Sustituya el raspado celular por el sonicador de alto rendimiento UIP400MTP

El desprendimiento y la extracción de líneas celulares adherentes de placas multipocillo para el análisis multiómico es una tarea diaria en los laboratorios. El desprendimiento celular de alto rendimiento mediante el sonicador de placas multipocillo UIP400MTP sustituye al raspado celular manual, lo que permite obtener mayores rendimientos de ARN, lípidos totales y metabolitos polares totales. Un nuevo método integra el sonicador UIP400MTP de Hielscher con la estación de trabajo de manejo de líquidos i7 de Beckman Coulter, permitiendo un procesamiento de células de alto rendimiento, reproducible y eficiente para la extracción de ARN, metabolitos y lípidos. El método presentado supera a los métodos manuales tradicionales de raspado celular al lograr una reproducibilidad y un rendimiento superiores en varios tipos de células y condiciones experimentales.

Agilice el desprendimiento de células con el sonicador de microplacas UIP400MTP

Los sistemas de cultivos celulares adherentes desempeñan un papel fundamental en la investigación toxicológica y biomédica. En este contexto, Cruchley-Fuge et al. (2024) abordaron un reto importante en el proyecto PrecisionTox, centrado en el aprovechamiento de las tecnologías ómicas para la evaluación del peligro químico. El proyecto pretendía realizar un análisis de alto rendimiento de miles de muestras tratadas con diversas sustancias químicas. Para satisfacer esta demanda, los investigadores desarrollaron un flujo de trabajo automatizado que combinaba el sonicador UIP400MTP con protocolos de extracción bifásica establecidos para el análisis por cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS). Su estudio evalúa la eficacia del sonicador de placas de pocillos múltiples UIP400MTP para desprender células adherentes en comparación con el raspado manual y otros métodos tradicionales.

Racionalización de Multi-Omics: Extracción automatizada de células adherentes con el UIP400MTP

El equipo de investigadores de Laura Cruchley-Fuge, de la Universidad de Birmingham, utilizó tres líneas celulares humanas: HepG2 (células de cáncer de hígado), HepaRG (células diferenciadas similares a los hepatocitos) y H295R (células de cáncer suprarrenal). Estas células se cultivaron en placas de 24 y 96 pocillos y se expusieron a sustancias químicas de ensayo como la aflatoxina B1 y la forskolina.

Diseño experimental:

• Fase 1: Optimización de los ajustes de potencia del sonicador UIP400MTP y comparación con el raspado manual de células y los baños de agua sónicos. Se emplearon células HepG2 para evaluar la recuperación de ARN, metabolitos y lípidos.
• Fase 2: Integración del UIP400MTP en un flujo de trabajo de extracción bifásica utilizando el sistema i7 de Beckman Coulter. La validación se llevó a cabo utilizando células HepaRG y H295R.

Flujo de trabajo de extracción: El flujo de trabajo incluía exposiciones químicas en placas de múltiples pocillos, desprendimiento de células mediante el UIP400MTP y extracción bifásica mediante el Bligh & Dyer (B&D). El análisis LC-MS se realizó con un Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 para compuestos lipofílicos y polares. El método B&D, un estándar de oro para la cuantificación de lípidos, implica una extracción en dos fases con metanol, cloroformo y agua, seguida de la cuantificación de lípidos en la fase de cloroformo.

El sonicador de microplacas UIP400MTP facilita el desprendimiento de líneas celulares adherentes de placas multipocillo y placas Petri

Resultados:

• Fase 1: Las condiciones óptimas de sonicación se identificaron a una potencia del 60%.
  El UIP400MTP produjo la mayor recuperación de ARN con una reproducibilidad excepcional en comparación con el raspado manual y los baños sónicos.
  La recuperación de metabolitos polares fue uniforme en todos los métodos, mientras que la recuperación de lípidos fue notablemente superior con el UIP400MTP.
• Fase 2: La validación en células HepaRG y H295R demostró una alta reproducibilidad en los datos lipidómicos y metabolómicos, como indican las puntuaciones PCA estrechamente agrupadas.
  Los tratamientos con aflatoxina B1 y forskolina se distinguieron eficazmente de los controles, lo que subraya la sensibilidad y fiabilidad del método.

“El dispositivo de sonicación UIP400MTP de Hielscher proporciona un enfoque alternativo de alta calidad y reproducible al "patrón oro" del raspado celular manual, lo que permite obtener mayores rendimientos de ARN, lípidos totales y metabolitos polares totales.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. destacan las ventajas del sonicador UIP400MTP para el procesamiento de células adherentes. Al sustituir el raspado manual, este método mejora la reproducibilidad, la producción y el rendimiento, lo que lo convierte en una herramienta inestimable para estudios a gran escala como PrecisionTox. La integración del UIP400MTP en flujos de trabajo automatizados no sólo reduce la variabilidad, sino que también agiliza los procesos laboriosos, permitiendo la adquisición de datos multiómicos de alta calidad.

El trabajo de Cruchley-Fuge et al. (2024) facilita y agiliza el procesamiento de cultivos celulares adherentes para análisis multiómicos. La integración del sonicador UIP400MTP con flujos de trabajo automatizados garantiza una preparación de muestras coherente y eficiente, lo que lo hace idóneo para la investigación toxicológica de alto rendimiento.
 

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