Hielscher – Tecnología de Ultrasonidos

Preparación ultrasónica de suero rico en plaquetas

  • El plasma rico en plaquetas (PRP) es plasma sanguíneo que ha sido enriquecido con plaquetas, que se utiliza para tratamientos médicos y estéticos.
  • La lisis ultrasónica y el acondicionamiento es un método muy efectivo para preparar plasma rico en plaquetas.
  • Hielscher Ultrasonics ofrece varios sistemas de ultrasonidos que se adaptan a las necesidades del tratamiento de la sangre (por ejemplo, para la preparación interior y exterior de una sala blanca).

Suero rico en plaquetas

La sonicación es un método fiable y fácil para lisar las plaquetas en suero sanguíneo autólogo con el fin de liberar los factores de crecimiento. Las fracciones derivadas de plaquetas – también conocido como suero autólogo acondicionado (ACS) – se utilizan para la reparación de tejidos o tratamientos estéticos. Para obtener resultados óptimos, el PRP se enriquece antes de la inyección.
Para preparar plasma enriquecido con factores de crecimiento celular, la sonicación es un método muy eficaz y eficiente para lisar las membranas celulares y liberar casi todos los factores de crecimiento celular de las plaquetas. Mediante la lisis ultrasónica y el acondicionamiento, se puede utilizar incluso sangre anticoagulada.
El acondicionamiento del PRP mediante sonicación es una forma conveniente y rentable de obtener resultados en factores de crecimiento concentrados.

Preparación ultrasónica de plasma rico en plaquetas (PRP) © Fortunato, T. M. et al.

Lisis ultrasónica del plasma rico en plaquetas (PRP)

Efectos de la lisis ultrasónica

El tratamiento ultrasónico del suero sanguíneo da como resultado una lisis homogénea de las plaquetas para liberar los factores de crecimiento atrapados (factor de crecimiento AB (PDGF-AB), factor de crecimiento AA (PDGF-AA), factor de crecimiento BB (PDGF-BB), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento transformante β (TGF-β), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento similar a la insulina (IGF), factor de crecimiento de células epiteliales ECGF y factor de crecimiento fibroblástico (FGF). Las plaquetas y sus alfa-gránulos son interrumpidos por sonicación, utilizando el fenómeno de cavitación acústica. El uso de la cavitación ultrasónica para la lisis plaquetaria disminuye el posible impacto negativo sobre la actividad del factor de crecimiento del método de congelación-deshielo repetido.

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Protocolo para la preparación de PRP ultrasónico

Insonificador de sonda UP200St para lisisAprox. 16 ml de muestra de sangre autóloga recién extraída se invierten suavemente de 8 a 10 veces en un tubo para que la sangre y los anticoagulantes se mezclen bien. A continuación, la muestra se centrifuga a 1800 g durante 20 minutos a temperatura ambiente. Después de la centrifugación, las plaquetas y las células mononucleares forman una capa blanquecina en la parte inferior de la capa plasmática, que se conoce como plasma rico en plaquetas (PRP). La capa superior se conoce como plasma pobre en plaquetas (PPP). Las células mononucleares se pueden extraer o permanecer en la muestra. A menudo, las células mononucleares permanecen en la muestra de PRP para evitar pasos adicionales, que conllevan el riesgo de contaminación.
Nota: El tratamiento ultrasónico del PRP autólogo debe realizarse en condiciones estériles.
El PRP y el PPP se separan y se recogen. Al PPP se le añade 1,5 ml de solución de cloruro de calcio al 10%, mientras que al PRP se le añade 0,5 ml de etanol al 5%. Ambas suspensiones se agitan suavemente y se dejan reposar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Finalmente, se añade 1mL de PPP a la suspensión de PRP y se deja reposar hasta que se forme un coágulo de fibrina.
Tratamiento ultrasónico: Como el gel de plaquetas formado actúa como reservorio de los factores de crecimiento liberados, el gel de fibrina debe ser interrumpido para liberar los factores de crecimiento disponibles. Los parámetros para la lisis ultrasónica y la liberación del factor de crecimiento son los siguientes: Sonicate con un UP200Ht o UP200St (200W, 26kHz) con el sonotrodo S26d2 la muestra en el tubo. Para evitar el sobrecalentamiento de la muestra de sangre, la sonicación puede realizarse en ciclos de pulsos (por ejemplo, 10 seg. encendido, 30 seg. apagado). La muestra debe colocarse en hielo para su enfriamiento, de modo que la temperatura se mantenga de forma óptima entre 2 °C y 2 °C. – 5°C. Después de la sonicación, la muestra se centrifuga a 16000 g durante 5 min. a temperatura ambiente. El sobrenadante se recoge y puede almacenarse a -70°C.
La concentración de plaquetas en la fracción PRP fue enriquecida 1,7 – 4.5 veces el método de sonicación cuando se compara con el recuento plaquetario promedio de la literatura en la sangre total.

La PRP se ha combinado con la terapia con células madre derivadas de la adiposa (células madre autólogas liberadas por ultrasonido del tejido adiposomezclado con PRP, y se inyecta de nuevo en el tejido del paciente para su reparación).

Equipo ultrasónico

El dispositivo ultrasónico VialTweeter permite preparar simultáneamente muestras con hasta 10 viales bajo las mismas condiciones (haga clic para ampliar).Hielscher Ultrasonics es experto en tecnología ultrasónica sofisticada y fiable. Nuestros equipos de ultrasonidos se utilizan en todo el mundo para la lisis, extracción y preparación de muestras. – por directo e indirecto. Autoclavable así como desechable los accesorios aseguran una libre de contaminación tratamiento de muestras de sangre autóloga. La mayoría de nuestros sistemas se pueden utilizar para la lisis ultrasónica de células troncales y PRP, lo que hace que nuestros dispositivos ultrasónicos sean aún más eficientes económicamente.
La siguiente tabla enumera nuestros dispositivos ultrasónicos, que son adecuados para la preparación de plasma rico en plaquetas, y su volumen de muestra recomendado, respectivamente. También hay disponibles ultrasonidos más grandes y sistemas personalizados.

Dispositivo Potencia [W] Frec. [kHz] Tipo Volumen [mL]
VialTweeter 200 26 autónomo 0,5 1,5
UP50H 50 30 manual o en soporte 0,01 250
UP100H 100 30 manual o en soporte 0,01 500
UP200Ht 200 26 manual o en soporte 0,1 1000
UP200St 200 26 en soporte 0,1 1000
UP400St 400 24 en soporte 5,0 2000
UP200St-SonoStep 200 26 autónomo 30 500
GDmini2 200 26 Celda de flujo estéril

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GDmini2 en el transductor UP200St-TD (200 vatios) para una sonicación sin contaminación

GDmini2 con transductor UP200St-TD (200 W)

Literatura/Referencias

  • Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): El gel lisado de plaquetas y los progenitores endoteliales estimulan la formación de redes microvasculares in vitro: implicaciones de la ingeniería tisular. Rep. Científica 6, 2016.
  • Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Plasma rico en plaquetas (PRP) para la lesión muscular aguda (Revisión Cochrane traducida): Una revisión sistemática. PLOS ONE Volumen 9, Edición 2, 2014.


Información interesante

Plasma rico en plaquetas

El plasma rico en plaquetas contiene el factor de crecimiento AB (PDGF-AB), el factor de crecimiento derivado de plaquetas AA (PDGF-AA), el factor de crecimiento derivado de plaquetas BB (PDGF-BB), el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de crecimiento transformante β (TGF-β), el factor de crecimiento epidérmico (EGF), el factor de crecimiento similar al de la insulina (IGF), el factor de crecimiento de las células epiteliales ECGF y el factor de crecimiento de las células fibroblásticas (FGF), los cuales son importantes factores estimulantes del crecimiento y de la renovación celular.

Suero Autólogo Acondicionado (ACS)

El plasma condicionado autólogo (ACP) es un plasma rico en plaquetas que se extrae de la sangre autóloga y que se utiliza para apoyar la regeneración en una variedad de condiciones ortopédicas y procedimientos quirúrgicos. El suero acondicionado se prepara separando el plasma de los otros componentes sanguíneos (como los eritrocitos) y concentrándolo. El ACP es un plasma rico en plaquetas (PRP). PRP es un término general para un tipo de plasma que contiene una concentración significativamente mayor de trombocitos en comparación con la sangre entera. Se extrae de la sangre entera. Los principales componentes del ACP incluyen trombocitos (plaquetas) y varios factores de crecimiento que juegan un papel importante en el proceso de curación. A diferencia de otras formulaciones plasmáticas ricas en plaquetas, el ACP se distingue por una baja concentración de glóbulos blancos, como los granulocitos de neutrófilos, que pueden ser perjudiciales para el proceso de curación cuando están presentes en altas concentraciones.

Inyecciones de plasma rico en plaquetas

El plasma rico en plaquetas se utiliza como inyección en medicina regenerativa y en procedimientos cosméticos. La aplicación de PRP promete una aceleración significativa de la curación muscular y la recuperación muscular. Además, se utiliza con éxito para tratar la inflamación, la artritis, el dolor, las heridas, las heridas abiertas de curación lenta y las quemaduras graves de la piel. El PRP contiene un alto nivel de factores de crecimiento, que estimulan y protegen las células en curación para que el tejido dañado sea reparado.
Para los tratamientos cosméticos, el PRP ha demostrado ser eficaz para estimular el crecimiento del cabello, la renovación de la piel (también conocido como tratamiento de vampiros).

Factores de crecimiento derivados de plaquetas (PDGF)

El término factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) se refiere a los factores PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C y PDGF-D. Es una red de señalización de cuatro ligandos (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C y PDGF-D), y dos receptores, PDGFR-alfa y PDGFR-beta.
Los factores de crecimiento, o proteínas, regulan el crecimiento y la división celular. Como el mitógeno principal que se encuentra en el suero de los mamíferos, que se libera de las plaquetas durante la formación de coágulos, desempeña un papel importante en la formación de vasos sanguíneos (angiogénesis), el crecimiento de los vasos sanguíneos a partir del tejido de los vasos sanguíneos ya existente.