Extracción de la matriz extracelular con el sonicador de 96 pocillos UIP400MTP

Los métodos tradicionales de extracción de la matriz extracelular (EM) suelen implicar múltiples pasos para alterar la matriz de la biopelícula. Sin embargo, estas técnicas pueden llevar mucho tiempo y ser inconsistentes, lo que provoca variabilidad en los resultados. Con el sonicador de placas de 96 pocillos UIP400MTP, el proceso de extracción de EM se facilita significativamente, proporcionando una disrupción de la biopelícula altamente eficiente, precisa y uniforme en formatos de alto rendimiento. El UIP400MTP utiliza ultrasonidos focalizados para generar cavitación controlada, rompiendo eficazmente la matriz del biofilm y preservando al mismo tiempo la viabilidad e integridad de las células incrustadas en el biofilm. El uso del UIP400MTP mejora la reproducibilidad y precisión de los ensayos posteriores, como los análisis metabolómicos y proteómicos, las pruebas de viabilidad y los estudios de susceptibilidad antimicrobiana. Al agilizar la extracción de EM, el UIP400MTP permite a los investigadores obtener resultados consistentes y de alta calidad, ofreciendo una visión más profunda de la dinámica del biofilm y de las interacciones con agentes externos.

Extracción de la matriz extracelular

La matriz extracelular (ME) es un componente crítico de las biopelículas formadas por microorganismos como Candida albicans. Compuesta por polisacáridos, proteínas, lípidos y ADN extracelular, la ME proporciona integridad estructural, media en la adhesión a superficies y contribuye significativamente a la resistencia antimicrobiana. Extraer y analizar el ME es esencial para comprender la biología de las biopelículas, dilucidar los mecanismos de resistencia a los medicamentos e identificar nuevas dianas terapéuticas.

Protocolo para la extracción de matriz extracelular (EM) de biopelículas de Candida albicans utilizando el UIP400MTP

Este protocolo se centra en la extracción de la matriz extracelular (EM) de biopelículas estáticas de Candida albicans. La integración de la UIP400MTP sonicador para reemplazar el raspado tradicional o pasos basados en enzimas para mejorar la eficiencia y reproducibilidad.

Materiales necesarios

Instrucciones paso a paso para la extracción de EM

1. Formación de biopelícula estática
   Para biopelículas estáticas, inocule C. albicans en los pocillos de una placa de 96 pocillos utilizando medio RPMI-1640. Cada pocillo debe contener un volumen constante de inóculo (por ejemplo, 200 µl por pocillo).
   Incubar la placa a 37°C en condiciones estáticas durante 24 horas para permitir la formación de biopelículas en las superficies de los pocillos.
2. Preparación de la biopelícula para la extracción
   Tras la incubación, aspirar suavemente y desechar el medio gastado de cada pocillo sin alterar la biopelícula.
   Enjuague cada pocillo cuidadosamente con PBS estéril (por ejemplo, 200 µl) para eliminar las células sueltas y los restos planctónicos. Repita este paso dos veces.
   Añada PBS fresco o el tampón de extracción (por ejemplo, 200 µl) a cada pocillo para prepararlo para la sonicación.
3. Sonicación con UIP400MTP
   Coloque la placa de 96 pocillos que contiene PBS o tampón de extracción en la bandeja del sonicador UIP400MTP. Para colocar correctamente la placa de pocillos múltiples, siga las instrucciones del manual.
   Sonicar durante 5-6 minutos con un ajuste suave (amplitud del 60%, modo de pulso), asegurando una disrupción uniforme de la estructura del biofilm y la liberación de los componentes del EM.
   Utilice el control de temperatura del sonicador UIP400MTP (sensor de temperatura y ajustes) para evitar un calentamiento excesivo o daños en la muestra.
4. Tratamiento con resina de intercambio catiónico (CER)
   Transfiera el líquido sonicado de cada pocillo a una nueva placa de 96 pocillos.
   Añadir un volumen doble de suspensión CER (preparada en PBS o tampón) a cada pocillo (por ejemplo, 400 µl de volumen total por pocillo).
   Sellar la placa e incubarla en un agitador de placas o en un rotador a 400 rpm durante 3 horas para permitir la unión y el aislamiento de los componentes EM.
5. Separación y filtración
   Centrifugar la placa a 2.000 × g durante 10 minutos para separar la resina y las células del sobrenadante.
   Transfiera cuidadosamente el sobrenadante que contiene EM de cada pocillo a una nueva placa de 96 pocillos.
   Filtrar el sobrenadante a través de un filtro de 0,22 µm utilizando un sistema de colector de vacío basado en placas o equivalente para obtener un extracto EM limpio.
6. Análisis de EM
   Utilizar técnicas como UPLC-Q-TOF-MS para la elaboración de perfiles de metabolitos no específicos, o emplear ensayos específicos (por ejemplo, BCA para proteínas, kits de cuantificación de triglicéridos y carbohidratos) para caracterizar los componentes de la ME.

Extracción de alto rendimiento de la matriz extracelular

La alta eficacia de la extracción de la matriz extracelular (EM) con el sonicador UIP400MTP ha revolucionado la preparación de muestras para ensayos que requieren un análisis preciso de las propiedades de la biopelícula. El UIP400MTP utiliza ondas ultrasónicas para romper de forma precisa y uniforme la matriz de la biopelícula, lo que permite la liberación eficaz de los componentes de la EM, preservando al mismo tiempo la viabilidad y la integridad de las células. Este enfoque mejora significativamente la fiabilidad de ensayos como las pruebas de viabilidad de biopelículas, los estudios proteómicos y metabolómicos y las evaluaciones de susceptibilidad antimicrobiana.

Para los ensayos de recuperación de biopelículas, como el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC), la extracción EM con el UIP400MTP garantiza un acceso sin obstáculos de los reactivos a las células incrustadas en la biopelícula. Del mismo modo, los análisis proteómicos y metabolómicos, como UPLC-Q-TOF-MS, se benefician del aislamiento de alto rendimiento de proteínas, lípidos y metabolitos. El UIP400MTP también es compatible con pruebas precisas de susceptibilidad antimicrobiana, permitiendo la determinación exacta de los valores MIC y MBEC de biopelículas. Además, la extracción eficiente facilitada por el UIP400MTP ayuda en ensayos de actividad enzimática, cuantificación de componentes y estudios estructurales, ofreciendo valiosos conocimientos sobre el papel de las matrices extracelulares en la arquitectura, adhesión y mecanismos de resistencia de las biopelículas.

Este método de extracción reproducible y de alto rendimiento optimiza la preparación de EM, garantizando resultados superiores en una amplia gama de ensayos relacionados con biopelículas.