הכנה לדוגמה עם VialTweeter אולטראסוניות

הכנה לדוגמה אולטראסאונד

Ultrasonication היא טכניקה נפוצה של טיפול לדוגמה על מנת לקבל את המדגם מוכן לניתוחים כגון תגובת שרשרת פולימרים (PCR), כתמים מערביים, תסרוקות, רצף מולקולרי, כרומטוגרפיה וכו '. Ultrasonication היא טכניקה בשימוש נרחב במעבדות לטיפול בדגימות טרום אנליטית. היתרון העיקרי של sonication הוא כי עקרון העבודה של אולטרסאונד מבוסס על כוחות מכניים גהורים. פירוק אולטראסוניות ושיבוש תאים מושגת על ידי כוחות גייה sonomechanical, אשר נותן ultrasonication את היתרון כי הממיסים המשמשים להפקת חלבון יכול לשמש גם במהלך ליסיס. משבשים תא אולטראסוניות כגון VialTweeter לשבור את קירות התא / קרום ולקדם העברה המונית בין פנים התא ממס. בכך, analyte (למשל DNA, RNA, חלבונים, organelles וכו ') מועברים ביעילות מטריצת התא לתוך הממס. משמעות הדבר היא השלבים של quenching וחילוץ חופפים עם תהליך שיבוש תא אולטראסוניות, מה שהופך את lysis אולטראסוניות יעיל מאוד. יתר על כן, הכנת מדגם אולטראסוניות אינה דורשת חומרי ניקוי ותריגנטים אחרים, אשר עשוי לשנות ולהשמיד את המבנה של lysate והוא ידוע בבעיות הבאות עם טיהור. שיטה נוספת, השיבוש האנזימטי דורש זמני דגירה ארוכים ומספק לעתים קרובות תוצאות שאינן ניתנות לשחזור. הכנת מדגם אולטראסוניות מתגברת על בעיות נפוצות בהכנה לדוגמה כגון הומוגניזציה רקמות, שיבוש תאים, ליסיס, חלבון מיצוי וlysate solubilization. מאז העוצמה של הטיפול אולטראסוניות ניתן לשלוט בדיוק ומותאם לדגם הביולוגי, השפלה ואובדן מדגם נמנעים. טמפרטורת מדגם מנוטרת ומבוקלטת באופן אוטומטי, מצב פולס ומשך sonication להבטיח תוצאות אופטימליות.

VialTweeter הוא נוח במיוחד עבור עבודת מעבדה הדורשת הכנה בו זמנית של דגימות מרובות באותם תנאים. VialTweeter הוא sonotrode בלוק אולטראסוניות שיכול להכיל עד 10 בקבוקונים (למשל Eppendorf, centriguge, צינורות NUNC, בקבוקונים cryo-) ו sonicates אותם באינטנסיביות בתנאים מבוקרים בדיוק. מאז האנרגיה אולטראסוניות הוא בשילוב דרך הקירות של הבקבוקונים לתוך המדיום המדגם, הבקבוקונים לשמור סגור במהלך הטיפול. ובכך, אובדן דגימה וזיהום צולב נמנעים לחלוטין.

בקבוקונים וצינורות המתאימים לטרף VialTweeter

VialTweeter מתאים להכיל 10 צינורות חבויים נפוצים או עגולים כגון Eppendorf, צנטריפוגה, בקבוקונים cryo וסוגים שונים של בקבוקון NUNC, אבל החורים יכולים להיות מותאמים אישית לגודלים אחרים בקבוקון וצינור על פי בקשה. אנא יידע אותנו באיזה סוג של מבחנות אתה רוצה להשתמש, כך שנוכל לשנות VialTweeter שלך בהתאם. עבור מבחנות גדולות יותר כגון צינורות פלקון ומכולות בדיקה אחרות, בירות וכלי שיט, VialPress הוא פתרון נוח.

הויאלטוויטר עם VialPress

בעוד VialTweeter עצמו עם שלה 10 צינורות חורים הוא כבר ייחודי ופונקציונלי מאוד מכשיר אולטראסוניות, התוספת VialPress עושה VialTweeter אפילו יותר תכליתי וגמיש לפעולה. VialPress הוא אביזר VialTweeter המורכב בר מהדק המאפשר לקבע צינורות מדגם גדול יותר כגון צינורות פלקון או אחרים קטנים עד בינוניים בבחנות לחזית VialTweeter. התמונה בצד שמאל מראה VialTweeter מחזיק 10 בקבוקונים Eppendorf בבלוק, בעוד VialPress מקובע אחד גדול יותר מבחן לחזית עבור sonication. VialPress הוא מסוגל להחזיק עד 5 מבחנות גדולות יותר עבור sonication אינטנסיבי.

פרוטוקולי הכנת מדגם VialTweeter

VialTweeter משמש נרחב כדי sonicate דגימות ביולוגיות. לפני הניתוח, יש להכין דגימות לניתוחים ביוכימיים או ביופיזיים, למשל על ידי ליסיס, הומוגניזציה של רקמות, מיצוי חלבונים, גיעור DNA / RNA, degassing וכו '. VialTweeter ממלא תהליכים אולטראסוניות אלה באופן אמין מספק תוצאות לשחזור. יישום נפוץ של VialTweeter הוא שיבוש lysis / תא של רקמות יונקים (אדם ובעלי חיים), כמו גם תאי חיידקים וחלקיקים ויראליים. בהצלחה VialTweeter שטופלו דגימות ביולוגיות כוללים תאי אפיתל ריאות אנושיים, תאי גזע haematopoietic, תאי לוקמיה מיאלואידית, אצ'ריצ'יה קולי, subtilis בצילוס, באצ'יוס אתראקיס, פרנסיסלה טולרסיס, ירסניה פשטיס, סטרפטוקוקוס פיוגנס, סהר כרובקטר, דלקת ריאות מיקופלסמהmycobacteria / קומפלקס שחפת Mycobacterium (MTBC) ותאים חיידקיים, בוטניים ומיקרוביאליים רבים אחרים.,
להלן, באפשרותך למצוא כמה פרוטוקולים נבחרים הכוללים את VialTweeter.

E.Coli Lysis עם Vialtweeter לקביעת גלוטתיון In-Vivo

חיידקי Escherichia coli של זן MG1655 גדלו MOPS מינימלי בינוני בנפח כולל של 200 מ"ל עד A600 של 0.5 הושג. התרבות חולקה לתרביות של 50 מ"ל לטיפול בלחץ. לאחר 15 דקות של דגירה עם 0.79 mM אלצין, 1 mM דיאמיד, או dimethyl sulfoxide (שליטה), תאים נקטפו ב 4,000 גרם ב 4 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. תאים נשטפו פעמיים עם מאגר KPE לפני התחדשות של כדוריות ב 700μl של מאגר KPE. עבור deproteination, 300μl של 10% (w / v) חומצה sulfosalicylic נוספו לפני הפרעה של תאים על ידי ultrasonication (3 x 1 דקות; VialTweeter אולטראסוניות). סופרנטנטים נאספו לאחר צנטריפוגה (30 דקות, 13,000 גרם, 4 מעלות צלזיוס). ריכוזי חומצה Sulfosalicylic ירדו 1% על ידי תוספת של 3 כרכים של מאגר KPE. מדידות של גלוטתיון כולל וGSSG בוצעו כמתואר לעיל. ריכוזי גלוטתיון תאי חושבו בהתבסס על נפח של תאי E. coli של 6.7×10-15 ליטר וצפיפות תאים של A600 0.5 (שווה ערך לתרבות 1×108 תאים ml-1). ריכוזי GSH חושבו על ידי חיסור של 2[GSSG] מגלוטתיון כולל. (מולר ואח '. 2016)

ליסיס תא עם VialTweeter לפני ספקטרומטריה ספיגה אטומית כבשן גרפיט

Bacillus subtilis 168 (trpC2) נחשפו 15 דקות של מתח אנטיביוטי, לאחר מכן תאים נקטפו ב 3,320 x g, שטף חמש פעמים עם 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, resuspended ב 10 mM Tris, pH 7.5 ושיבש על ידי ultrasonication במכשיר Hielscher VialTweeter. (וונזל ואח' 2014)

הכנת מדגם VialTweeter לפני ספקטרומטריה מסה

כדורי התא lyophilized של CD34 אנושי􏰀 תאי גזע המטופואיטי / אב רבייה היו resuspend ב 10μ􏰇l (200μl עבור הכנה בתפזורת HEK293 עבור סדרת דילול פפטיד) של 8 M urea ב 100 mM אמוניום מימן קרבונט וlysed בסיוע sonication עם VialTweeter Hielscher במשרעת של 60%, מחזור של 60% ומשך של 20s במשך שלוש פעמים עם קירור ביניים על קרח. (אמון ואח' 2019)

פרוטוקולי הכנה לדוגמה באמצעות VialPress

חסה טרייה (Lactuca sativa) היה homogenized ב 0.5 M HEPES מאגר (pH 8, KOH מותאם) ביחס של 1 גרם צמח (משקל טרי) כדי 200, 100, 50, או 20 מ"ל פתרון מאגר. היחס בין מסת הצמח לנפח פתרון מאגר היה מגוון כדי לשמור על נפח הומוגני הכולל בין 3.5 ו 12 מ"ל. היחס בין מסת הצמח לנפח פתרון מאגר היה מגוון כדי לשמור על נפח הומוגני הכולל בין 3.5 ו 12 מ"ל, המאפשר homogenization עם הגשוש. Homogenates לאחר מכן עבר ultrasonication עקיף באמצעות UP200St עם VialTweeter מצויד 200xt VialPress (Hielscher אולטרסוניקה GmbH, גרמניה) במשך 3 דקות (80% דופק ו 100% כוח). שימוש בהתקן זה נמנע מזיהום. (לוטון ואח ' 2019)

בקרת טמפרטורה אמינה במהלך Sonication עם VialTweeter

טמפרטורה היא גורם חיוני המשפיע על התהליך שחשוב במיוחד לטיפול בדגימות ביולוגיות. כמו כל טכניקות הכנת מדגם מכני, sonication יוצר חום. עם זאת, הטמפרטורה של הדגימות ניתן לשלוט היטב בעת השימוש VialTweeter. אנו מציגים בפניכם אפשרויות שונות כדי לפקח ולשלוט בטמפרטורה של הדגימות שלך תוך הכנתם עם VialTweeter ו VialPress לניתוח.

1. ניטור טמפרטורת המדגם: המעבד אולטראסוניות UP200St, אשר מניע את VialTweeter, מצויד בתוכנה חכמה חיישן טמפרטורה לחיבור. חבר את חיישן הטמפרטורה ל-UP200St והכנס את קצה חיישן הטמפרטורה לאחד מהצינורות לדוגמה. באמצעות צג מגע דיגיטלי בצבע, באפשרותך להגדיר בתפריט של UP200St טווח טמפרטורות ספציפי עבור sonication המדגם שלך. ultrasonicator יעצור באופן אוטומטי כאשר הטמפרטורה המקסימלית מגיעה להשהות עד הטמפרטורה המדגם הוא למטה לערך הנמוך יותר של הטמפרטורה להגדיר ∆. ואז sonication מתחיל באופן אוטומטי שוב. תכונה חכמה זו מונעת השפלה הנגרמת על-ידי חום.
2. ניתן לקרר מראש את בלוק VialTweeter. לשים את בלוק VialTweeter (רק sonotrode ללא מתמר!) לתוך המקרר או המקפיא כדי לקרר מראש את בלוק טיטניום עוזר לדחות את עליית הטמפרטורה במדגם. אם הדבר אפשרי, הדגימה עצמה יכולה להיות מקוררת מראש מדי.
3. השתמש בקרח יבש כדי להתקרר במהלך sonication. השתמשו במגש רדוד מלא בקרח יבש והניבו את ה-VialTweeter על הקרח היבש כדי שהחום יתפוגג במהירות.

לקוחות ברחבי העולם משתמשים ב-VialTweeter וב-VialPress לעבודת הכנת המדגם היומית שלהם במעבדות ביולוגיות, ביוכימיות, רפואיות וקליניות. התוכנה החכמה ובקרת הטמפרטורה של מעבד UP200St, הטמפרטורה נשלטת באופן אמין וכתוצאה מכך ההשפלה בדגימה כתוצאה מחום נמנעת. הכנת מדגם אולטראסוניות עם VialTweeter ו VialPress מספק תוצאות אמינות מאוד לשחזור!

פרטים טכניים של הבקבוקון

VialTweeter הוא סונוטרודה בלוק עשוי טיטניום שיכול להכיל עד 10 בקבוקונים בחורים בתוך הבלוק. בנוסף, עד 5 מבחנות גדולות יותר ניתן להדק לחזית VialTweeter באמצעות VialPress. VialTweeter הוא כל כך מעוצב כי אנרגיית ultrasonication מופץ באופן אחיד לתוך כל בקבוקון מוכנס כדי להבטיח תוצאות sonication אמין ואחיד. ציר קטן מתאים את sonotrode VialTweeter לקרקע לא אחידה וליישר את מבחנות אנכית.

יתרונות של VialTweeter במבט חטוף

• sonication אינטנסיבי של עד 10 בקבוקונים זמנית
• Sonication עקיף בעוצמה אולטרה סאונד דרך קיר כלי לתוך המדגם
• sonication עקיף ימנע זיהום צולב ואובדן מדגם
• תוצאות הניתנות לשינוי בשל משרעת sonication מתכווננת וניתנת לשליטה
• VialPress מאפשר לך לsonicate צינורות גדולים יותר
• משרעת מתכווננת מ- 20 עד 100%
• מצב דופק מתכוונן מ -0 עד 100%
• autoclavable

VialTweeter מופעל על ידי בית Seatingמעבד אולטראסוניות רב עוצמה 200 וואט., UP200St מצויד בתוכנה חכמה המאפשרת שליטה מדויקת על כל הפרמטרים החשובים של תהליך אולטראסוניות כגון משרעת, זמן sonication, פועם, וטמפרטורה. זה הופך את VialTweeter כלי אמין עבור תוצאות תהליך לשחזור מוצלח במעבדות ביולוגיות וביוכימיות.
משרעת ניתן להתאים בין 20 ו 100% ומאפשר ובכך להתאים את עוצמת אולטראסוניות לדגימה שלך. לדוגמה, גיזה ופיצול של DNA ו RNA דורש משרעת מתונה יותר כדי למנוע את הייצור של שברי DNA קטנים מדי, הומוגניזציה רקמות של מוח העכבר צריך sonication בעוצמה גבוהה. בחר את המשרעת האידיאלית, עוצמת הקולציה ומשך הזמן באמצעות התפריט החכם והאינטואיטיבי במעבד UP200St. התפריט וההגדרות נגישים ומופעלים בקלות באמצעות צג מגע צבעוני. בהגדרות אתה יכול להגדיר מראש פרמטרים sonication כגון משרעת, פועם / מצב מחזור, משך sonication, קלט אנרגיה כולל, ומגבלות טמפרטורה. במחקר וייצור, היכולת החוזרת של ניסויים ותוצאות הבדיקה היא קריטית. משמעות הדבר היא הקלטה מדויקת של תנאי תהליך ופרוטוקולי sonication חשובים לחלוטין. פרוטוקול נתונים אוטומטי כותב את כל נתוני sonication לתוך קובץ CSV על כרטיס SD משולב, כך שאתה יכול בקלות לבדוק ולהשוות ריצות sonication שונות. כל נתוני תהליך אולטראסוניות ניתן לגשת בקלות ומשותף כקובץ CSV.
Hielscher אולטרסוניקה שואפת לספק לך טכנולוגיה מתקדמת כדי להקל ולשפר את עבודת המחקר שלך!