Preparación ultrasónica de suero rico en plaquetas

• El plasma rico en plaquetas (PRP) es plasma sanguíneo enriquecido con plaquetas que se utiliza para tratamientos médicos y estéticos.
• La lisis y acondicionamiento por ultrasonidos es un método muy eficaz para preparar plasma rico en plaquetas.
• Hielscher Ultrasonics ofrece diversos sistemas ultrasónicos que se adaptan a los requisitos del tratamiento de la sangre (por ejemplo, para la preparación interior y exterior de una sala blanca).

Suero rico en plaquetas

La sonicación es un método fiable y sencillo para lisar las plaquetas en suero sanguíneo autólogo con el fin de liberar los factores de crecimiento. Las fracciones derivadas de las plaquetas – también conocido como suero autólogo condicionado (SCA) – se utilizan para la reparación de tejidos o tratamientos estéticos. Para obtener resultados óptimos, el PRP se enriquece antes de la inyección.
Para preparar plasma enriquecido con factores de crecimiento celular, la sonicación es un método muy eficaz y eficiente para lisar las membranas celulares y liberar casi por completo los factores de crecimiento celular de las plaquetas. Mediante la lisis y el acondicionamiento por ultrasonidos, se puede utilizar incluso sangre anticoagulada.
El acondicionamiento del PRP mediante sonicación es una forma cómoda y rentable de obtener factores de crecimiento concentrados.

Lisis ultrasónica del plasma rico en plaquetas (PRP)

Efectos de la lisis ultrasónica

El tratamiento ultrasónico del suero sanguíneo produce una lisis homogénea de las plaquetas para liberar los factores de crecimiento atrapados (factor de crecimiento AB (PDGF-AB), factor de crecimiento AA (PDGF-AA), factor de crecimiento BB (PDGF-BB), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento transformante β (TGF-β), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento similar a la insulina (IGF), factor de crecimiento de células epiteliales ECGF y factor de crecimiento fibroblástico (FGF)). Las plaquetas y sus gránulos alfa se desorganizan por sonicación, mediante el fenómeno de cavitación acústica. El uso de la cavitación ultrasónica para la lisis de las plaquetas disminuye el posible impacto negativo sobre la actividad del factor de crecimiento del método repetido de congelación-descongelación.

Protocolo para la preparación ultrasónica de PRP

Aproximadamente 16mL de muestra de sangre autóloga recién recogida se invierte suavemente 8-10 veces en un tubo para que la sangre y los anticoagulantes se mezclen bien. Después, la muestra se centrifuga a 1800 g durante 20 min a temperatura ambiente. Tras la centrifugación, las plaquetas y las células mononucleares forman una capa blanquecina en la parte inferior de la capa de plasma, que se conoce como plasma rico en plaquetas (PRP). La capa superior se conoce como plasma pobre en plaquetas (PPP). Las células mononucleares pueden eliminarse o permanecer en la muestra. A menudo, las células mononucleares permanecen en la muestra de PRP para evitar pasos adicionales, que conllevan el riesgo de contaminación.
Nota: El tratamiento ultrasónico del PRP autólogo debe realizarse en condiciones estériles.
Se separan y recogen el PRP y el PPP. Al PPP se le añade 1,5mL de solución de cloruro cálcico al 10%, mientras que al PRP se le añaden 0,5mL de etanol al 5%. Ambas suspensiones se agitan suavemente y se dejan reposar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Por último, se añade 1mL de PPP a la suspensión de PRP y se deja reposar hasta que se forme un coágulo de fibrina.
Tratamiento ultrasónico: Dado que el gel de plaquetas formado actúa como reservorio de los factores de crecimiento liberados, el gel de fibrina debe romperse para liberar los factores de crecimiento disponibles. Los parámetros para la lisis ultrasónica y la liberación de factores de crecimiento son los siguientes: Sonicar con un UP200Ht o UP200St (200W, 26kHz) con el sonotrodo S26d2 la muestra en el tubo. Para evitar el sobrecalentamiento de la muestra de sangre, la sonicación puede realizarse en ciclos pulsantes (por ejemplo, 10 seg. encendido, 30 seg. apagado). La muestra debe colocarse en hielo para su enfriamiento, de modo que la temperatura se mantenga de forma óptima entre 2 – 5°C. Tras la sonicación, la muestra se centrifuga a 16000 g durante 5 min. a temperatura ambiente. El sobrenadante se recoge y puede almacenarse a -70°C.
La concentración de plaquetas en la fracción PRP se enriqueció 1,7 – 4,5 veces en el método sonicado cuando se compara con el recuento medio de plaquetas en sangre total de la bibliografía.

El PRP se ha combinado con la terapia de células madre derivadas de tejido adiposo (células madre autólogas liberadas por ultrasonidos a partir de tejido adiposomezclado con PRP e inyectado de nuevo en el tejido del paciente para su reparación).

Equipo ultrasónico

Hielscher Ultrasonics es experto en tecnología ultrasónica sofisticada y fiable. Nuestros dispositivos ultrasónicos se utilizan en todo el mundo para la lisis, extracción y preparación de muestras. – directa e indirecta. Autoclavable así como desechable accesorios garantizan una libre de contaminación tratamiento de muestras de sangre autóloga. La mayoría de nuestros sistemas pueden utilizarse para la lisis ultrasónica de células madre y PRP, lo que hace que nuestros dispositivos ultrasónicos sean económicamente aún más eficaces.
Esta tabla enumera nuestros dispositivos ultrasónicos, que son adecuados para la preparación de plasma rico en plaquetas, y su volumen de muestra recomendado, respectivamente. También hay disponibles ultrasonicadores más grandes y sistemas personalizados.

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