Ултразвуково Лизис на Е. Coli

  • На E.coli бактерии са най-често използваните бактерии в микробиология и биотехнология.
  • Ултразвукови клетъчни нарушаващи осигуряват надеждни и възпроизводими резултати за лизиса на Е.коли.
  • Силните още точно контролируеми кавитация и срязващи сили водят до пълно прекъсване и високи добиви екстракция (например протеини, ДНК).

Защо ултразвуковото клетъчно разрушаване на E. coli е предпочитаният метод?

Ултразвукови хомогенизатори или сонда тип ultrasonicators предлагат няколко предимства за E. coli лизис като интензивен ултразвук ефективно нарушава клетъчните стени и мембрани. Сонда тип ultrasonicators са широко използвани за E. coli лизис поради следните причини:

  • Ефективно разрушаване на клетъчните стени: E. coli има полутвърда клетъчна стена, съставена от пептидогликан, която може да бъде трудна за разрушаване с помощта на традиционните методи за лизис. Ултразвуков апарат тип сонда генерира интензивни ултразвукови вълни, които създават кавитационни мехурчета в течността около клетките. Когато тези мехурчета се сринат, те генерират високоскоростни течни струи и ударни вълни, които водят до механично разрушаване на клетъчните стени, ефективно освобождавайки клетъчно съдържание като биомолекули.
  • Подобрено проникване: Ултразвуковите вълни, генерирани от сондата / издатината, могат да проникнат дълбоко в пробата, достигайки по-голям брой клетки на E. coli и третирайки ги равномерно. Това помага да се гарантира, че лизисът е по-равномерен в цялата проба, което води до по-висока ефективност на разрушаване на клетките.
  • Намалено време за обработка: Енергията, доставена от ултрасоникатора тип сонда, е силно концентрирана и локализирана, което води до бърз и ефективен клетъчен лизис. В сравнение с други методи като топчета побой или ензимен лизис, ултразвук може да се постигне E. coli лизис в рамките на минути или дори секунди. Докато много алтернативни техники като замразяване-размразяване изискват няколко кръга на лечение, ултразвукова лизис отваря клетки в една стъпка процес.
  • Контрол на температурата: Най-съвременните ultrasonicators са оборудвани с температурни сензори и интелигентен софтуер, който позволява да се зададе максимална температура на процеса. Ultrasonicator спира автоматично, когато се достигне температурната граница и започва процеса на ултразвук, когато се достигне зададена температурна точка. Охлаждането на пробите в ледена баня е прост метод за поддържане на ниска температура на пробата и предотвратяване на топлинно индуцираното разграждане на пробата.
  • Мащабируемост: Ултрасоникаторите тип сонда се предлагат в различни размери, от ръчни устройства до мащабни промишлени модели. Това ги прави подходящи за обработка на малки обеми в лаборатория или за мащабиране за по-големи приложения за биообработка, например производство на ваксини или биосинтеза на молекули.
  • Гъвкавост: Ultrasonicators могат да се използват за различни приложения извън клетъчния лизис, като ДНК срязване, екстракция на протеини, хомогенизиране на тъканите, дисперсия на наночастици и емулгиране. Ето защо, инвестиране в сонда тип ultrasonicator осигурява гъвкавост в научни изследвания или промишлени настройки.
  • Сонда тип ultrasonicators като UP200St са надеждни тъканни хомогенизатори и клетъчни трошачки, следователно широко използвани за подготовка на проби в генетиката, например, за E.coli лизис

    Екстракцията на протеин от клетките на E.coli се извършва ефективно с ултразвукова сонда UP200St

    Сонда тип ultrasonicator предлага много предимства за E. coli лизис. Надеждният и прецизен контрол върху параметрите на ултразвуковия процес позволява да се оптимизират работните параметри като мощност, продължителност и обработка на проби, за да се постигнат желаните резултати.
     

    Искане на информация




    Забележете нашите Правила за поверителност,


     

    Този урок обяснява какъв тип соникатор е най-подходящ за вашите задачи за подготовка на проби като лизис, разрушаване на клетките, изолиране на протеини, фрагментация на ДНК и РНК в лаборатории, анализ и изследвания. Изберете идеалния тип соникатор за вашето приложение, обем на пробата, номер на пробата и пропускателна способност. Hielscher Ultrasonics има идеален ултразвуков хомогенизатор за вас!

    Как да намерим перфектния соникатор за разрушаване на клетките и извличане на протеини в науката и анализа

    Миниатюра на видео

    Ултразвукова фрагментация на ДНК често се използва като стъпка за подготовка на проби в Следващо поколение последователност (NGS)

    Електрофоретични анализи на геномна ДНК на E. coli EDL933, подложени на 0 – 15 минути ултразвук. L показва ДНК стълбата.
    (проучване и изображение: ©Basselet et al. 2008)

    Разрушаване на клетките с помощта на ултразвукова кавитация

    Ултразвуковите хомогенизатори тип сонда работят с приблизително 20 000 цикъла в секунда (при 20kHz) и причиняват кавитация в течности или суспензии. Акустична кавитация микроскопични области на вакуумоподобни налягания и високи температури, които разкъсват клетките. Въпреки че температурите могат да достигнат няколко хиляди градуса по Целзий, обемите на кавитация са толкова малки, че не загряват процеса значително. Ултразвукът генерира акустична кавитация и сили на срязване перфорират или разрушават клетъчната мембрана на бактериални клетки като E.coli. Hielscher ultrasonicators позволяват прецизен контрол върху параметрите на процеса, като ултразвукова интензивност, амплитуда, входяща енергия и температура. По този начин процесът на ултразвуков лизис може да се регулира оптимално към клетъчния тип, клетъчната култура и целта на процеса.
     

    Предимства на Ултразвуков Lysis

    • прецизен контрол на лизис (интензитет, амплитуда, температура)
    • надеждни, възпроизводими резултати
    • оптимално приспособяване към специфични проби
    • контрол на температурата
    • за много малки до много големи проби (цЬ да литра)
    • Чисто механична обработка
    • удобна за потребителя, безопасна работа
    • линейна скала-нагоре от лаборатория за производство
    Ултразвуковите устройството VialTweeter дава възможност за получаване едновременно проба до 10 флакони под същите условия на процеса. (Кликнете за увеличение!)

    VialTweeter за ултразвукова лиза

    Искане на информация




    Забележете нашите Правила за поверителност,


    Ултразвуков хомогенизатор срещу други техники за лизис

    Докато химичният и ензимният лизис могат да бъдат проблематични – от химически лизис може да промени протеинови структури и въвеждане проблеми пречистване и ензимно лизиране изисква дълги инкубационни времена и не е възпроизводимо – ултразвукова прекъсване е изтънчен, метод за бързо клетъчно разрушаване.
    Ултразвуков лизис се основава само на механични сили. Не се добавят химикали, ултразвукът разрушава клетъчната стена чрез сили на срязване. Химичният лизис може да промени протеиновата структура и да доведе до проблеми с пречистването. Ензимното разрушаване изисква дълги инкубационни времена и не е възпроизводимо. Ултразвуковото разрушаване на клетките на бактериите E.coli е бързо, просто, надеждно и възпроизводимо. Ето защо Hielscher ultrasonicators се използват в биологични и биохимични лаборатории по целия свят за подготовка на проби, pre-ananlytics, in-vitro диагонстика и многобройни анализи.

    Общи препоръки за ултразвуков лизис

    Sonication е най-популярната техника за лизиране на много малки, средни и големи количества от клетъчни суспензии – от пико-литра до 100 L / час (при използване на ултразвукова клетка на потока). Клетките се лизират чрез течна срязване и кавитация. ДНК също е отделена по време на обработка с ултразвук, така че не е необходимо да се добави ДНК-аза към клетъчната суспензия.
     

    Контрол на температурата по време на ултразвукова E.coli лизис
    Ултразвуков клетъчен разрушител UP100H (100W) за разрушаване на клетките и екстракция на растителни съединения.Чрез предварително охлаждане на пробата и поддържане на пробата по време на обработка с ултразвук върху лед, проба термично разграждане на пробата може лесно да бъде предотвратено.
    В идеалния случай пробите трябва да се държат ледено студени по време на лизис, но за повечето проби е достатъчно, ако температурата не се повиши над температурата на културата или източника на тъкан. Затова се препоръчва, да се запази суспензията на лед и да се обработва с ултразвук с няколко кратки ултразвукови импулси от 5-10 сек и паузи от 10-30 сек. По време на паузите топлината може да се разсее, за да се възстанови ниската температура. За по-големи клетъчни проби се предлагат различни реактори с поточни клетки с охлаждащи кожуси.
    Прочетете тук подробни съвети и препоръки за успешен ултразвуков лизис!

    Протоколи за ултразвукова подготовка на лизати на E. coli

    Изследователите използват Hielscher ултразвукови хомогенизатори за разрушаване на клетките на E.coli. По-долу можете да намерите различни тествани и доказани протоколи за E.coli лизис, използвайки Hielscher ултразвукови хомогенизатори за различни приложения, свързани с E. coli.
     

    Този видео клип показва ултразвуков хомогенизатор Hielscher UP100H, ултразвуков уред, широко използван за подготовка на проби в лаборатории.

    Ултразвуков хомогенизатор UP100H

    Миниатюра на видео

    Клетъчен растеж, омрежване и подготовка на екстракти от клетки на E. coli с помощта на ултразвук

    За SeqA и РНК полимераза чип чип на E.coli MG1655 или MG1655 ΔseqA се култивира при 37 ° С до OD600 от около 0.15 в 50 ml LB (+ 0.2% глюкоза) преди да се добавят 27 ц1 формалдехид (37%) на ml среда (крайна концентрация 1%). Омрежването се извършва при бавно разклащане (100 об / мин) при стайна температура в продължение на 20 минути, последвано от охлаждане с 10 ml от 2.5 М глицин (крайна концентрация 0.5 М). За експерименти с топлинни шокове, Е. coli MG1655 се отглежда в 65 ml LB среда при 30 ° С до OD600 от около 0,3. След това 30 ml от културата се прехвърлят в предварително затоплена колба при 43°C, а останалата част се съхранява при 30°C. Кръстосаното свързване и охлаждането са както е описано по-горе, с изключение на това, че клетките се държат при 30 или 43 ° C в продължение на 5 минути, преди по-нататъшно бавно разклащане при стайна температура. Клетките се събират чрез центрофугиране и се промиват два пъти със студен TBS (pH7.5). След ресуспендиране в 1 ml лизис буфер (10 mM Tris (pH 8.0), 20% захароза, 50 mM NaCl, 10 mM EDTA, 10 mg / ml лизозим) и инкубация при 37 ° C за 30 минути, последвано от добавяне на 4 ml IP буфер, клетките се обработват с ултразвук върху лед с 12 пъти 30 секунди и 30 сек почивки с помощта на ултразвуков процесор Hielscher UP400St при настройка на 100% мощност. След центрофугиране в продължение на 10 min при 9000 g, 800 μl аликвотни части от супернатантата се съхраняват при -20°C. (Валдмингхаус 2010)
     

    Свръхпроизводство и пречистване на ензими с ултразвукова сонда

    Ultrasonicator UP100H е лабораторен хомогенизатор, често използван за подготовка на проби от плочи от клетъчна култура.За свръхпроизводство на маркирани с декахистидин (His10) протеини, E. coli BL21 (DE3) се трансформира с pET19b конструкции. Чрез центрофугиране се събира прекултура за една нощ и 1% се използва за инокулиране на експресивна култура. Клетките, носещи pET19mgtB, се отглеждат при 22°C до оптична плътност при 600 nm (OD600) от 0,7. Културата се прехвърля на 17°C и се индуцира от 100 μM IPTG. След 16 часа културата се събира чрез центрофугиране при 7 500 × g при 4 °C. Клетките са ресуспендирани в 50 mM фосфат-буфериран физиологичен разтвор (PBS) с 0.3 M NaCl при рН 7.4 и нарушени чрез ултразвук с S2 микро-връх издатина в Hielscher ultrasonicator UP200St в цикъл от 0.5 и амплитуда от 75%.
    В свръхпроизводството на decahistidine-маркиран GtfC се индуцира при 37 ° С при OD600 на 0,6 със 100 цМ IPTG. След това клетките се инкубират в продължение на 4 часа, се събират и се лизират, както е посочено по-горе за MgtB.
    Суровите клетъчни екстракти се центрофугират при 15 000 × g и 4 ° C, за да се утаят клетъчните остатъци. Избистрените екстракти бяха заредени на 1-ml HisTrap FF Crude колони с помощта на система ÄKTAprime Plus. Ензимите са пречистени съгласно протокола на производителя за градиентно елуиране на маркираните от Него протеини. Елуираните протеинови разтвори се диализират два пъти срещу 1000 обема от 50 mM PBS, pH 7,4, с 0,3 M NaCl при 4°C. Пречистването е анализирано от 12% SDS-PAGE. Концентрацията на протеин се определя по метода на Брадфорд, използвайки Roti-Quant. (Rabausch et al. 2013)
     

    Ултразвукова екстракция на протеин от бактерии E. coli
    Примамка протеин от интерес (в този случай, MTV1 на Arabidopsis thaliana) е слят с GST маркер и изразено в BL21 Ешерихия коли (Е.коли) клетки.

    1. Вземете една гранула GST-MTV1 и GST (съответстваща на 50 ml бактериална култура) и ресуспендирайте всяка в 2,5 ml буфер за ледено студена екстракция.
    2. Използвайте ultrasonicator UP100H (оборудван с MS3 microtip-издатина за малки обеми от прибл. 2-5mL), за да нарушите бактериалните клетки, докато те се лизират, което е показано от намалена непрозрачност и повишен вискозитет. Това трябва да се извършва на лед, и се препоръчва да се обработва с ултразвук в интервали (например 10 сек ултразвук, последвано от 10 сек пауза върху лед и така нататък). Трябва да се внимава да не се обработва с ултразвук с твърде висока интензивност. Ако се открие разпенване или образуване на бяла утайка, интензивността трябва да бъде намалена.
    3. Прехвърлете разтвора на лизираните бактерии в 1,5 ml микроцентрофужни епруветки и центрофугирайте при 4°C, 16 000 x g за 20 min.

     

    Ултразвуковите сонди използват силите на акустичната кавитация, за да нарушат клетката и да извлекат молекули и ДНК от E.coli.

    Сонда тип ultrasonicators като UP400St използват принципа на работа на акустична кавитация за ефективно лизис на E.coli.

    Експресия анализ и пречистване на рекомбинантен протеин с помощта на соникация

    Пелетата E. coli се обработва с ултразвук с ултразвук Hielscher UP100H. За тази цел клетъчната пелета се ресуспендира в охладен лизисен буфер (50 mM Tris-HCl pH=7.5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) и се охлажда върху лед в продължение на 10 минути. След това клетъчната суспензия се обработва с ултразвук с 10 кратки изблици от 10 s, последвани от интервал от 30 s за охлаждане. Накрая клетъчните остатъци се отстраняват чрез ултрацентрофугиране при 4°C за 15 минути при 14000 rpm. За потвърждаване на експресията на rPR, супернатантата се провежда на 12% полиакриламиден гел и се анализира чрез SDS-PAGE и Western blotting. Пречистването на rPR е извършено с помощта на Ni2+-NTA смола (Invitrogen, САЩ) съгласно ръководството на производителя. На този етап е използван естествен метод за пречистване. Чистотата на пречистения протеин е оценена с помощта на електрофореза върху 12% полиакриламиден гел и последващо синьо оцветяване на Coomassie. Концентрацията на пречистен протеин е измерена чрез Micro BCA протеинов комплект за анализ (PIERCE, САЩ). (Azarnezhad et al. 2016)
     

    Това видео показва 200 вата ултразвуков cuphorn за разпръсване, хомогенизиране, извличане или дегазация на лабораторни проби.

    Ултразвуков Cuphorn (200 Вата)

    Миниатюра на видео

    Ултразвукови хомогенизатори за E. coli Lysis

    Hielscher Ultrasonics проектира, произвежда и доставя високоефективни ултразвукови хомогенизатори за надежден и ефективен лизис на бактерии E. coli и други видове клетки, тъкани и клетъчни култури.
    Широкото портфолио от ултразвукови сонди, както и индиректни системи за ултразвук ни позволява да ви предложим идеалния ултразвуков хомогенизатор на тъкани за вашето приложение за разрушаване и екстракция на клетки.

    Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

    Hielscher ultrasonicators могат да бъдат дистанционно контролирани чрез управление на браузъра. Параметрите на ултразвук могат да бъдат наблюдавани и регулирани именно към изискванията за процеса.Hielscher ultrasonicators са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Интелигентен софтуер, интуитивно меню, програмируеми настройки и автоматично протоколиране на данни са само някои от характеристиките на Hielscher ultrasonicators. Здравината и лесната работа позволяват гладкото интегриране на нашите ultrasonicators в изследователски и биотехнологични съоръжения. Дори груби условия и взискателни среди лесно се обработват от Hielscher ultrasonicators.

    Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и постави специален акцент върху високопроизводителни ultrasonicators с участието на най-съвременните технологии и удобство за потребителя. Разбира се, Hielscher ultrasonicators са CE съвместими и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.

    Таблицата по-долу дава индикация за приблизителната капацитет за преработка на нашите ultrasonicators:

    Партида том Дебит Препоръчителни Devices
    много кладенец / микротитър плочи п.а. 1000000000000000000000
    CupHorn за флакони или бехерова чаша п.а. Ултразвуков cuphorn
    ултразвуков микро-поток реактор п.а. GDmini2
    до 10 флакона с 0,5 до 1,5 ml п.а. VialTweeter
    00,5 до 1,5 ml п.а. VialTweeter
    1 до 500mL 10 до 200 ml / мин UP100H
    10 до 2000mL 20 до 400 ml / мин Uf200 ः т, UP400St
    00,1 до 20L 00,2 до 4 л / мин UIP2000hdT
    10 до 100L 2 до 10 л / мин UIP4000
    п.а. 10 до 100 L / мин UIP16000
    п.а. по-голям струпване на UIP16000

    Свържете се с нас! / Попитай ни!

    Поискайте повече информация

    Моля, използвайте формата по-долу, за да изиска допълнителна информация за ултразвукови хомогенизатори тъкан и клетъчни трошачки, лизис приложения и цени. Ще се радваме да обсъдим процеса с вас и да ви предложим ултразвуков хомогенизатор, отговарящ на вашите изисквания!









    Моля, обърнете внимание, че нашите Правила за поверителност,


    Видеото показва ултразвуковата система за подготовка на проби UIP400MTP, която позволява надеждната подготовка на пробата на всички стандартни много кладенец плочи с помощта на ултразвук с висока интензивност. Типичните приложения на UIP400MTP включват клетъчен лизис, ДНК, РНК, и хроматин срязване, както и екстракция на протеини.

    Ултразвуков апарат UIP400MTP за многопластова ултразвукова обработка

    Миниатюра на видео

    Допълнителни протоколи за ултразвукова E. coli Lysis

    Алицин-модифицирани протеини в E. coli с помощта на ултразвуков VialTweeter

    VialTweeter при ултразвуков процесор UP200STОпределяне на Сулфхидрилни Съдържание от 5,5'-дитиобис (2-нитробензоена киселина) анализ (DTNB)
    За инокулиране на MOPS минимална среда (1:100) е използвана култура от E. coli MG1655 за една нощ. Културата се отглежда аеробно, докато се достигне A600 от 0,4. Културата е разделена на три 15-милилитрови култури за лечение на стрес. Нелекуваната култура служи като отрицателна контрола. 0,79 mM алицин (128 μg ml-1) или 1 mM диамид се добавя към една от останалите две култури всяка. Културите се инкубират в продължение на 15 минути. 5 ml от всяка култура се събират чрез центрофугиране (8,525 × g, 4°C, 10 min). Клетките се промиват два пъти с 1 ml PBS (137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7,4, съхраняват се анаеробно преди употреба) и се центрофугират (13 000 × g, 4°C, 10 min). Клетките са ресуспендирани в лизис буфер (PBS с 6 mM гуанидиниев HCl, pH 7.4) преди прекъсване при 4 ° C чрез ултразвук (VialTweeter ultrasonicator, Hielscher GmbH, Германия) (3 × 1 мин). Клетъчните остатъци се гранулират чрез центрофугиране (13 000 × g, 4 °C, 15 min). Супернатантата се прехвърля в 3,5-ml QS-макро кювета (10 mm) с магнитна бъркалка и се смесва с 1 ml лизисен буфер. Изчезването на пробите е наблюдавано при 412 nm със спектрофотометър Jasco V-650, оборудван с държач за клетки с контролирана температура PSC-718 при стайна температура. Добавени са 100 μl разтвор на дитиобис (2-нитробензоена киселина) от 3 mM. Изчезването е наблюдавано, докато достигне насищане. Изчисляването на концентрацията на тиол е извършено с помощта на коефициента на екстинкция ε412 = 13700 М-1 см-1 за тио-2-нитробензоена киселина (TNB). Клетъчни тиолови концентрации са изчислени на базата на обем на E.coli клетки от 6.7 х 10-15 литър и плътност на клетката A600 = 0,5 (еквивалентна на 1 × 108 клетки мл-1 култура). (Мюлер и др. 2016 г.)
     

    In vivo определяне на глутатион с помощта на ултразвукова клетъчна трошачка

    E.coli MG1655 се отглежда в MOPS минимална среда в общ обем от 200ml до достигане на A600 от 0,5. Културата е разделена на 50-милилитрови култури за лечение на стрес. След 15 минути инкубация с 0,79 mM алицин, 1 mM диамид или диметилсулфоксид (контрола), клетките се събират при 4,000g при 4°C за 10 минути. Клетките се промиват два пъти с KPE буфер преди ресуспендиране на пелети в 700μl KPE буфер. За депротеинация, 300l от 10% (w / v) сулфосалицилова киселина са добавени преди разрушаване на клетките чрез ултразвук (3 х 1 мин; VialTweeter ултрасоникатор). Супернатантите се събират след центрофугиране (30 минути, 13000 гр, 4 ° С). концентрации сулфосалицилова киселина се намалява до 1% чрез прибавяне на 3 обема KPE буфер. Измерванията на общия глутатион и GSSG се провеждат, както е описано по-горе. Клетъчни концентрации глутатион се изчислява въз основа на обема на Е. Coli клетки от 6.7×10-15 литър и плътност на клетката A6000 0,5 (еквивалентна на 1×108 клетки мл-1 култура). концентрации на GSH се изчисляват чрез изваждане на 2 [GSSG] от общо глутатион. (Мюлер и др. 2016 г.)

    Експресия на човешки mAspAT в E. coli с помощта на ултразвуков хомогенизатор

    Ултразвуково клетка дисруптор UP400St (400W) за добив на вътреклетъчния значение (например протеини, органели, ДНК, РНК и т.н.)Единична колония на Е.коли BL21 (DE3), приютяващ експресионния вектор в 30 мл Luria-Bertani (LB) среда, съдържаща 100 ug / мл ампицилин, и след това култивирани при 37 ° С до оптична плътност (OD600) Достигна 0.6. Клетките се събират чрез центрофугиране при 4000 х г за 10 минути и се ресуспендират в 3L прясна LB среда, съдържаща 100 ug / мл ампицилин.
    Впоследствие протеиновата експресия се индуцира с 1 mM изопропил β-ᴅ-1-тиогалактопиранозид (IPTG) за 20 часа при 16ºC. Клетките се събират чрез центрофугиране при 8 000 × g в продължение на 15 min и се промиват с буфер A (20 mM NaH2PO4, 0,5 M NaCl, pH 7,4). Приблизително 45g (мокро тегло) клетки са получени от 3 L култура. След центрофугиране, клетъчните пелети се ресуспендират в 40 мл (за 1 L култура) леденостуден екстракционен буфер А и се лизират чрез ултразвук при леденостудена температура с помощта на ултразвукова клетъчна трошачка Hielscher UP400St. Клетъчният лизис се центрофугира при 12 000 оборота в минута в продължение на 15 минути, за да се отделят разтворимите (супернатантни) и утаените (пелети) фракции. (Дзян и др. 2015)
     



    Факти заслужава да се знае

    Д. Коли

    Escherichia coli (Е. coli) е грам-отрицателна, факултативно анаеробна, пръчковидна колоидна бактерия от рода Escherichia, която обикновено се намира в долната част на червата на топлокръвни организми (ендотерми). Има голям брой щамове (или подтипове) от Е. coli с различни характеристики. Повечето щамове на Е. coli са безвредни за хората, напр. Щамове В и К-12, които се използват обикновено за изследователски приложения в лаборатории. Някои щамове обаче са вредни и могат да причинят сериозно заболяване.
    Е. коли играе важна роля в съвременната биологична инженеринг и индустриалната микробиология тъй като бактериите е лесно да се манипулира. Общи лабораторни приложения, които включват често използването на Е. коли, например да се създаде рекомбинантен дезоксирибонуклеинова киселина (ДНК) или да действа като модел организъм.
    Е.коли е много гъвкав гостоприемник за производство на хетероложни протеини и многобройни протеин експресионни системи са на разположение за производство на рекомбинантни протеини в E.coli. Използването на плазмиди, които позволяват високо ниво на експресия на протеин, гените могат да бъдат въведени в бактериите, което позволява да се получат такива протеини в големи количества в процеса на промишлени ферментация.
    E.coli се използват като клетъчни фабрики за производство на инсулин. Други приложения включват използването на модифицирани клетки на E. coli за разработване и производство на ваксини и имобилизирани ензими, за производство на биогорива, както и за биоремедиация.
    Щамът К-12 е мутантна форма на Е. Coli, че свръх-експресира ензима алкална фосфатаза (ALP). Тази мутация се дължи на дефект в гена, който постоянно кодира ензима. Ако ген произвежда продукт без инхибиране това е известно като конститутивна активност. Този специфичен мутантна форма се използва за изолиране и пречистване на ензима алкална фосфатаза.
    E. coli бактерии също са широко използвани като клетъчни фабрики. Инженерните микроби (напр., бактериите) и растителните клетки могат да се използват като така наречените клетъчни фабрики. Тези генетично модифицирани клетки произвеждат молекули, химикали, полимери, протеини, и други вещества, които се използват например във фармацевтичната, хранителната, и химическата промишленост. За да се освободят молекулите, произведени във вътрешността на такива биоинженерни клетки, ултразвуковият лизис е общ метод за нарушаване на клетъчните стени и за прехвърляне на целевите вещества в заобикалящата течност. Прочетете повече за лизиса на биоинженерните клетки!

    Ултразвуково ДНК срязване

    Ултразвуковите сили на срязване са често използван метод за освобождаване на молекули, органели и протеини от вътрешността на клетката, както и за разбиване на ДНК нишките на парчета. Акустичната кавитация разрушава клетъчните стени и мембрани, за да извлече ДНК от клетките и да генерира фрагменти от около 600 – 800 нд в дължина, която е идеална за анализ.
    Кликнете тук, за да научите повече за ултразвукови хомогенизатори за ДНК фрагментация!

    Литература / Препратки


    Ултразвук с висока производителност! Продуктовата гама Hielscher обхваща пълния спектър от компактния ултразвуков апарат на лабораторията над пейка-топ единици до пълноиндустриални ултразвукови системи.

    Hielscher Ultrasonics произвежда високопроизводителни ултразвукови хомогенизатори от лаборатория да се промишлени размери.


    Ще се радваме да обсъдим вашия процес.

    Да се свържем.