, 100% आयाम पर 22 मिमी सोनोट्रोड के साथ यूपी 400 एसटी या 100% आयाम पर 14 मिमी सोनोट्रोड के साथ यूपी 200 एचटी) का उपयोग करके सोनिक करें और 90 डिग्री सेल्सियस से नीचे का तापमान बनाए रखें। कम तापमान निष्कर्षण के दौरान बीटा-ग्लूकन जैसे गर्मी-संवेदनशील यौगिकों को संरक्षित करने में मदद करता है। UP400St का उपयोग करते समय लगभग 5 से 10 मिनट और UP200Ht का उपयोग करते समय क्रमशः 10 से 10 मिनट के लिए सोनिकेट करें। कृपया ध्यान दें कि तापमान और निष्कर्षण का समय उपयोग की जाने वाली अल्ट्रासोनिक शक्ति के आधार पर भिन्न हो सकता है। बेशक, बड़ी मात्रा में लंबे समय तक सोनिकेशन समय की आवश्यकता होगी।
- फ़िल्टर पेपर के माध्यम से सोनिकेटेड मिश्रण को फ़िल्टर करें या ठोस मशरूम अवशेषों से तरल (निकाले गए बीटा-ग्लूकन युक्त) को अलग करने के लिए वैक्यूम निस्पंदन सेटअप का उपयोग करें।
- फिर अल्कोहल (जैसे, इथेनॉल) जोड़कर तरल से बीटा-ग्लूकन को अवक्षेपित करें। आमतौर पर, आप वर्षा के लिए शराब की 2-3 मात्रा का उपयोग कर सकते हैं।
- उसके बाद, बीटा-ग्लूकन को अवक्षेपित करने की अनुमति देने के लिए मिश्रण को कई घंटों तक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें।
- वर्षा के बाद, आप तरल को सावधानी से हटा सकते हैं और बीटा-ग्लूकन अवक्षेप एकत्र कर सकते हैं।
- अंत में, बीटा-ग्लूकन को कम तापमान (जैसे, 40-50 डिग्री सेल्सियस) पर ओवन में सुखाएं जब तक कि सभी शराब हटा न दी जाए और आप एक सूखा पाउडर प्राप्त न करें।
मशरूम अपनी विशेषताओं में भिन्नता प्रदर्शित करते हैं। इसलिए, बीटा-ग्लूकन निष्कर्षण प्रक्रिया विशिष्ट मशरूम प्रजातियों, मशरूम की स्थिति (सूखे या ताजा), कण आकार और निष्कर्षण तापमान जैसे कारकों के आधार पर भिन्न हो सकती है। अपनी निष्कर्षण प्रक्रिया को अनुकूलित करने के लिए, विभिन्न मापदंडों के साथ प्रयोग करने पर विचार करें, जिसमें ठोस-से-तरल अनुपात को बदलना, तापमान समायोजित करना, विभिन्न सॉल्वैंट्स की खोज करना और विविध सोनिकेशन अवधि और आयाम सेटिंग्स का परीक्षण करना शामिल है।
बीटा-ग्लूकन के अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त एंजाइमेटिक निष्कर्षण
अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त एंजाइमेटिक निष्कर्षण एक विधि है जिसका उपयोग एंजाइमऔर अल्ट्रासोनिक तरंगों के संयोजन का उपयोग करके मशरूम से बीटा-ग्लूकन निकालने के लिए किया जाता है। यह प्रक्रिया मशरूम की कोशिका दीवारों को तोड़कर और बीटा-ग्लूकन की रिहाई की सुविधा प्रदान करके निष्कर्षण की दक्षता को बढ़ाती है।
मशरूम से बीटा-ग्लूकन निष्कर्षण का स्केल-अप
एक बार जब आप बीटा-ग्लूकन निष्कर्षण प्रोटोकॉल स्थापित कर लेते हैं जो आपकी आवश्यकताओं को पूरा करता है, तो निष्कर्षण प्रक्रिया को बढ़ाना एक सीधा प्रयास हो सकता है।
बैच निष्कर्षण स्केल-अप
यदि आप बैच निष्कर्षण विधि का उपयोग करके स्केल करने की योजना बनाते हैं, तो हम ठोस-से-तरल अनुपात और अन्य सभी मापदंडों को स्थिर रखते हुए बैच वॉल्यूम बढ़ाने की सलाह देते हैं। यदि आप एक ही अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र का उपयोग करना जारी रखते हैं, तो आनुपातिक रूप से सोनिकेशन समय बढ़ाना सुनिश्चित करें। 1 लीटर से अधिक बैचों के लिए, आप कण निलंबन को बनाए रखने और निष्कर्षण एकरूपता में सुधार करने के लिए धीमी गति से हलचल को शामिल करने पर विचार कर सकते हैं। नीचे दी गई छवि एक प्रयोगशाला हलचल के साथ संयोजन में यूपी 400 एसटी अल्ट्रासोनिक होमोजिनाइज़र का उपयोग करके 8-लीटर बैच निष्कर्षण सेटअप दिखाती है।
इनलाइन मशरूम निष्कर्षण
मशरूम से बीटा-ग्लूकन की बड़ी मात्रा को लगातार निकालने में रुचि रखने वालों के लिए, Hielscher Ultrasonics वनस्पति सामग्री निष्कर्षण के लिए डिज़ाइन किए गए फ्लो सेल रिएक्टर प्रदान करता है। यदि यह आप पर लागू होता है, तो हम आपको अधिक जानकारी के लिए सीधे हमसे संपर्क करने के लिए प्रोत्साहित करते हैं। हमारी तकनीकी टीम आपकी विशिष्ट आवश्यकताओं के लिए सबसे उपयुक्त सेटअप निर्धारित करने में सहायता करने में प्रसन्न होगी। हालांकि, आपकी विशिष्ट मशरूम प्रजातियों के साथ पहले उल्लिखित प्रयोगशाला-पैमाने पर प्रयोग का संचालन सटीक प्रक्रिया आवश्यकताओं को समझने में अमूल्य हो सकता है। नीचे दी गई छवि प्रति घंटे लगभग 50 से 200 लीटर मशरूम-विलायक घोल पर बीटा-ग्लूकन निकालने के लिए यूआईपी 4000एचडीटी अल्ट्रासोनिक होमोजिनाइज़र के साथ एक बड़े प्रवाह सेल रिएक्टर को दिखाती है।
मशरूम प्रजातियों की अनुभवजन्य बीटा-ग्लूकन एकाग्रता
नीचे, आपको अनुभवजन्य बीटा-ग्लूकन एकाग्रता की एक सूची मिलेगी जो विभिन्न मशरूम प्रजातियों से निकाली गई थी।
मशरूम की प्रजातियां | बीटा ग्लूकन सामग्री (% वजन) |
---|---|
टर्मिटोमाइसेस फुलिगिनोसस आर। | 1% |
बोलेटस कोलोसस आर। | 3% |
रूस की मौत हो गई है। पूर्व जिलेट | 25% |
रसुला सायनोक्सैन्था (शेफ) फादर। | 29% |
रसुला अल्बोएरोलाटा होंगो | 42% |
रसुला एमेटिका (शेफ) पर्स। | 10% |
रसुला डेलिका फादर। | 38% |
- पिक्नोपोरस सिनाबेरिनस (जैकक) पी। | 35% |
अमनीता हेमिबाफा (बर्क। & ब्रूम) सैक। | 5% |
अमानिता प्रिंसप्स कॉर्नर & Bas | 9% |
अमानिता कैसरिया (स्कोप) पर्स। | 4% |
- हेमिएला रेटिस्पोरा (पैट। & सी.एफ. बेकर) बोडिजन | 19% |
कोर्टिनेरियस क्लैरिकलर वर. टर्मलिस (फादर) क्वाड्र | 13% |
Termitomyces tylerianus Otieno | 12% |
टर्मिटोमाइसेस माइक्रोकार्पस (बर्क) & ब्रूम) आर हेम। | 8% |
टर्मिटोमाइसेस यूरिहिज़स (बर्क) आर हेम। | 7% |
पॉलीपोरेलस वैरियस (पर्स) पी। | 2% |
- पिक्नोपोरस कोकिनस (फादर) बोंडार्टसेव। & गायक | 45% |
लेंटिनस स्क्वैरोसुलस मोंट। | 2% |
- डेडालियोप्सिस कन्फ्रैगोसा (बोल्टन) जे। | 3% |
- पिक्नोपोरस सैंगुइनियस (एल) फादर। | 35% |
अमनीता हेमिबाफा (बर्क। & ब्रूम) सैक। | 5% |
अमानिता वर्जिनोइड्स बास | 1% |
अगरिकस सिल्वेटिकस शेफ। | 3% |
क्लोरोफिलम मोलिब्डाइट्स (जी। Massee | 3% |
- गैनोडर्मा ल्यूसिडम (कर्टिस) पी। | 33% |
अमाउरोडर्मा रुगोसम (ब्लूम) & टी नीस) टॉरेंड | 4% |
बोविनस (पर्स) कुन्त्ज़ी | 1% |
क्लिटोसाइब सुएवोलेंस (शूमाच) पी. कुम्म। S | 9% |
क्लेरोडर्मा वर्रुकोसम (बैल) पर्स। | 9% |
- हेमिएला रेटिस्पोरा (पैट। & सी.एफ. बेकर) | 19% |
लेंटिनुला एडोड्स (बर्क) पेगलर | 34% |
- पिक्नोपोरस सिनाबेरिनस (जैकक) पी। | 35% |
जंगली मशरूम प्रजातियों की बीटा-ग्लूकन एकाग्रता, स्रोत: बून्यानुप्प, जारुनटोर्न & हंसावास्दी, चानिडा। उपोष्णकटिबंधीय शुष्क वन, थाईलैंड में जंगली मशरूम समुदायों वाले बीटा ग्लूकन का स्थानिक वितरण। फंगल विविधता। 46. 29-42. 10.1007/s13225-010-0067-8।
मशरूम के बीटा-ग्लूकन अर्क एकाग्रता का परिमाणीकरण
निष्कर्षण के बाद बीटा-ग्लूकन एकाग्रता को बीटा-ग्लूकन के प्रकार और विश्लेषण की विशिष्ट आवश्यकताओं के आधार पर विभिन्न तरीकों का उपयोग करके निर्धारित किया जा सकता है। बीटा-ग्लूकन एकाग्रता को निर्धारित करने के लिए सामान्य तरीके नीचे सूचीबद्ध हैं। बेशक, विधि की पसंद आवश्यक सटीकता और उपलब्ध उपकरण जैसे कारकों पर निर्भर करती है।
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ग्रेविमेट्रिक विधि
- सिद्धांत: यह विधि इथेनॉल के साथ बीटा-ग्लूकन की वर्षा पर आधारित है, इसके बाद अवक्षेप को सुखाने और तौलने के बाद।
- प्रक्रिया: नमूना पानी में घुल जाता है, बीटा-ग्लूकन को अवक्षेपित करने के लिए इथेनॉल के साथ इलाज किया जाता है, और फिर अवक्षेप को एकत्र किया जाता है, सुखाया जाता है और तौला जाता है।
- लाभ: सरल और व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
- सीमाएं: अन्य तरीकों की तुलना में कम सटीक।
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कलरिमेट्रिक विधियाँ
- सिद्धांत: इन विधियों में विशिष्ट अभिकर्मकों के साथ रंग प्रतिक्रियाएं शामिल होती हैं जो बीटा-ग्लूकन एकाग्रता के आनुपातिक रंग परिवर्तन का उत्पादन करती हैं।
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उदाहरण:
- फिनोल-सल्फ्यूरिक एसिड विधि: इस विधि में केंद्रित सल्फ्यूरिक एसिड और फिनोल के साथ नमूने का इलाज करना शामिल है, जो घोल को नारंगी कर देता है। रंग की तीव्रता बीटा-ग्लूकन एकाग्रता के आनुपातिक है।
- एंथ्रोन विधि: एनथ्रोन अभिकर्मक नीले-हरे रंग का उत्पादन करने के लिए बीटा-ग्लूकन के साथ प्रतिक्रिया करता है, और रंग की तीव्रता को मापा जाता है।
- लाभ: उच्च-थ्रूपुट विश्लेषण के लिए संवेदनशील और उपयुक्त।
- सीमाएं: अन्य यौगिकों से हस्तक्षेप और विशिष्ट अभिकर्मकों की आवश्यकता।
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एंजाइमेटिक परख
- सिद्धांत: एंजाइमेटिक परख बीटा-ग्लूकेन को सरल शर्करा में तोड़ने के लिए β-ग्लूकानेस जैसे एंजाइमों का उपयोग करते हैं, और जारी शर्करा की मात्रा निर्धारित की जाती है।
- लाभ: अत्यधिक विशिष्ट और सटीक।
- सीमाएं: विशेष उपकरण और अभिकर्मकों की आवश्यकता होती है।
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उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी)
- सिद्धांत: एचपीएलसी एक क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के साथ उनकी बातचीत के आधार पर यौगिकों को अलग और निर्धारित करता है।
- प्रक्रिया: बीटा-ग्लूकन को मोनोसैकराइड में हाइड्रोलाइज्ड किया जाता है, और परिणामस्वरूप शर्करा को एचपीएलसी द्वारा अलग और परिमाणित किया जाता है।
- लाभ: जटिल नमूनों के लिए अत्यधिक सटीक और उपयुक्त।
- सीमाएं: विशेष उपकरण और विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है।
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विशिष्ट इम्यूनोसे।
- सिद्धांत: इम्यूनोएसे अपनी एकाग्रता को निर्धारित करने के लिए बीटा-ग्लूकन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करते हैं।
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उदाहरण:
- एलिसा (एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख): इस विधि में, एक एंजाइम-लिंक्ड एंटीबॉडी बीटा-ग्लूकन को बांधने पर एक रंग परिवर्तन पैदा करता है।
- पार्श्व प्रवाह परख: ये तेजी से परीक्षण हैं जो एक परीक्षण पट्टी पर एक दृश्यमान परिणाम प्रदान करते हैं।
- लाभ: उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता।
- सीमाएं: विशिष्ट एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है और अधिक महंगा हो सकता है।