Tecnología de ultrasonido de Hielscher

Protocolo para la desactivación del virus Coronavirus SARS-CoV-2 con sonicación

El Hielscher VialTweeter es una unidad ultrasónica única de preparación de muestras múltiples, que se utiliza para inactivar el coronavirus SARS-COV-2. El VialTweeter permite preparar hasta 10 viales de muestra simultáneamente y es por lo tanto la unidad ideal para el procesamiento de muestras en masa.

Desactivación del virus del SARS-CoV-2 con el VialTweeter

Después de retirar el fijador, las monocapas fueron lavadas tres veces con solución salina amortiguadora de fosfato (PBS) antes de raspar las células en 1mL MEM/5% FBS y sonicadas (3 × 10 segundos encendido, 10 segundos apagado al 100% de potencia y amplitud) usando el procesador ultrasónico de Hielscher UP200St con VialTweeter ...de la conexión. Los sobrenadantes se clarificaron mediante la centrifugación a 3000 × g durante 10 minutos. Read el protocolo completo aquí para la inactivación del coronavirus SARS-CoV-2 por Welch et al. (2020) abajo:

Células y virus

Las células Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) fueron cultivadas en el medio esencial mínimo (MEM) de Eagle modificado, complementado con un 10% (v/v) de suero de ternera fetal (FCS). El virus utilizado fue el SARS-CoV-2 cepa hCOV-19/Inglaterra/2/2020, aislado por PHE del primer grupo de pacientes en el Reino Unido el 29/01/2020. Este virus se obtuvo en el paso 1 y se utilizó para estudios de inactivación en el paso 2 o 3.
En cuanto a los reactivos y productos químicos utilizados para la inactivación del SARS-CoV-2, así como para la eliminación de la citotoxicidad de los reactivos, véase el informe científico de Welch y otros (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Inactivación del virus por los detergentes – Protocolo de desactivación del virus del SARS-CoV-2 por Welch et al. 2020

SARS-CoV-2 Inactivation

Para los productos comerciales, las preparaciones de virus (líquido de cultivo de tejidos, títulos que van desde 1 × 106 a 1 × 108 PFU/ml) se trataron por triplicado con reactivos a las concentraciones y para los tiempos de contacto recomendados en las instrucciones de uso de los fabricantes, cuando se disponía de ellos, o para las concentraciones y los tiempos específicamente solicitados por los laboratorios de ensayo. Cuando el fabricante proporcionó una gama de concentraciones, se ensayó la proporción más baja entre producto y muestra (es decir, la concentración más baja recomendada del producto de ensayo). Los reactivos de tubo de transporte de muestras se ensayaron utilizando una relación de un volumen de líquido de cultivo de tejidos por diez volúmenes de reactivo, a menos que el fabricante especificara una relación de volumen de líquido de muestra por reactivo. Los detergentes, fijadores y disolventes se ensayaron a las concentraciones indicadas durante los tiempos indicados. Todos los pasos de inactivación se realizaron a temperatura ambiente (18 - 25°C). Para la prueba de tipos de muestras alternativas, el virus se introdujo en la matriz de muestra indicada en una proporción de 1:9, y luego se trató con reactivos de prueba como se ha indicado anteriormente. Todos los experimentos incluían muestras de control simuladas por triplicado con un volumen equivalente de PBS en lugar del reactivo de prueba. Inmediatamente después del tiempo de contacto requerido, 1mL de la muestra tratada se procesó utilizando la matriz de filtración seleccionada adecuadamente. La eliminación del reactivo para la prueba de inactivación se llevó a cabo en un formato de columna de centrifugado más grande utilizando las columnas de centrifugado Pierce de 4mL para la eliminación de detergente (Thermo Fisher), o llenando las columnas de centrifugado Pierce de 10mL de capacidad vacías (Thermo Fisher) con SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR o Sephadex LH-20 para obtener 4mL de perlas/resina envasadas. Para la purificación mediante filtros Amicon, se purificaron 2 × 500μl muestras mediante dos filtros centrífugos por el método descrito anteriormente, y luego se unieron. Para el formaldehído y el formaldehído con eliminación de glutaraldehído, se utilizó un filtro con un volumen de muestra de 1 × 500μl, resuspendido después de ser procesado en 500μl PBS, y añadido a 400ul MEM/5% FBS. Para la inactivación de los VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmonocapas, 12,5 cm2 frascos de células Vero E6 (2,5 × 106 células/flasco en 2.5mL MEM/5% FBS) se infectaron a MOI 0.001 y se incubaron a 37°C/5% CO2 durante 24 horas. El sobrenadante fue removido, y las células se fijaron usando 5mL de formaldehído, o formaldehído y glutaraldehído a temperatura ambiente durante 15 o 60 minutos. Se quitó el fijador, y las monocapas se lavaron tres veces con PBS antes de raspar las células en 1mL MEM/5% FBS y se sonicaron (3 × 10 segundos encendido, 10 segundos apagado al 100% de potencia y amplitud) usando un UP200St con accesorio VialTweeter (Tecnología de Ultrasonido Hielscher). Los sobrenadantes fueron clarificados por centrifugación a 3000 × g durante 10 mins.

VialTweeter para la Sonicación Intensa de Ampollas Cerradas

VialTweeter para la sonicación intensa de viales cerrados

Solicitar información




Observe nuestro Política de privacidad.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Detalles del reactivo utilizado para la inactivación del coronavirus del SARS-CoV-2 con el VialTweeter ultrasónico según el protocolo de Welch et al. 2020

El protocolo completo, incluyendo el uso del Hielscher VialTweeter, se puede encontrar aquí:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter para la inactivación del virus ultrasónico

Ventajas del VialTweeter de un vistazo

  • Sonicación de hasta 10 viales simultáneamente
  • No hay contaminación cruzada
  • No hay pérdida de muestras
  • Registro automático de datos
  • Fácil y seguro de operar
El VialTweeter también se utiliza para

  • Lisis celular
  • Interrupción de partículas virales
  • Extracción de ácido nucleico: Aislamiento de ADN/ARN
  • Fragmentación de ADN/ARN
  • Solubilización de lisados
  • Desmembradores ultrasónicos sofisticados y disruptores celulares

    El ultrasonido multimuestra VialTweeter es sólo una de las muchas soluciones ultrasónicas para la preparación de muestras en laboratorios biológicos, bioquímicos y clínicos. Hielscher Ultrasonics ofrece el desmembrador ultrasónico ideal para su aplicación, por ejemplo, lisis celular, extracción de células, homogeneización de tejidos, solubilización de lisados, disolución, desgasificación de muestras, etc.
    Háganos saber cuántas muestras tiene que procesar por hora y día, si prefiere la sonicación directa o indirecta y cuál es el objetivo del tratamiento de las muestras por ultrasonidos. ¡Le recomendaremos la unidad de ultrasonidos más adecuada para su rutina de trabajo diaria!
    Los procesadores digitales de ultrasonido de Hielscher Ultrasonics están equipados con un software inteligente, registro automático de datos, opciones de preajuste fácil para el control de la temperatura, duración de la sonicación, modo de ciclo/impulso, así como iluminación de la muestra y control remoto del navegador. Nos esforzamos por hacer que nuestros dispositivos ultrasónicos sean lo más inteligentes posible para que su rutina de investigación y trabajo sea lo más conveniente y exitosa posible.
    Haga clic aquí, para encontrar más aplicaciones incluyendo protocolos de preparación de muestras ultrasónicas con el VialTweeter!

    Póngase en contacto con nosotros/Envíenos su pregunta

    Solicite más información

    Por favor, utilice el siguiente formulario para solicitar información adicional sobre los procesadores ultrasónicos, aplicaciones y precio. Estaremos encantados de discutir su proceso con usted y ofrecerle un sistema de ultrasonidos que cumpla con sus requisitos!









    Por favor, tenga en cuenta Política de privacidad.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos de alto rendimiento para aplicaciones de mezcla, dispersión, emulsificación y extracción a escala de laboratorio, piloto e industrial.

    Literatura / Referencias



    Información interesante

    ¿Qué son las células Vero?

    El Vero E6, también conocido como Vero C1008 (ATCC No. CRL-1586) es una línea de células clonadas del Vero 76 y se utiliza en la investigación de los coronavirus del SARS-CoV y del SARS-CoV-2. Las células Vero son un linaje de células utilizadas en cultivos celulares. El 'Vero’ El linaje fue aislado de células epiteliales de riñón extraídas de un mono verde africano (Chlorocebus sp.).
    Las células Vero E6 muestran cierta inhibición de contacto, por lo que son adecuadas para propagar virus que se replican lentamente. Las líneas celulares Vero E6 se utilizan comúnmente para investigar la citopatología de los coronavirus SARS-CoV y SARS-CoV-2, ya que las células Vero (células renales de mono verde africano) exhiben una expresión abundante de receptores de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2). Los receptores ACE2 son un importante sitio de acoplamiento para el coronavirus del SARS-CoV-2.
    Por ejemplo, Ogando y otros (2020) encontraron que el SARS-CoV-2 – en comparación con el SARS-CoV – generó niveles más altos de ARN viral intracelular, pero sorprendentemente se recuperó del medio de cultivo una progenie viral infecciosa 50 veces menor. Además, determinaron que la sensibilidad de los dos virus a tres inhibidores establecidos de la replicación de los coronavirus (Remdesivir, Alisporivir y cloroquina) es muy similar, pero que la infección por el SARS-CoV-2 era sustancialmente más sensible al pretratamiento de las células con interferón alfa pegilado. Una diferencia importante entre los dos virus es el hecho de que – al pasar por las células Vero E6 – El SARS-CoV-2 aparentemente está bajo una fuerte presión de selección para adquirir mutaciones adaptativas en su gen de la proteína de punta. Estas mutaciones cambian o eliminan un supuesto "sitio de clivaje similar a la furina" en la región que conecta los dominios S1 y S2 y dan lugar a un cambio fenotípico muy prominente en los ensayos de placa.