Ултразвуково Protein Extraction от тъкани и клетъчни култури

  • екстракция на протеин е важна стъпка проба получаване на протеомиката.
  • Протеините могат да бъдат извлечени от растителен и животински тъкани, дрожди и микроорганизми.
  • Sonication е надежден и ефективен метод за екстракция протеин дава високи добиви на протеин в рамките на кратко време екстракция.

Екстракция на протеин от тъкани и клетки

Екстракцията на протеини от тъкани и култивирани клетки е основна стъпка за подготовка на пробите, която се извършва по време на много биохимични и аналитични техники като ELISA, PAGE, Western blotting, масспектрометрия или пречистване на протеини. Ултразвуково разрушаване на клетките, лизис и екстракция е прецизно контролируема, нетермична техника за осигуряване на високи добиви на протеини.

Искане на информация




Забележете нашите Правила за поверителност,


Сонда тип ultrasonicators като UP200St са надеждни тъканни хомогенизатори и широко използвани за подготовка на проби в генетични и протеомни изследвания.

Екстракция на протеин от клетки с ултразвукова сонда UP200St

Предимства на ултразвукова лизис и протеин екстракция
 

  • бърз
  • високи добиви
  • висока ефективност
  • Прецизен контрол върху параметрите
  • възпроизводими резултати
  • линейна скалируемост

Общи инструкции за ултразвуков лизис и екстракция на протеини

  • Контрол на температурата: За да се осигури висок добив протеин без термична денатурация, температурата по време на екстракцията трябва да бъде контролирана. състоянието на най-арт ултразвукови хомогенизатори Hielscher е – наричан още ултразвуков дезинтегратор или ултразвуков – са точно контролирани. Те разполагат с plugable температурен сензор. В опциите за настройка на ултразвуков хомогенизатор, максимална температура може да се настрои. Когато се достигне тази температура макс, ултрасоннкаторът автоматично спира, докато пробата се охлади.
  • буфер: На избор на подходящ буфер и дясната обема на буфер варира от тъкан на тъкан и трябва да измисли-от тестване проба-грешка.
  • Изолиране / пречистване: Протеиновите лизати могат да съдържат излишък на биомолекули като ДНК или въглехидрати, които могат да бъдат отстранени чрез утаяване на протеин (деоксихолат-трихлороцетна киселина) или буферен обмен.

Chittapalo и Noomhorm (2009) съобщават в своето проучване, че добивът на протеин се увеличава с помощта на ултразвук и че ултразвуковата тъкан хомогенизация и процес на лизис може значително да подобри съществуващите процеси на екстракция – дава възможност за нови възможности за бизнес за добив.
 

Ултразвукова CupHorn за едновременна подготовка на проби от множество проби при едни и същи условия за изолиране на протеини и ДНК фрагментация.

Ултразвуков cuphorn за едновременна, високоефикасна подготовка на проби от множество проби при едни и същи условия за изолиране на протеини и фрагментация на ДНК.

екстракция на протеин от животински тъкани

Ultrasonicator UP100H е лабораторен хомогенизатор, често използван за подготовка на проби от плочи от клетъчна култура.За приготвянето на тъкани с пълна големина (напр. Бъбрек, сърце, бял дроб, мускул и т.н.) тъканта трябва да се разрязва на много малки парченца с чисти инструменти, за предпочитане върху лед и възможно най-бързо, за да се предотврати разграждането с протеази лизисен буфер, като RIPA или хипотоничен лизисен буфер, съдържащ протеазен и фосфатазен инхибиторен коктейл). След дисекция, пробата се потапя в течен азот за бързо замразяване. Пробата може да се съхранява при -80 ° С за по-нататъшна употреба или да се съхранява на лед за незабавна хомогенизация. Непосредствено преди екстракцията с ултразвук се добавя бързо ледено студен лизисен буфер (с протеазни инхибитори DTT, леупептин и апротинин) в тръбата за проби (за ~ 10 mg тъкан приблизително ~ 600 μL буфер се препоръчват). Прибл. Препоръчва се 20-60 mg тъкан на тръба за проби.
Ултразвукова хомогенизация, лизис и екстракция се извършва с ултразвуков хомогенизатор като UP100H или UP200Ht, оборудван с микро-върха издатина. Продължителност на ултразвук е 60-90 сек. при ултразвуков цикъл режим на 15 сек. ултразвук и 10 сек. време за почивка. Пробата трябва да се съхранява в лед през цялото време.
След ултразвукова хомогенизиране / екстракция, лизатът се центрофугира при 27,000g за прибл. 20 мин. След това супернатантата се събира, така че концентрацията на протеина се определя чрез изследване на протеин, като например Pierce ВСА протеин анализ.

екстракция на протеин от кръвен серум

За хомогенна смес от серума и фосфатния буфер, пробата се завихря първо преди ултразвуков клетъчен лизис. За ултразвуков лизис, пробата се обработва с ултразвук с ултразвукова лаборатория хомогенизатор като UP100H за 8 цикъла при 20% амплитуда, за цикли на всеки 5 секунди и 15 секунди разстояние. Екстракцията на протеин се извършва чрез ултразвук в цикли (режим на пулсация) и чрез поставяне на пробата върху лед, така че да се избегне прегряване и термично разграждане на пробата. Тъй като серумът съдържа голямо количество протеини с високо молекулно тегло (като албумин, α1-антитрипсин, трансферин, хаптоглобулин, имуноглобулин G и имуноглобулин А), които пречат на отделянето на протеини с ниско молекулно тегло по време на IEF, се препоръчва да се изчерпят от серума, като се използва колона за изчерпване.

екстракция на протеин от растителна тъкан

Прясна, мека растителна тъкан, например мъх и т.н., може лесно да се разрушават чрез просто поставяне на проба нарязан материал в лизисен буфер в продължение на ултразвук. Трудни, ligenous растителни тъкани, като например семена, ела игли и т.н., трябва да бъдат смлени сухи. Някои твърди, дървесни растителни материали трябва да бъдат замразени и смила в течен азот преди да се екстрахира с ултразвук. За суспензии растителна клетъчна култура, ултразвукова обработка между 30 и 150 секунди в лизисен буфер обикновено е достатъчна. По-строги материал като тиквени семки изискват по-интензивна обработка с ултразвук, както е описано по-долу.
 

Този урок обяснява какъв тип соникатор е най-подходящ за вашите задачи за подготовка на проби като лизис, разрушаване на клетките, изолиране на протеини, фрагментация на ДНК и РНК в лаборатории, анализ и изследвания. Изберете идеалния тип соникатор за вашето приложение, обем на пробата, номер на пробата и пропускателна способност. Hielscher Ultrasonics има идеален ултразвуков хомогенизатор за вас!

Как да намерим перфектния соникатор за разрушаване на клетките и извличане на протеини в науката и анализа

Миниатюра на видео

 

Протокол за ултразвукова екстракция на албумин от тиквени семки

Ултразвуково тъкан хомогенизатор UP400St с S24d40 - за извличане на протеин от растителен и животински тъкани (Увеличи!)За ултразвукова протеинова екстракция на албумин от фино смляно тиквено семе на прах, 10 g обезмаслено тиквено семе на прах и 100 ml дейонизирана вода като разтворител се добавят в 250mL стъклена чаша. Екстракцията на протеин се състои от две стъпки: Първо, пробата се обработва с ултразвук с сонда тип ultrasonicator UP400St (400W, 24kHz), оборудвани с издатина S24d7. Стъклената чаша се поставя в студена водна баня по време на ултразвуковата хомогенизация. Щепселният температурен сензор и настройките за контрол на температурата на ултрасоникатора UP400St гарантират, че температурата на пробата винаги се поддържа под 30 ° C. Чрез прецизен контрол на температурата по време на ултразвук, се избягва денатуриране на албумин. На второ място, екстракцията се извършва с миксер при скорост 200 об / мин и при 30 ° C. След това бехеровата чаша се прехвърля в термостатичен шейкър. Глобулинът се отстранява чрез диализа с дестилирана вода. След отстраняването на глобулина, от протеиновия екстракт може да се вземе проба за определяне на профила на албумина и впоследствие се коригира до pI = 3.0, като се използва 0.1 M HCl за коагулация на албумин. Твърдата фаза се отделя чрез центрофугиране при 5000g, 20°C и се разтваря отново в дейонизирана вода. Коагулацията на албумина се извършва два пъти, за да се увеличи съотношението на протеините в албуминовия концентрат.

Ултразвуково алкална екстракция протеин за получаване на концентрат на протеини от оризови трици показва, че резултатите от обработката с ултразвук в по-висок добив протеин в значително по-кратко време за екстракция – в сравнение с конвенционалните методи за екстракция.

Този видео клип показва ултразвуков хомогенизатор Hielscher UP100H, ултразвуков уред, широко използван за подготовка на проби в лаборатории.

Ултразвуков хомогенизатор UP100H

Миниатюра на видео

Примерен препарат протокол за функционален ензим ИНОС

За да се получи напълно функционален ензим iNOS (например за скрининг на лекарства), се препоръчва следният протокол: Клетъчната суспензия трябва да се постави върху лед и се обработва с ултразвук с UP100H при амплитуда 10μm при режим на цикъл от 5 сек. ултразвук и 25 сек. почивка върху лед. Процедурата трябва да се повтори приблизително 3 пъти. Времето за почивка между циклите на ултразвук намалява повишаването на температурата и следователно ще намали риска от денатурация.

Ултразвуков Protein Солубилизиращ

Sonication може да ускори процеса на разтваряне протеин, който обикновено изисква няколко часа. За да не се прегрява пробата и да се предотврати разграждане на протеина и модификации в разтвори, съдържащи карбамид, ултразвукови пакетите не трябва да продължават повече от няколко секунди.

VialTweeter е уникална ултразвукова система за едновременно ултразвукова обработка на до 10 флакона при точно същите условия без кръстосано замърсяване.

UP200St с VialTweeter за ултразвукна обработка на затворени флакони

Миниатюра на видео

Ultrasonicator UP200Ht с микротип S26d2 за ултразвуково лизиране на биологични проби

Ultrasonicator UP200Ht с 2mm микротип S26d2 за ултразвук на малки проби.

Ултразвуково оборудване за Екстракция на протеин

Hielscher Ultrasonics предлага широк обхват от ултразвукови хомогенизатори за разпадането на клетки, тъкани, бактерии, микроорганизми, дрожди и спори.
Hielscher лаборатория ultrasonicators са мощни и лесни за работа. Създадени за 24/7 работа, те са проектирани като здрави и ефективни лабораторни и настолни устройства. За всички устройства изходната енергия и амплитудата могат да бъдат прецизно контролирани. Широката гама от аксесоари отваря допълнителни опции за настройка. Цифровите ultrasonicators като VialTweeter, UP200Ht, UP200St, и UP400St имат интегриран контрол на температурата и вградена SD карта за автоматично записване на данни.
За индиректна, без кръстосано замърсяване и едновременно ултразвук на множество проби, ние предлагаме VialTweeter или ултразвукова CupHorn.
Таблицата по-долу ви дава преглед на нашите ultrasonicators за подготовка на пробата, разрушаване на клетките и екстракция. Кликнете върху типа на устройството, за да получите повече информация за всеки ултразвуков хомогенизатор. Нашият добре обучен и дългогодишен опит технически персонал ще се радва да ви помогне да изберете най-подходящия ultrasonicator за вашата подготовка на пробата!
 

Партида том Дебит Препоръчителни Devices
до 10 флакона или епруветки п.а. VialTweeter
мултиуел / микротитър плочи п.а. 1000000000000000000000
множество тръби / съдове п.а. Cuphorn
1 до 500mL 10 до 200 ml / мин UP100H
10 до 1000 мл 20 до 200 мл / мин Uf200 ः т, UP200St
10 до 2000mL 20 до 400 ml / мин UP400St

В зависимост от приложението, материал, и обема на пробния си, ние ще ви препоръча най-подходящата настройка за пробоподготовка. Свържете се с нас още днес!

Свържете се с нас! / Попитай ни!

Поискайте повече информация

Моля, използвайте формата по-долу, за да изиска допълнителна информация за ултразвукови хомогенизатори, приложения в биотехнологиите и протеомиката, както и цени. Ще се радваме да обсъдим с вас разрушаването на клетките и процеса на извличане на протеини и да ви предложим ултразвук, отговарящ на вашите изисквания!









Моля, обърнете внимание, че нашите Правила за поверителност,


 

Видеото показва ултразвуковата система за подготовка на проби UIP400MTP, която позволява надеждната подготовка на пробата на всички стандартни много кладенец плочи с помощта на ултразвук с висока интензивност. Типичните приложения на UIP400MTP включват клетъчен лизис, ДНК, РНК, и хроматин срязване, както и екстракция на протеини.

Ултразвуков апарат UIP400MTP за многопластова ултразвукова обработка

Миниатюра на видео

Hielscher ultrasonicators могат да бъдат дистанционно контролирани чрез управление на браузъра. Параметрите на ултразвук могат да бъдат наблюдавани и регулирани именно към изискванията за процеса.

Hielscher цифрови ultrasonicators разполагат с браузър дистанционно управление и автоматично протоколиране на данни на интегрирана SD-карта.

Ултразвуково VialTweeter устройство за екстракция протеин от тъканни проби (Увеличи!)

VialTweeter за непряко ултразвук.



Факти заслужава да се знае

протеомика

Протеомика е областта на научноизследователската дейност, която разследва протеини и протеома. Протеини fullfil широк спектър от жизнените функции в рамките на организми. Протеома е целия набор от протеини, експресирани от генома, клетка, тъкан или организъм в определено време. Протеома варира с времето и различни изисквания, или подчертава, че една клетка или организъм претърпява. По-специално, това е набор от протеини, изразени в даден вид на клетка или организъм, в даден момент, при определени условия. Терминът е смес от протеини и геном. Протеомика е изучаването на протеома.

протеин

Протеините са големи биомолекули, така наречените макромолекули – които са съставени от една или повече дълги вериги от аминокиселинни остатъци. Протеините присъстват във всички организми от растителен и животински произход и са от решаващо значение за повечето биологични функции. Тъй като протеините съдържат много биологична информация, те се извличат за аналитична цел, например за протеомични изследвания. Най-важната функция, изпълнявана от протеини, включва катализа на метаболитни реакции, ДНК репликация, реакция на стимули и транспорт на молекули от едно място на друго. Протеините се различават един от друг основно в тяхната последователност от аминокиселини, която се диктува от нуклеотидната последователност на техните гени и която обикновено води до нагъване на протеина в специфична триизмерна структура, която определя нейната активност. Протеините са – освен пептиди – един от ключовите компоненти на храната. Ето защо, протеомиката е мощен инструмент, в областта на науката храна за оптимизиране на процесите, безопасност на храните и хранителните оценка.

Cloud Point Extraction

Cloud Point Extraction е преданалитична процедура за отделяне и предварително съгласуване на аналити. В комбинация с ултразвук, извличането на облачна точка може да бъде засилено, което прави процеса по-ефективен, по-бърз и по-щадящ околната среда. С ултразвук, облак точка екстракция е значително по-ефективен метод за подготовка на аналит. Прочетете повече за ултразвуково подпомага облак точка извличане!

гел електрофореза

Гел електрофореза е основният метод за разделяне и анализ на макромолекули като ДНК, РНК и протеини, както и техните фрагменти, въз основа на техния размер и заплащане. Той се използва в клиничната химия за разделяне протеини чрез зареждане и / или размер (IEF агароза, по същество размер независим) и в биохимията, молекулярната биология и протеомиката за разделяне на смесена популация на ДНК и РНК фрагменти с дължина, за да се оцени размера на ДНК и РНК фрагменти или да отделят протеини чрез заплащане.

клетъчни култури

Клетъчна култура е контролира процеса на отглеждане от кои клетки се отглеждат при контролирани условия. Клетъчна култура условия варират за всеки клетъчен тип. Като цяло, среда на клетъчна култура се състои от подходящ съд (например петриева паничка) с подложка или носител, който доставя основни хранителни вещества (аминокиселини, въглехидрати, витамини, минерали), растежни фактори, хормони и газове (СО2, The2), И регулира физико-химична среда (рН буфер, осмотичното налягане, температура). Повечето клетки трябва повърхност или изкуствен субстрат, докато други клетъчни култури могат да бъдат култивирани свободно плаващ в културална среда (суспензионна култура, клетъчната суспензия).
Масови култури от животински клетъчни линии са използвани в промишленото производство на вирусни ваксини и други биотехнологичен производни продукти. Човешки стволови клетки се култивират за разширяване на броя на клетките и диференциране на клетките в различни соматични клетъчни типове за целите на трансплантации.

тъканни проби

Терминът тъкан описва клетъчна междинно съединение, където клетъчния материал е организационна ниво между клетки и пълен орган. В тъкан, и други клетки от един и същ произход, които заедно извършват специфична функция, са сглобени. От функционалните групиране на множество тъкани, се формират сложни структури на органи.
Тъканта се вземат проби за изследване в биологията, хистология / хистопатология, паразитология, биохимия, имунохистохимия, както и да се култивира и се екстрахира ДНК. Това могат да бъдат разграничени между животно (подразделение: бозайник тъкан) и растителна тъкан. тъкани животни са групирани в четири основни типа на съединителната, мускул, нервна, и епителна тъкан. Растителна тъкан се разделя на следните три системи тъкан: епидермиса, приземния тъкан и съдовата тъкан.
Тъканни проби могат да бъдат получени от животински или растителни части, например кости, мускули, листа и т.н.

Телесни течности

Кръв, серум, плазма, гръбначномозъчна течност, слюнка и синовиална течност са телесни течности, които предлагат голям източник на диагностично релевантна информация. Ето защо, изискан подготовка на пробите за анализ телесна течност е важно. Първата трудност е свързана с широк динамичен обхват на компоненти, присъстващи в телесните течности.

Определяне на концентрацията на протеин

Bradford анализ, анализ на Lowry и бицинхонинова киселина (ВСА) анализ са общи анализи за определяне на концентрацията на протеини. Говежди серумен албумин (BSA) е един от най-често използваният протеин стандарт.

буфер за лизиране

Лизисен буфер трябва да бъде избран в съответствие с клетъчния материал или тъкан (тъкан култура, растения, бактерии, гъбички и т.н.), и дали клетките са в структурата и вида на структурата. Широка гама от лизис буфери за добив на протеини, мембрани и органели са формулирани с един или повече детергенти. Детергентът обикновено се избира чрез тестове опити и грешки или – ако е налична – съгласно съществуващ протокол екстракция протеин. Препаратът трябва да е съвместима с източника на тъкани и протеините. Като цяло, най-леката детергент, който работи за специфична тъкан / протеин, се избира, за да се поддържа максимална функционалност на екстракта. Освен това, в случай на извличане на мембрани и органели, мек детергент държи мембраната непокътнати. Често използвани детергенти в лизисен буфер предимно нейонни или амфотерни, например CHAPS, деоксихолат, Triton ™ X-100, NP40, и Tween 20.
Например, тъкани като мозъка, черния дроб, червата, бъбреците, далака и т.н. могат да бъдат просто буферирана с RIPA – обаче трябва да бъдат включени протеазни инхибитори и DTT (например за гел електрофореза).
Лизисен буфер в продължение на скелетна мускулна тъкан (леденостуден): 20 тМ Tris (рН 7.8), 137 тМ NaCl, 2.7 тМ KCI, 1 тМ MgCl2, 1% Triton Х-100, 10% (т / об) глицерол, 1 тМ EDTA , 1 милимола дитиотреитол, допълнена с протеаза и фосфатаза инхибитор коктейл
Таблица на общи буфери и тяхното рН обхват. Като цяло, тези буфери обикновено се използват в концентрации от 20-50 тМ.
 

буфер рН обхват
Лимонена киселина – Naoh 2,2 – 6,5
Натриев цитрат – Лимонена киселина 3,0 – 6,2
Натриев ацетат – оцетна киселина 3,6 – 5,6
Какодилова киселина натриева сол – Hcl 5,0 – 7,4
MY – Naoh 5,6 – 6,8
Натриев дихидроген фосфат – динатриев хидрогенфосфат 5,8 – 8,0
Имидазолното – Hcl 6,2 – 7,8
Подочистачки – КОН 6,6 – 7,8
триетаноламин хидрохлорид – Naoh 6,8 – 8,8
трис – Hcl 7,0 – 9,0
HEPES – Naoh 7,2 – 8,2
Трицин – Naoh 7,6 – 8,6
Натриев тетраборат – борна киселина 7,6 – 9,2
бицинов – Naoh 7,7 – 8,9
Глицин – Naoh 8,6 – 10,6

Повечето буфери показват рН-зависимост от температурата. Това е особено вярно за Tris буфери. РКа променя от 8.06 при 25 ° С до 8,85 при 0 ° С.
(РН и рКа на буфер: рН измерва концентрацията на водородните йони във воден разтвор рКа (= киселина дисоциационна константа) е свързано, но по-специфична мярка, с това, че помага да се предскаже как молекула ще действа в определен. рН стойност).

TRIzol

TRIzol е химически разтвор, използван за извличане на РНК / ДНК / протеин по време на извличането на гуанидин тиоцианат-фенол-хлороформ. Използването на ултразвук подпомагани резултати Trizol екстракция при високо ДНК, РНК и протеин добиви от една и съща проба и превъзхожда този начин други методи за екстракция.

Позоваването литература /

Ще се радваме да обсъдим вашия процес.

Да се свържем.