היגישר טכנולוגיית אולטרה סאונד

פירוק התא של תאי BL21 על ידי אולטרסוניקה

תאי BL21 הם זן של escoli כי הוא בשימוש נרחב במעבדות מחקר, ביוטכנולוגיה וייצור תעשייתי בשל יכולתם לבטא חלבונים יעילים מאוד. שיבוש תאים אולטראסוניות, ליזיס וחילוץ חלבון היא השיטה הנפוצה לבודד ולאסוף את החלבונים ממוקדים מפנים התא של תאי BL21. Ultrasonication משבש את התא לחלוטין ומשחרר את כל החלבונים מלכודת, מה שהופך 100% של החלבון זמין.

תאי BL21 לביטוי חלבונים

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsתא BL21 הוא זן חיידקי E. coli בעל יכולת כימית המתאים לטרנספורמציה וביטוי חלבון ברמה גבוהה באמצעות מערכת אינדוקציה פולימראז-IPTG T7 RNA. תאי BL21 מאפשרים ביטוי חלבון יעיל ביותר של כל גן השובר תחת שליטתו של מקדם T7. זן E. coli BL21(DE3) הוא זן ייצור חלבון מבוסס פולימראז פולימראז T7 RNA בשילוב עם וקטורים ביטוי מבוססי מקדם T7 והוא מיושם באופן נרחב במעבדות ובתעשייה כדי לייצר חלבונים רקומביננטיים. ב BL21(DE3), הביטוי של קידוד הגן חלבון רקומביננטי מתעתק על ידי הפולימראז T7 RNA מקודד כרומוסומי (T7 RNAP), אשר מתמלל שמונה פעמים מהר יותר מאשר RNAP E. coli קונבנציונלי. זה הופך את הזן BL21(DE3) יעיל מאוד והופך אותה לאחת ממערכות תאי ביטוי החלבון המועדפות ביותר.

פרוטוקול עבור ליסיס אולטראסוניות וחילוץ חלבון מתאי BL21

פירוק התא של תאי BL21 מבוצע בעיקר באמצעות ultrasonication בשילוב עם נתרן לאורויל sarcosinate (המכונה גם סרקוזיל) כמאגר פירוק. היתרונות של שיבוש תא אולטראסוניות וחילוץ חלבון לשקר באמינות, רבייה, כמו גם פשוט, פעולה בטוחה ומהירה של ultrasonicators. הפרוטוקול שלהלן נותן כיוון שלב אחר שלב עבור lysis תא BL21 אולטראסוניות:

Probe-סוג insonifier UP200St עבור תמס

משבש תא אולטראסוניות בית Seating עם מיקרו-טיפ S26d2 לליזה וחילוץ חלבונים

בקשת מידע





  • על מנת להסיר את החלבונים המלווים, כדורי חיידק BL21 היו resuspended ב 50 מ"ל של נתרן קר כקרח Tris-EDTA (STE) מאגר (המורכב 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl בתוספת עם 100 mM PMSF).
  • 500 ul של ליזויזים (10 מ"ג / מ"ל) מתווספים ואת התאים הם דגירה על קרח במשך 15 דקות.
  • לאחר מכן, 500 ul של DTT ו 7 מ"ל של סרקוסיל (10% (w / v) מורכב מאגר STE) מתווספים.
  • חיוני לשמור על כל מאגרי הטיהור קרים כקרח ולשמור על הדגימות על קרח בכל עת. כל צעדי הטיהור צריכים להתבצע בחדר הקר במידת האפשר.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • עבור ליסיס אולטראסוניות וחילוץ חלבון, הדגימות הם sonicated ב VialTweeter מולטי-גמאה אולטרה סוניקטור במשך 4 x 30 שניות ב 100% משרעת עם מרווח של 2 דקות בין כל sonication. לחלופין, הומוגניזר אולטראסוניות מסוג בדיקה עם מיקרו-קצה למשל, Uf200 ः t עם S26d2 (3 x 30 שניות, 2 דקות. הפסקה בין מחזורים אולטראסוניות, 80% משרעת) ניתן להשתמש.
  • לצעדי טיהור נוספים, יש לשמור דגימות על קרח או לאחסן לחילופין ב-80°C עד לעיבוד נוסף.

Lysis אולטראסוניות תחת בקרת טמפרטורה פרסז

בקרת הטמפרטורה המדויקת והאמינה חיונית בעת טיפול בדגימות ביולוגיות. טמפרטורות גבוהות ליזום השפלה חלבון כתוצאה תרמית בדגימות.
כמו כל טכניקות הכנת מדגם מכני, sonication יוצר חום. עם זאת, הטמפרטורה של הדגימות ניתן לשלוט היטב בעת השימוש VialTweeter. אנו מציגים בפניכם אפשרויות שונות כדי לפקח ולשלוט בטמפרטורה של הדגימות שלך תוך הכנתם עם VialTweeter ו VialPress לניתוח.

  1. ניטור טמפרטורת המדגם: המעבד אולטראסוניות UP200St, אשר מניע את VialTweeter, מצויד בתוכנה חכמה חיישן טמפרטורה לחיבור. חבר את חיישן הטמפרטורה ל-UP200St והכנס את קצה חיישן הטמפרטורה לאחד מהצינורות לדוגמה. באמצעות צג מגע דיגיטלי בצבע, באפשרותך להגדיר בתפריט של UP200St טווח טמפרטורות ספציפי עבור sonication המדגם שלך. ultrasonicator יעצור באופן אוטומטי כאשר הטמפרטורה המקסימלית מגיעה להשהות עד הטמפרטורה המדגם הוא למטה לערך הנמוך יותר של הטמפרטורה להגדיר ∆. ואז sonication מתחיל באופן אוטומטי שוב. תכונה חכמה זו מונעת השפלה הנגרמת על-ידי חום.
  2. ניתן לקרר מראש את בלוק VialTweeter. לשים את בלוק VialTweeter (רק sonotrode ללא מתמר!) לתוך המקרר או המקפיא כדי לקרר מראש את בלוק טיטניום עוזר לדחות את עליית הטמפרטורה במדגם. אם הדבר אפשרי, הדגימה עצמה יכולה להיות מקוררת מראש מדי.
  3. השתמש בקרח יבש כדי להתקרר במהלך sonication. השתמשו במגש רדוד מלא בקרח יבש והניבו את ה-VialTweeter על הקרח כדי שהחום יוכל להתפוגג במהירות.

לקוחות ברחבי העולם משתמשים ב-VialTweeter וב-VialPress לעבודת הכנת המדגם היומית שלהם במעבדות ביולוגיות, ביוכימיות, רפואיות וקליניות. התוכנה החכמה ובקרת הטמפרטורה של מעבד UP200St, הטמפרטורה נשלטת באופן אמין וכתוצאה מכך ההשפלה בדגימה כתוצאה מחום נמנעת. הכנת מדגם אולטראסוניות עם VialTweeter ו VialPress מספק תוצאות אמינות מאוד לשחזור!

מצא את משבש אולטראסוניות אופטימלי עבור יישום Lysis שלך

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher אולטרסוניקה הוא יצרן מנוסה זמן רב של משבשים תא אולטראסוניות ביצועים גבוהים ו homogenizers עבור מעבדות, ספסל העליון ומערכות בקנה מידה תעשייתי. גודל תרבות התא החיידקי שלך, מטרת המחקר או הייצור שלך ואת נפח התא לעבד לשעה או יום הם גורמים חיוניים כדי למצוא את משבש תא אולטראסוניות הנכון עבור היישום שלך.
Hielscher אולטרסוניקה מציעה פתרונות שונים עבור sonication בו זמנית של דגימות מרובות (עד 10 בקבוקונים עם VialTweeter) ודגימות המוניות (כלומר, לוחות microtiter / לוחות ELISA עם UIP400MTP), כמו גם ultrasonicator מעבדה מסוג בדיקה קלאסי עם רמות כוח שונות מ 50 כדי 400 וואט למעבדים אולטראסוניות תעשייתי באופן מלא עם עד 16,000 וואט ליחידה לשיבוש תאים מסחריים וחילוץ חלבון בייצור גדול. כל Ultrasonicators Hielscher בנויים עבור הפעולה 24/7/365 תחת עומס מלא. חוסן ואמינות הם תכונות הליבה של המכשירים אולטראסוניות שלנו.
כל homogenizers אולטראסוניות דיגיטלי מצוידים בתוכנה חכמה, תצוגת מגע צבעונית פרוטוקולי נתונים אוטומטיים, אשר הופכים את המכשיר אולטראסוניות לתוך כלי עבודה נוח במעבדה ומתקני ייצור.
תן לנו לדעת, איזה סוג של תאים, איזה נפח, עם איזה תדירות ועם איזה יעד יש לך לעבד את הדגימות הביולוגיות שלך. אנו ממליצים לך משבש תא אולטראסוניות המתאים ביותר עבור דרישות התהליך שלך.

הטבלה שלהלן נותן לך אינדיקציה של קיבולת העיבוד המשוער של מערכות אולטראסוניות שלנו מ homogenizers תחבולה יד ו אולטרה סאונד MultiSample מעבדים אולטראסוניות תעשייתי עבור יישומים מסחריים:

נפח תצווה קצב זרימה התקנים מומלצים
96-באר / צלחות microtiter N.A. UIP400MTP
10 בקבוקונים à 0.5 עד 1.5 מ"ל N.A. VialTweeter ב UP200St
0.01 עד 250 מ"ל 5 עד 100 מ"ל/דקה UP50H
00.01 עד 500 מ"ל 10 עד 200mL / min מעלהay
10 עד 2000mL 20 עד 400mL / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 ל 20L 0.2 ל 4 ליטר / דקה UIP2000hdT
10 עד 100 ליטר 2 עד 10L / min UIP4000hdT
N.A. 10 עד 100L / min UIP16000
N.A. יותר גדול אשכול UIP16000

תיצור איתנו קשר! / שאל אותנו!

בקש מידע נוסף

אנא השתמש בטופס שלהלן כדי לבקש מידע נוסף אודות מעבדים אולטרה סאונד, יישומים ומחיר. נשמח לדון בתהליך שלך איתך ולהציע לך מערכת אולטרה סאונד לפגישה הדרישות שלך!









הינכם מתבקשים לשים לב מדיניות פרטיות.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrasonicator Uf200 ः t עם 2 מ"מ microtip S26d2 עבור sonication של דגימות קטנות

ספרות/הפניות



עובדות שראוי לדעת

חיידקי אשריצ'יה קולי

Escherichia קולי הוא סוג חיידקים, כי הוא שאינו נבוב ויוצרים, גרם שלילי ומאופיין בצורתו של מוט ישר. חיידקי אי-קולי קיימים בסביבה, במכלים ובמעיים של בני אדם ובעלי חיים. E. coli הוא בדרך כלל מוטיב באמצעות פוטלה peritrichous, אבל יש סוגים שאינם מוטיב, מדי. E.coli הם מה שנקרא אורגניזמים כימותרפיים אנאירוביים, מה שאומר שהם מסוגלים גם חילוף חומרים נשימתי תסיסתי. רוב סוגי ה-E.coli הם שפירים וממלאים פונקציות שימושיות בגוף, למשל דיכוי הצמיחה של מינים חיידקיים מזיקים, סינתזה ויטמינים וכו '.
תא חיידקי Escherichia coli מסוג B הם קטגוריה מיוחדת של זנים E.coli, אשר נמצאים בשימוש נרחב במחקר כדי לחקור מנגנונים כגון רגישות bacteriophage או מערכות שינוי הגבלה. יתר על כן, חיידקי אי-קולי מוערכים כסוס עבודה אמין לביטוי חלבונים במעבדות ביוטכנולוגיה ומדעי החיים. לדוגמה, E.coli משמשים לסנתז תרכובות כגון חלבונים ואוליגוסכרידים בקנה מידה תעשייתי. בשל תכונות ספציפיות כגון מחסור פרוטאז, ייצור אצטט נמוך ברמה גבוהה של גלוקוז, וחחלנות משופרת, תאי E. coli B הם הוא משמש לעתים קרובות ביותר תאים מארחים לייצור חלבונים מהונדסים גנטית.

חלבון רקומביננטי

חלבונים רקומביננטיים (rProt) צוברים חשיבות משמעותית בענפי סעפת, כולל בייצור כימי, תרופות, קוסמטיים, רפואה אנושית ובעלי חיים, חקלאות, מזון, כמו גם תעשיות טיפול בפסולת.
ייצור חלבון רקומביננטי דורש שימוש במערכת ביטוי. כמו הבעת מערכות תאים לייצור של DNA רקומביננטי, ניתן להשתמש הן תאים פרוקריוטיים ואאוקריוטיים. בעוד תא חיידקי נמצאים בשימוש נרחב ביותר עבור ביטוי חלבון בשל גורמים כגון עלות נמוכה, מדרגיות קלה ותנאי מדיה פשוטים, יונקים, שמרים, אצות, חרקים ומערכות ללא תאים הם חלופות מבוססות. סוג החלבון, הפעילות הפונקציונלית, כמו גם התפוקה הנדרשת של חלבון מבוטא משפיעים על בחירת מערכת התאים המשמשת לביטוי חלבונים.
על מנת לבטא חלבון רקומביננטי, תא מסוים חייב להיות טרנס נגוע עם וקטור DNA המכיל את התבנית של DNA רקומביננטי. לאחר מכן, התאים הטרנסג'נדרים בתבנית מתואורים. כתוצאה מהמנגנון התאי, התאים מתמלמלים ומתרגמים את החלבון של עניין, ובכך מייצרים את החלבון הממויקוד.
מכיוון שהחלבונים המבוטאים נמצאים במטריקס התאי, יש לשבש את התא (משובש ושבור) כדי לשחרר את החלבונים. בשלב טיהור לאחר מכן, החלבון מופרד ומטוהר.
החלבון רקומביננטי הראשון המשמש לטיפול היה אינסולין אנושי רקומביננטי בשנת 1982. כיום, יותר מ 170 סוגים של חלבון רקומביננטי מיוצרים ברחבי העולם עבור טיפולים רפואיים. חלבונים רקומביננטיים נפוצים המשמשים ברפואה הם למשל הורמונים רקומביננטיים, אינטרפרונים, interleukins, גורמי גדילה, גורמי נמק הגידול, גורמי קרישת דם, תרופות טרומבוליטיס, ואנזימים לטיפול במחלות גדולות כגון סוכרת, גמדות, אוטם שריר הלב, אי ספיקת לב גדשתית, אפופלקסיה מוחית, טרשת נפוצה, נויטרופניה, טרומבוציטופניה, אנמיה, צהבת, דלקת מפרקים שגרונית, אסטמה, מחלת קרוהן, וסרטן הריאות. (cf. Phuc V. Pham, באומיק טכנולוגיות וביו-הנדסה, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

אולטרסוניקה ביצועים גבוהים! מגוון המוצרים של Hielscher מכסה את הספקטרום המלא מן ultrasonicator מעבדה קומפקטית על ספסל העליון יחידות למערכות אולטראסוניות תעשייתי מלא.