Ultraääninäytteen valmistelu THC-analyysiä varten
- Ultraääniuutto on todistettu menetelmä THC: n tuottamiseksi, mutta sitä voidaan käyttää myös analyyttisiin tarkoituksiin.
- Ultrasonication on yleinen näytteen valmistelumenetelmä, jota käytetään kannabistuotteiden THC: n kokonaispitoisuuden analysointiin.
- Ultraääniuutto levitetään näytteisiin ennen TLC-, GC- ja HPLC-analyysiä.
Ultraääni THC-uutto
THC, or tetrahydrocannabinol (delta-9-tetrahydrocannabinol), is the chemical that causes most of marijuana’s psychological effects. For the cannabis species, can be more than 400 different strains are known. Depending on the specific cannabis strain, cannabis can have as little as 0.3 wt% THC. In other strains, the THC content can reach up to 20 wt%.
Myös eri kannabistuotteet vaihtelevat merkittävästi: Joten vaihtelee marihuanan keskimääräinen THC-pitoisuus välillä 1-5%; hasiksen THC-pitoisuus on 5–15 prosenttia ja hasisöljyssä keskimäärin 20 prosenttia. THC marihuanan virkistysannoksissa vaihtelee suuresti ja mitä alhaisempi marihuanan THC-pitoisuus on, sitä enemmän käyttäjän on käytettävä kokeakseen halutut vaikutukset.
Ultraääninäytteen valmistusta käytetään THC-pitoisuuden analysointiin
- virkistyskäyttöön tarkoitettujen THC-tuotteiden laadunvalvontaan,
- farmaseuttisten THC-tuotteiden laadun määrittämiseen,
- huumehampun ja kuituhampun erottamiseksi.
THC-analyysissä käytetään yleisesti seuraavia kromatografisia menetelmiä: ohutkerroskromatografia (TLC), kaasukromatografia (GC) ja korkean erotuskyvyn nestekromatografia (HPLC)
Ultraääninäytteen valmisteluprotokolla TLC-analyysiä varten
Näytteen valmistelu: Näytteiden valmistamiseksi kuivattu kasvimateriaali on maseroitava ja jauhettava homogeeniseksi jauheeksi. Ultraääniuuttoa varten 500 mg kannabiksen kasvijauhetta ja 5 ml metanoli-kloroformiseosta (suhde 9: 1) sekoitetaan injektiopulloon. Sonikaatiota voidaan soveltaa käyttämällä ultraäänilaite mikrokärjellä VialTweeter tai ultraääni CupHorn. Sonikaatioaika kestää noin 5 minuuttia. Sen jälkeen näytteen annetaan levätä vähintään 5 minuuttia. Laimennetaan kirkas kelluva aine uuttoseoksella (v/v: 1:10). Vapaa THC: 1μL TLC-levyllä
Dekarboksylaatio: 100 μl uutetta haihdutetaan kuiviin. Jäännöstä kuumennetaan 180 °C:ssa 4 minuutin ajan. Lisätään 500 μl metanolikloroformia (v/v 9: 1). Sonikoidaan 5 min. Laimennetaan kirkas kelluva aine uuttoseoksella (v/v: 1:10).
Kalibrointi: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC-silikageeli F-254, Merck 5729
TLC-skanneri II, ohjelmisto CATS3, Camag Muttenz Eluens:
Etyyliasetaatti: Toluol: kloroformi = 3:17:0,25 (v/v/v)
Postkromatografinen johdannaisten muodostuminen: nopea sinisuola 0,1 % 0,1 M NaOH:ssa
Densitometria aallonpituudella 550 nm
Tetrahydrokannabinoli (Δ9-THC), analysointia ja uuttamista varten
Ultraääninäytteen valmisteluprotokolla GC-analyysiä varten
Näytteen valmistelu: Kuivattu kasvimateriaali maseroidaan ja jauhetaan homogeeniseksi jauheeksi. Uuttamista varten 500 mg kannabiksen kasvijauhetta ja 10 ml metanoli-heksaaniseosta (suhde 9: 1) sekoitetaan injektiopulloon. Sonikaatiota voidaan soveltaa käyttämällä koettimen tyyppinen ultraäänilaite mikrokärjellä VialTweeter tai ultraääni CupHorn. Sonikoidaan näytettä 15-20 min. Ravista näytettä ja anna sen levätä vähintään 5 minuuttia. Laimennetaan kirkas kelluva aine uuttoseoksella (v/v 1:20).
Dekarboksyliaatio: insertissä
Injektorin lämpötila 250°C
Kalibrointi: 5 ng/μL – 250 ng/μL
GC: HP 6890, 5973 MSD ja 7683 automaattinen näytteenottimen injektio: 1μl, jaettu aika: 2 min.
Pylväs: HP-5 MS, 30 m, halkaisija 250 μm, kalvon paksuus 0,25 μm
Kantokaasu: He, 35 psi, vakiovirtaus: 4 ml/min.
Uuni: 100 °C 1 minuutti .; lämpötilan nousu 15 °C?min - 280 °C; 280 °C 5 minuutin ajan MSD: SKANNAUS: m/e 35 – 550
Ultraääninäytteen valmisteluprotokolla HPLC-analyysiin
Näytteen valmistelu (analoginen GC-prepille): Kuivattu kasvimateriaali maseroidaan ja jauhetaan homogeeniseksi jauheeksi. Uuttamista varten 500 mg kannabiksen kasvijauhetta ja 10 ml metanoli-heksaaniseosta (suhde 9: 1) sekoitetaan injektiopulloon. Sonikaatiota voidaan soveltaa käyttämällä koetintyyppinen ultraäänilaite mikrokärjellä VialTweeter tai ultraääni CupHorn. Sonikoidaan näytettä 15-20 min. Ravista näytettä ja anna sen levätä vähintään 5 minuuttia. Laimennetaan kirkas kelluva aine uuttoseoksella (v/v 1:20).
VialTweeter ultraääninäytteen valmisteluun
Esikolonni: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Pylväs: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluentti: isokraattinen 36% TEAP 25 mmol/l, 64% asetonitriilin kvantifiointi 210 nm:ssä
Kalibrointi: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrointi: 0,01–0,50 μg/μL
Retentioaika: CBD:lle: 6,2 min.; CBN: 8,0 min.; THC: 9,4 min.; THC-A:lle: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St mikrokärjellä näytteen sonikaatiota varten
Kirjallisuus/viitteet
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensisch chemische Analysen von THC haltigem Hanfkraut. Von der DC GC zur HPLC-Methoden kautta. Sovellus 2006.
Faktoja, jotka kannattaa tietää
marihuana koostuu naaraspuolisen kannabiskasvin kuivatuista kukista ja hienovaraisista lehdistä ja varsista. Tämä on yleisimmin kulutettu muoto ja se sisältää noin 3-20% THC: tä. Spesifiset, pitkälle jalostetut marihuanan muodot saavuttavat yli 30 prosentin THC-pitoisuuden. Marihuana on kaikkien muiden THC:tä sisältävien kannabistuotteiden lähdemateriaali. Runsaimman kannabinoidin, tetrahydrokannabinolihapon (THCA), muuttamiseksi psykoaktiiviseksi THC:ksi on aloitettava dekarbolaatioprosessi. Siksi kannabis ja sen uutteet on kuumennettava tai kuivattava dekarboksyloinnin aiheuttamiseksi.
Kief viittaa jauheeseen, jossa on runsaasti trikomeja, joka seulotaan kannabiksen lehdistä ja kukista. Se kulutetaan joko jauheena tai puristettuna ja käytetään hasiskakkuihin.
hasis Tai hash on tiivistetty hartsikakku tai pallo, joka valmistetaan joko puristetusta kiefistä tai hartsista, joka kaavitaan kasvin pinnalta ja rullataan palloiksi. Sitä esiintyy eri väreissä mustasta kullanruskeaan puhtaudesta ja lähteestä riippuen. Sitä voidaan nauttia suun kautta tai polttaa esimerkiksi piipussa, vesipiipussa, bongissa, kuplituslaitteessa, höyrystimessä, kuumalla veitsellä, polttaa nivelissä, sekoittaa kannabiksen silmuihin tai tupakkaan, polttaa pullonvarttuina tai käyttää elintarvikkeiden ainesosana.
kannabiksen tinktuura viittaa kannabinoidien uutteeseen alkoholissa. Kannabinoidit uutetaan kannabiskasvista käyttämällä erittäin kestäviä väkeviä alkoholijuomia (enimmäkseen viljaalkoholia) tinktuuran luomiseksi.
hash-öljy on liuotinuutolla tuotettu kannabinoidien hartsimatriisi, joka on muodostettu kovettuneeksi tai viskoosiksi massaksi. Hashöljy on yksi tehokkaimmista kannabistuotteista sen korkean psykoaktiivisen yhdisteen vuoksi. Butaanissa ja ylikriittisessä hiilidioksidissa uutetun hashöljyn käyttö on viime aikoina saavuttanut kasvavan suosion.
Infuusiota viittaa erilaisiin kannabisinfuusioihin, jotka eroavat toisistaan haihtumattomien liuottimien laajan valikoiman vuoksi, joita voidaan käyttää kannabisinfuusion valmistamiseen. Tällaisen infuusion valmistamiseksi kannabiksen kasviaine sekoitetaan liuottimen kanssa ja puristetaan ja suodatetaan sitten öljyjen siirtämiseksi kasvista liuottimeen. Kaakaovoi, maitovoi, ruokaöljy, glyseriini ja ihon kosteusvoiteet ovat yleisesti käytettyjä liuottimia.
Lääkekannabiksen viittaa kannabiskasvin käyttöön lääkärin suosittelemana yrttihoitona sekä synteettiseen THC:hen ja kannabinoideihin. Tämä käyttö vaatii yleensä reseptin, ja jakelu tapahtuu yleensä paikallisten lakien määrittelemissä puitteissa. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että kannabiksen tai sen johdannaisten käyttö tehoaa esimerkiksi solunsalpaajahoidon aiheuttamaan pahoinvointiin ja oksenteluun, neuropaattiseen kipuun ja MS-tautiin.