ASTM E2799-22 Protocolo para la evaluación antimicrobiana

El UIP400MTP de Hielscher es un potente y eficiente sonicador de placas de pocillos múltiples diseñado para agilizar el paso de sonicación en el protocolo ASTM E2799-22. Al suministrar energía ultrasónica uniforme en toda la placa de microtitulación, el UIP400MTP garantiza un desprendimiento consistente y fiable de las biopelículas de las tapas de las placas sin dañar las células ni comprometer la integridad de la muestra. Su capacidad de alto rendimiento y su fácil manejo reducen significativamente el tiempo de procesamiento al tiempo que mejoran la reproducibilidad, lo que lo convierte en una solución ideal para los laboratorios que realizan ensayos de viabilidad de biopelículas y pruebas de eficacia antimicrobiana.

ASTM E2799

ASTM E2799 es un método de ensayo normalizado diseñado para evaluar la eficacia de los agentes antimicrobianos contra las biopelículas, centrándose específicamente en Pseudomonas aeruginosa. Las biopelículas son comunidades microbianas complejas que se adhieren a las superficies y muestran una mayor resistencia a los tratamientos antimicrobianos, lo que las convierte en un reto importante en contextos sanitarios, industriales y medioambientales. Este método utiliza el ensayo de concentración mínima de erradicación de biopelículas (MBEC) para proporcionar un marco fiable y reproducible para probar desinfectantes en condiciones de biopelícula realistas.

¿Cómo contribuye la sonicación a la norma ASTM E2799?

La sonicación desempeña un papel fundamental en el protocolo ASTM E2799 al facilitar el desprendimiento de las biopelículas de las superficies de ensayo, garantizando una evaluación precisa de la viabilidad microbiana tras el tratamiento. Mediante el uso controlado de energía ultrasónica, el protocolo consigue una disrupción eficaz y consistente de la biopelícula sin dañar las células, lo que permite obtener resultados precisos y reproducibles. Esto convierte a la norma ASTM E2799 en una herramienta esencial para avanzar en la investigación de las biopelículas y desarrollar estrategias antimicrobianas eficaces.

Cómo realizar el ensayo MBEC de acuerdo con ASTM E2799-22

El protocolo ASTM E2799-22 describe los pasos para evaluar la eficacia de los agentes antimicrobianos contra las biopelículas. Cuando se utiliza el sonicador de microplacas UIP400MTP de Hielscher, el protocolo puede adaptarse para incorporar este método avanzado de sonicación para el desprendimiento de biopelículas. A continuación se describen los pasos adaptados al uso del sonicador de microplacas UIP400MTP:

1. Preparación de biopelículas
   Prepare una placa estéril de microtitulación de 96 pocillos con tapas desmontables.
   Inocular los pocillos con una suspensión bacteriana estandarizada en un medio de cultivo adecuado.
   Coloque la tapa de las espigas en la placa, asegurándose de que las espigas estén completamente sumergidas en la suspensión bacteriana.
   Incube la placa en condiciones controladas (por ejemplo, temperatura y tiempo) para permitir la formación de biopelículas en las clavijas.
2. Tratamiento con agentes antimicrobianos
   Tras la formación de la biopelícula, sustituya el medio por medio fresco que contenga los agentes antimicrobianos de ensayo a diferentes concentraciones.
   Vuelva a colocar la tapa de la clavija e incube en las condiciones especificadas en el diseño de la prueba.
3. Preparación para el desprendimiento del biofilm
   Después del tratamiento, enjuague la tapa de la clavija sumergiéndola en una solución de enjuague estéril para eliminar los agentes antimicrobianos residuales y las células planctónicas sueltas adheridas.
4. Desprendimiento de biopelículas con el sonicador UIP400MTP
   Preparar una nueva placa de microtitulación de 96 pocillos que contenga un medio de recuperación (por ejemplo, caldo neutralizante).
   Separe las biopelículas colocando la tapa de la clavija en los pocillos de la placa del medio de recuperación.
   Inserte la placa en el sonicador UIP400MTP, asegurándose de que la tapa y la placa están correctamente alineadas.
   Ajustar el sonicador a una amplitud del 70%-80% y sonicar durante 3-4 minutos en modo cíclico, para garantizar un desprendimiento uniforme de la biopelícula sin lisis celular.
5. Evaluación de la viabilidad del biofilm
   Tras la sonicación, procesar el medio de recuperación que contiene las células de biopelícula desprendidas utilizando técnicas microbiológicas o analíticas estándar, como por ejemplo:
   • Recuento de unidades formadoras de colonias (UFC): Realizar diluciones seriadas y colocar en placas de agar para el recuento de células viables.
   • Mediciones de la densidad óptica (DO): Utilice el análisis espectrofotométrico para evaluar la densidad celular.
   • Ensayos de viabilidad basados en fluorescencia: Cuantificación de células vivas y muertas mediante colorantes fluorescentes.
6. análisis de datos
   Comparar los datos de viabilidad de las biopelículas tratadas y no tratadas para determinar la eficacia de los agentes antimicrobianos.
   Calcular la concentración mínima de erradicación del biofilm (MBEC) basándose en la concentración necesaria para eliminar las células viables del biofilm.
7. control de calidad
   Asegúrese de que las condiciones de sonicación son consistentes calibrando regularmente el UIP400MTP y verificando que el proceso de desprendimiento del biofilm no da lugar a una lisis o destrucción celular significativa.
   Incluya controles apropiados, como biopelículas no tratadas y blancos de sólo medio, para validar los resultados.

Las células de biopelícula formadas en las agujas se desalojaron por sonicación (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Alemania, UIP250MTP) durante 5 min en placas de 96 pocillos que contenían medio de cultivo fresco para la recuperación de las células.
(Fotografía y estudio: ©de Oliveira et al., 2016)

Al integrar el UIP400MTP en el flujo de trabajo ASTM E2799-22, el proceso de desprendimiento de la biopelícula se optimiza para obtener coherencia, eficacia y aplicaciones de alto rendimiento.