פיצול אלפא-סינוקלאין באמצעות VialTweeter Sonicator
סיבי α-סינוקלאין וסרטים מפוצלים במחקר מדעי כדי ליצור קטעי פיבריל קטנים יותר או אפילו מולקולות חלבון בודדות, אשר ניתן לנתח בקלות רבה יותר באמצעות טכניקות ניסיוניות שונות. VialTweeter Sonicator הוא אחד האולטרה-סוניקטורים הנפוצים ביותר לפיצול אלפא-סינוקלאין יעיל ואמין.
α-סינוקלאין במחקר
סיבי אלפא-סינוקלאין הם אגרגטים חלבוניים הקשורים מאוד להפרעות נוירודגנרטיביות כגון מחלת פרקינסון וצורות מסוימות של דמנציה, כולל דמנציה עם גופי לוי. המחקר המתמקד בסיבי אלפא-סינוקלאין נועד להבין את תפקידם בהתקדמות המחלה ולפתח התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. על ידי פירוק סיבי אלפא-סינוקלאין למקטעים קטנים יותר, חוקרים יכולים לחקור את התכונות המבניות הספציפיות שלהם. לדוגמה, פיצול סיבי אלפא-סינוקלאין מאפשר לחוקרים לחקור את האינטראקציות שלהם עם מולקולות אחרות, כגון חלבונים, שומנים או מולקולות קטנות. על ידי הפקת מקטעים קטנים יותר, ניתן לחקור בצורה יעילה יותר את אתרי הקישור והזיקה לשותפים אלה המקיימים אינטראקציה. פריברילים וסרטים קטנים יותר של α-Syn עשויים גם הם להראות רעילות שונה והשפעות ביוכימיות. לכן, טכניקת פיצול אמינה ויעילה, המניבה תוצאות הניתנות לשחזור בטיפול דגימה מהיר ופשוט, היא חיונית.
פיצול אלפא-סין על-קולי: הסוניקטור VialTweeter הוא מערכת הכנת הדגימה העל-קולית המבוססת על עד 10 בקבוקונים בו זמנית באותם תנאים בדיוק. הגדרות ניתנות לתכנות מאפשרות הפעלה חוזרת פשוטה ומהירה של אותם ניסויים, מה שנותן תוצאות אמינות ביותר וניתנות לשחזור בפיצול סיבי אלפא-סינוקלאין.
VialTweeter sonicator עבור פיצול קולי בו זמנית של דגימות אלפא-סינוקלאין מרובות.
הכנת דגימת α-סינוקלאין עם סוניקטור
גישה אחת לחקר סיבי אלפא-סינוקלאין כוללת מיצוי ופיצול שלהם באמצעות טכניקות כגון סוניקציה. סוניקציה היא תהליך המשתמש בגלי אולטרסאונד בעוצמה גבוהה ובתדר נמוך כדי לשבש ולפרק אגרגטים של חלבונים, מה שמוביל לשחרור של סיבים קטנים יותר או מולקולות חלבון בודדות. הסוניקטור VialTweeter הוא מכשיר נפוץ במחקרים הקשורים לסינוקלאין α למטרה זו.
מחקרים רבים מתארים פרוטוקולים מדויקים להכנת דגימות של סוניקציית סיבי אלפא-סינוקלאין, המשתמשים ב-Hielscher VialTweeter לפיצול סיבי α-סינוקלאין יעיל ואמין. על ידי פיצול הסיבים באופן אולטרה-סאונד, החוקרים יכולים לנתח את התוצרים המתקבלים ולבחון את המבנה שלהם, רעילותם והאינטראקציות שלהם עם מולקולות אחרות. מחקר זה מספק תובנות חשובות לגבי המנגנונים העומדים בבסיס ניוון עצבי ועשוי לזהות מטרות טיפוליות חדשות. פרוטוקולי הסוניקציה המבוססים היטב של α-סינוקלאין המשתמשים בסוניקטור VialTweeter מאפשרים תוצאות אמינות וניתנות לשחזור.
תמונות עליונות: סיבי אלפא-סינוקלאין לא מקוטעים
תמונות תחתונות: סיבי אלפא-סינוקלאין מקוטעים באולטרסאונד עם הסוניק VialTweeter
(מחקר ותמונות: ©Dieriks et al., 2022)
פיצול קולי של סיבי α-סינוקלאין – פרוטוקולים
מכיוון שחוקרים רבים משתמשים בסוניקטור VialTweeter כטכניקת פיצול מועדפת לייצור מקטעי פיבריל אחידים של α-סינוקלאין, פרוטוקולים מבוססים זמינים. להלן תוכל למצוא כמה פרוטוקולי פיצול למופת.
הכנת זרעי ClearTau: סיבי ClearTau דוללו ל-10 מיקרומטר ב-dH2O ועברו משרעת של 70% למשך 50 שניות עם מחזור OFF של 1 שניות בצינור באמצעות הסוניקטור UP200St עם VialTweeter. הזרעים התאפיינו במיקרוסקופ אלקטרונים.
מדידת פלואורסצנטיות ThS: סיבי ClearTau דוללו ל-2.5 מיקרומטר ב-dH2O ועברו משרעת של 70% למשך 50 שניות עם מחזור כיבוי של 1 שניות בצינור באמצעות UP200St עם VialTweeter. מונומר Tau 4R2N באורך מלא של 2.5 מיקרומטר שימש כבקרה. לתגובה של 100 μl נוספו 100 μl של ThS (10 μM), שהניבו ריכוזי חלבון סופיים של 1.25 μM. פלואורסצנטיות ThS חד-פעמית נמדדה באמצעות 96 לוחות תחתונים שקופים היטב שהותקנו בקורא מיקרו-צלחות אומגה FLUOstar עם עירור ב-445 ננומטר ופליטה ב-485 ננומטר.
(ראה: Limorenko et al., 2023)
אורך אחיד של α-סינוקלאין באמצעות סוניקציה: ההטרוגניות האורכית של סיבי α-syn וסרטים הופחתה על ידי סוניקציה למשך 20 דקות על קרח בצינורות אפנדורף 2 מ"ל בצייצן VialTweeter שנקבע על משרעת 75%, 0.5 שניות פולסים.
(ראה: Bousset et al., 2013)
בוצעה בקרת איכות של WT מונומרי רקומביננטי אנושי או S129A a-Syn והפולימורפים הפיברילריים שהם מייצרים כמו גם זה של a-Syn 1–110. לאחר מכן, הפולימורפים הפיברילריים פוצלו על ידי סוניקציה למשך 20 דקות בצינורות אפנדורף של 2 מ"ל באולטרסוניקטור VialTweeter כדי ליצור חלקיקים פיברילריים בגודל ממוצע של 42-52 ננומטר המתאימים לאנדוציטוזה.
(ראה: Shrivastava et al., 2020)
אפיון חמישה פולימורפים פיברילריים α-Syn. (A) מוצגים מיקרוגרפים אלקטרוניים תמסורת של פולימורפים פיברילריים α-Syn מוכתמים שלילית, סיבים, סרטים, פיברילים-91, פיברילים-65 ופיברילים-110 לפני (הנתיב העליון) ולאחר פיצול עם ה-VialTweeter (הנתיב התחתון). (B) מוצגת התפלגות האורך של הפולימורפים הפיברילריים המקוטעים. מצוין מספר (n) של מכלולים פיברילריים שההיסטוגרמות נגזרו מהם.
(מחקר ותמונות: Shrivastava et al., 2020)
סיבי α-Syn פוצלו על ידי סוניקציה למשך 20 דקות בצינורות אפנדורף של 2 מ"ל ב- VialTweeter כדי ליצור חלקיקים פיברילריים בגודל ממוצע של 42-52 ננומטר כפי שהוערך על ידי ניתוח TEM.
(ראה: Negrini et al., 2022)
הסיבים המרחפים מחדש91 (ב-PBS) פוצלו לפני שנוספו לתרביות תאים על ידי סוניקציה למשך 20 דקות בשפופרות אפנדורף של 2 מ"ל באמצעות הסוניקטור Vial Tweeter, aliquoted, הבזק קפוא בחנקן נוזלי ואוחסן עד לשימוש בטמפרטורה של -80 ̊C.
(ראה: Vajhøj et al., 2021)
Sonicator UIP400MTP לפיצול פיבריל אלפא-סינוקלאין בלוחות מרובי בארות.
VialTweeter ו-Lab Sonicators לפיצול α-syn
Hielscher Ultrasonics מוכרת ברחבי העולם כיצרנית מובילה של ultrasonicators חדשני. האולטרסאונד שלנו, המהימן והמבוסס במעבדות מחקר גדולות ברחבי העולם, מציע איכות וביצועים ללא תחרות עבור הניסויים הקריטיים שלך.
עם Hielscher VialTweeter וכל סוניקטור Hielscher אחר, תוכלו לחוות נוחות משתמש שאין שני לה, כפי שהם מתוכננים בקפידה עבור תוצאות לשחזור, קלות שימוש ופעולה חלקה. עם תכונות הקלטת נתונים אוטומטיות, אתה יכול להתמקד במחקר שלך בזמן שהאולטרסאונד שלנו מקליט בקפדנות נתונים חיוניים לצורך שחזור ודיוק.
השג תוצאות עקביות וניתנות לשחזור בביטחון!
האולטרה-סאונד שלנו מהונדס ומיוצר בגרמניה. דיוק גרמני ואיכות הנדסית גבוהה ביותר כדי להבטיח הכנת דגימה אמינה ומדויקת כגון פיצול סיבי אלפא-סינוקלאין בכל פעם. אין עוד דאגות לגבי תוצאות לא עקביות - טכנולוגיית האולטרסאונד שלנו מבטיחה שהמחקר שלך יישאר בחזית ההתקדמות המדעית.
אבל זה לא הכל! המחויבות שלנו למצוינות משתרעת מעבר למוצרים שלנו. אנו גאים בשירות הלקוחות יוצא הדופן שלנו, המספק תמיכת מומחים כדי לענות על כל שאלה או חשש שיש לך. הצוות המסור שלנו נמצא כאן כדי לסייע לך בכל שלב במסע המחקר שלך, ולהבטיח שתפיק את המרב מהאולטרסאונד שלנו.
בחר חדשנות, אמינות וחוויית משתמש יוצאת דופן - בחר בסוניקטורים במעבדה שלנו כגון VialTweeter לפיצול סיבי אלפא-סינוקלאין. תיהנו מהפרוטוקולים שכבר נקבעו והצטרפו לשורות החוקרים המובילים שסומכים על הטכנולוגיה שלנו במחקרים הקריטיים שלהם. שדרג את המחקר שלך וחקור גבולות חדשים במחקר דמנציה ומחלות נוירודגנרטיביות עם האולטרסאונד החדיש שלנו.
- יעילות גבוהה
- טכנולוגיה מתקדמת
- אֲמִינוּת & חוסן
- שחזור
- בקרת תהליך מתכווננת ומדויקת
- עבור כל אמצעי אחסון
- תוכנה אינטליגנטית
- תכונות חכמות (למשל, ניתנות לתכנות, פרוטוקול נתונים, שלט רחוק)
- קל ובטוח לתפעול
- תחזוקה נמוכה
- CIP (נקי במקום)
תכנון, ייצור וייעוץ – איכות תוצרת גרמניה
Hielscher אולטראסוניקאטורים ידועים באיכות הגבוהה ביותר שלהם סטנדרטים עיצוב. עמידות ותפעול קל מאפשרים שילוב חלק של האולטרסוניקאטורים שלנו במתקנים תעשייתיים. תנאים מחוספסים וסביבות תובעניות מטופלים בקלות על ידי Hielscher אולטראסוניקאטורים.
Hielscher Ultrasonics היא חברה מוסמכת ISO לשים דגש מיוחד על ultrasonicators ביצועים גבוהים שמציעות טכנולוגיה חדישה וידידותיות למשתמש. כמובן, Hielscher sonicators הם תואמי CE ועומדים בדרישות של UL, CSA ו- RoHs.
הטבלה הבאה נותנת לך אינדיקציה לגבי יכולת העיבוד המשוערת של האולטרסאונד בגודל מעבדה שלנו:
| התקנים מומלצים | נפח תצווה | קצב זרימה |
|---|---|---|
| UIP400MTP | צלחות מולטי-באר / מיקרוטיטר | N.A. |
| cuphorn אולטרסאונד | CupHorn עבור בקבוקונים או | N.A. |
| GDmini2 | כור מיקרו-זרימה על-קולי | N.A. |
| VialTweeter | 00.5 ל 1.5mL | N.A. |
| מעלהay | 1 עד 500mL | 10 עד 200mL / min |
| Uf200 ः t, UP400St | 10 עד 2000mL | 20 עד 400mL / min |
תיצור איתנו קשר! / שאל אותנו!
הבקבוקון משמש בדרך כלל לפיצול סיבי אלפא-סינוקלאין כשלב בהכנת דגימה פרה-אנליטית
ספרות/הפניות
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Hielscher אולטרסוניקה מייצרת homogenizers קולי ביצועים גבוהים מ מַעבָּדָה ל גודל תעשייתי.