ASTM E2799-22 protokol za procjenu antimikrobne djelotvornosti
Hielscher UIP400MTP je snažan i efikasan sonikator za ploče s više jažica, osmišljen za pojednostavljenje koraka ultrazvučne obrade u protokolu ASTM E2799-22. Isporukom ujednačene ultrazvučne energije kroz cijelu mikrotitarsku ploču, UIP400MTP osigurava dosljedno i pouzdano odvajanje biofilmova s poklopaca s klinovima bez oštećenja ćelija i bez narušavanja integriteta uzorka. Njegova visoka propusnost uzoraka i jednostavan rad znatno skraćuju vrijeme obrade, a istovremeno poboljšavaju ponovljivost, što ga čini idealnim rješenjem za laboratorije koje provode testove vijabilnosti biofilma i ispitivanja antimikrobne djelotvornosti.
ASTM E2799
ASTM E2799 je standardizirana metoda ispitivanja namijenjena procjeni djelotvornosti antimikrobnih sredstava protiv biofilmova, sa posebnim fokusom na Pseudomonas aeruginosa. Biofilmovi su složene mikrobne zajednice koje prianjaju za površine i pokazuju povećanu otpornost na antimikrobne tretmane, zbog čega predstavljaju značajan izazov u zdravstvu, industriji i okolišu. Ova metoda koristi test minimalne koncentracije za eradikaciju biofilma (MBEC) kako bi osigurala pouzdan i ponovljiv okvir za testiranje dezinficijenasa u realističnim uvjetima biofilma.
Sonikator za ploče sa 96 jažica UIP400MTP za skrining visoke propusnosti
Kako ultrazvučna obrada doprinosi ASTM E2799?
Ultrazvučna obrada ima ključnu ulogu u protokolu ASTM E2799 jer olakšava odvajanje biofilmova s ispitnih površina, čime se osigurava tačna procjena mikrobne vijabilnosti nakon tretmana. Primjenom kontrolirane ultrazvučne energije protokol postiže efikasno i dosljedno razbijanje biofilma bez oštećenja ćelija, što omogućava precizne i ponovljive rezultate. Zbog toga je ASTM E2799 ključan alat za unapređenje istraživanja biofilmova i razvoj učinkovitih antimikrobnih strategija.
Kako provesti MBEC test u skladu s ASTM E2799-22
Protokol ASTM E2799-22 opisuje korake za procjenu djelotvornosti antimikrobnih sredstava protiv biofilmova. Pri korištenju Hielscher UIP400MTP sonikatora za mikrotitarske ploče, protokol se može prilagoditi tako da uključi ovu naprednu metodu ultrazvučne obrade za odvajanje biofilma. U nastavku je opis koraka prilagođenih korištenju sonikatora za mikroploče UIP400MTP:
- Priprema biofilmova
Pripremite sterilnu mikrotitarsku ploču sa 96 jažica s odvojivim poklopcima s klinovima.
Inokulirajte jažice standardiziranom bakterijskom suspenzijom u odgovarajućem hranjivom mediju.
Stavite poklopac s klinovima na ploču, pazeći da klinovi budu potpuno uronjeni u bakterijsku suspenziju.
Inkubirajte ploču pod kontroliranim uvjetima (npr. temperatura i vrijeme) kako bi se omogućilo stvaranje biofilma na klinovima. - Tretman antimikrobnim sredstvima
Nakon stvaranja biofilma zamijenite medij svježim medijem koji sadrži ispitivana antimikrobna sredstva u različitim koncentracijama.
Ponovo postavite poklopac s klinovima i inkubirajte pod uvjetima navedenim u dizajnu ispitivanja. - Priprema za odvajanje biofilma
Nakon tretmana isperite poklopac s klinovima uranjanjem u sterilnu otopinu za ispiranje kako biste uklonili zaostala antimikrobna sredstva i slabo prianjajuće planktonske ćelije. - Odvajanje biofilma pomoću sonikatora UIP400MTP
Pripremite svježu mikrotitarsku ploču sa 96 jažica koja sadrži medij za oporavak (npr. neutralizirajući bujon).
Odvojite biofilmove stavljanjem poklopca s klinovima u jažice ploče s medijem za oporavak.
Umetnite ploču u sonikator UIP400MTP, pazeći da poklopac i ploča budu pravilno poravnati.
Postavite sonikator na amplitudu od 70%-80% i provodite ultrazvučnu obradu 3-4 minute u ciklusnom načinu rada, kako biste osigurali dosljedno odvajanje biofilma bez lize ćelija. - Procjena vijabilnosti biofilma
Nakon ultrazvučne obrade, medij za oporavak koji sadrži odvojene ćelije biofilma obradite standardnim mikrobiološkim ili analitičkim tehnikama, kao što su:- Brojanje jedinica koje formiraju kolonije (CFU): Napravite serijska razrjeđenja i zasijte na agar radi brojanja vijabilnih ćelija.
- Mjerenja optičke gustoće (OD):Koristite spektrofotometrijsku analizu za procjenu gustoće ćelija.
- Testovi vijabilnosti zasnovani na fluorescenciji:Kvantificirajte žive i mrtve ćelije pomoću fluorescentnih boja.
- Analiza podataka
Usporedite podatke o vijabilnosti tretiranih i netretiranih biofilmova kako biste odredili djelotvornost antimikrobnih sredstava.
Izračunajte minimalnu koncentraciju za eradikaciju biofilma (MBEC) na osnovu koncentracije potrebne za eliminaciju vijabilnih ćelija biofilma. - Kontrola kvaliteta
Osigurajte dosljedne uvjete ultrazvučne obrade redovnim kalibriranjem UIP400MTP i provjerom da proces odvajanja biofilma ne dovodi do značajne lize ili uništenja ćelija.
Uključite odgovarajuće kontrole, kao što su netretirani biofilmovi i slijepe probe samo s medijem, radi validacije rezultata.
Ćelije biofilma formirane na klinovima odvojene su ultrazvučnom obradom (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Njemačka, UIP250MTP) u trajanju od 5 min u pločama sa 96 jažica koje su sadržavale svjež hranjivi medij za oporavak ćelija.
(Slika i studija: ©de Oliveira et al., 2016)
Integracijom UIP400MTP u radni tok ASTM E2799-22 proces odvajanja biofilma optimiziran je za dosljednost, efikasnost i primjene visoke propusnosti.
Literatura / Reference
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Često postavljana pitanja
Šta je ASTM E2799?
ASTM E2799 je standardna metoda ispitivanja koju je uspostavio ASTM International za ispitivanje djelotvornosti dezinficijenasa protiv biofilma Pseudomonas aeruginosa pomoću MBEC testa. Metoda se široko koristi za procjenu formiranja biofilma, antimikrobne djelotvornosti i interakcija s površinom materijala, što omogućava standardizirana poređenja u istraživanjima povezanim s biofilmom.
Koja je razlika između ASTM E2799-22 i ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 i ASTM E2799-17?
ASTM E2799 je standardizirana metoda ispitivanja koja procjenjuje djelotvornost dezinficijenasa protiv biofilmova Pseudomonas aeruginosa pomoću MBEC testa (Minimum Biofilm Eradication Concentration, minimalna koncentracija za eradikaciju biofilma). Ova metoda je prošla nekoliko revizija radi poboljšanja tačnosti i primjenjivosti.
- ASTM E2799-11: Ovo je bilo prvo izdanje standarda, kojim su uspostavljeni temeljni postupci za procjenu djelotvornosti dezinficijenasa protiv biofilmova P. aeruginosa pomoću MBEC testa.
- ASTM E2799-12: Ova revizija uvela je manje tehničke izmjene radi poboljšanja jasnoće i otklanjanja nejasnoća utvrđenih u verziji iz 2011.
- ASTM E2799-17: U ovom ažuriranju izvršene su značajnije izmjene protokola, uključujući prilagodbe procesa uzgoja biofilma, primjene tretmana i postupaka neutralizacije, s ciljem poboljšanja ponovljivosti i usklađenosti s napretkom u istraživanju biofilmova.
- ASTM E2799-22: Najnovija revizija odražava najnovija naučna saznanja i tehnološki napredak u studijama biofilmova. Uključuje usavršene metodologije za rast, tretman i analizu biofilma, čime se osigurava da metoda ispitivanja ostane relevantna i efikasna za aktuelna ocjenjivanja djelotvornosti dezinficijenasa.
Svaka revizija ASTM E2799 provedena je radi poboljšanja pouzdanosti, ponovljivosti i relevantnosti metode, čime se osigurava da ostane u koraku s naučnim i tehnološkim napretkom u području istraživanja biofilmova.
Koja je razlika između MBEC i MBIC testova?
Ključna razlika između MBEC (Minimum Biofilm Eradication Concentration, minimalna koncentracija za eradikaciju biofilma) i MBIC (Minimum Biofilm Inhibitory Concentration, minimalna inhibitorna koncentracija biofilma) testova leži u njihovom fokusu:
MBEC testovi mjere najnižu koncentraciju antimikrobnog sredstva potrebnu za potpunu eradikaciju prethodno formiranih biofilmova, procjenjujući sposobnost tvari da ubije mikroorganizme ugrađene u biofilm.
MBIC testovi određuju najnižu koncentraciju antimikrobnog sredstva koja sprječava početno formiranje biofilmova, procjenjujući njegovu sposobnost da inhibira razvoj biofilma.
Oba testa su ključna za razumijevanje djelotvornosti antimikrobika protiv biofilmova, ali ciljaju različite faze životnog ciklusa biofilma.
Saznajte kako se sonikator za mikroploče UIP400MTP koristi za odvajanje biofilma u MBIC testovima!
Novi sonikatori za mikroploče za razbijanje tvrdokornih biofilmova
Hielscher Ultrasonics proizvodi visokoučinkovite ultrazvučne homogenizatore od laboratorijske do industrijske veličine.