ניתן להכין מאגרי ליזיס ביעילות ובמהירות באמצעות הומוגנייזרים קוליים של רקמות. מכיוון שאולטרסאונד הוא כלי חלומי לערבוב, המסה ופיזור, הם מאפשרים הכנה אמינה וידידותית למשתמש של מאגרי ליזיס.

הכנה קולית של מאגרי ליזה

הומוגנייזרים של רקמות אולטראסוניות הם כלי נפוץ לשיבוש תאים, ליזה וחילוץ, ולכן זמינים ברוב המעבדות. יישום משני עבור ultrasonicators סוג הבדיקה הוא הכנת מאגרי ליזיס.

מאגר ליזיס הוא פתרון המשמש לשבירת תאים (ליז) ושחרור תוכנם לניתוח במורד הזרם. ההרכב הספציפי של חיץ הליזה יכול להשתנות בהתאם לסוג התאים שעוברים ליזה וליישום במורד הזרם. עם זאת, חיץ ליזה טיפוסי מכיל רכיבים כגון דטרגנטים, מלחים ומעכבי פרוטאזות. מלחי חציצה (למשל Tris-HCl) ומלחים יוניים (למשל NaCl) משמשים בדרך כלל לוויסות ה- pH והאוסמולריות של הליזט.
כדי ליצור חיץ ליזיס, הרכיבים מעורבבים יחד בריכוזים המתאימים ו- pH. בדרך כלל מערבבים או מנערים את התערובת עד להמסת הרכיבים והתמיסה הומוגנית.
הומוגניזציה קולית היא שיטה שניתן להשתמש בה כדי לעזור להפוך חיץ ליזה טוב על ידי שיפור ערבוב ופירוק של הרכיבים. בשיטה זו, גלי אולטרסאונד – בדרך כלל בטווח של 20 עד 30 קילוהרץ – מיושמים על התערובת, מה שיוצר בועות קוויטציה שקורסות ומייצרות אנרגיה מקומית אינטנסיבית, מה שמוביל לגזירה מכנית וערבוב של הרכיבים.
תהליך הומוגניזציה קולי יכול לעזור לפרק כל גושים או אגרגטים של הרכיבים, ולהבטיח כי הפתרון הוא מעורבב באופן אחיד. כתוצאה מכך, חיץ ליזה משופר כזה יכול להוביל לשיבוש תאים יעיל יותר ותשואות גבוהות יותר של חומר שחולץ. בנוסף, הומוגניזציה קולית יכולה להפחית את הזמן הדרוש ליצירת חיץ ליזיס בהשוואה לשיטות ערבוב או ניעור מסורתיות.
בסך הכל, הומוגניזציה קולית היא כלי רב עוצמה לשיפור האיכות והיעילות של הכנת חיץ ליזיס.

פרוטוקול להכנת חיץ ליזיס קולי

זהו פרוטוקול כללי להכנת חיץ ליזיס באמצעות אולטרסוניקטור מסוג בדיקה:
 
חומרים

• חומרי ניקוי לבחירה (למשל Triton X-100, SDS, CHAPS)
• מלח(ים) לפי בחירה (למשל NaCl, KCl)
• מעכבי פרוטאז (למשל PMSF, אפרוטינין, לאופטין)
• ultrasonicator
• מערבב
• מים שעברו דה-יוניזציה
• מד pH או רצועות pH

 
 
הוראות שלב אחר שלב:

1. קבע את הרכב מאגר הליזה בהתבסס על התאים או הרקמה שתשכב, והיישומים במורד הזרם שעבורם תשתמש בליזט. הכינו את תמיסות המלאי של דטרגנטים, מלחים ומעכבי פרוטאז בריכוזים הרצויים.
2. הוסיפו את תמיסות הציר של חומרי ניקוי, מלחים ומעכבי פרוטאז לכוס או לצלוחית.
3. הוסיפו מים שעברו דה-יוניזציה כדי להעלות את הנפח לכמות החיץ הרצויה.
4. מערבבים את הרכיבים באמצעות מערבל על מנת לקבל פתרון טרום ערבוב.
5. מדוד את ה- pH של המאגר באמצעות מד pH או רצועות pH, וכוונן את ה- pH לפי הצורך עם כמויות קטנות של חומצה או בסיס.
6. השתמש באולטרה-סאונד מסוג בדיקה כדי הומוגניזציה של פתרון טרום ערבוב, כך שתתקבל תמיסה הומוגנית מאוד. לכן, סוניק את התמיסה במשך כמה שניות עד התמיסה מעורבבת היטב וכל גושים או אגרגטים מתפרקים. משך ועוצמת הסוניקציה יכולים להיות אופטימליים בהתבסס על חיץ הליזיס הספציפי והאולטרה-סוניקטור בו נעשה שימוש.
7. לאחר אולטרסוניקציה, למדוד מחדש את ה- pH של המאגר ולהתאים לפי הצורך.
8. סנן את המאגר דרך מסנן של 0.2 מיקרון כדי להסיר פסולת או אגרגטים שאולי נוצרו במהלך סוניקציה.
9. מאגר הליזיס מוכן כעת לשימוש.

 
הערה: ההרכב וה- pH המדויקים של מאגר הליזה עשויים להשתנות בהתאם לתאים או לרקמות העוברים ליזה וליישומים במורד הזרם. הפרוטוקול לעיל הוא קו מנחה כללי וייתכן שיהיה צורך למטב אותו עבור יישומים ספציפיים.
 
הומוגנייזרים על-קוליים משמשים בדרך כלל לשיבוש תאים ולמיצוי מולקולות תוך-תאיות. לכן, יישומי ליזה רבים משתמשים בסוניקציה מסוג בדיקה לא רק להכנת חיץ הליזיס, אלא גם לשיבוש התא המכני ולחילוץ.
זה הופך את ההומוגנייזרים לרקמות אולטראסוניות לכלי רב-תכליתי למעבדות ומסביר את השימוש הרחב באולטרסאונד במיקרוביולוגיה, ביוטכנולוגיה ומדעי החיים.

אולטראסאונד מעבד

Hielscher Ultrasonics מייצרת ומספקת הומוגנייזרים קוליים ובדיקות (sonotrodes) בדירוגי הספק שונים ובנפחי דגימה. זה מאפשר לנו להציע לך את המשבש הקולי המתאים ביותר להכנת הדגימה שלך. אנו מתמקדים באיכות הגבוהה ביותר, בנוחות משתמש יוצאת דופן ובתוצאות סוניקציה אמינות. כל האולטרסוניקטורים הדיגיטליים כוללים תוכנה חכמה, תכנות והגדרה מראש של פרוטוקולי סוניקציה, שלט רחוק לדפדפן, בקרת טמפרטורה, תאורת דגימה וכן הקלטת נתונים אוטומטית על כרטיס SD מובנה.

תכנון, ייצור וייעוץ – איכות תוצרת גרמניה

Hielscher אולטראסוניקאטורים ידועים באיכות הגבוהה ביותר שלהם סטנדרטים עיצוב. עמידות ותפעול קל מאפשרים שילוב חלק של האולטרסוניקאטורים שלנו במתקנים תעשייתיים. תנאים מחוספסים וסביבות תובעניות מטופלים בקלות על ידי Hielscher אולטראסוניקאטורים.

Hielscher אולטרסוניקה היא חברה מוסמכת ISO ולשים דגש מיוחד על ultrasonicators ביצועים גבוהים הכוללים טכנולוגיה חדישה וידידותיות למשתמש. כמובן, Hielscher אולטרסוניקאטורים הם תואמי CE ועומדים בדרישות של UL, CSA ו- RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: