Zamijenite Cell Scraping UIP400MTP Sonicatorom visokog protoka

Odvajanje i ekstrakcija adherentnih ćelijskih linija iz ploča sa više jažica za multi-omičnu analizu je svakodnevni zadatak u laboratorijama. Visoko propusno odvajanje ćelija pomoću ultrazvučnog uređaja za ploče sa više jažica UIP400MTP zamjenjuje ručno struganje ćelija što dovodi do većeg prinosa RNK, ukupnih lipida i ukupnih polarnih metabolita. Nova metoda integriše Hielscher UIP400MTP sonikator sa Beckman Coulter i7 radnom stanicom za rukovanje tečnostima, omogućavajući visoku propusnost, ponovljivu i efikasnu obradu ćelija za ekstrakciju RNK, metabolita i lipida. Predstavljena metoda nadmašuje tradicionalne metode ručnog struganja ćelija postižući superiornu ponovljivost i prinos u različitim tipovima ćelija i eksperimentalnim uslovima.

Pojednostavite odvajanje ćelija uz Microplate Sonicator UIP400MTP

Sistemi vezanih kultura ćelija igraju ključnu ulogu u toksikološkim i biomedicinskim istraživanjima. U tom kontekstu, Cruchley-Fuge et al. (2024) bavio se značajnim izazovom u projektu PrecisionTox fokusiranom na korištenje omics tehnologija za procjenu hemijske opasnosti. Projekat je imao za cilj analizu visokog protoka hiljada uzoraka tretiranih različitim hemikalijama. Da bi ispunili ovu potražnju, istraživači su razvili automatizovani radni tok kombinujući sonikator UIP400MTP sa uspostavljenim protokolima za dvofaznu ekstrakciju za analizu tečnom hromatografijom-masenom spektrometrijom (LC-MS). Njihova studija procjenjuje efikasnost UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator u odvajanju adherentnih ćelija u poređenju sa ručnim struganjem i drugim tradicionalnim metodama.

Pojednostavljeni Multi-Omics: automatizirana ekstrakcija adherentnih ćelija sa UIP400MTP

Istraživački tim Laure Cruchley-Fuge sa Univerziteta u Birminghamu koristio je tri ljudske ćelijske linije: HepG2 (ćelije raka jetre), HepaRG (diferencirane ćelije slične hepatocitima) i H295R (ćelije raka nadbubrežne žlijezde). Ove ćelije su uzgajane u pločama sa 24 i 96 jažica i izložene ispitivanim hemikalijama kao što su aflatoksin B1 i forskolin.

Eksperimentalni dizajn:

• 1. faza: Optimizacija postavki snage sonikatora UIP400MTP i poređenje sa ručnim struganjem ćelija i zvučnim vodenim kupatilima. HepG2 ćelije su korištene za procjenu oporavka RNK, metabolita i lipida.
• 2. faza: Integracija UIP400MTP u dvofazni tok rada ekstrakcije koristeći Beckman Coulter i7 sistem. Validacija je provedena korištenjem HepaRG i H295R ćelija.

Tok rada ekstrakcije: Tok posla je obuhvatao izlaganje hemikalijama u pločama sa više jažica, odvajanje ćelija pomoću UIP400MTP i dvofaznu ekstrakciju preko Bligh & Dyer (B&D) metoda. LC-MS analiza je izvedena korišćenjem Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 za lipofilna i polarna jedinjenja. B&D metoda, zlatni standard za kvantifikaciju lipida, uključuje ekstrakciju u dva koraka s metanolom, hloroformom i vodom, nakon čega slijedi kvantifikacija lipida u fazi hloroforma.

UIP400MTP sonikator za mikroploče olakšava odvajanje prianjajućih ćelijskih linija od ploča s više jažica i Petrijevih zdjelica

Rezultati:

• 1. faza: Optimalni uslovi sonikacije su identificirani pri 60% snage.
  UIP400MTP je dao najveći oporavak RNK sa izuzetnom reproduktivnošću u poređenju sa ručnim struganjem i zvučnim kupatilima.
  Oporavak polarnog metabolita bio je konzistentan u svim metodama, dok je oporavak lipida bio značajno bolji sa UIP400MTP.
• 2. faza: Validacija na HepaRG i H295R ćelijama pokazala je visoku reproduktivnost u lipidomičkim i metabolomskim podacima, na šta ukazuju čvrsto grupirani PCA rezultati.
  Tretmani aflatoksinom B1 i forskolinom su se efikasno razlikovali od kontrola, naglašavajući osjetljivost i pouzdanost metode.

“Hielscher UIP400MTP ultrazvučni uređaj pruža visokokvalitetan i ponovljiv alternativni pristup “zlatnom standardu” ručnog struganja ćelija, što dovodi do većeg prinosa RNK, ukupnih lipida i ukupnih polarnih metabolita.” (Cruchley-Fuge et al., 2024.)

Cruchley-Fuge et al. naglasiti prednosti UIP400MTP sonikatora za adherentnu obradu ćelija. Zamjenjujući ručno struganje, ova metoda poboljšava ponovljivost, propusnost i prinos, što ga čini neprocjenjivim alatom za istraživanja velikih razmjera kao što je PrecisionTox. Integracija UIP400MTP u automatizovane radne tokove ne samo da smanjuje varijabilnost, već i pojednostavljuje radno intenzivne procese, omogućavajući visokokvalitetno prikupljanje podataka sa više omika.

Rad Cruchley-Fuge et al. (2024) olakšava i pojednostavljuje obradu adherentnih ćelijskih kultura za multi-omičku analizu. Integracija sonikatora UIP400MTP sa automatizovanim tokovima rada osigurava konzistentnu i efikasnu pripremu uzoraka, što ga čini idealnim za toksikološka istraživanja visokog protoka.
 

Dizajn, proizvodnja i konsalting – Kvaliteta Made in Germany

Hielscher ultrasonicatori su poznati po najvišoj kvaliteti i standardima dizajna. Robusnost i jednostavan rad omogućavaju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnih aparata u industrijske objekte. Hielscher ultrasonikatori lako se nose sa teškim uslovima i zahtevnim okruženjima.

Hielscher Ultrasonics je ISO sertifikovana kompanija i stavlja poseban naglasak na sonikatore visokih performansi koji karakterišu najsavremeniju tehnologiju i jednostavnost za korišćenje. Naravno, Hielscher ultrasonikatori su usklađeni sa CE i ispunjavaju zahtjeve UL, CSA i RoH.