Preparación ultrasónica de suero rico en plaquetas

• El plasma rico en plaquetas (PRP) es plasma sanguíneo enriquecido con plaquetas que se utiliza en tratamientos médicos y estéticos.
• La lisis y el acondicionamiento por ultrasonidos constituyen un método muy eficaz para preparar plasma rico en plaquetas.
• Hielscher Ultrasonics ofrece diversos sistemas ultrasónicos que cumplen los requisitos del tratamiento de la sangre (p. ej., para la preparación dentro y fuera de una sala limpia).

Suero rico en plaquetas

La sonicación es un método fiable y sencillo para lisar las plaquetas del suero sanguíneo autólogo y liberar los factores de crecimiento. Las fracciones derivadas de las plaquetas –también conocidas como suero autólogo acondicionado (ACS)– se utilizan para la reparación de tejidos o en tratamientos estéticos. Para obtener resultados óptimos, el PRP se enriquece antes de la inyección.
Para preparar plasma enriquecido con factores de crecimiento celular, la sonicación es un método muy eficaz y eficiente que permite lisar las membranas celulares y liberar casi todos los factores de crecimiento celular de las plaquetas. Mediante la lisis y el acondicionamiento por ultrasonidos, puede utilizarse incluso sangre anticoagulada.
El acondicionamiento del PRP mediante sonicación es una forma práctica y rentable de obtener factores de crecimiento concentrados.

Lisis ultrasónica de plasma rico en plaquetas (PRP)

Efectos de la lisis ultrasónica

El tratamiento ultrasónico del suero sanguíneo produce una lisis homogénea de las plaquetas para liberar los factores de crecimiento que contienen (factor de crecimiento AB (PDGF-AB), factor de crecimiento AA (PDGF-AA), factor de crecimiento BB (PDGF-BB), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento transformante β (TGF-β), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento similar a la insulina (IGF), factor de crecimiento de células epiteliales ECGF y factor de crecimiento fibroblástico (FGF)). Las plaquetas y sus gránulos alfa se rompen mediante sonicación, aprovechando el fenómeno de la cavitación acústica. El uso de la cavitación ultrasónica para la lisis de plaquetas reduce el posible efecto negativo del método de congelación y descongelación repetidas sobre la actividad de los factores de crecimiento.

Protocolo de preparación ultrasónica de PRP

Se invierte suavemente un tubo que contiene aproximadamente 16 mL de una muestra de sangre autóloga recién extraída 8–10 veces para mezclar bien la sangre y los anticoagulantes. A continuación, la muestra se centrifuga a 1800 g durante 20 min a temperatura ambiente. Tras la centrifugación, las plaquetas y las células mononucleares forman una capa blanquecina en la parte inferior de la capa de plasma, conocida como plasma rico en plaquetas (PRP). La capa superior se conoce como plasma pobre en plaquetas (PPP). Las células mononucleares pueden eliminarse o permanecer en la muestra. A menudo, las células mononucleares se dejan en la muestra de PRP para evitar pasos adicionales que conllevan un riesgo de contaminación.
Nota: El tratamiento ultrasónico del PRP autólogo debe realizarse en condiciones estériles.
El PRP y el PPP se separan y se recogen. Al PPP se le añaden 1,5 mL de solución de cloruro de calcio al 10%, mientras que al PRP se le añaden 0,5 mL de etanol al 5%. Ambas suspensiones se agitan suavemente y se dejan reposar durante 5 min a temperatura ambiente. Por último, se añade 1 mL de PPP a la suspensión de PRP y se deja reposar hasta que se forme un coágulo de fibrina.
Tratamiento ultrasónico: Como el gel de plaquetas formado actúa como reservorio de los factores de crecimiento liberados, el gel de fibrina debe romperse para liberar los factores de crecimiento disponibles. Los parámetros de la lisis ultrasónica y la liberación de factores de crecimiento son los siguientes: Sonique con un UP200Ht o UP200St (200 W, 26 kHz) equipado con el sonotrodo S26d2 la muestra contenida en el tubo. Para evitar el sobrecalentamiento de la muestra de sangre, la sonicación puede realizarse en ciclos de pulsos (p. ej., 10 sec. de funcionamiento y 30 sec. de pausa). La muestra debe colocarse sobre hielo para enfriarla, de modo que la temperatura se mantenga, idealmente, entre 2 – 5 °C. Tras la sonicación, la muestra se centrifuga a 16.000 g durante 5 min. a temperatura ambiente. El sobrenadante se recoge y puede almacenarse a -70 °C.
Con el método de sonicación, la concentración de plaquetas en la fracción de PRP se incrementó entre 1,7 – 4,5 veces en comparación con el recuento medio de plaquetas en sangre total indicado en la bibliografía.

El PRP se ha combinado con la terapia con células madre derivadas del tejido adiposo (células madre autólogas liberadas del tejido adiposo mediante ultrasonidos, mezcladas con PRP e inyectadas de nuevo en el tejido del paciente para su reparación).

Equipos ultrasónicos

Hielscher Ultrasonics es especialista en tecnología ultrasónica avanzada y fiable. Nuestros equipos ultrasónicos se utilizan en todo el mundo para la lisis, la extracción y la preparación de muestras mediante métodos directos e indirectos. Los accesorios esterilizables en autoclave así como desechables garantizan un tratamiento sin contaminación de las muestras de sangre autóloga. La mayoría de nuestros sistemas pueden utilizarse para la lisis ultrasónica de células madre y PRP, lo que hace que nuestros equipos ultrasónicos sean aún más eficientes desde el punto de vista económico.
La siguiente tabla enumera nuestros equipos ultrasónicos adecuados para la preparación de plasma rico en plaquetas y el volumen de muestra recomendado para cada uno. También hay disponibles sonicadores de mayor tamaño y sistemas personalizados.

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