ASTM E2799-22 Protokol za antimikrobnu evaluaciju

Hielscher UIP400MTP je moćan i efikasan sonikator ploča sa više jažica dizajniran da pojednostavi korak sonikacije u ASTM E2799-22 protokolu. Isporukom ujednačene ultrazvučne energije preko cijele mikrotitarske ploče, UIP400MTP osigurava dosljedno i pouzdano odvajanje biofilma od poklopca bez oštećenja ćelija ili ugrožavanja integriteta uzorka. Njegova sposobnost visoke propusnosti i rad prilagođen korisniku značajno skraćuju vrijeme obrade uz povećanje reproduktivnosti, što ga čini idealnim rješenjem za laboratorije koje provode testove održivosti biofilma i testiranje antimikrobne efikasnosti.

ASTM E2799

ASTM E2799 je standardizirana metoda testiranja dizajnirana za procjenu efikasnosti antimikrobnih agenasa protiv biofilma, s posebnim fokusom na Pseudomonas aeruginosa. Biofilmovi su složene mikrobne zajednice koje se prianjaju na površine i pokazuju povećanu otpornost na antimikrobne tretmane, što ih čini značajnim izazovom u zdravstvenom, industrijskom i ekološkom kontekstu. Ova metoda koristi ispitivanje minimalne koncentracije biofilma (MBEC) kako bi se osigurao pouzdan i ponovljiv okvir za testiranje dezinficijensa u realnim uvjetima biofilma.

Kako Sonication doprinosi ASTM E2799?

Sonikacija igra ključnu ulogu u ASTM E2799 protokolu tako što olakšava odvajanje biofilma od testnih površina, osiguravajući preciznu procjenu vitalnosti mikroba nakon tretmana. Korištenjem kontrolirane ultrazvučne energije, protokol postiže efikasno i dosljedno razbijanje biofilma bez oštećenja ćelija, omogućavajući precizne i ponovljive rezultate. Ovo čini ASTM E2799 osnovnim alatom za unapređenje istraživanja biofilma i razvoj efikasnih antimikrobnih strategija.

Kako pokrenuti MBEC test u skladu sa ASTM E2799-22

ASTM E2799-22 protokol opisuje korake za procjenu efikasnosti antimikrobnih agenasa protiv biofilma. Kada se koristi sonikator mikrotitarske ploče Hielscher UIP400MTP, protokol se može prilagoditi da uključi ovu naprednu metodu sonikacije za odvajanje biofilma. Ispod je opis koraka prilagođenih korištenju ultrazvučnog uređaja za mikroploče UIP400MTP:

1. Priprema biofilma
   Pripremite sterilnu mikrotitarsku ploču sa 96 jažica sa odvojivim poklopcima.
   Inokulirajte jažice standardiziranom bakterijskom suspenzijom u odgovarajućem mediju za rast.
   Postavite poklopac s klinom na ploču, osiguravajući da su klinovi potpuno uronjeni u suspenziju bakterija.
   Inkubirajte ploču u kontrolisanim uslovima (npr. temperatura i vreme) kako biste omogućili formiranje biofilma na klinovima.
2. Tretman antimikrobnim agensima
   Nakon formiranja biofilma, zamijenite podlogu svježom podlogom koja sadrži testirana antimikrobna sredstva u različitim koncentracijama.
   Ponovo pričvrstite poklopac i inkubirajte pod uslovima navedenim u dizajnu testa.
3. Priprema za odvajanje biofilma
   Nakon tretmana, isperite poklopac za klin tako što ćete ga uroniti u sterilnu otopinu za ispiranje kako biste uklonili zaostale antimikrobne agense i labavo zalijepljene planktonske ćelije.
4. Odvajanje biofilma pomoću UIP400MTP sonicatora
   Pripremite svježu mikrotitarsku ploču sa 96 jažica koja sadrži medij za oporavak (npr. neutralizirajući bujon).
   Odvojite biofilmove tako što ćete staviti poklopac sa klinom u jažice ploče sa medijumom za oporavak.
   Umetnite ploču u sonikator UIP400MTP, pazeći da su poklopac i ploča pravilno poravnati.
   Podesite sonikator na 70%-80% amplitude i sonikirajte 3-4 minuta u režimu ciklusa, kako biste osigurali konzistentno odvajanje biofilma bez lize ćelija.
5. Procjena održivosti biofilma
   Nakon sonikacije, obradite medij za oporavak koji sadrži odvojene ćelije biofilma koristeći standardne mikrobiološke ili analitičke tehnike, kao što su:
   • Broj jedinica koje formiraju kolonije (CFU): Izvršite serijska razrjeđenja i ploču na agaru za prebrojavanje živih ćelija.
   • Mjerenje optičke gustoće (OD): Koristite spektrofotometrijsku analizu za procjenu gustine ćelija.
   • Testovi održivosti zasnovani na fluorescenciji: Kvantifikujte žive i mrtve ćelije koristeći fluorescentne boje.
6. Analiza podataka
   Uporedite podatke o održivosti tretiranih i netretiranih biofilma kako biste odredili efikasnost antimikrobnih agenasa.
   Izračunajte minimalnu koncentraciju eradikacije biofilma (MBEC) na osnovu koncentracije potrebne za eliminaciju živih ćelija biofilma.
7. kontrola kvaliteta
   Osigurajte konzistentne uvjete sonikacije redovnim kalibriranjem UIP400MTP i provjerom da proces odvajanja biofilma ne rezultira značajnom lizom ili uništenjem ćelija.
   Uključite odgovarajuće kontrole, kao što su netretirani biofilmovi i praznine samo za medij, da potvrdite rezultate.

Ćelije biofilma formirane na iglicama su uklonjene ultrazvučnom obradom (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Njemačka, UIP250MTP) u trajanju od 5 minuta u pločama sa 96 jažica koje su sadržavale svježi medij za kulturu za oporavak ćelija.
(Slika i studija: ©de Oliveira et al., 2016.)

Integracijom UIP400MTP u ASTM E2799-22 radni tok, proces odvajanja biofilma je optimizovan za konzistentnost, efikasnost i aplikacije velike propusnosti.