تهیهٔ فراصوتی سرم غنی از پلاکت
- پلاسمای غنی از پلاکت (PRP)، پلاسمای خونی است که با پلاکت‌ها غنی شده است و برای درمان‌های پزشکی و زیبایی به کار می‌رود.
- لیز و آماده‌سازی فراصوتی، روشی بسیار مؤثر برای تهیهٔ پلاسمای غنی از پلاکت است.
- Hielscher Ultrasonics سامانه‌های فراصوتی متنوعی متناسب با الزامات فرآوری خون ارائه می‌دهد؛ برای مثال، برای آماده‌سازی در داخل و خارج از اتاق تمیز.
سرم غنی از پلاکت
فراصوت‌دهی روشی مطمئن و آسان برای لیز پلاکت‌های موجود در سرم خون اتولوگ به‌منظور آزادسازی فاکتورهای رشد است. فراکسیون‌های مشتق از پلاکت – که با نام سرم اتولوگ آماده‌سازی‌شده (ACS) نیز شناخته می‌شوند – برای ترمیم بافت یا درمان‌های زیبایی به کار می‌روند. برای دستیابی به نتایج بهینه، PRP پیش از تزریق غنی‌سازی می‌شود.
برای تهیهٔ پلاسمای غنی‌شده با فاکتورهای رشد سلولی، فراصوت‌دهی روشی بسیار مؤثر و کارآمد برای لیز غشاهای سلولی و آزادسازی تقریباً تمامی فاکتورهای رشد سلولی از پلاکت‌هاست. با لیز و آماده‌سازی فراصوتی، حتی می‌توان از خونی استفاده کرد که با مواد ضدانعقاد از انعقاد آن جلوگیری شده است.
آماده‌سازی PRP از طریق فراصوت‌دهی، روشی ساده و مقرون‌به‌صرفه برای دستیابی به فاکتورهای رشد تغلیظ‌شده است.
لیز فراصوتی پلاسمای غنی از پلاکت (PRP)
اثرات لیز فراصوتی
تیمار فراصوتی سرم خون موجب لیز یکنواخت پلاکت‌ها برای آزادسازی فاکتورهای رشد محبوس در آن‌ها می‌شود (فاکتور رشد AB (PDGF-AB)، فاکتور رشد AA (PDGF-AA)، فاکتور رشد BB (PDGF-BB)، فاکتور رشد اندوتلیال عروقی (VEGF)، فاکتور رشد تغییردهندهٔ β (TGF-β)، فاکتور رشد اپیدرمی (EGF)، فاکتور رشد شبه‌انسولین (IGF)، فاکتور رشد سلول‌های اپی‌تلیال ECGF و فاکتور رشد فیبروبلاستی (FGF)). پلاکت‌ها و گرانول‌های آلفای آن‌ها با فراصوت‌دهی و با استفاده از پدیدهٔ کاویتاسیون آکوستیکی تخریب می‌شوند. استفاده از کاویتاسیون فراصوتی برای لیز پلاکت‌ها، اثر منفی احتمالی روش انجماد و ذوب مکرر بر فعالیت فاکتورهای رشد را کاهش می‌دهد.
پروتکل تهیهٔ فراصوتی PRP
حدود 16mL از نمونهٔ خون اتولوگ تازه‌جمع‌آوری‌شده را در یک لوله به‌آرامی 8–10 بار وارونه کنید تا خون و مواد ضدانعقاد به‌خوبی مخلوط شوند. سپس نمونه به‌مدت 20 min در دمای اتاق با 1800 g سانتریفیوژ می‌شود. پس از سانتریفیوژ، پلاکت‌ها و سلول‌های تک‌هسته‌ای لایه‌ای سفیدفام در پایین لایهٔ پلاسما تشکیل می‌دهند که پلاسمای غنی از پلاکت (PRP) نامیده می‌شود. لایهٔ بالایی، پلاسمای کم‌پلاکت (PPP) نام دارد. سلول‌های تک‌هسته‌ای را می‌توان حذف کرد یا در نمونه باقی گذاشت. اغلب این سلول‌ها در نمونهٔ PRP باقی می‌مانند تا از مراحل اضافی که خطر آلودگی دارند، جلوگیری شود.
توجه: تیمار فراصوتی PRP اتولوگ باید در شرایط استریل انجام شود.
PRP و PPP از یکدیگر جدا و جمع‌آوری می‌شوند. به PPP مقدار 1٫5mL محلول کلرید کلسیم 10% و به PRP مقدار 0٫5mL اتانول 5% افزوده می‌شود. هر دو سوسپانسیون به‌آرامی هم زده می‌شوند و به‌مدت 5 min در دمای اتاق ساکن می‌مانند. در پایان، 1mL از PPP به سوسپانسیون PRP افزوده می‌شود و مخلوط تا تشکیل لختهٔ فیبرین ساکن می‌ماند.
تیمار فراصوتی: از آنجا که ژل پلاکتی تشکیل‌شده به‌عنوان مخزنی برای فاکتورهای رشد آزادشده عمل می‌کند، ژل فیبرین باید تخریب شود تا فاکتورهای رشد موجود آزاد شوند. پارامترهای لیز فراصوتی و آزادسازی فاکتورهای رشد به شرح زیر است: با استفاده از دستگاه UP200Ht یا UP200St (200W, 26kHz) مجهز به سونوتْرود S26d2، نمونهٔ داخل لوله را فراصوت‌دهی کنید. برای جلوگیری از گرم‌شدن بیش‌ازحد نمونهٔ خون، می‌توان فراصوت‌دهی را در چرخه‌های پالسی انجام داد (برای مثال، 10 sec. روشن و 30 sec. خاموش). نمونه باید برای خنک‌شدن روی یخ قرار گیرد تا دما در حالت بهینه بین 2–5°C نگه داشته شود. پس از فراصوت‌دهی، نمونه به‌مدت 5 min. در دمای اتاق با 16٬000 g سانتریفیوژ می‌شود. مایع رویی جمع‌آوری می‌شود و می‌توان آن را در -70°C نگهداری کرد.
در روش مبتنی بر فراصوت‌دهی، غلظت پلاکت‌ها در فراکسیون PRP در مقایسه با میانگین شمار پلاکت‌ها در خون کامل که در منابع علمی گزارش شده است، 1٫7–4٫5 برابر افزایش یافت.
PRP همراه با درمان با سلول‌های بنیادی مشتق از بافت چربی به کار رفته است (سلول‌های بنیادی اتولوگ آزادشده از بافت چربی با استفاده از فراصوت، با PRP مخلوط شده و برای ترمیم، دوباره به بافت بیمار تزریق می‌شوند).
تجهیزات فراصوتی
Hielscher Ultrasonics در زمینهٔ فناوری فراصوت پیشرفته و قابل‌اعتماد تخصص دارد. دستگاه‌های فراصوتی ما در سراسر جهان برای لیز، استخراج و آماده‌سازی نمونه – به روش‌های مستقیم و غیرمستقیم – به کار می‌روند. لوازم جانبی قابل اتوکلاو و همچنین یک‌بارمصرف انجام تیمار عاری از آلودگی نمونه‌های خون اتولوگ را تضمین می‌کنند. بیشتر سامانه‌های ما را می‌توان برای لیز فراصوتی سلول‌های بنیادی و PRP به کار برد که این امر دستگاه‌های فراصوتی ما را از نظر اقتصادی نیز کارآمدتر می‌کند.
جدول زیر دستگاه‌های فراصوتی مناسب ما برای تهیهٔ پلاسمای غنی از پلاکت و حجم نمونهٔ توصیه‌شده برای هر یک را نشان می‌دهد. سونیکاتورهای بزرگ‌تر و سامانه‌های سفارشی نیز موجودند.
| دستگاه | توان [W] | فرکانس [kHz] | نوع | حجم [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | مستقل | 0٫5 | – | 1٫5 |
| UP50H | 50 | 30 | قابل نگه‌داشتن در دست یا نصب روی پایه | 0٫01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | قابل نگه‌داشتن در دست یا نصب روی پایه | 0٫01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | قابل نگه‌داشتن در دست یا نصب روی پایه | 0٫1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | نصب‌شونده روی پایه | 0٫1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | نصب‌شونده روی پایه | 5٫0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | مستقل | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | سلول جریان عاری از آلودگی | |||
همین امروز با ما تماس بگیرید! خوشحال می‌شویم در یافتن دستگاه فراصوتی بهینه به شما کمک کنیم!
با ما تماس بگیرید! / از ما بپرسید!
GDmini2 متصل به مبدل UP200St-TD (200 وات)
منابع و مراجع
- فورتوناتو ، تی ام ؛ بلترامی، چ.; امانوئلی، سی. د بانک، PA:; Pula، G. (2016): ژل لیزات پلاکتی و اجداد اندوتلیال تشکیل شبکه میکروواسکولار را در شرایط آزمایشگاهی تحریک می کنند: پیامدهای مهندسی بافت. Sci. Rep. 6، 2016.
- حمید، کارشناسی ارشد; یوسف، اشریل; علی، محمد رازیف محمد (2014): پلاسمای غنی از پلاکت (PRP) برای آسیب حاد عضلانی: یک بررسی سیستماتیک. PLOS ONE جلد 9 ، شماره 2 ، 2014.
دانستنی‌های مفید
پلاسمای غنی از پلاکت
پلاسمای غنی از پلاکت حاوی فاکتور رشد AB (PDGF-AB)، فاکتور رشد مشتق از پلاکت AA (PDGF-AA)، فاکتور رشد مشتق از پلاکت BB (PDGF-BB)، فاکتور رشد اندوتلیال عروقی (VEGF)، فاکتور رشد تغییردهندهٔ β (TGF-β)، فاکتور رشد اپیدرمی (EGF)، فاکتور رشد شبه‌انسولین (IGF)، فاکتور رشد سلول‌های اپی‌تلیال ECGF و فاکتور رشد فیبروبلاستی (FGF) است که محرک‌های مهم رشد و نوسازی سلولی هستند.
سرم اتولوگ آماده‌سازی‌شده (ACS)
پلاسمای اتولوگ آماده‌سازی‌شده (ACP)، پلاسمای غنی از پلاکتی است که از خون اتولوگ استخراج می‌شود و برای کمک به بازسازی در انواع عارضه‌های ارتوپدی و اعمال جراحی به کار می‌رود. سرم آماده‌سازی‌شده با جداسازی پلاسما از دیگر اجزای خون (مانند گلبول‌های قرمز) و تغلیظ آن تهیه می‌شود. ACP نوعی پلاسمای غنی از پلاکت (PRP) است. PRP اصطلاحی عمومی برای نوعی پلاسماست که غلظت ترومبوسیت‌های آن در مقایسه با خون کامل به‌طور چشمگیری بیشتر است. این پلاسما از خون کامل استخراج می‌شود. اجزای اصلی ACP شامل ترومبوسیت‌ها (پلاکت‌ها) و چندین فاکتور رشد است که در فرآیندهای بهبود کلیدی هستند. برخلاف دیگر فرمولاسیون‌های پلاسمای غنی از پلاکت، ویژگی متمایز ACP غلظت پایین گلبول‌های سفید مانند گرانولوسیت‌های نوتروفیل است که حضور آن‌ها در غلظت‌های بالا می‌تواند به فرآیند بهبود آسیب برساند.
تزریق پلاسمای غنی از پلاکت
پلاسمای غنی از پلاکت به‌صورت تزریقی در پزشکی بازساختی و همچنین در روش‌های زیبایی به کار می‌رود. کاربرد PRP نویدبخش تسریع چشمگیر ترمیم و بازیابی عضلات است. افزون بر این، برای درمان التهاب، آرتریت، درد، زخم‌ها، زخم‌های باز با روند بهبود کند و سوختگی‌های شدید پوستی با موفقیت استفاده می‌شود. PRP حاوی میزان بالایی از فاکتورهای رشد است که سلول‌های در حال ترمیم را تحریک و از آن‌ها محافظت می‌کنند تا بافت آسیب‌دیده ترمیم شود.
در درمان‌های زیبایی، اثربخشی PRP برای تحریک رشد مو و نوسازی پوست (که با نام درمان خون‌آشامی نیز شناخته می‌شود) نشان داده شده است.
فاکتورهای رشد مشتق از پلاکت (PDGF)
اصطلاح فاکتور رشد مشتق از پلاکت (PDGF) به فاکتورهای PDGF-A، PDGF-B، PDGF-C و PDGF-D اشاره دارد. این یک شبکهٔ پیام‌رسانی متشکل از چهار لیگاند (PDGF-A، PDGF-B، PDGF-C و PDGF-D) و دو گیرندهٔ PDGFR-alpha و PDGFR-beta است.
فاکتورهای رشد، یا پروتئین‌ها، رشد و تقسیم سلولی را تنظیم می‌کنند. این فاکتور به‌عنوان میتوژن اصلی موجود در سرم پستانداران که هنگام تشکیل لخته از پلاکت‌ها آزاد می‌شود، نقش چشمگیری در تشکیل رگ‌های خونی (رگ‌زایی)، یعنی رشد رگ‌های خونی از بافت رگ‌های خونی ازپیش‌موجود، دارد.