ליזה קולית של E. Coli
- חיידקי E. coli הם החיידקים הנפוצים ביותר במיקרוביולוגיה ובביוטכנולוגיה.
- משבשי תאים על-קוליים מספקים תוצאות אמינות וניתנות לשחזור עבור ליזה של E. coli.
- כוחות קוויטציה וגזירה אינטנסיביים אך ניתנים לשליטה מדויקת גורמים לשיבוש מוחלט ולתפוקות מיצוי גבוהות (למשל חלבונים, דנ"א).
מדוע הפרעה בתאים אולטראסוניים של E. coli היא השיטה המועדפת?
הומוגנייזרים קוליים או אולטרסאונד מסוג בדיקה מציעים מספר יתרונות עבור E. coli lysis כמו אולטרסאונד אינטנסיבי ביעילות משבש את קירות התא ואת הממברנות. אולטרסאונד מסוג בדיקה נמצא בשימוש נרחב עבור E. coli lysis בשל הסיבות הבאות:
מיצוי חלבון מתאי E.coli מתבצע ביעילות עם בדיקה קולית UP200St
אולטרסאונד מסוג בדיקה מציע יתרונות רבים עבור E. coli lysis. הבקרה האמינה והמדויקת על פרמטרים של תהליך קולי מאפשרת לייעל את פרמטרי ההפעלה כגון כוח, משך זמן וטיפול בדגימה כדי להשיג את התוצאות הרצויות.
ניתוחים אלקטרופורטיים של DNA גנומי של E. coli EDL933 נתון 0 – 15 דקות ultrasonication. L מציין את סולם הדנ"א.
(מחקר ותמונה: ©Basselet et al. 2008)
הפרעה בתאים באמצעות קביטציה קולית
הומוגנייזרים מסוג בדיקה על-קולית פועלים עם כ-20,000 מחזורים בשנייה (ב-20kHz) וגורמים לקוויטציה בנוזלים או תרחיפים. קוויטציה אקוסטית אזורים מיקרוסקופיים של לחצים דמויי ואקום וטמפרטורות גבוהות שקורעות תאים לגזרים. למרות שהטמפרטורות עשויות להגיע לכמה אלפי מעלות צלזיוס, נפחי הקוויטציה קטנים כל כך שהם אינם מחממים את התהליך באופן משמעותי. אולטרסאונד שנוצר קוויטציה אקוסטית וכוחות גזירה מנקבים או שוברים את קרום התא של תאי חיידקים כגון E.coli. Hielscher ultrasonicators מאפשרים שליטה מדויקת על פרמטרים תהליך כגון עוצמה קולית, משרעת, קלט אנרגיה, וטמפרטורה. בכך, ניתן להתאים את תהליך הליזה העל-קולית באופן אופטימלי לסוג התא, תרבית התאים ומטרת התהליך.
- שליטה מדויקת בליזיס (עוצמה, משרעת, טמפרטורה)
- תוצאות אמינות וניתנות לשחזור
- התאמה אופטימלית לדגימות ספציפיות
- בקרת טמפרטורה
- עבור דגימות קטנות מאוד עד גדולות מאוד (μL עד ליטר)
- טיפול מכני גרידא
- תפעול ידידותי למשתמש ובטוח
- סקייל-אפ ליניארי ממעבדה לייצור
VialTweeter עבור ליזה קולית
הומוגנייזר קולי לעומת טכניקות ליזה אחרות
בעוד ליזה כימית ואנזימטית יכולה להיות בעייתית – מכיוון שליזה כימית יכולה לשנות מבנים חלבוניים ולגרום לבעיות טיהור וליזה אנזימטית דורשת זמני דגירה ארוכים ואינה ניתנת לשכפול – הפרעה קולית היא שיטה מתוחכמת ומהירה לשיבוש תאים.
ליזה קולית מבוססת על כוחות מכניים בלבד. לא מוסיפים כימיקלים, סוניקציה שוברת את דופן התא על ידי כוחות גזירה. ליזה כימית יכולה לשנות את מבנה החלבון ולהציג בעיות טיהור. הפרעה אנזימטית דורשת זמני דגירה ארוכים ואינה ניתנת לשחזור. שיבוש תאים אולטראסוניים של תאי חיידקי E.coli הוא מהיר, פשוט, אמין וניתן לשחזור. לכן אולטרסאונד Hielscher משמשים במעבדות ביולוגיות וביוכימיות ברחבי העולם להכנת דגימה, pre-ananlytics, diagonstics במבחנה ובדיקות סעפת.
המלצות כלליות לליזה קולית
סוניקציה היא הטכניקה הפופולרית ביותר להנחת כמויות קטנות מאוד, בינוניות וגדולות של מתלי תאים – מפיקו-ליטר עד 100 ליטר/שעה (באמצעות תא זרימה על-קולי). תאים הם lysed על ידי גזירה נוזלית cavitation. DNA הוא גם גזוז במהלך סוניקציה, ולכן אין צורך להוסיף DNase להשעיית התא.
בקרת טמפרטורה במהלך קולי קולי ליזיס קולי
על ידי קירור מקדים של הדגימה ושמירת הדגימה במהלך סוניקציה על קרח, ניתן למנוע בקלות את השפלת הדגימה התרמית של הדגימה.
באופן אידיאלי, דגימות צריך להישמר קר כקרח במהלך ליזיס, אבל עבור רוב הדגימות זה מספיק אם הטמפרטורה אינה עולה מעל הטמפרטורה של תרבית או מקור רקמות. לכן מומלץ, לשמור את המתלה על קרח ולבצע סוניקציה עם מספר פולסים אולטראסוניים קצרים של 5-10 שניות והפסקות של 10-30 שניות. במהלך ההפוגות החום יכול להתפזר על מנת ליצור מחדש טמפרטורה נמוכה. עבור דגימות תאים גדולות יותר, כורי תאי זרימה שונים עם מעילי קירור זמינים.
קראו כאן טיפים מפורטים והמלצות לליזה אולטראסונית מוצלחת!
פרוטוקולים להכנת קולי של E. coli lysates
חוקרים משתמשים הומוגנייזרים קוליים Hielscher עבור הפרעה בתאי E.coli. להלן תוכל למצוא פרוטוקולים שונים שנבדקו והוכחו עבור E.coli lysis באמצעות Hielscher קולי homogenizers עבור יישומים שונים הקשורים E. coli.
גדילת תאים, הצלבה והכנה של תמציות תאי E. coli באמצעות אולטרסאונד
עבור SeqA ו-RNA פולימראז ChIP-Chip E. coli MG1655 או MG1655 ΔseqA גודל ב-37°C ל-OD600 של כ 0.15 ב 50 מ"ל LB (+ 0.2% גלוקוז) לפני 27 μl של פורמלדהיד (37%) לכל מדיום מ"ל נוספו (ריכוז סופי 1%). הקרוסלינקינג בוצע בטלטול איטי (100 סל"ד) בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות ולאחר מכן מרווה עם 10 מ"ל גליצין 2.5 מ' (ריכוז סופי 0.5 מ'). עבור ניסויים בהלם חום, E. coli MG1655 גודל ב-65 מ"ל ליברות בינוניות ב-30°C ל-OD600 של כ-0.3. לאחר מכן 30 מ"ל תרבית הועברו לבקבוק שחומם מראש ב-43 מעלות צלזיוס והשאר נשמר ב-30 מעלות צלזיוס. הצלבה ומרווה היו כמתואר לעיל, פרט לכך שהתאים נשמרו בטמפרטורה של 30 או 43 מעלות צלזיוס במשך 5 דקות לפני רעידות איטיות נוספות בטמפרטורת החדר. התאים נאספו בצנטריפוגה ונשטפו פעמיים ב-TBS קר (pH7.5). לאחר השעיה במאגר ליזה של 1 מ"ל (10 mM Tris (pH 8.0), 20% סוכרוז, 50 mM NaCl, 10 mM EDTA, 10 מ"ג/מ"ל ליזואנזים) ודגירה ב-37°C למשך 30 דקות ולאחר מכן תוספת של 4 מ"ל חיץ IP, התאים הופעלו על קרח עם הפסקות של 12 פעמים 30 שניות ו-30 שניות באמצעות המעבד האולטרסוני UP400St של Hielscher בהגדרת הספק של 100%. לאחר צנטריפוגה במשך 10 דקות ב 9000 גרם, 800 μl aliquotes של supernatant אוחסנו ב -20 מעלות צלזיוס. (Waldminghaus 2010)
ייצור יתר וטיהור אנזימים עם בדיקה קולית
עבור ייצור יתר של חלבונים מתויגים דקהיסטידין (His10), E. coli BL21(DE3) השתנה עם מבני pET19b. קדם-תרבות לילה נקטפה על ידי צנטריפוגה, ו-1% שימשו לחיסון תרבות ביטוי. תאים שנשאו pET19mgtB גודלו ב-22°C עד לצפיפות אופטית של 600 ננומטר (OD600) של 0.7. התרבית הועברה לטמפרטורה של 17°C והושרה על ידי IPTG של 100 מיקרומטר. לאחר 16 שעות, התרבית נקטפה באמצעות צנטריפוגה בטמפרטורה של 7,500 × גרם ב-4 מעלות צלזיוס. התאים הושעו מחדש במי מלח חוצצי פוספט של 50 מילימטר (PBS) עם 0.3 M NaCl ב- pH 7.4 והופרעו על ידי אולטרסוניקציה עם סונוטרודה S2 micro-tip באולטרסאונד Hielscher UP200St במחזור של 0.5 ומשרעת של 75%.
ייצור יתר של GtfC המתויג על ידי דקהיסטידין נגרם בטמפרטורה של 37°C ב-OD600 של 0.6 עם 100 מיקרומטר IPTG. לאחר מכן הודגרו התאים במשך 4 שעות, נקטפו, ועברו ליזה כאמור לעיל עבור MgtB.
תמציות תאים גולמיים עברו צנטריפוגות בטמפרטורה של 15,000 × גרם ו-4 מעלות צלזיוס כדי לשקוע בפסולת התא. התמציות המזוקקות הועמסו על עמודי HisTrap FF Crude בנפח 1 מ"ל באמצעות מערכת ÄKTAprime Plus. האנזימים טוהרו על פי פרוטוקול היצרן לפליטה הדרגתית של חלבונים מתויגים His. תמיסות חלבון אלוטות חווינו פעמיים כנגד 1,000 נפחים של 50 מילימטר PBS, pH 7.4, עם 0.3 M NaCl ב-4 מעלות צלזיוס. הטיהור נותח על ידי 12% SDS-PAGE. ריכוז החלבון נקבע בשיטת ברדפורד באמצעות Roti-Quant. (Rabausch et al. 2013)
מיצוי אולטראסוני של חלבון מחיידקי E. coli
חלבון פיתיון מעניין (במקרה זה, MTV1 של Arabidopsis thaliana) מאוחה לתג GST ומתבטא בתאי BL21 Escherichia coli (E. coli).
- קח גלולה אחת של GST-MTV1 ו- GST (המקבילה לתרבית חיידקים של 50 מ"ל) והשהה מחדש כל אחד במאגר מיצוי קר כקרח של 2.5 מ"ל.
- השתמש ב- Ultrasonicator UP100H (מצויד במיקרוטיפ-סונוטרודה MS3 עבור נפחים קטנים של כ- 2-5 מ"ל) כדי לשבש את תאי החיידקים עד שהם עוברים ליזה, דבר המסומן על ידי אטימות מופחתת וצמיגות מוגברת. זה צריך להתבצע על קרח, ומומלץ לבצע סוניקציה במרווחים (למשל 10 שניות סוניקציה ואחריה הפסקה של 10 שניות על קרח וכן הלאה). יש להקפיד לא להסוניק בעוצמה גבוהה מדי. אם מקציף או היווצרות של משקע לבן מזוהה, העוצמה צריכה להיות מופחתת.
- העבירו את תמיסת החיידקים ל-1.5 מ"ל מיקרוצנטריפוגות וצנטריפוגות בטמפרטורה של 4°C, 16,000 x g למשך 20 דקות.
אולטרסאונד מסוג בדיקה כגון UP400St השתמש בעקרון העבודה של קוויטציה אקוסטית עבור ליזה יעילה של E.coli.
ניתוח ביטוי וטיהור חלבון רקומביננטי באמצעות סוניקציה
גלולת E. coli סוניקה עם Ultrasonicator Hielscher UP100H. למטרה זו, גלולת התא הושעתה מחדש בחיץ ליזה צונן (50 mM Tris-HCl pH = 7.5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) והתקררה על קרח למשך 10 דקות. לאחר מכן, מתלה התא הושמע עם 10 התפרצויות קצרות של 10 שניות ואחריו מרווח של 30 שניות לקירור. לבסוף, פסולת התאים הוסרה על ידי אולטרה-צנטריפוגה ב-4°C למשך 15 דקות ב-14,000 סל"ד. לאישור ביטוי rPR, הסופרנאטנט הופעל על ג'ל פוליאקרילאמיד 12% ונותח על ידי SDS-PAGE ו-Western blotting. טיהור rPR נעשה באמצעות שרף Ni2+-NTA (Invitrogen, ארה"ב) על פי מדריך היצרן. בשלב זה נעשה שימוש בשיטת טיהור טבעית. טוהר החלבון המטוהר הוערך באמצעות אלקטרופורזה על ג'ל פוליאקרילאמיד 12% ולאחר מכן כתמים כחולים קומאסי. ריכוז החלבון המטוהר נמדד על ידי ערכת בדיקת חלבון Micro BCA (PIERCE, ארה"ב). (Azarnezhad et al. 2016)
הומוגנייזרים קוליים עבור E. coli Lysis
Hielscher Ultrasonics מתכננת, מייצרת ומספקת הומוגנייזרים קוליים בעלי ביצועים גבוהים עבור ליזה אמינה ויעילה של חיידקי E. coli וסוגי תאים אחרים, רקמות ותרביות תאים.
הפורטפוליו הרחב של בדיקות קוליות, כמו גם מערכות סוניקציה עקיפה, מאפשר לנו להציע לך את ההומוגנייזר האידיאלי לרקמות על-קוליות עבור יישום שיבוש וחילוץ התאים שלך.
תכנון, ייצור וייעוץ – איכות תוצרת גרמניה
Hielscher ultrasonicators ידועים באיכות הגבוהה ביותר שלהם סטנדרטים עיצוב. תוכנה חכמה, תפריט אינטואיטיבי, הגדרות ניתנות לתכנות ופרוטוקול נתונים אוטומטי הם רק כמה תכונות של Hielscher ultrasonicators. החוסן והתפעול הקל מאפשרים שילוב חלק של האולטרסאונד שלנו במתקני מחקר וביוטכנולוגיה. אפילו תנאים קשים וסביבות תובעניות מטופלים בקלות על ידי אולטרסאונד Hielscher.
Hielscher Ultrasonics היא חברה מוסמכת ISO לשים דגש מיוחד על ultrasonicators ביצועים גבוהים שמציעות טכנולוגיה חדישה וידידותיות למשתמש. כמובן, Hielscher ultrasonicators הם תואמי CE ולעמוד בדרישות של UL, CSA ו RoHs.
הטבלה הבאה נותנת לך אינדיקציה ליכולת העיבוד המשוערת של האולטרסאונד שלנו:
| נפח אצווה | קצב זרימה | מכשירים מומלצים |
|---|---|---|
| צלחות מרובות באר / מיקרוטיטר | נ.א. | UIP400MTP |
| CupHorn עבור בקבוקונים או | נ.א. | כוסית אולטראסונית |
| כור מיקרו-זרימה על-קולי | נ.א. | GDmini2 |
| עד 10 בקבוקונים עם 0.5 עד 1.5 מ"ל | נ.א. | VialTweeter |
| 00.5 עד 1.5 מ"ל | נ.א. | VialTweeter |
| 1 עד 500 מ"ל | 10 עד 200 מ"ל/דקה | UP100H |
| 10 עד 2000 מ"ל | 20 עד 400 מ"ל/דקה | UP200Ht, UP400ST |
| 00.1 עד 20 ליטר | 00.2 עד 4L/דקה | UIP2000hdT |
| 10 עד 100 ליטר | 2 עד 10 ליטר/דקה | UIP4000 |
| נ.א. | 10 עד 100 ליטר/דקה | UIP16000 |
| נ.א. | גדול | אשכול של UIP16000 |
צרו קשר! / שאל אותנו!
פרוטוקולים נוספים עבור E. coli Lysis קולי קולי
חלבונים מהונדסים אליצין ב- E. coli באמצעות VialTweeter על-קולי
קביעת תכולת סולפידריל על ידי 5,5′-Dithiobis (2-nitrobenzoic acid) (DTNB) Assay
תרבית לילה E. coli MG1655 שימשה לחיסון MOPS בינוני מינימלי (1:100). התרבית גודלה באופן אירובי עד שהגיע ל-A600 של 0.4. התרבית פוצלה לשלוש תרביות של 15 מ"ל לטיפול בסטרס. תרבות לא מטופלת שימשה כשליטה שלילית. אליצין 0.79 מילימטר (128 מיקרוגרם מ"ל-1) או קוטר 1 מילימטר נוסף לאחת משתי התרביות הנותרות כל אחת. התרביות הודגרו במשך 15 דקות. 5 מ"ל מכל תרבית נקטפו באמצעות צנטריפוגה (8,525 × גרם, 4 מעלות צלזיוס, 10 דקות). התאים נשטפו פעמיים עם 1 מ"ל PBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7.4, שאוחסנו באופן אנאירובי לפני השימוש) וצנטריפוגות (13,000 × גרם, 4°C, 10 דקות). התאים הושעו מחדש בחיץ ליזה (PBS עם 6 mM guanidinium HCl, pH 7.4) לפני הפרעה ב 4 מעלות צלזיוס על ידי ultrasonication (VialTweeter ultrasonicator, Hielscher GmbH, גרמניה) (3 × 1 דקות). פסולת התא הוטלה על ידי צנטריפוגה (13,000 × גרם, 4 מעלות צלזיוס, 15 דקות). הסופרנאטנט הועבר לקובט QS-מאקרו בנפח 3.5 מ"ל (10 מ"מ) עם מוט ערבוב מגנטי וערבב עם 1 מ"ל של חיץ ליזיס. הכחדת הדגימות נוטרה במהירות של 412 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר Jasco V-650 המצויד במחזיק התא מבוקר הטמפרטורה PSC-718 בטמפרטורת החדר. 100μl של 3 mM dithiobis (2-nitrobenzoic חומצה) פתרון נוספו. ההכחדה נוטרה עד שהגיעה לרוויה. חישוב ריכוז התיול בוצע באמצעות מקדם ההכחדה ε412 = 13,700 מטר-1 ס מ-1 עבור חומצה thio-2-nitrobenzoic (TNB). ריכוזי תיול תאי חושבו על בסיס נפח של תאי E. coli של 6.7 × 10-15 ליטר וצפיפות תאים של A600 = 0.5 (שווה ערך ל- 1 × 108 תאים מ"ל-1 תרבות). (Müller et al. 2016)
ב-Vivo קביעת גלוטתיון באמצעות מרסק תאים על-קולי
E.coli MG1655 גודל ב-MOPS בינוני מינימלי בנפח כולל של 200 מ"ל עד שהגיע ל-A600 של 0.5. התרבית חולקה לתרביות של 50 מ"ל לטיפול במתח. לאחר 15 דקות של דגירה עם אליצין 0.79 מילימטר, קוטר 1 מ"מ או דימתיל סולפוקסיד (בקרה), התאים נקצרו ב-4,000 גרם ב-4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. התאים נשטפו פעמיים עם חיץ KPE לפני השעיית הכדוריות ב-700μl של חיץ KPE. עבור deproteination, 300l של 10% (w/v) חומצה sulfosalicylic נוספו לפני הפרעה של תאים על ידי ultrasonication (3 x 1 דקות; VialTweeter אולטרסוניקטור). סופרנאטנטים נאספו לאחר צנטריפוגה (30 דקות, 13,000 גרם, 4 מעלות צלזיוס). ריכוזי חומצה סולפוסליצילית ירדו ל -1% על ידי תוספת של 3 כרכים של חיץ KPE. מדידות של סך גלוטתיון ו-GSSG בוצעו כמתואר לעיל. ריכוזי גלוטתיון בתאים חושבו על בסיס נפח של 6.7 תאי E. coli×10-15 ליטר וצפיפות תאים של A600 0.5 (שווה ערך ל-1×108 תאים מ"ל-1 תרבות). ריכוזי GSH חושבו על ידי חיסור של 2[GSSG] מסך הגלוטתיון. (Müller et al. 2016)
ביטוי של mAspAT אנושי ב- E. coli באמצעות הומוגנייזר קולי
המושבה היחידה של E. coli BL21 (DE3) המכילה את וקטור הביטוי ב-30 מ"ל של תווך לוריא-ברטאני (LB) המכיל 100μg/mL אמפיצילין, ולאחר מכן מעובדת ב-37ºC עד לצפיפות האופטית (OD600) הגיע ל-0.6. התאים נקצרו באמצעות צנטריפוגה במשקל של 4,000 × גרם למשך 10 דקות, והושעו מחדש בתווך LB טרי בנפח 3L המכיל אמפיצילין של 100μg/mL.
לאחר מכן, ביטוי חלבון הושרה עם 1 mM isopropyl β-ᴅ-1-thiogalactopyranoside (IPTG) במשך 20 שעות ב 16ºC. התאים נקצרו באמצעות צנטריפוגה במהירות של 8,000 × גרם למשך 15 דקות ונשטפו בחיץ A (20 mM NaH2PO4, 0.5 M NaCl, pH 7.4). תאים משוערים של 45 גרם (משקל רטוב) התקבלו מתרבית 3 ליטר. לאחר הצנטריפוגה, כדורי התא הושעו מחדש ב-40 מ"ל (עבור תרבית 1 ליטר) בחיץ מיצוי קר כקרח A, והושמדו על ידי אולטרה-סוניקציה בטמפרטורה קרה כקרח באמצעות מרסק התאים העל-קולי של Hielscher UP400St. הליזה התאית עברה צנטריפוגה במהירות של 12,000 סל"ד למשך 15 דקות כדי להפריד בין שברים מסיסים (סופר-נטנטיים) ומשקעים (כדוריים). (ג'יאנג ואחרים 2015)
עובדות שכדאי לדעת
אי קולי
Escherichia coli (E. coli) הוא חיידק גראם שלילי, אנאירובי בצורת מוט, קוליפורם מהסוג Escherichia הנפוץ במעי התחתון של אורגניזמים בעלי דם חם (אנדותרמים). ישנם מספר רב של זני E. coli (או תת-סוגים) עם מאפיינים מגוונים. רוב זני האי-קולי אינם מזיקים לבני אדם, למשל זני B ו-K-12 המשמשים בדרך כלל ליישומי מחקר במעבדות. עם זאת, זנים מסוימים מזיקים ויכולים לגרום למחלה קשה.
E. coli ממלא תפקיד חשוב בהנדסה ביולוגית מודרנית ובמיקרוביולוגיה תעשייתית מכיוון שקל לתמרן את החיידקים. יישומי מעבדה נפוצים הכוללים לעתים קרובות שימוש ב- E. coli, למשל ליצירת חומצה דאוקסיריבונוקלאית רקומביננטית (DNA) או לפעול כאורגניזם מודל.
E. coli הוא מארח רב-תכליתי מאוד לייצור חלבונים הטרולוגיים, ומערכות ביטוי חלבונים רבות זמינות לייצור חלבונים רקומביננטיים ב- E. coli. באמצעות פלסמידים המאפשרים ביטוי ברמה גבוהה של חלבון, ניתן להחדיר לחיידקים גנים, המאפשרים לייצר חלבונים כאלה בכמויות גבוהות בתהליכי תסיסה תעשייתיים.
E.coli משמשים כמפעלי תאים לייצור אינסולין. יישומים נוספים כוללים שימוש בתאי E. coli מהונדסים לפיתוח וייצור חיסונים ואנזימים משותקים, לייצור דלקים ביולוגיים, כמו גם לטיפול ביולוגי.
הזן K-12 הוא צורה מוטנטית של E. coli המבטא יתר על המידה את האנזים אלקליין פוספטאז (ALP). מוטציה זו מתרחשת עקב פגם בגן המקודד כל הזמן לאנזים. אם גן מייצר תוצר ללא כל עיכוב, זה נקרא פעילות מכוננת. צורה מוטנטית ספציפית זו משמשת לבידוד וטיהור האנזים ALP.
חיידקי E. coli נמצאים בשימוש נרחב גם כמפעלי תאים. מיקרובים מהונדסים (למשל, חיידקים) ותאי צמחים יכולים לשמש כבתי חרושת לתאים. תאים מהונדסים גנטית אלה מייצרים מולקולות, כימיקלים, פולימרים, חלבונים וחומרים אחרים, המשמשים למשל בתעשיית התרופות, המזון והכימיקלים. על מנת לשחרר את המולקולות המיוצרות בפנים של תאים מהונדסים ביולוגית כאלה, ליזה קולית היא שיטה נפוצה לשבש את דפנות התא ולהעביר את חומרי המטרה לתוך הנוזל שמסביב. קרא עוד על ליזה של תאים מהונדסים ביולוגית!
גזירת DNA אולטראסונית
כוחות גזירה על-קוליים הם שיטה נפוצה לשחרור מולקולות, אברונים וחלבונים מפנים התא, כמו גם לפירוק גדילי DNA לחתיכות. קוויטציה אקוסטית שוברת את דפנות התא ואת קרומי התא כדי לחלץ DNA מתאים וליצור מקטעים של כ -600 – 800 bp אורך, שהוא אידיאלי לניתוח.
לחץ כאן כדי ללמוד עוד על הומוגנייזרים על-קוליים לפיצול DNA!
ספרות / מקורות
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics מייצרת הומוגנייזרים קוליים בעלי ביצועים גבוהים מ המעבדה ל גודל תעשייתי.