Liza ćelija kvasca u mikroplotama pomoću ultrazvučne obrade visokog intenziteta
Mikrobiolozi i istraživači u oblasti nauka o životu koji rade sa Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris / Komagataella phaffii i drugim sistemima kvasca poznaju taj izazov: ćelije kvasca su otporne, reproducibilnu lizu je teško postići, a ručna razgradnja uzoraka brzo postaje usko grlo kada se mora ispitati mnogo sojeva, klonova, uslova kultivacije ili ekspresijskih konstrukata.
Liza kvasca visoke propusnosti za mikrobiologiju, molekularnu biologiju i analitiku proteina
Hielscher ultrazvučni uređaji za mikroploče, kao što su UIP400MTP (400 W) i UIP550MTP (550 W), nude rješenje visoke propusnosti za mehaničku lizu ćelija kvasca direktno u mikroplotama. Umjesto obrade uzoraka jedan po jedan pomoću sonde, cijele mikroploče mogu se podvrgnuti ultrazvučnoj obradi pod ujednačenim uslovima. Zahvaljujući tome ultrazvučna liza kvasca je brža, reproducibilnija i lakše se uklapa u savremene tokove rada u mikrobiologiji, ekspresiji proteina, probiru enzima i omici.
Bilo da trebate osloboditi rekombinantne proteine iz P. pastoris, pripremiti lizate kvasca za enzimske testove, razgraditi S. cerevisiae za analizu proteina ili paralelno ispitati desetine klonova kvasca, Hielscher ultrazvučni uređaji za mikroploče pružaju snažnu razgradnju ćelija zasnovanu na kavitaciji uz preciznu kontrolu procesa.
Trebate reproducibilnu lizu kvasca S. cerevisiae, P. pastoris ili drugih sojeva kvasca u mikroplotama? Recite nam format ploče, volumen uzorka, gustoću ćelija i ciljni analit. Pomoći ćemo vam da definirate odgovarajuće parametre ultrazvučne obrade za vaš tok rada s uređajem UIP400MTP ili UIP550MTP.
Zašto ćelije kvasca zahtijevaju efikasnu mehaničku lizu
Ćelije kvasca teže se lizirju od mnogih bakterijskih ili ćelija sisara jer ih štiti kruta ćelijska stijenka sastavljena uglavnom od polisaharida, glukana, manoproteina i hitina. Ta ćelijska stijenka daje mehaničku stabilnost, ali i ograničava oslobađanje unutarćelijskih proteina, nukleinskih kiselina, metabolita i enzima.
Konvencionalne metode lize kvasca uključuju mlijevenje kuglicama, enzimsku razgradnju, cikluse zamrzavanja i odmrzavanja, hemijsku lizu i ultrazvučnu obradu sondom. Te metode mogu biti efikasne, ali imaju i ograničenja. Mlijevenje kuglicama može unijeti ostatke i zagrijavanje, enzimska razgradnja može povećati troškove i varijabilnost, a ultrazvučna obrada pojedinačnih uzoraka sondom oduzima mnogo vremena kada se mora obraditi veliki broj uzoraka.
Fokusirana ultrazvučna kavitacija visokog intenziteta prevazilazi ta ograničenja primjenom intenzivnih mehaničkih smičnih sila, fluktuacija pritiska i mikrostrujanja u suspenziji kvasca. Rezultat su brza razgradnja ćelijskih stijenki i membrana, bolje oslobađanje unutarćelijskog sadržaja i vrlo reproducibilna priprema uzoraka u formatu ploče.
Ultrazvučna obrada mikroploča za paralelnu pripremu uzoraka kvasca
Hielscher UIP400MTP i UIP550MTP dizajnirani su za ujednačenu ultrazvučnu obradu mikroploča, višejažičnih ploča, PCR ploča i odgovarajućih stalaka za uzorke. Za razliku od obrade sondom, uzorci se ne moraju tretirati pojedinačno. Cijela ploča izlaže se kontroliranoj ultrazvučnoj energiji, zbog čega je tok rada vrlo pogodan za paralelnu obradu uzoraka.
Ovo je posebno korisno za:
- Probir S. cerevisiae mutanata ili sojeva za ekspresiju
- Lizu P. pastoris / K. phaffii klonova nakon ekspresije rekombinantnih proteina
- Pripremu lizata kvasca za enzimske testove
- Ekstrakciju proteina za SDS-PAGE, Western blot, ELISA, LC-MS/MS ili ispitivanje aktivnosti
- Oslobađanje unutarćelijskih metabolita za metabolomiku
- Pripremu uzoraka DNK i RNK nakon odgovarajućeg naknadnog prečišćavanja
- Optimizaciju pufera za lizu, aditiva i uslova ekstrakcije visoke propusnosti
Kako ultrazvučna kavitacija razgrađuje ćelije kvasca
Tokom ultrazvučne obrade fokusirani ultrazvuk velike snage stvara naizmjenične cikluse kompresije i razrjeđenja u tečnom uzorku. Pri dovoljnom intenzitetu te fluktuacije pritiska izazivaju akustičnu kavitaciju. Kavitacijski mjehurići nastaju, osciliraju i kolabiraju, stvarajući lokalizirane smične sile, mikromlazeve, turbulenciju i jake gradijente pritiska.
U suspenzijama kvasca ti mehanički efekti slabe i kidaju ćelijsku stijenku i ćelijsku membranu. Unutarćelijski proteini, enzimi, nukleinske kiseline i metaboliti oslobađaju se u pufer za lizu. Budući da je proces mehanički, može se koristiti s mnogim različitim sistemima pufera i može se kombinirati s inhibitorima proteaza, redukcijskim sredstvima, deterdžentima, solima ili blagim enzimskim predtretmanom.
Opći protokol: liza ćelija kvasca u mikroplotama
Sljedeći protokol pruža praktičnu polaznu tačku za lizu kvasca pomoću Hielscher ultrazvučnog uređaja za mikroploče UIP400MTP ili UIP550MTP. Parametre treba optimizirati prema soju kvasca, gustoći ćelija, ciljnom molekulu, sastavu pufera, tipu ploče i naknadnom testu.
1. Prikupljanje i ispiranje ćelija kvasca
Uzgajajte Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Debaryomyces ili drugi soj kvasca pod željenim uslovima kultivacije. Prikupite ćelije centrifugiranjem i uklonite hranjivu podlogu. Isperite talog hladnom destiliranom vodom, PBS-om ili odabranim puferom za lizu kako biste uklonili zaostale komponente podloge koje mogu ometati naknadnu analizu.
Za ekstrakciju proteina držite uzorke hladnim i radite brzo. Ako su proteaze razlog za zabrinutost, prethodno ohladite sve pufere i potrošni materijal.
2. Resuspendiranje taloga ćelija
Resuspendirajte talog kvasca u odgovarajućem hladnom puferu za lizu. Za efikasno oslobađanje proteina visoka gustoća ćelija često je povoljna. Kao polaznu tačku koristite približno 10–20% w/v mokrog taloga ćelija ili gustu suspenziju koja odgovara OD600 > 10, ovisno o testu.
Tipičan pufer za lizu proteina kvasca može sadržavati:
- sistem pufera kao što su Tris-HCl, fosfatni pufer ili HEPES
- sol kao što je NaCl ili KCl
- koktel inhibitora proteaza
- opcionalno redukcijsko sredstvo kao što je DTT ili β-merkaptoetanol
- opcionalni deterdžent kao što je Triton X-100, NP-40, SDS ili CHAPS, ovisno o kompatibilnosti s naknadnim koracima
- opcionalne inhibitore fosfataza za studije fosforilacije
Za zahtjevne sojeve kvasca ili vrlo blagu ekstrakciju proteina prije ultrazvučne obrade može se primijeniti kratak predtretman zimolijazom, litikazom ili drugim enzimom koji razgrađuje ćelijsku stijenku. Taj enzimski predtretman je opcionalan, ali može poboljšati efikasnost lize ili smanjiti potreban ultrazvučni intenzitet.
3. Prenošenje uzoraka u odgovarajuću mikroploču
Rasporedite suspenziju kvasca u mikroploču kompatibilnu s ultrazvučnom obradom. Ploče s okruglim dnom često su poželjnije jer poboljšavaju sakupljanje uzorka i smanjuju mrtve zone. Koristite jednake volumene uzoraka u svim jažicama kako biste poboljšali reproducibilnost.
Zatvorite ploču odgovarajućom brtvenom podlogom ili folijom kako biste spriječili isparavanje, stvaranje aerosola i unakrsnu kontaminaciju. Osigurajte da je brtva kompatibilna s odabranom temperaturom i uslovima ultrazvučne obrade.
Tipični radni volumeni ovise o formatu ploče i primjeni. Uobičajeni formati uključuju ploče s 96 jažica, ploče s dubokim jažicama, PCR ploče ili odgovarajuće stalke za epruvete.
4. Postavljanje hlađenja
Liza kvasca zahtijeva visok ultrazvučni intenzitet, a mehanička razgradnja stvara toplotu. Kontrola temperature je stoga ključna, posebno za analizu proteina, enzima, RNK ili fosforilacije.
Koristite odgovarajuću strategiju hlađenja, kao što su:
- prethodno ohlađen pufer za lizu
- prethodno ohlađene mikroploče
- pauze za hlađenje između intervala ultrazvučne obrade
- vanjsko hlađenje platforme za ultrazvučnu obradu, gdje je primjenjivo
Cilj je održati uzorak dovoljno hladnim da se spriječe denaturacija proteina, inaktivacija enzima, razgradnja RNK i varijabilnost uzorka uzrokovana toplotom.
5. Ultrazvučna obrada suspenzije kvasca
Postavite zatvorenu ploču u Hielscher ultrazvučni uređaj za mikroploče UIP400MTP ili UIP550MTP i odaberite program pulsne ultrazvučne obrade. Pulsiranje se preporučuje jer omogućava mehaničku razgradnju tokom UKLJUČENIH faza i odvođenje toplote tokom ISKLJUČENIH faza.
Kao polazna tačka za lizu ćelija kvasca:
| Parametar | Preporučeni početni raspon | Svrha |
|---|---|---|
| Amplituda | 60–100% | Visok intenzitet kavitacije za otporne ćelije kvasca |
| Pulsni način rada | 10–30 s UKLJUČENO / 30–60 s ISKLJUČENO | Efikasna liza uz kontrolirano nakupljanje toplote |
| Kumulativno vrijeme UKLJUČENO | 5–15 min | Prilagodite prema soju, gustoći i ciljnom molekulu |
| Temperatura | Držite uzorke hladnim | Zaštita proteina, enzima, RNK i metabolita |
| Brtvljenje ploče | Preporučeno | Sprječava isparavanje, stvaranje aerosola i unakrsnu kontaminaciju |
Za vrlo otporne suspenzije kvasca, gustu biomasu P. pastoris ili zahtjevnu ekstrakciju rekombinantnih proteina postepeno povećavajte kumulativno vrijeme UKLJUČENO. Za proteine osjetljive na toplotu ili enzimske testove koristite kraće pulseve, duže pauze za hlađenje i nižu početnu amplitudu.
6. Bistrenje lizata
Nakon ultrazvučne obrade centrifugirajte mikroploču ili prenesite uzorke u epruvete za centrifugiranje. Uklonite ćelijske ostatke centrifugiranjem pri odgovarajućoj brzini i temperaturi. Sakupite supernatant za naknadnu analizu.
Ovisno o primjeni, lizat se može koristiti za:
- kvantifikaciju proteina
- testove enzimske aktivnosti
- SDS-PAGE i Western blot
- ELISA i imunotestove
- LC-MS/MS proteomiku
- analizu metabolita
- prečišćavanje DNK ili RNK
7. Optimizacija i dokumentiranje metode
Za reproducibilnu lizu kvasca dokumentirajte sve relevantne parametre, uključujući soj, uslove kultivacije, OD600, masu mokrih ćelija, sastav pufera, tip ploče, volumen uzorka, amplitudu, pulsni ciklus, kumulativno vrijeme UKLJUČENO, način hlađenja i konačnu temperaturu uzorka.
Ako je Hielscher ultrazvučni uređaj opremljen automatskim bilježenjem podataka, procesni podaci mogu se koristiti za dokumentiranje, razvoj metode, povećanje razmjera i kontrolu kvaliteta.
Savjeti za optimizaciju lize kvasca
Za maksimalno oslobađanje proteina koristite guste suspenzije kvasca, visok ultrazvučni intenzitet i dovoljno kumulativno vrijeme UKLJUČENO. Za osjetljive proteine smanjite amplitudu, produžite pauze za hlađenje i držite ploču hladnom tokom cijelog ciklusa.
Ako je liza nepotpuna, postepeno produžavajte vrijeme ultrazvučne obrade, ispitajte enzimski predtretman, smanjite viskoznost uzorka ili optimizirajte pufer. Ako se proteini razgrađuju ili gube aktivnost, poboljšajte hlađenje, skratite UKLJUČENE intervale, dodajte inhibitore i provjerite je li sistem deterdženata kompatibilan s ciljnim proteinom.
Budući da se sojevi kvasca znatno razlikuju po strukturi ćelijske stijenke, fazi rasta, ekspresijskom sistemu i gustoći biomase, preporučuje se kratka matrica optimizacije. Na primjer, ispitajte tri amplitude, dva pulsna ciklusa i dva ukupna vremena UKLJUČENO, a zatim procijenite efikasnost lize i integritet proteina.
Bilo da obrađujete nekoliko ploča za testove ili provodite probir kvasca visoke propusnosti, Hielscher vam može pomoći da odaberete pravi ultrazvučni uređaj za mikroploče i razvijete pouzdan protokol lize. Obratite nam se s podacima o soju kvasca, toku rada i zahtjevima za propusnost!
Prednosti Hielscher ultrazvučnih uređaja za mikroploče za lizu kvasca
Hielscher ultrazvučni uređaji za mikroploče idealni su za laboratorije kojima je potrebna reproducibilna liza velikog broja uzoraka. Oni eliminiraju sporo rukovanje jednim uzorkom u jednom trenutku, što je svojstveno ultrazvučnoj obradi sondom, i smanjuju varijabilnost uzrokovanu ručnim pozicioniranjem sonde, dubinom uranjanja i razlikama u rukovanju među uzorcima.
Ključne prednosti uključuju:
- Obrada visoke propusnosti: Paralelna ultrazvučna obrada mnogih uzoraka kvasca u mikroplotama ili kompatibilnim stalcima za uzorke.
- Reproducibilni uslovi: Isti uslovi ultrazvučne obrade u svim jažicama za ujednačene, uporedive rezultate lize.
- Bez unakrsne kontaminacije sondom: Uzorci ostaju zatvoreni tokom ultrazvučne obrade, što smanjuje prijenos zaostalog materijala i korake čišćenja.
- Pogodno za otporne ćelije: Ultrazvuk visokog intenziteta podržava razgradnju ćelijskih stijenki kvasca.
- Efikasan tok rada: Idealno za probir sojeva, klonova, uslova ekspresije i pufera za lizu.
- Efikasan tok rada: Programabilne postavke, automatsko bilježenje podataka i pogodnost za laboratorijsku automatizaciju.
Primjene u biotehnologiji kvasca i istraživanjima u oblasti nauka o životu
Ultrazvučna liza kvasca u mikroplotama podržava mnoge istraživačke tokove rada i tokove rada probira. Kod ekspresije rekombinantnih proteina klonovi P. pastoris i S. cerevisiae mogu se lizirati paralelno radi poređenja nivoa ekspresije ili enzimske aktivnosti. U sistemskoj biologiji i omici standardizirana liza poboljšava uporedivost među različitim uslovima. U mikrobiologiji ultrazvučna obrada podržava brzu pripremu lizata iz više sojeva, uslova podloge ili tretmana stresom.
Tipična područja primjene uključuju:
- ekstrakciju proteina kvasca
- probir rekombinantnih proteina
- probir enzimske aktivnosti
- odabir klonova nakon transformacije
- optimizaciju fermentacije
- pripremu uzoraka za proteomiku
- pripremu uzoraka za metabolomiku
- studije razgradnje ćelijske stijenke
- mikrobiološke testove visoke propusnosti
Pouzdana liza kvasca počinje kontroliranom ultrazvučnom obradom
Liza kvasca može biti zahtjevna kada se broj uzoraka povećava, ali Hielscher ultrazvučni uređaji za mikroploče čine proces bržim, čišćim i reproducibilnijim. UIP400MTP i UIP550MTP omogućavaju istraživačima da obrade cijele ploče pod definiranim ultrazvučnim uslovima, čime se povećava propusnost, a smanjuje ručno rukovanje.
Za mikrobiologe, molekularne biologe, stručnjake za proteine i biotehnološke laboratorije ultrazvučna obrada mikroploča moćan je alat za efikasno i reproducibilno oslobađanje unutarćelijskih komponenti kvasca.
Često postavljana pitanja o lizi ćelija kvasca ultrazvučnom obradom mikroploča
Mogu li se ćelije kvasca lizirati ultrazvučnom obradom?
Da. Ćelije kvasca kao što su Saccharomyces cerevisiae i Pichia pastoris mogu se lizirati ultrazvučnom obradom visokog intenziteta. Ultrazvučna kavitacija stvara jake mehaničke smične sile koje razgrađuju ćelijsku stijenku i membranu kvasca, oslobađajući proteine, enzime, nukleinske kiseline i metabolite.
Zašto se ćelije kvasca teže lizirju od bakterijskih ćelija?
Ćelije kvasca imaju debelu i mehanički otpornu ćelijsku stijenku sastavljenu uglavnom od glukana, manoproteina i hitina. Zbog te krute strukture kvasac je teže razgraditi nego mnoge bakterijske ili ćelije sisara. Stoga liza kvasca obično zahtijeva viši intenzitet, duže trajanje obrade ili opcionalni enzimski predtretman.
Koji Hielscher ultrazvučni uređaji su pogodni za lizu kvasca u mikroplotama?
Hielscher UIP400MTP i UIP550MTP pogodni su za lizu kvasca visoke propusnosti u mikroplotama. UIP400MTP je idealan za rutinsku paralelnu pripremu uzoraka, dok UIP550MTP pruža veću ultrazvučnu snagu za zahtjevne zadatke lize, guste suspenzije i otporne sojeve kvasca.
Može li se Pichia pastoris lizirati u ultrazvučnom uređaju za mikroploče?
Da. Pichia pastoris, poznata i kao Komagataella phaffii, može se lizirati ultrazvučnom obradom mikroploča visokog intenziteta. Budući da P. pastoris može stvarati gustu biomasu i ima otpornu ćelijsku stijenku, preporučuje se optimizacija amplitude, pulsnog ciklusa, hlađenja i ukupnog vremena ultrazvučne obrade.
Koji su tipični parametri ultrazvučne obrade za lizu kvasca?
Koristan početni raspon je 50–80% amplitude, pulsni rad, na primjer 10–30 sekundi UKLJUČENO i 30–60 sekundi ISKLJUČENO, te 5–15 minuta kumulativnog vremena UKLJUČENO. Tačni parametri ovise o soju kvasca, gustoći ćelija, volumenu uzorka, tipu ploče, puferu i ciljnom molekulu.
Zašto lizu kvasca treba provoditi u pulsnom načinu rada?
Pulsni način rada smanjuje nakupljanje toplote tokom ultrazvučne obrade. Tokom UKLJUČENE faze ultrazvučna kavitacija razgrađuje ćelije. Tokom ISKLJUČENE faze uzorak se može ohladiti. To je važno jer prekomjerna toplota može denaturirati proteine, smanjiti enzimsku aktivnost, razgraditi RNK i ugroziti reproducibilnost.
Je li enzimski predtretman potreban prije ultrazvučne obrade ćelija kvasca?
Enzimski predtretman nije uvijek potreban, ali može poboljšati efikasnost lize. Enzimi kao što su zimolijaza ili litikaza djelomično razgrađuju ćelijsku stijenku kvasca i mogu smanjiti ultrazvučni intenzitet ili vrijeme potrebno za potpunu lizu. To može biti korisno za osjetljive proteine ili zahtjevne sojeve.
Kako se može spriječiti pregrijavanje tokom ultrazvučne obrade kvasca?
Koristite prethodno ohlađene pufere, pulsni način rada, pauze za hlađenje i ohlađenu postavku ploče. Držite mikroploču zatvorenom i, gdje je moguće, pratite temperaturu. Za osjetljive proteine koristite kraće UKLJUČENE intervale, duže ISKLJUČENE intervale i obrađujte uzorke u hladnim uslovima.
Može li ultrazvučna obrada mikroploča zamijeniti mlijevenje kuglicama za lizu kvasca?
U mnogim tokovima rada, da. Ultrazvučna obrada mikroploča može zamijeniti mlijevenje kuglicama kada su potrebne čista, reproducibilna i paralelna liza. Izbjegava se rukovanje kuglicama, smanjuje složenost potrošnog materijala i pojednostavljuje automatizacija. Međutim, svaku primjenu treba validirati poređenjem prinosa lize, integriteta proteina i performansi testa.
Je li ultrazvučna obrada mikroploča pogodna za ekstrakciju proteina iz kvasca?
Da. Ultrazvučna obrada mikroploča vrlo je pogodna za ekstrakciju proteina iz kvasca, posebno kada se mora uporediti mnogo klonova ili uslova kultivacije. Inhibitori proteaza, hladni puferi i kontrolirane postavke pulsiranja pomažu u očuvanju kvalitete proteina.
Može li se ista metoda koristiti za ekstrakciju DNK, RNK i proteina?
Isti osnovni princip ultrazvučne obrade može se koristiti, ali pufer i procesne uslove treba prilagoditi ciljnom molekulu. Tokovi rada za proteine zahtijevaju inhibiciju proteaza i kontrolu temperature. Tokovi rada za RNK zahtijevaju rukovanje bez RNaza i snažno hlađenje. Tokovi rada za DNK mogu zahtijevati drugačije uslove lize i prečišćavanja, ovisno o tome želi li se intaktna genomska DNK ili fragmentirana DNK.
Koji tip ploče treba koristiti za lizu kvasca?
Koristite mikroploču ili ploču s dubokim jažicama kompatibilnu s ultrazvučnom obradom i s odgovarajućim brtvljenjem. Ploče s okruglim dnom često su korisne za rukovanje suspenzijama. Ploča treba izdržati odabrane uslove ultrazvučne obrade, temperaturu uzorka i korake centrifugiranja.
Kako znati je li liza kvasca potpuna?
Efikasnost lize može se provjeriti mikroskopijom, prinosom proteina, enzimskom aktivnošću, smanjenjem viskoznosti, SDS-PAGE analizom, prinosom DNK/RNK ili poređenjem sa poznatom metodom lize. Pri razvoju metode procijenite i prinos i kvalitetu oslobođenog ciljnog molekula.
UIP400MTP ili UIP550MTP: koji ultrazvučni uređaj za mikroploče odabrati?
UIP400MTP je snažan ultrazvučni uređaj za mikroploče za rutinsku pripremu uzoraka visoke propusnosti, uključujući lizu kvasca, ekstrakciju proteina, fragmentaciju DNK, odvajanje biofilma i pripremu testova. Pogodan je za laboratorije kojima je potrebna reproducibilna ultrazvučna obrada u standardnim formatima ploča.
UIP550MTP pruža veću ultrazvučnu snagu i preporučuje se kada zahtjevnije primjene traže veći akustični intenzitet, kraće vrijeme obrade, veća opterećenja uzorcima ili otpornije uslove razgradnje. Za lizu kvasca UIP550MTP je posebno koristan za gustu biomasu, zahtjevne sojeve, veće radne volumene i probir ekspresije visoke propusnosti.
Može li se liza kvasca ultrazvučnom obradom mikroploča automatizirati?
Da. Ultrazvučna obrada zasnovana na mikroplotama vrlo je pogodna za automatizirane laboratorijske tokove rada jer uzorci ostaju u formatu ploče. To podržava integraciju sa sistemima za pipetiranje, rukovanjem pločama, centrifugiranjem, pripremom testova i tokovima rada probira visoke propusnosti.
Literatura / reference
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- FactSheet UIP550MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics 2024.



