היגישר טכנולוגיית אולטרה סאונד

הכנה מדגם אולטראסוניות עבור ELISA Assays

תסכולות כגון ELISA נמצאות בשימוש נרחב לאבחון במבחנה, זיהוי חלבונים הקשורים למחלות ובקרת איכות (למשל ניטור אלרגנים למזון). הכנת מדגם אולטראסוניות היא טכניקה מהירה, אמינה וניתנת לשחזור כדי לריס תא ולבודד חלבונים תאיים, DNA, RNA ו organelles. Hielscher אולטרסוניקה מציעה פתרונות אולטרה סאונד שונים עבור הכנה נוחה של דגימות יחיד, בקבוקונים מרובים, כמו גם עבור לוחות microtiter ו 96-well צלחות.

אליסה – אנזים מקושר תסה אימונוסורבנט

ELISA מייצגת אנזים מקושר תסאגת אימונוסורבנט, היא טכניקת ניתוח ביוכימית בשימוש נרחב של הקטגוריה של רצועות ליגנד מחייב. ב- ELISA, מדגם נוזלי מתווסף לשלב מוצק נייח עם מאפייני איגוד מיוחדים. בדרך כלל, שלב מוצק נייח מוחל כמו ציפוי על צלחת היטב או צלחת ELISA. לאחר מכן, ריאגנטים נוזליים שונים מתווספים באופן רצף, דגירה, ושטף, כך שלבסוף שינוי אופטי (למשל, פיתוח צבע על ידי המוצר של תגובה אנזימטית) מתרחש בנוזל הסופי בבאר. השינוי האופטי מאפשר למדוד את כמות האנליטית על-ידי מה שנקרא כמותית “"קורא". לקריאה כמותית, ספקטרופוטומטר, פלואורומטר או מד לומינומטר משמש כדי לזהות ולמדוך את עוצמת האור המשודר. רגישות הגילוי מושפעת מההגברה של האות במהלך התגובות האנליטיות. מאז תגובות אנזימים נחקרים היטב ותהליכים אמין ההגדלה, אנזימים משמשים כדי ליצור את האות. האנזימים מקושרים לריגנטים זיהוי בפרופורציות קבועות כדי לאפשר כימות מדויקת, מה שמסביר גם את השם "אנזים מקושר" esmunosorbent.
כמו ELISA assays מבוצעים צלחות microtiter / 96-גם צלחות, זה ידוע בשם טכניקת תסה מבוססת צלחת והוא משמש למשל באבחון קליני במבחנה, מחקר, פיתוח תרופות וכו 'לאיתור וכימות נוגדנים, פפטידים, חלבונים, והורמונים.
טכניקת ELISA משמשת לעתים קרובות ככלי אבחון ברפואה, ביוטכנולוגיה, פתולוגיה של צמחים והיא גם מדידה חשובה לבקרת איכות בתעשיות מרובות.

התקנת VialTweeter מלאה: VialTweeter sonotrode על מעבד קולי UP200St

יחידת הכנה מדגם אולטראסוניות VialTweeter משמש לליזיס תאים וחילוץ חלבונים לפני ELISA אומר

בקשת מידע





הכנה מדגם אולטראסוניות לפני ELISA

לפני ניתן לבצע את ה-ELISA, הדגימות דורשות שלבים של הכנה כגון ליזיס תאים וחילוץ של חלבונים תאיים, DNA, RNA וכו '. היתרון של lysis תא אולטראסוניות ובידוד חלבון הוא יעילות גבוהה שלה, אמינות ורבייה. כל הגורמים הללו חשובים על מנת לקבל תוצאות אבחון ומחקר באיכות גבוהה

היתרונות של Lysis אולטראסוניות לפני ELISA

  • טיפול מדגימה הומוגנית
  • תברה מלאה
  • מיצוי חלבון מלא (למשל נוגדנים, דנ"א)
  • התאמה אופטימלית לסוג התא
  • עבור כל גודל מדגם
  • לשחזור
  • מבוקר טמפרטורה
  • פרוטוקול נתונים אוטומטי בכרטיס SD

פרוטוקול עבור תסיסה תא אולטראסוניות טרום ELISA

Probe-סוג insonifier UP200St עבור תמס

  • עבור תרבויות תאים: לפני lysis תא אולטראסוניות, תאי צנטריפוגה עבור 5 דקות ב 270 x g במיקרוצנטריפוגה. הסר את supernatant על ידי שאיפה ותאים resuspend ב 30 – 100 μL של מאגר RIPA. לאחר מכן, דגירה את גלולת התא על קרח במשך 30 דקות.
  • עכשיו, דגימת התא מוכנה לליזה אולטראסוניות:
    השתמש אולטראסוניות מסוג בדיקה (למשל. Uf200 ः t עם בדיקה S26d2) או מכשיר רב מדגם אולטראסוניות (למשל VialTweeter עבור sonication בו זמנית של עד 10 בקבוקונים או UIP400MPT עבור לוחות microtiter / 96-well צלחות) בהתאם לכמות הדגימות שאתה צריך להכין.
    עבור sonication מסוג בדיקה של מדגם יחיד, למקם את התאים בצינורות 1.5 מ"ל microcentrifuge.
  • הגדר מראש משך אולטראסוניות שלך, קלט אנרגיה כוללת, מצב מחזור ו / או מגבלות טמפרטורה בתפריט הדיגיטלי של ultrasonicator. זה מבטיח sonication אמין מאוד ויכולת חזרה.
  • להדליק את sonotrode ולהחליף את המכשיר אולטראסוניות על. בעדינות להעביר את הקצה הזעיר של בדיקה אולטראסוניות דרך המדגם כדי sonicate את המדגם באופן אחיד.
    עבור רוב התאים, פירוק אולטראסוניות יושלם לאחר 2 -4 מחזורים של 10 שניות sonication.
  • לאחר sonication, להסיר את sonotrode מהדגימה. הדגימות צריכות להיות מדגירה על קרח במשך 5 דקות. לאחר מכן, צנטריפוגה ב 10,000 x g עבור 20 דקות כדי גלולות ההריסות. להעביר את supernatants לצינור מיקרוצנטריפוגה חדש. תייג את האנליטים ואחסן ב- -20°C.
  • sonotrode אולטראסוניות ניתן לנקות על ידי ניגוב אותו כראוי עם אלכוהול או sonicate בבקת מלאה באלכוהול, למשל 70% אתנול. כל בדיקות אולטראסוניות עשוי טיטניום הם autoclavable.

להומוגניטים של רקמות:

  • לשטוף את הרקמה עם PBS קר כקרח (0.01M, pH = 7.4) כדי להסיר דם המוליזה עודף ביסודיות.
  • לשקול את הרקמה (כליות, לב, ריאות, טחול וכו ') וmacerate אותו לחתיכות קטנות, אשר הומוגניים PBS. נפח PBS הנדרש קשור למשקל הרקמה. ככלל אצבע, 1g של רקמה דורש כ. 9mL PBS. מומלץ להוסיף כמה מעכב פרוטאז PBS. (RIPA או מאגר ליזה היפוטונית המכיל פרוטאז וקוקטייל מעכב פוספטאז יכול לשמש לחילופין.)
  • בהתאם לגודל הרקמה, טיפול מערבולת קצר (כ 1-2 דקות ב 15 שניות. פולסים) יכול להיות מועיל כדי לטפל מראש את הרקמה.
  • הר מיקרו-קצה, למשל S26d2, כדי ultrasonicator שלך. מניחים את צינור הדגימה עם הרקמה באמבט קרח.
  • Sonicate את הדגימה עם ultrasonicator שלך, למשל UP200St (80% משרעת) במשך 1 דקות במצב דופק (15sec on, 15sec הפסקה). שמור את הדגימה באמבטיית הקרח.
  • לאחר מכן, ההומוגנאטים צנטריפוגים כדי להשיג בריכות ספציפיות (ציטוסולית, גרעינית, מיטוכונדריאלית או ליזומלית) כדי להעשיר את החלבון לניתוח. על ידי צנטריפוגה הדגימה במשך 5 דקות ב 5000×g, supernatant מאוחזר.
Sonotrode MTP-24-8-96 יש שמונה בדיקות אולטראסוניות עבור sonication של הבארים של לוחות microtiter.

Sonotrode MTP-24-8-96 יש שמונה בדיקות אולטראסוניות עבור sonication של הבארים של לוחות microtiter.

בקרת טמפרטורה אמינה במהלך Sonication

הטמפרטורה היא גורם חיוני המשפיע על תהליך שחשוב במיוחד לטיפול בדגימות ביולוגיות, למשל כדי למנוע השפלה תרמית של חלבונים. כמו כל טכניקות הכנת מדגם מכני, sonication יוצר חום. עם זאת, הטמפרטורה של הדגימות ניתן לשלוט היטב בעת שימוש מכשירי אולטרסוניקה Hielscher. אנו מציגים בפניכם אפשרויות שונות כדי לפקח ולשלוט בטמפרטורה של הדגימות שלך תוך הכנתם עם ultrasonicator מסוג בדיקה או VialTweeter טרום אנליטית.

  1. ניטור טמפרטורת המדגם: כל מעבדי אולטראסוניות דיגיטלי Hielscher מצוידים בתוכנה חכמה חיישן טמפרטורה לחיבור. חבר את חיישן הטמפרטורה להתקן אולטראסוניות (למשל, Uf200 ः t, בית Seating, VialTweeterUIP400MTP) והכנס את קצה חיישן הטמפרטורה באחד מצינורות הדגימה., באמצעות תצוגת מגע צבעונית דיגיטלית, אתה יכול להגדיר בתפריט של המעבד אולטראסוניות טווח טמפרטורה ספציפי עבור sonication המדגם שלך. ultrasonicator יעצור באופן אוטומטי כאשר הטמפרטורה המקסימלית מגיעה להשהות עד הטמפרטורה המדגם הוא למטה לערך הנמוך יותר של הטמפרטורה להגדיר ∆. ואז sonication מתחיל באופן אוטומטי שוב. תכונה חכמה זו מונעת השפלה הנגרמת על-ידי חום.
  2. לגבי יחידת אולטראסוניות מרובה מדגם VialTweeter, בלוק טיטניום, אשר מחזיקים את צינורות הדגימה, ניתן לקרר מראש. לשים את בלוק VialTweeter (רק sonotrode ללא מתמר!) לתוך המקרר או המקפיא כדי לקרר מראש את בלוק טיטניום עוזר לדחות את עליית הטמפרטורה במדגם. אם הדבר אפשרי, הדגימה עצמה יכולה להיות מקוררת מראש מדי.
  3. השתמשו באמבט קרח או בקרח יבש כדי להתקרר במהלך ההתרה. מניחים את הצינורים לדוגמה במהלך sonication לתוך אמבט קרח. עבור VialTweeter, השתמש במגש רדוד מלא קרח יבש והניח את VialTweeter על הקרח היבש, כך שהחום יכול להתפוגג במהירות.

לקוחות ברחבי העולם להשתמש Hielscher בדיקה-ultrasonicators, כמו גם את יחידות sonication מרובה מדגם VialTweeter ו UIP400MTP עבור עבודת הכנת המדגם היומי שלהם במעבדות ביולוגיות, ביוכימיות, רפואיות וקליניות. התוכנה החכמה ובקרת הטמפרטורה של מעבדי Hielscher, הטמפרטורה נשלטת באופן אמין והשפלה מדגם המושרה בחום נמנעה. הכנת מדגם אולטראסוניות עם פתרונות אולטרה סאונד Hielscher מספק תוצאות אמינות מאוד לשחזור!

תיצור איתנו קשר! / שאל אותנו!

בקש מידע נוסף

אנא השתמש בטופס שלהלן כדי לבקש מידע נוסף אודות מעבדים אולטרה סאונד, יישומים ומחיר. נשמח לדון בתהליך שלך איתך ולהציע לך מערכת אולטרה סאונד לפגישה הדרישות שלך!









הינכם מתבקשים לשים לב מדיניות פרטיות.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher אולטרסוניקה מייצרת הומוגניזרים אולטראסוניות ביצועים גבוהים עבור ערבוב יישומים, פיזור, אמולסיה וחילוץ על מעבדה, טייס בקנה מידה תעשייתי.

ספרות/הפניות



עובדות שראוי לדעת

סוגי אליסה

ישנם מספר סוגים של ELISA, אשר נבדלים על ידי עקרון התפקוד שלהם. הם ידועים בשם ישירות אליסה, אליסה עקיף, כריך אליסה, ELISA תחרותי, ו הפוך אליסה. להלן, אנו מציגים בפניך סקירה על סוגי ELISA השונים והמאפיינים וההבדלים העיקריים שלהם.
ניתן להפעיל את ELISA בתבנית איכותית או כמותית. תוצאות איכותיות מספקות תוצאה חיובית או שלילית פשוטה, בעוד ב-ELISA הכמותית הצפיפות האופטית (OD) של המדגם מושווה לעקומה סטנדרטית, שהיא בדרך כלל דילול סדרתי של פתרון ריכוז ידוע של מולקולת היעד.

אליסה ישירה

ELISA הישיר הוא הצורה הפשוטה ביותר של אליסה, שבו רק נוגדן ראשי עם תווית אנזים משמש ונוגדנים משניים אינם נדרשים. הנוגדן הראשי המסומן באנזים נקשר ישירות למטרה, כלומר אנטיגן. פתרון האנטיגן המאגר מתווסף לכל באר של צלחת microtiter (בדרך כלל 96-גם צלחות, לוחות ELISA), שם דבק על פני השטח פלסטיק באמצעות אינטראקציות טעינה. כאשר האנזים המקושר לנוגדן הראשי מגיב עם ההתבססות שלו, הוא מייצר אות גלוי שניתן למדוד באמצעות ספקטרופוטומטר, פלואורומטר, או luminometer.

אליסה עקיף

עבור בדיקת ELISA עקיפה, נדרשים גם נוגדן ראשי וגם נוגדן משני. עם זאת, בניגוד ELISA ישיר, לא הנוגדן העיקרי, אבל הנוגדן המשני מתויג עם אנזים. האנטיגן משותק לצלחת הבאר ואוגד על ידי הנוגדן הראשי. לאחר מכן, הנוגדן המשני המסומן באנזים נקשר לנוגדן הראשי. לבסוף, האנזים המקושר לנוגדן המשני מגיב עם המצוע שלו כדי לייצר אות גלוי שניתן לזהותו.

כריך אליסה

בעוד בבדיקות ELISA ישירות ועקיפות, האנטיגן משותק ומצופה על פני השטח של צלחת הבאר, בכריך ELISA הנוגדן משותק על משטח הפלסטיק של צלחת ELISA. הנוגדנים המותקים בכריך ELISA ידועים בשם נוגדני לכידה. בנוסף לנוגדנים ללכוד, בכריך ELISA גם מה שנקרא נוגדני זיהוי נדרשים. נוגדני זיהוי כוללים נוגדן זיהוי ראשוני ללא תווית ונוגדן זיהוי משני עם תווית אנזים.
מבחינתו, האנטיגן של עניין נקשר לנוגדן הלכידה משותק לצלחת. לאחר מכן, נוגדן הגילוי העיקרי נקשר לאנטיגן. לאחר מכן, נוגדן הזיהוי המשני נקשר לנוגדן הזיהוי הראשי. בשלב התגובה הסופי, האנזים מגיב עם הצוללת שלו כדי לייצר אות גלוי שניתן לזהות אופטית.

אליסה תחרותית

ELISA תחרותי, המכונה גם עיכוב ELISA, הוא סוג ELISA המורכב ביותר כי זה כרוך בשימוש אנטיגן מעכב. כל אחד משלושת הפורמטים, ישיר, עקיף, כריך ELISA, ניתן להתאים לפורמט ELISA תחרותי. ב ELISA תחרותי, אנטיגן מעכב אנטיגן אנטיגן של עניין להתחרות על קשירה הנוגדן העיקרי.
עבור ELISA תחרותי, נוגדן ללא תיוג הוא דגירה בנוכחות האנטיגן שלה, כלומר מדגם. תסביכות נוגדנים/אנטיגן קשורים אלה מתווספים לאחר מכן לבאר מצופה אנטיגן.
הצלחת נשטפת, כך שנוגדנים לא מאוגדים מוסרים. ELISA תחרותי יש את שמו בשל העובדה כי אנטיגן יותר הוא בדגימה, יותר אנטיגן-נוגדנים מורכבים נוצרים. משמעות הדבר, ישנם פחות נוגדנים לא מאוגדים זמינים לאגד את האנטיגן בבאר ואת האנטיגנים חייבים להתחרות על נוגדן זמין. נוגדן משני, התווסף לנוגדן הראשי. הנוגדן השני הזה מקושר לאנזים. בעת הוספת המאכל, האנזימים הנותרים מייצרים אות כרומוגני או פלואורסצנטי.
בשלב זה, התגובה נעצרת כדי למנוע את הרוויה הסופית של האות.
כמה ערכות ELISA תחרותיות כוללות אנטיגן המקושר לאנזים במקום נוגדן המקושר לאנזים. האנטיגן המסומן מתחרה על אתרי איגוד נוגדנים ראשיים עם האנטיגן לדוגמה (ללא תווית). ככל שפחות אנטיגן בדגימה, כך האנטיגן מתויג יותר בבאר, כך האות חזק יותר.

הפוך אליסה

הפוך ELISA אינו משתמש צלחות היטב, אבל משאיר את האנטיגן תלוי בנוזל הבדיקה. בדיקת ELISA ההפוכה מודדת את כמות הנוגדנים הכבולים באמצעות אנטיגן. הוא פותח במיוחד כדי לזהות ולחקור את חלבון מעטפת וירוס הנילוס המערבי ואיך הוא מסוגל למצוא נוגדנים ספציפיים לווירוס.

סמן אנזימטי המשמש עבור ELISA

הרשימה שלהלן נותנת את סמנים אנזימטיים הנפוצים ביותר בשימוש ב- ELISA assays, המאפשרים את תוצאות ההסכמה להימדד עם השלמת.

  • OPD (o-phenylenediamine dihydrochloride) הופך ענבר כדי לזהות HRP (חזרת Peroxidase), אשר משמש לעתים קרובות כחלבון התווך.
  • TMB (3,3)′,5,5′-tetramethylbenzidine) הופך לכחול בעת זיהוי HRP והופך צהוב לאחר תוספת של חומצה גופרתית או זרחנית.
  • ABTS (2,2′-אזינוביס [3-אתילבזותיאזולין-6-חומצה סולפונית]-מלח דיאמוניום) הופך ירוק בעת גילוי HRP.
  • PNPP (p-Nitrophenyl פוספט, מלח דיסודיום) הופך צהוב בעת זיהוי פוספטאז אלקליין.