Preparación ultrasónica de suero rico en plaquetas

  • El plasma rico en plaquetas (PRP) es plasma sanguíneo enriquecido con plaquetas, que se utiliza para tratamientos médicos y estéticos.
  • La lisis y acondicionamiento por ultrasonidos es un método muy eficaz para preparar plasma rico en plaquetas.
  • Hielscher Ultrasonics ofrece diversos sistemas de ultrasonidos que se adaptan a los requisitos del tratamiento de la sangre (por ejemplo, para la preparación interior y exterior de una sala blanca).

Suero rico en plaquetas

La sonicación es un método fiable y sencillo para lisar las plaquetas en suero sanguíneo autólogo con el fin de liberar los factores de crecimiento. Las fracciones derivadas de las plaquetas – también conocido como suero autólogo condicionado (SCA) – se utilizan para la reparación de tejidos o tratamientos estéticos. Para obtener resultados óptimos, el PRP se enriquece antes de la inyección.
Para preparar plasma enriquecido con factores de crecimiento celular, la sonicación es un método muy eficaz y eficiente para lisar las membranas celulares y liberar casi por completo los factores de crecimiento celular de las plaquetas. Mediante la lisis y el acondicionamiento por ultrasonidos, se puede utilizar incluso sangre anticoagulada.
El acondicionamiento del PRP mediante sonicación es una forma cómoda y rentable de obtener factores de crecimiento concentrados.

Preparación ultrasónica de plasma rico en plaquetas (PRP) © Fortunato, T. M. et al. (2016)

Lisis ultrasónica del plasma rico en plaquetas (PRP)

Efectos de la lisis ultrasónica

El tratamiento ultrasónico del suero sanguíneo produce una lisis homogénea de las plaquetas para liberar los factores de crecimiento atrapados (factor de crecimiento AB (PDGF-AB), factor de crecimiento AA (PDGF-AA), factor de crecimiento BB (PDGF-BB), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento transformante β (TGF-β), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento similar a la insulina (IGF), factor de crecimiento de células epiteliales ECGF y factor de crecimiento fibroblástico (FGF)). Las plaquetas y sus gránulos alfa se desorganizan por sonicación, mediante el fenómeno de cavitación acústica. El uso de la cavitación ultrasónica para la lisis de las plaquetas disminuye el posible impacto negativo sobre la actividad del factor de crecimiento del método repetido de congelación-descongelación.

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Protocolo para la preparación ultrasónica de PRP

Insonificador tipo sonda UP200St para lisisAproximadamente 16mL de muestra de sangre autóloga recién recogida se invierte suavemente 8-10 veces en un tubo para que la sangre y los anticoagulantes se mezclen bien. Después, la muestra se centrifuga a 1800 g durante 20 min a temperatura ambiente. Tras la centrifugación, las plaquetas y las células mononucleares forman una capa blanquecina en la parte inferior de la capa de plasma, que se conoce como plasma rico en plaquetas (PRP). La capa superior se conoce como plasma pobre en plaquetas (PPP). Las células mononucleares pueden eliminarse o permanecer en la muestra. A menudo, las células mononucleares permanecen en la muestra de PRP para evitar pasos adicionales, que conllevan el riesgo de contaminación.
Nota: El tratamiento ultrasónico del PRP autólogo debe realizarse en condiciones estériles.
Se separan y recogen el PRP y el PPP. Al PPP se le añade 1,5mL de solución de cloruro cálcico al 10%, mientras que al PRP se le añaden 0,5mL de etanol al 5%. Ambas suspensiones se agitan suavemente y se dejan reposar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Por último, se añade 1mL de PPP a la suspensión de PRP y se deja reposar hasta que se forme un coágulo de fibrina.
Tratamiento ultrasónico: Como el gel de plaquetas formado actúa como reservorio de los factores de crecimiento liberados, el gel de fibrina debe romperse para liberar los factores de crecimiento disponibles. Los parámetros para la lisis ultrasónica y la liberación de factores de crecimiento son los siguientes: Sonicar con un UP200Ht o UP200St (200W, 26kHz) con el sonotrodo S26d2 la muestra en el tubo. Para evitar el sobrecalentamiento de la muestra de sangre, la sonicación puede realizarse en ciclos pulsantes (por ejemplo, 10 seg. encendido, 30 seg. apagado). La muestra debe colocarse en hielo para su enfriamiento, de modo que la temperatura se mantenga de forma óptima entre 2 – 5°C. Tras la sonicación, la muestra se centrifuga a 16000 g durante 5 min. a temperatura ambiente. El sobrenadante se recoge y puede almacenarse a -70°C.
La concentración de plaquetas en la fracción PRP se enriqueció 1,7 – 4,5 veces en el método sonicado cuando se compara con el recuento medio de plaquetas en sangre total de la bibliografía.

El PRP se ha combinado con la terapia de células madre derivadas de tejido adiposo (células madre autólogas liberadas por ultrasonidos a partir de tejido adiposomezclado con PRP e inyectado de nuevo en el tejido del paciente para su reparación).

Equipo ultrasónico

El dispositivo ultrasónico VialTweeter permite preparar simultáneamente muestras con hasta 10 viales bajo las mismas condiciones (haga clic para ampliar).Hielscher Ultrasonics es experto en tecnología ultrasónica sofisticada y fiable. Nuestros dispositivos ultrasónicos se utilizan en todo el mundo para la lisis, extracción y preparación de muestras. – directa e indirecta. Autoclavable así como desechable accesorios garantizan una libre de contaminación tratamiento de muestras de sangre autóloga. La mayoría de nuestros sistemas pueden utilizarse para la lisis ultrasónica de células madre y PRP, lo que hace que nuestros dispositivos ultrasónicos sean económicamente aún más eficaces.
Esta tabla enumera nuestros dispositivos ultrasónicos, que son adecuados para la preparación de plasma rico en plaquetas, y su volumen de muestra recomendado, respectivamente. También hay disponibles ultrasonicadores más grandes y sistemas personalizados.

Dispositivo Potencia [W] Frec. [kHz] Tipo Volumen [mL]
VialTweeter 200 26 autónomo 0,5 1,5
UP50H 50 30 manual o en soporte 0,01 250
UP100H 100 30 manual o en soporte 0,01 500
UP200Ht 200 26 manual o en soporte 0,1 1000
UP200St 200 26 en soporte 0,1 1000
UP400St 400 24 en soporte 5,0 2000
UP200St-SonoPaso 200 26 autónomo 30 500
GDmini2 200 26 Celda de flujo estéril

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GDmini2 con transductor UP200St-TD (200 vatios) para una sonicación sin contaminación

GDmini2 con transductor UP200St-TD (200 W)

Literatura/Referencias

  • Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): El gel de lisado de plaquetas y los progenitores endoteliales estimulan la formación de redes microvasculares in vitro: implicaciones para la ingeniería de tejidos. Sci. Rep. 6, 2016.
  • Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Plasma rico en plaquetas (PRP) para la lesión muscular aguda: A Systematic Review. PLOS ONE Volumen 9, Número 2, 2014.


Información interesante

Plasma rico en plaquetas

El plasma rico en plaquetas contiene factor de crecimiento AB (PDGF-AB), factor de crecimiento derivado de plaquetas AA (PDGF-AA), factor de crecimiento derivado de plaquetas BB (PDGF-BB), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento transformante β (TGF-β), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento similar a la insulina (IGF), factor de crecimiento de células epiteliales ECGF y factor de crecimiento fibroblástico (FGF), que son importantes estimulantes del crecimiento y la renovación celular.

Suero autólogo condicionado (SCA)

El plasma autólogo condicionado (ACP) es un plasma rico en plaquetas que se extrae de sangre autóloga y que se utiliza para favorecer la regeneración en diversas afecciones ortopédicas y procedimientos quirúrgicos. El suero condicionado se prepara separando el plasma de los demás componentes sanguíneos (como los eritrocitos) y concentrándolo. El ACP es un plasma rico en plaquetas (PRP). PRP es un término general para un tipo de plasma que contiene una concentración significativamente mayor de trombocitos en comparación con la sangre total. Se extrae de la sangre total. Los principales componentes del PRP son los trombocitos (plaquetas) y varios factores de crecimiento que desempeñan un papel importante en el proceso de cicatrización. A diferencia de otras formulaciones de plasma rico en plaquetas, el ACP se distingue por una baja concentración de glóbulos blancos, como los granulocitos neutrófilos, que pueden ser perjudiciales para el proceso de cicatrización cuando están presentes en altas concentraciones.

Inyecciones de plasma rico en plaquetas

El plasma rico en plaquetas se utiliza como inyección en medicina regenerativa, así como en procedimientos cosméticos. La aplicación de PRP promete una aceleración significativa de la cicatrización y la recuperación muscular. Además, se utiliza con éxito para tratar inflamaciones, artritis, dolor, heridas, heridas abiertas de cicatrización lenta y quemaduras graves de la piel. El PRP contiene un alto nivel de factores de crecimiento, que estimulan y protegen las células curativas para que se repare el tejido dañado.
En tratamientos cosméticos, el PRP ha demostrado su eficacia para estimular el crecimiento del cabello y la renovación de la piel (también conocido como tratamiento vampiro).

Factores de crecimiento derivados de las plaquetas (PDGF)

El término factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) hace referencia a los factores PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C y PDGF-D. Se trata de una red de señalización de cuatro ligandos (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C y PDGF-D), y dos receptores, PDGFR-alfa y PDGFR-beta.
Los factores de crecimiento, o proteínas, regulan el crecimiento y la división celular. Como principal mitógeno presente en el suero de los mamíferos, que se libera de las plaquetas durante la formación de coágulos, desempeña un papel importante en la formación de vasos sanguíneos (angiogénesis), el crecimiento de vasos sanguíneos a partir de tejido vascular ya existente.

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