ליזה אולטראסוניות של דגימות מלנוגסטר Drosophila

Drosophila מלנוגאסטר נמצא בשימוש נרחב במעבדות כאורגניזם מודל. לכן, צעדי הכנה טרום אנליטיים כגון תמוגה, הפרעה לתאים, מיצוי חלבון וגזירה DNA של דגימות מלנוגאסטר Drosophila חייב להתבצע לעתים קרובות. מחזרים אולטרה סאונד הם אמינים ויעילים והוא יכול לשמש לביצוע משימות שונות כגון תמוגה, מיצוי חלבון או פיצול DNA בנוחות רק על ידי התאמת פרמטרי תהליך קולי. homogenizers אולטרה סאונד הם ובכך כלים גמישים עם מגוון רחב של יישומים.

ליסיס אולטראסוניות ומיצוי חלבון

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.ליסיס, solubilization התא, הומוגניזציה רקמות וחילוץ חלבון הם משימות אופייניות עבור dismembrators אולטראסוניות במעבדות ביולוגיות. משבשי תאים אולטראסוניות מתאימים היטב להומוגניזציה של רקמות בעלי חיים, חרקים (למשל, מלנוגסטר דרוזופילה, C. elegans) או דגימות צמחים. יישומים הבאים של ultrasonication הם הפירוק של השעיות תאים וכדורים, כמו גם החילוץ של חלבונים תאיים.
ליסיס אולטראסוניות וחילוץ חלבון הם תהליכים אמינים מאוד לשחזור, אשר יכול לבצע על בסיס פרוטוקולים מבוססים. מאז עוצמת תהליך אולטראסוניות ניתן לכוונן בדיוק באמצעות פרמטרים sonication כגון משרעת, מחזור / מצב דופק, טמפרטורה ונפח מדגם, פעם פרוטוקולים מוכחים ניתן לחזור על עצמם עם אותה תוצאה שוב ושוב.

היתרונות של הכנת מדגם אולטראסוניות

  • היעיל ביותר
  • מתכוונן לחומר לדוגמה ספציפי
  • מתאים לכל אמצעי אחסון
  • טיפול לא תרמי
  • תוצאות לשחזור
  • פשוט ובטוח

DNA אולטראסוניות ופיצול RNA

לאחר תמוגה של תאים ומיצוי חלבונים, צעד נדרש נפוץ בהכנת מדגם הוא גזירה ופיצול של DNA, RNA וכרומטין, למשל לפני חיסוניות כרומטין (ChIP). פיצול DNA ו- RNA יכול להיות מושגת באופן אמין על ידי שבירת הקשרים covalent המחזיקים את ה- DNA יחד על ידי כוחות פיזיים. באמצעות גזירה פיזית כגון sonication, בהתחלה גדילי ה-DNA שבורים, אז ה-DNA מקוטע לחתיכות קטנות יותר.
פיצול DNA אולטראסוניות הוא אמין ויעיל בגייה DNA לאורך ממוקד, למשל 500bp (זוגות בסיס). היתרונות העיקריים של פיצול DNA אולטראסוניות כוללים את השליטה המדויקת של הפרמטרים תהליך אולטראסוניות ועוצמה. הפרמטרים תהליך אולטראסוניות ניתן להתאים על ידי כוונון עוצמת sonication, מחזורים וזמן בדיוק. זה מאפשר ליצור גדלי DNA הרצויים ואת אורך ה-DNA ממוקד יכול להיות מיוצר באופן אמין, כמו גם לשכפל. גיעת DNA אולטראסוניות היא גם אידיאלית ליצור שברי DNA במשקל מולקולרי גבוה.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

ultrasonicator Uf200 ः t עם 2mm מיקרוטיפ S26d2 עבור sonication של דגימות דרוזופילה

בקשת מידע





פרוטוקולים עבור Lysis אולטראסוניות של מלנוגסטר Drosophila

להלן ניתן למצוא פרוטוקולים שונים עבור פירוק בסיוע ultrasonically, חילוץ חלבון, ו- DNA או שבר כרומטין של דגימות Drosophila.

ליסיס אולטראסוניות עבור הצלבת פירוק חיסוני (קליפ) אסיי

CLIP assay was performed as previously reported with some modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were UV crosslinked (3 × 2000 μJ/cm2), homogenized on ice in 1 mL RCB buffer (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 2.5 mM MgCl2, 0.1% Triton X-100, 250 mM sucrose, 1 mM DTT, 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors, 1 mM PMSF) supplemented with 300 U RNAseOUT and placed on ice for 30 min. The homogenate was sonicated on ice, at 80% power, five times in 20 s bursts with a 60 s rest in between using the Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 ואט, 30 kHz) וצנטריפוגות (16000 × ל-5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס). תמצית מסיסה היה precleared עם 20 μl חלבון-G dynabeads במשך 20 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. לאחר הסרת דגימות עבור immunoblotting וכמות של קלט RNA (1%), HP1 היה immunoprecitated עם נוגדן נגד HP1 9A9 מ תמצית precleared μl μl על ידי דגירה במשך 4 שעות עם 50 μl חלבון-G dynabeads. אימונו-פוליסיפיאטים נשטפו 4 פעמים עם אר.סי.בי. כדי לחתור את RNAs immunoprecipitated, חרוזים כדוריים התבשלו 100 μL של UltraPure DEPC שטופלו מים במשך 5 דקות. 900 μL Qiazol ריאגנט נוספה supernatant התאושש הכנה RNA. RNA מטוהר שימש כתבנית לסנתז cDNA באמצעות oligo dT, hexamers אקראי ו SuperScript תמלול הפוך III על פי פרוטוקול היצרן.
(קאסל ואח', 2019)

ליסיס אולטראסוניות עבור כרומטין immunoprecipitation אסיי

כרומטין immunoprecipitation בוצע על פי השיטה המתוארת על ידי Menet עם שינויים קלים. כ 20 מ"ג השחלות מ 0- עד 1 יום אחד נקבות מסוג פראי היו הומוגניים ב 1 מ"ל של מאגר NEB (10 מ"מ HEPES-Na ב pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.1 מ"מ EGTA-Na ב pH 8, 0.5 מ"מ EDTA-Na ב pH 8, 1 mM DTT, 0.5% NP-40, 0.5 מ"מ Spermidine, 0.15 mM זרע, 1× EDTA- ללא מעכבי פרוטאז מלאים) עם מפזר הומוגניזר / טבילה 1 דקה (ב 3000 סל"ד). ההומוג'ן הועבר לדון זכוכית מצונן מראש ו -15 משיכות מלאות הוחלו עם עלה הדוק. גרעינים חינם היו אז צנטריפוגה ב 6000xg במשך 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. כדורי המכילים גרעינים היו בשימוש חוזר ב 1 מ"ל של NEB וצנטריפוגות ב 20000 × גרם במשך 20 דקות על שיפוע סוכרוז (0.65 מ"ל של 1.6 M סוכרוז ב NEB, 0.35 מ"ל של 0.8 M סוכרוז ב NEB). גלולה היה resuspended ב 1 מ"ל של NEB ופורמלדהיד לריכוז הסופי של 1%. גרעינים היו מקושרים במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר ומרווה על ידי הוספת 1/10 vol של 1.375 M גליצין. הגרעינים נאספו על ידי צנטריפוגה ב 6000 × גרם במשך 5 דקות. גרעינים נשטפו פעמיים ב 1 מ"ל של NEB ו resuspended ב 1 מ"ל של מאגר תמוגה (15 מ"מ HEPES-Na ב pH 7.6, 140 mM NaCl, 0.5 mM EGTA, 1 mM EDTA ב- pH 8, 1% טריטון X-100, 0.5 mM DTT, 0.1% Na Deoxycholate, 0.1% SDS, 0.5% N-lauroylsarcosine ו 1× מעכבי פרוטאז מלאים ללא EDTA). גרעינים היו sonicated באמצעות מעבד אולטראסאונד Hielscher UP100H (100 ואט, 30 kHz) שש פעמים ב-20 שניות ו-1 דקות על קרח. גרעין Sonicated היו צנטריפוגות ב 13000 × במשך 4 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. רוב הכרומטין sonicated היה 500 כדי 1000 זוגות בסיס (bp) אורך. עבור כל ערך חיסוני, 15 μg של כרומטין היה דגירה בנוכחות 10 μg של נוגדן מונוקלונלי HP1 9A9 (3 שעות ב 4 מעלות צלזיוס בגלגל מסתובב). לאחר מכן, 50 μl של חלבון dynabeads G נוספה הדגירה נמשכה בן לילה ב 4 מעלות צלזיוס. הסופרנטנטים הושלכו והדגימות נשטפו פעמיים במאגר Lysis (כל שטיפה ב-4°C) ופעמיים במאגר TE (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl ב- pH 8). כרומטין הודף מחרוזים בשני שלבים; הראשון ב 100 μl של מאגר Eluition 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl ב pH 8) ב 65 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות, ואחריו צנטריפוגציה והתאוששות של supernatant. חומר חרוזים חולץ מחדש ב 100 μl של TE + 0.67% SDS. ההתלהבות המשולבת (200 μl) היה דגירה בן לילה ב 65 מעלות צלזיוס כדי להפוך קישורים צולבים וטופל על ידי 50 μg/ml RNaseA במשך 15 דקות ב 65 מעלות צלזיוס ועל ידי 500 μg/ml Proteinase K עבור 3 שעות ב 65 מעלות צלזיוס. הדגימות חולצו על פנול-כלורופורם ואתנול. הדנ"א נערך מחדש ב-25 μl של מים. למקסום ניתוחים מולקולריים עם DNA immunoprecipitated, גנים מועמדים היו מוגברים בזוגות באמצעות פרוטוקול דופלקס-PCR אופטימיזציה באמצעות שתי קבוצות שונות של פריימרים שיש טמפרטורות התכה דומות בתגובה אחת.
(Casale ואח ' 2019)

UP200st TD_CupHorn עבור sonication עקיף של דגימות

UP200המקומות TD_CupHorn עבור sonication עקיף של דגימות כגון DNA וגיה כרומטין

משבשים תאים אולטרה סאונד ביצועים גבוהים עבור דגימות ביולוגיות

Hielscher אולטרסוניקה הוא השותף שלך מנוסה זמן רב כשמדובר ultrasonicators ביצועים גבוהים עבור הפרעה לתא, פירוק, חלבון מיצוי, DNA, RNA, ו שבריר כרומטין, כמו גם שלבים אחרים הכנת מדגם טרום אנליטי. מציע תיק מקיף של homogenizers מעבדה אולטראסוניות ויחידות הכנה לדוגמה, Hielscher יש את המכשיר אולטראסוניות האידיאלי עבור היישום הביולוגי שלך ודרישות.
Probe-סוג insonifier UP200St עבור תמסקלאסי בדיקה-סוג ultrasonicator עם מיקרו-קצה כגון בית Seating (200W; ראה תמונה שמאל) או אחת מיחידות ההכנה מדגם אולטראסוניות VialTweeter אוֹ UP200ST_TD_CupHorn עם VialHolder הם מודלים מועדפים במעבדות מחקר ואנליטיות. בדיקה קולית קלאסית היא אידיאלית, כאשר להכין פחות דגימות חייב להיות lysed, חילוץ או מפוצל. יחידות הכנה מדגם VialTweeter ו UP200St_TD_CupHorn לאפשר sonication בו זמנית של עד 10 או 5 בקבוקונים, בהתאמה.
אם יש לעבד מספרים לדוגמה גבוהה (לדוגמה, לוחות 96 בארות, לוחות מיקרוטיטר וכו') UIP400MTP הוא ההתקנה sonication האידיאלי. UIP400MTP מתפקד כמו cuphorn גדול יותר, אשר מלא במים ויש לו מספיק מקום כדי להכיל צלחות מיקרו באר. מופעל על ידי מעבד אולטראסוניות רב עוצמה 400 וואט, UIP400MTP מספק sonication אחיד מאוד אינטנסיבי של צלחות רב גם על מנת לשבש תאים, דגימות lyse, כדורי solubilize, לחלץ חלבונים או לגה DNA.

שליטה מדויקת באמצעות תוכנה חכמה

המעבדים התעשייתיים של Hielscher בסדרת ה- HDT יכולים להיות נוחים וידידותיים למשתמש, המופעלים באמצעות שלט רחוק בדפדפן.כל פתרונות ה-Hielscher sonication מ- 200 וואט כלפי מעלה מצוידים במסך מגע צבעוני דיגיטלי ותוכנה חכמה. באמצעות פרוטוקול נתונים חכמים כל הפרמטרים תהליך אולטראסוניות נשמרים באופן אוטומטי כקובץ CSV על כרטיס SD מובנה ברגע ultrasonicator מופעל. זה הופך את המחקר והפרוטוקולים להרבה יותר נוחים. לאחר ניסויי sonication או הכנה לדוגמה, אתה יכול פשוט לסקור את הפרמטרים sonication של כל sonication לרוץ ולהשוות אותם.
באמצעות התפריט האינטואיטיבי, ניתן לקבוע פרמטרים רבים מראש לפני sonication: למשל, כדי לשלוט על הטמפרטורה במדגם ולמנוע השפלה תרמית שלה, גבול עליון של טמפרטורת המדגם ניתן להגדיר. חיישן טמפרטורה pluggable, אשר מגיע עם היחידה הקולית, נותן משוב מעבד קולי על טמפרטורת sonication בפועל. כאשר מגבלת הטמפרטורה העליונה הוא הגיע, המכשיר הקולי מושהה עד הגבול התחתון של ∆T להגדיר הוא הגיע ומתחיל ואז sonicating באופן אוטומטי שוב.
אם sonication עם קלט אנרגיה ספציפי נדרש, אתה יכול להקדים את האנרגיה אולטראסוניות הסופי של הריצה sonication. כמובן, פועם אולטראסוניות ו מצב מחזור יכול להיות מוגדר בנפרד, מדי.
כדי להשתמש מחדש בפרמטרים sonication המוצלחים ביותר שלך, אתה יכול לשמור מצבי sonication שונים (למשל זמן sonication, עוצמה, מצב מחזור וכו ') כמו מצבים מוגדרים מראש, כך שהם יכולים להיות קלים והתחלו שוב במהירות.
לנוחות מבצעית יותר, כל יחידות אולטרה סאונד דיגיטלי ניתן להפעיל באמצעות שלט רחוק דפדפן בכל דפדפן משותף (למשל, InternetExplorer, ספארי, כרום וכו '). חיבור LAN הוא הגדרת הכנס-הפעל פשוטה ולא דורש התקנת תוכנה נוספת.
אנחנו בHielscher יודע כי sonication מוצלח של דגימות ביולוגיות דורש דיוק ויכולת חזרה. לכן, עיצבנו ultrasonicators שלנו כמו מכשירים חכמים עם כל התכונות המאפשרות יעיל, אמין, לשחזור והכנה לדוגמה נוחה.

צור קשר עכשיו ולספר לנו על הדגימות הביולוגיות שלך ועל צעדי ההכנה הנדרשים. אנו נציע לך את מכשיר הכנת מדגם אולטראסוניות המתאים ביותר ולסייע לך עם מידע נוסף כגון פרוטוקולים והמלצות.

הטבלה הבאה נותנת לך אינדיקציה של יכולת העיבוד המשוערת של המערכות הקוליות שלנו ממיקרו טיפים קוליים homogenizers קולי קלאסי כדי ultrasonicators MultiSample להכנה נוחה ואמינה של דגימות רבות:

נפח תצווה קצב זרימה התקנים מומלצים
96-באר / צלחות microtiter N.A. UIP400MTP
10 בקבוקונים à 0.5 עד 1.5 מ"ל N.A. VialTweeter ב UP200St
CupHorn עבור sonication עקיף, למשל עד 5 בקבוקונים N.A. UP200ST_TD_CupHorn
0.01 עד 250 מ"ל 5 עד 100 מ"ל/דקה UP50H
00.01 עד 500 מ"ל 10 עד 200mL / min מעלהay
0.02 ל-1L 20 עד 400mL / min Uf200 ः t / בית Seating
10 עד 2000mL 20 עד 400mL / min Uf200 ः t, UP400St
0.25 עד 5L 0.05 עד 1L/min UIP500hdT

תיצור איתנו קשר! / שאל אותנו!

בקש מידע נוסף

אנא השתמש בטופס שלהלן כדי לבקש מידע נוסף אודות מעבדים אולטרה סאונד, יישומים ומחיר. נשמח לדון בתהליך שלך איתך ולהציע לך מערכת אולטרה סאונד לפגישה הדרישות שלך!









הינכם מתבקשים לשים לב מדיניות פרטיות.


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

יחידת הכנה מרובת מדגם אולטראסוניות VialTweeter מאפשר sonication בו זמנית של עד 10 בקבוקונים. עם מכשיר הידוק VialPress, עד 4 צינורות נוספים ניתן ללחוץ לחזית עבור sonication אינטנסיבי.

ספרות/הפניות



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

אולטרסוניקה ביצועים גבוהים! מגוון המוצרים של Hielscher מכסה את הספקטרום המלא מן ultrasonicator מעבדה קומפקטית על ספסל העליון יחידות למערכות אולטראסוניות תעשייתי מלא.


עובדות שראוי לדעת

מטבולומיקה (מטבולומיה)

Metabolomics הוא מחקר של מולקולות קטנות, המכונה מטבוליטים, נוכח בתוך תאים, biofluids, רקמות או אורגניזמים. מולקולות קטנות אלה ואת האינטראקציות שלהם בתוך מערכת ביולוגית מסוכמים תחת המונח מטריה "מטבוליזם" ואת שדה המחקר נקרא metabolomics. מחקר חילוף החומרים קשור קשר הדוק עם השדה המתפתח במהירות של רפואה מדויקת. ההבנה של המטבולום והקשר שלו למחלות שונות מסייעת לפתח אסטרטגיות למניעת מחלות וטיפול קליני תוך שונות אישית בסביבה, באורח החיים, בגנטיקה ובפנוטיפ מולקולרי. על מנת לשחרר מולקולות מטבוליט מתאים, ultrasonication משמש לעתים קרובות במעבדות ביולוגיות להכנת מדגם טרום אנליטי כגון הפרעה לתאים, תמוגה והפקת חלבונים, שומנים ומולקולות אחרות.