פרוטוקול להשבתת נגיף הקורונה SARS-CoV-2 עם Sonication

Hielscher VialTweeter היא יחידת הכנה רב מדגם אולטראסוניות ייחודי, אשר משמש כדי להשבית את נגיף הקורונה SARS-COV-2. VialTweeter לאפשר להכין עד 10 בקבוקונים לדוגמה בו זמנית, ובכך הוא היחידה האידיאלית לעיבוד מדגם המוני.

אי-הפעלה של נגיף הקורונה SARS-CoV-2 עם הויולטטר

לאחר הסרת קיבעון, monolayers נשטפו שלוש פעמים עם תמיסת מלח פוספט אגירה (PBS) לפני גירוד תאים לתוך 1mL MEM/5% FBS ו sonicated (3 × 10 שניות על, 10 שניות את ב 100% כוח ומשרעת) באמצעות מעבד אולטראסוניות Hielscher UP200St עם VialTweeter הקובץ המצורף. Supernatants הובהרו על ידי צנטריפוגה ב 3000 × גרם עבור 10 דקות. 

קרא את הפרוטוקול המלא כאן עבור ההשבתה SARS-CoV-2 נגיף הקורונה על ידי וולש ואח '. (2020) להלן:

תאים ווירוסים

תאי ורו E6 (ורו C1008; 18 בינואר 1912 - 2008) ATCC CRL-1586) היו תרבותיים במדיום החיוני המינימלי (MEM) של הנשר שונה בתוספת 10% (v/v) סרום עגל עוברי (FCS). הווירוס בשימוש היה SARS-CoV-2 זן hCOV-19/England/2/2020, מבודד על ידי PHE מאשכול החולים הראשון בבריטניה על 29/01/2020. וירוס זה הושג במעבר 1 ושמש ללימודי אי-הפעלה במעבר 2 או 3.
עבור reagents וכימיקלים המשמשים להשבתה SARS-CoV-2, כמו גם הסרת cytotoxicity reagent אנא עיין הדו"ח המדעי של וולש ואח '. (2020).

וירוסים של חוסר פעילות על ידי חומרי ניקוי – פרוטוקול אי-הפעלה של נגיף הקורונה SARS-CoV-2 על ידי וולש ואח' 2020

אי-הפעלה של סארס-קו-2

עבור מוצרים מסחריים, תכשירי וירוסים (נוזל תרבות רקמות, titers החל 1 × 10⁶ עד 1 × 10⁸ PFU/ml) טופלו בשלושה רישיות עם reagents בריכוזים ולזמי מגע מומלצים בהוראות של היצרנים לשימוש, איפה זמין, או עבור ריכוזים וזמנים שהתבקשו במיוחד על ידי מעבדות בדיקה. כאשר מגוון ריכוזים ניתן על ידי היצרן, היחס הנמוך ביותר של המוצר לדגימה נבדק (כלומר הריכוז המומלץ הנמוך ביותר של מוצר בדיקה). ריאגנט צינור הובלה דגימה נבדקו באמצעות יחס של נפח אחד של נוזל תרבות רקמות לעשרה כרכים של reagent, אלא אם כן יחס נפח של נוזל מדגם לריגנט צוין על ידי היצרן. חומרי ניקוי, חומרים מקבעים וממיסים נבדקו בריכוזים המצוינים לזמנים המצוינים. כל שלבי אי-הפעולה בוצעו בטמפרטורת החדר הסביבה (18 עד 25 מעלות צלזיוס). לבדיקה של סוגי דגימות חלופיות, הווירוס היה זינק לתוך מטריצת המדגם שצוינה ביחס של 1:9, ולאחר מכן טופל עם reagents בדיקה כאמור לעיל. כל הניסויים כללו דוגמאות שטופלו ב-300 פעמים עם נפח שווה ערך של PBS במקום רייגנט בדיקה. מיד לאחר זמן המגע הנדרש, 1mL של מדגם מטופלעובד באמצעות מטריצת סינון שנבחר כראוי. הסרת ריאגנט לבדיקות אי-הפעלה בוצעה בפורמט גדול יותר של עמודת ספין באמצעות פירס 4mL הסרת דטרגנטים ספין עמודות (תרמו פישר), או על ידי מילוי ריק פירס 10mL קיבולת צנטריפוגה עמודות (תרמו פישר) עם SM2 ביו חרוזים, Sephacryl S-400HR או Sephadex LH-20 לתת 4mL ארוז חרוזים / resin. לטיהור באמצעות מסנני Amicon, 2 × 500μl טוהרו באמצעות שני מסננים צנטריפוגליים על ידי השיטה שתוארה קודם לכן, ולאחר מכן אוגר יחד. עבור פורמלדהיד ופורמלדהיד עם הסרת גלוטרלדהייד, מסנן אחד שימש עם 1× 500μl נפח מדגם, resuspended לאחר עיבוד ב 500μl PBS, והוסיף 400ul MEM/5% FBS. להשבתת הנגועים שכבות מונו, 12.5 ס"מ² מבחנות של תאי Vero E6 (2.5 × 10⁶ תאים/בקבוקון ב 2.5mL MEM/5% FBS) נדבקו ב MOI 0.001 דגירה ב 37 ° C / 5% CO₂ במשך 24 שעות. Supernatant הוסר, ותאים קבועים באמצעות 5 מ"ל של פורמלדהיד, או פורמלדהיד ו גלוטרלדהייד בטמפרטורת החדר במשך 15 או 60 דקות. המקבע הוסר, monolayers נשטף שלוש פעמים עם PBS לפני גירוד תאים לתוך 1mL MEM/5% FBS ו sonicated (3 × 10 שניות על, 10 שניות את ב 100% כוח ומשרעת) באמצעות UP200St עם קובץ מצורף VialTweeter (טכנולוגיית אולטרסאונד Hielscher). Supernatants הובהרו על ידי צנטריפוגה ב 3000 × גרם עבור 10 דקות.

פרטים של reagent המשמש ל-SARS-CoV-2 נגיף הקורונה הפעלה עם VialTweeter אולטראסוניות על פי הפרוטוקול על ידי וולש ואח '.

את הפרוטוקול המלא, לרבות השימוש בווילשר ויטוטר ( Hielscher VialTweeter ) ניתן למצוא כאן:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Dismembrators אולטראסוניות מתוחכמים ומשבשי תאים

מולטי-מדגם ultrasonicator VialTweeter הוא רק אחד של פתרונות אולטראסוניות רבים להכנת מדגם במעבדות ביולוגיות, ביוכימיות וקליניקיות. Hielscher אולטרסוניקה מציעה את dismembrator אולטראסוניות אידיאלי עבור היישום שלך, למשל פירוק תא, מיצוי תאים, הומוגניזציה רקמות, solubilization lysate, המסה, degassing לדוגמה וכו '.
תן לנו לדעת כמה דגימות אתה צריך לעבד לשעה וליום, אם אתה מעדיף sonication ישיר או עקיף ומה היעד של טיפול מדגם אולטראסוניות הוא. אנו ממליצים לך על יחידת אולטראסוניות המתאימה ביותר עבור שגרת העבודה היומית שלך!
Hielscher אולטרסוניקה ' מעבדים קוליים דיגיטליים מצוידים בתוכנה חכמה, הקלטת נתונים אוטומטית, אפשרויות הגדרה מראש קל לבקרת טמפרטורה, משך sonication, מחזור / מצב דופק, כמו גם תאורה לדוגמה שלט רחוק של הדפדפן. אנו שואפים להפוך את המכשירים אולטראסוניות שלנו חכם ככל האפשר, כך שגרת המחקר והעבודה שלך הופך נוח ומוצלח ככל האפשר.
לחץ כאן, כדי למצוא יישומים נוספים כולל פרוטוקולים של הכנת מדגם אולטראסוניות עם VialTweeter!